Name: crispr/cas9 gene editing to make conditional mutants of human malaria parasite p. falciparum
Uploaded: 2018-09-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum at JoVE.com

हम Muthugapatti Kandasamy जॉर्जिया के विश्वविद्यालय में धंयवाद (UGA) तकनीकी सहायता और जोस-जुआन लोपेज के लिए जैव चिकित्सा माइक्रोस्कोपी कोर-pUF1 Cas9 और pL6 plasmids बांटने के लिए रूबियो । यह काम आर्क्स फाउंडेशन पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था D.W.C. करने के लिए और H.M.K. करