Name: retinal cryo-sections, whole-mounts, and hypotonic isolated vasculature preparations for immunohistochemical visualization of microvascular pericytes
Uploaded: 2018-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Cryo-sections, Whole-Mounts, and Hypotonic Isolated Vasculature Preparations for Immunohistochemical Visualization of Microvascular Pericytes at JoVE.

Die Forschung wurde finanziert durch die Lundbeck Foundation, Dänemark.

Das Protokoll wurde optimiert und an erwachsenen männlichen Albino Ratten gezeigt. In allen experimentellen Verfahren wurden Tiere gemäß den Bestimmungen in der ARVO-Anweisung für den Einsatz von Tieren in Ophthalmic und Vision Forschung behandelt. Tiere wurden durch Kohlendioxid und anschließende zervikale Dislokation eingeschläfert.
1. Rat Netzhautgewebe Vorbereitungen
<ol><li>
Cryo-Abschnitt
	<ol>
<li>Machen Sie hinteren und vorderen ~0.5 cm Schlitze des in der Ratt...

<ol>
	<li>Eshaq, R. S., Aldalati, A. M. Z., Alexander, J. S., Harris, N. 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G., Menicucci, G., Das, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+degradation+of+VE-cadherin+alters+the+blood-retinal+barrier+in+diabetes.">Proteolytic degradation of VE-cadherin alters the blood-retinal barrier in diabetes.</a> Diabetes. 56, 2380-2387 (2007).</li><li>Gustavsson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+cellular+adhesion+molecule-1+(VCAM-1)+expression+in+mice+retinal+vessels+is+affected+by+both+hyperglycemia+and+hyperlipidemia.">Vascular cellular adhesion molecule-1 (VCAM-1) expression in mice retinal vessels is affected by both hyperglycemia and hyperlipidemia.</a> PLoS One. 5, e12699 (2010).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. 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Wir präsentieren Ihnen drei retinalen Vorbereitung Techniken, die in der Studie von mikrovaskulären retinalen perizyten angewendet werden können. Unten, wir bieten einen Vergleich zwischen den einzelnen Methoden und wichtige Schritte in den Protokollen zu markieren.
Mit Cryo-Schnitt, die Netzhaut ist in sagittaler Abschnitte geschnitten und daher ist es möglich, zahlreiche Exemplare von der gleichen Netzhaut zu erhalten. Die Bezugszeichen Abschnitte aus dieser Methode machen es ideal für ...

Netzhaut perizyten stehen im Mittelpunkt von vielen Forschungslabors, wie diese Zellen eine wichtige Rolle in die Integrität des Gefäßsystems spielen. Pathologische Zuständen wie Diabetische Retinopathie1, Ischämie2und Glaukom3 haben vaskuläre Merkmale, die die Funktion der perizyten beinhalten. Perizyten befinden sich in der inneren retinalen Kapillaren Plexi. Der zentralen Netzhautarterie, die die inneren Netzhaut liefert verzweigt sich in zwei Schichten der Kapillare Plexi. Die innere vaskuläre Bett befindet sich zwischen dem Ganglion Zelle und nukleare Innenlagen. Die tiefere Schicht ist dicht und komplex und ist zwischen der inneren und äußeren nuclear Layer4,5lokalisiert. Darüber hinaus enthalten einige Teile der Netzhaut auch eine dritte Netz bezeichnet die radiale Parapapillary Kapillaren. Dies sind lange, gerade Kapillaren, die unter die Nervenfasern und selten liegen anastomosieren mit einander oder die anderen beiden Plexi-6. Innerhalb der Kapillare Wand perizyten sind eingebettet in die Basalmembran und Linie die abluminalen Seite des vaskulären endothelialen Zellen.
Zu diesem Zeitpunkt gibt es keine einzigartige biologische Marker für diese perizyten, die sie von anderen vaskulären Zellen unterscheiden kann. Platelet-derived Wachstumsfaktor-Rezeptor β (PDGFRβ) und Nerven/Glia Antigen 2 (NG2) sind häufig verwendete Markierungen die perizyten aber auch andere vaskulären Zellen zu präsentieren. Identifizierung von perizyten wird weiter erschwert durch das Vorhandensein von Pericyte Teilmengen, deren Morphologie und Protein Ausdruck7variiert. Derzeit setzt die besten Identifizierung auf eine Kombination aus Protein-Marker und die charakteristischen Positionierung des Pericyte in der Gefäßwand. Wir zeigen hier drei verschiedene Gewebe Präparationstechniken für immunhistochemische Färbung PDGFRβ/NG2 Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h., Cryo-Abschnitte, ganze-Halterungen und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.
Mit Cryo-Abschnitten werden die Netzhaut und Sklera durch den Sehnerv geschnitten. Dies ermöglicht die Visualisierung aller geschichteten Strukturen von Neuronen. Die deutlichen zehn Schichten der Netzhaut sind offensichtlich als Vertauschung Kern- und axonalen/dendritischen Strukturen, die mit Flecken wie Hämatoxylin/Eosin oder fluoreszierende nuklearen 4', 6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI)8visualisiert werden können. Die metabolischen Anforderungen unterscheiden sich zwischen den Schichten9 und es bietet eine Methode, um festzustellen, das dicke oder insgesamt Fehlen einer bestimmten Ebene (z. B.der Verlust von retinalen Ganglienzellen ist eines der Markenzeichen von retinale Ischämie10, 11). Das Gefäßsystem ist klar, wie quer der Netzhaut durchschneidet, die es ermöglichen, die Kapillare Plexi innerhalb der jeweiligen Netzhaut Schichten12,13separat zu studieren.
Eher traditionell sind die Untersuchungen des retinalen Gefäßsystem Netzwerks in retinalen ganze-Halterungen durchgeführt. Gewebe vorbereitet ist die Netzhaut schneiden und flach wie eine Blume-förmige Struktur. Die Methode ist eine relativ schnelle Gewebe Präparationstechnik, die das gesamte Architektur retinalen Gefäßsystem hervorheben kann und es wird daher oft in der Untersuchung der Neovaskularisation in der murinen Netzhaut angewendet. Erfolgreiche Visualisierung von Microvasculature im gesamten montierte Netzhaut wird auch in die Entwicklung Neugeborener Maus und Ratte Netzhaut14,15,16,17,18, berichtet. 19. diese Studien zeigen eine definierte Pericytic-Aktivität mit größeren Kapillar-freie Flächen bei Erwachsenen im Vergleich zu den Neugeborenen Netzhaut14.
Eine weitere Möglichkeit der Visualisierung ist die Netzhaut Microvasculature nach hypotone Isolierung. Dieses Gewebe Präparationstechnik führt Netzhautgefäße und Kapillaren der neuronalen Zellen freigegeben wird. Diese Art von zweidimensionalen Bildgebung des retinalen Gefäße inselnetzes ist in der Regel nach retinalen Trypsin Verdauung20 durchgeführt und zur Beurteilung der vaskulären Anomalien der diabetischen Retinopathie einschließlich Pericyte Verlust und Kapillare Degeneration20,21,22. Die hypotone Isolationsmethode bietet die Untersuchungen der retinalen Gefäße gen und Protein regulatorischen Reaktionen mit RT-PCR und westlichen befleckenden23,24,25getan wurde. Wir bieten hier ein Protokoll für die free-Float-immunhistochemische Färbung des das hypotone isoliert retinalen Gefäßsystem als Alternative zu Trypsin-Verdauung, mikrovaskulären perizyten zu untersuchen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="902">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Geletin from porcine skin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:165px;">G2625-500G</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Albumin from chicken egg white</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:165px;">A5253-500G</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Deoxyribonuclease (DNAse) I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:165px;">D5025-15KU</td>
			<td style="width:171px;">Dissolved in 0.15 M NaCl</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:165px;">0332-100G</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Normal donkey serum</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:165px;">017-000-121, lot 129348</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Rabbit anti-PDGFR&#946;</td>
			<td style="width:175px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:165px;">sc-432</td>
			<td style="width:171px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Mouse anti-NG2</td>
			<td style="width:175px;">Abcam</td>
			<td style="width:165px;">ab50009</td>
			<td style="width:171px;">1:500</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:165px;">711-585-152</td>
			<td style="width:171px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Fluorescein (FITC) AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:165px;">715-095-151</td>
			<td style="width:171px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Cy2 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:165px;">711-225-152</td>
			<td style="width:171px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Cy3 AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:165px;">715-165-150</td>
			<td style="width:171px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:165px;">D9542-1MG</td>
			<td style="width:171px;">Dissolved in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Anti-fading mounting medium</td>
			<td style="width:175px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:165px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Anti-fading mounting medium with DAPI</td>
			<td style="width:175px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:165px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:392px;">Nunc Lab-Tek II 4-well chamber slide</td>
			<td style="width:175px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:165px;">154526</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal cryo-sections, whole-mounts, and hypotonic isolated vasculature preparations for immunohistochemical visualization of microvascular pericytes

Netzhaut perizyten spielen eine wichtige Rolle bei vielen Erkrankungen des Auges. Immunhistochemische Färbung Techniken der Netzhautgefäße und mikrovaskuläre prägen perizyten ophthalmologischen Forschung. Es ist wichtig, eine geeignete Methode zur Visualisierung der mikrovaskulären perizyten wählen. Wir beschreiben retinalen mikrovaskuläre Pericyte immunhistochemische Färbung in Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem mit Antikörpern für Platelet-derived Wachstumsfaktor-Rezeptor β (PDGFRβ) und Nerven/Glia Antigen 2 (NG2). Dies ermöglicht es uns, vor- und Nachteile jeder der drei Gewebe Vorbereitungen für die Visualisierung von der Netzhaut mikrovaskulären perizyten hervorzuheben. Cryo-Abschnitte enthalten nur ein paar gelegentliche Quere Schnitten von den Microvasculature aber Transsectional Visualisierung aller Schichten der Netzhaut. Ganz-Mount bietet eine Übersicht über die gesamte Netzhaut Gefäßsystem, aber Visualisierung von den Microvasculature kann lästig sein. Hypotone Isolierung bietet eine Methode, um die gesamte Netzhaut Gefäßsystem durch den Abbau von Nervenzellen zu visualisieren, aber das macht das Gewebe sehr zerbrechlich.

Die erfolgreiche Protokolle bieten drei verschiedene retinalen Präparate zur Visualisierung von mikrovaskulärer perizyten. Jede dieser Methoden verwendet, die PDGFRβ und NG2 Immunoreactivity Co-Lokalisierung und die einmalige Lage der perizyten, die wrap-around der Kapillaren Endothel Foridentification.
Mit Cryo-Abschnitte die neuronalen Schichten durch die fluoreszierenden Dichte des DAPI gekennzeichnet Kernen und inneren id...

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Retinal Cryo-sections, Whole-Mounts, and Hypotonic Isolated Vasculature Preparations for Immunohistochemical Visualization of Microvascular Pericytes

Wir führen drei verschiedene Gewebe Vorbereitung Techniken für immunhistochemische Visualisierung der Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h. Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.

Netzhaut Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem Vorbereitungen für immunhistochemische Visualisierung von Mikrovaskulären Perizyten

Retinal pericytes play an important role in many diseases of the eye. Immunohistochemical staining techniques of retinal vessels and microvascular ...

Diese Methoden können helfen, wichtige Fragen im Bereich der Ophthalmologie wie Pericyte-Proliferation oder Migration zu beantworten. Der Hauptvorteil dieses Verfahrens besteht darin, dass sie eine Vielzahl von Visualisierungsoptionen bieten. Die Verfahren werden Karin Dreisig und Frank W.Blixt, zwei Post-Docs in unserem Labor, demonstrieren.Um das Auge zu enukleieren, verwenden Sie zuerst ein Skalpell, um die hinteren und vorderen Schlitze von etwa 0,5 Zentimetern im Rattenaugenlid zu machen. Schnappen Sie sich das Auge mit der Zange und neigen Sie vorsichtig zur Seite, um das umgebende Gewebe freizulegen. Entführen Sie das Auge durch Schnitte mit Einerse im Binde- und Muskelgewebe.Legen Sie das Auge kurz ein bis zwei Minuten in 4%Formaldehyd und phosphatgepufferte Saline. Spülen Sie kurz in Natriumpuffer, bevor Sie ein Loch an der Hornhaut limbus durch Anwendung von leichtem Druck mit der Spitze eines Skalpells. Schneiden Sie entlang der Hornhaut Limbus mit Sezierschere, um die Hornhaut und Linse mit Zange zu entfernen.Das restliche Gewebe zwei bis vier Stunden mit Netzhaut in 4%Formaldehyd in PBS untertauchen. Kryo-Schutz des Gewebes durch Eintauchen in Sorenson Phosphatpuffer enthält 10%Saccharose und dann 25%Saccharose. Übertragen Sie das Gewebe, sobald es auf den Boden des Behälters gesunken ist.Einbettung in Yazulla Medium mit 3%Gelatine aus Schweinehaut und 30%albumin aus Hühnereiweiß zubereitet. Als nächstes schneiden Sie 10-Mikron vertikale Kryosektionen der gelatine-eingebetteten Netzhaut bis zum Sehnerv. Die Kryosektionen auf eine Glasrutsche legen und mindestens eine Stunde trocknen lassen.Nach dem Trocknen die Rutsche 15 Minuten lang mit 0,25%Triton-X 100 in PBS untertauchen. Dann tropfen Sie eine Mischung aus 1:100 PDGF-Rezeptor-Beta und 1:500 NG2 primärer Antikörper in PBST und 1%BSA auf die Kryosektion und legen Sie sie in eine feuchte Kammer bei vier Grad Celsius über Nacht. Waschen Sie am nächsten Tag die Abschnitte, indem Sie die Rutsche zweimal für jeweils 15 Minuten in PBST eintauchen.Dann tropfen Sie eine Mischung aus 1:100 Anti-Maus Alexa Fluor 594-verknüpft und 1:100 Anti-Rabbit FITC-gebundenen sekundären Antikörpern in PBST mit 3%BSA auf die Kryosektionen verdünnt und für eine Stunde im Dunkeln inkubieren. Nach der Inkubation spülen Sie die Glasrutsche in PBST zweimal für jeweils 15 Minuten. Montieren Sie die gefärbten Kryosections mit anti-verblassendem Montagemedium, das DAPI und einen Deckelschlupf enthält.Eine zweite Netzhautgewebe-Vorbereitungstechnik ist vollgemountet. Verwenden Sie nach der Entfernung der Hornhaut kleine Öffnungsbewegungen von Zangen, um die Netzhaut vom retinalen Pigmentepithel in Richtung des Sehnervs zu trennen. Befreien Sie die Netzhaut am Sehnerv mit einer Sezierschere und machen Sie drei bis vier Schlitze von wenigen Millimetern Länge von der Netzhautperipherie zum Sehnervenkopf.Die Netzhaut auf eine Glasrutsche verteilen und fünf bis zehn Minuten trocknen lassen. 4%Formaldehyd auf die Netzhaut tropfen und 20 bis 30 Minuten fixieren. Nach der Fixierung mit PBS abspülen.Für optimale Ergebnisse, Immunostain direkt nach dem Spülen. Zuerst tropfen SIE PBST auf die gesamte Halterung und inkubieren bei Raumtemperatur für 15 Minuten. Gießen Sie den PBST ab, fügen Sie dann die primäre Antikörperlösung hinzu und inkubieren Sie in einer feuchten Kammer bei vier Grad Celsius über Nacht.Gießen Sie am nächsten Tag den primären Antikörper ab und tropfen Sie auf PBST, um die Netzhaut zweimal für 15 Minuten jedes Mal zu spülen. Nach dem Abgießen der zweiten Wäsche, tropfen Sekundärantikörperlösung auf die Netzhaut und inkubieren für eine Stunde in einer feuchten Kammer bei Raumtemperatur im Dunkeln. Nach der sekundären Antikörper-Inkubation zweimal mit PBST waschen wie zuvor.Montieren Sie die gebeizte Vollmontage mit einem anti-verblassenden Montagemedium mit DAPI und einem Deckelschlupf. Alternativ zur Vollmontage der Netzhaut kann die Netzhautvaskulatur durch hypotonische Isolierung isoliert werden. Legen Sie die Netzhaut zunächst in einem Milliliter entionisiertes Wasser in eine 24-Well-Platte und schütteln Sie bei 200 Umdrehungen pro Minute mit einer 1,5-Millimeter-Vibrationsumlaufbahn für eine Stunde bei Raumtemperatur, und fügen Sie dann 200 Einheiten DNAse 1 hinzu, um die lysierten Zellablagerungen von der Netzhautvaskulatur zu trennen und weitere 30 Minuten bei Raumtemperatur zu schütteln.Spülen Sie die Netzhaut in entionisiertem Wasser für jeweils fünf Minuten mit Schütteln bei 150 bis 300 Umdrehungen pro Minute, um neuronale Zellablagerungen zu entfernen. Die Netzhaut sollte mit jeder Spülung transparenter werden, was auf die Entfernung neuronaler Zellablagerungen hindeutet. Nach dem Spülen die Netzhaut in einem Milliliter 4%Paraformaldehyd und PBS für 10 Minuten bei Raumtemperatur fixieren.Spülen Sie mit PBS dreimal. Wenn Sie mit der Immunfärbung fortfahren, blockieren Sie die hypotonisch-isolierte Vaskulatur mit 500 Mikrolitern 10%Eselsserum, das in PBS für eine Stunde verdünnt wird, wobei bei 100 U/min geschüttelt wird. Nach der Blockierung, inkubieren Sie die Netzhaut über Nacht in 600 Mikroliter primärer Antikörperlösung bestehend aus 1:100 PDGF-Rezeptor Beta und 1:500 NG2 primärer Antikörper in 10%Eselserum und PBS verdünnt.Am nächsten Tag spülen Sie das Netzhautnetz dreimal in PBS für jeweils fünf Minuten ab, dann in 1:100 Anti-Maus Alexa Fluor 594-verknüpft und 1:100 Anti-Rabbit FITC-gebundene sekundäre Antikörper, verdünnt in 10%Eselserum und PBS mit Schütteln bei 100 Rpm bei Raumtemperatur für eine Stunde im Dunkeln. Nach einer fünfminütigen Wäsche in PBST 15 Minuten lang in 0,2 Nanogramm pro Milliliter DAPI und PBST inkubieren. Waschen Sie dreimal für fünf Minuten mit PBST, während vor Licht geschützt.Als nächstes schneiden Sie die Spitze einer Pasteur-Pipette aus Kunststoff. Entfernen Sie scharfe Kanten mit einer Pipettenspitze, und befeuchten Sie die Pasteur Pipette mit PBST, dann aspirieren Sie die Netzhautvaskulatur in die Pipette und geben Sie in eine Vier-Well-Glaskammer-Rutsche. Der feuchtigkeitsbefeuchtende Schritt ist wichtig, um zu vermeiden, dass die Netzhautvaskulatur an der Innenseite der Pasteur Pipette klebt.Positionieren Sie die Netzhautvaskulatur, indem Sie die Kammerfolie hin und her kippen. Entfernen Sie das Medium aus den Brunnen der Kammerrutsche. Die Oberflächenspannung der Flüssigkeit flacht die Gefäße auf den Boden des Schlittens ab.Falls erforderlich, tropfen Flüssigkeitstropfen auf die Netzhautvaskulatur, um sich zu entfalten. Stellen Sie die korrekte Entfaltung unter dem Mikroskop sicher, bevor Sie die Kunststoffbohrungen aus dem Kammerschlitten entfernen. Montieren Sie die gebeizte Vaskulatur mit anti-verblassendem Montagemedium und einem Deckelschlupf.Die NG2-Immunhistochemie zeigt positive Gefäße im inneren Teil der Netzhaut. Pfeile zeigen kreisförmige und hufeisenförmige Immunreaktivität in den Gefäßen an. Die Pfeilspitze weist auf ein längs geschnittenes Gefäß hin.Die PDGF-Rezeptor-Beta-Immunhistochemie zeigt eine ähnliche Immunreaktivität wie NG2. Auch hier zeigen die Pfeile und pfeilspitzen Spitzen die Immunreaktivität in den Gefäßen an. Dieses Bild zeigt eine Verschmelzung von NG2 in grün, PDGF-Rezeptor-Beta in Rot und DAPI in Blau.Durch die Überlagerung der drei verschiedenen Filter, Es wird aufgedeckt, dass NG2 und PDGF-Rezeptor Beta sind ko-lokalisiert. Dieses Bild zeigt eine immunostainierte Vollmontage-Präparation mit NG2-Färbung in Rot. Immunreaktivität ist entlang des oberflächlichen Gefäßnetzes mit intensiver Färbung in abluminalen Pericyten sichtbar.Die neuronalen Zellen sind als DAPI-Blaue Kerne zwischen der NG2-gefleckten Mikrovaskulatur sichtbar. Dieses Bild zeigt das hypotonische isolierte retinale Netzhautnetz der Ratte, das mit NG2 in grün und PDGF-Rezeptor-Beta in Rot gefärbt ist. Das gesamte Netzwerk zeigte NG2-Immunreaktivität.PDGF-Rezeptor Beta-Immunreaktivität wurde in Zellsomas gefunden. Bei höherer Vergrößerung ist klar, dass PDGF-Rezeptor-Beta-Färbung nur in Zellsomas im Gefäßnetzwerk zu sehen ist, was auf Pericyt-Immunreaktivität hindeutet. Einschließlich DAPI-Färbung zusammen mit NG2 und PDGF-Rezeptor Beta zeigt drei Pericyte in zwei undefinierten Gefäßwandzellen in diesem hoch-Vergrößerungsbild.Nach diesen Verfahren können andere Immunostainings wie glatte Muskelzellen oder endotheliale Färbungen verwendet werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten. Zum Beispiel, wie sehen Zellen in der Netzhautvaskulatur nach Ischämie aus?

Research

JoVE Journal

Biology

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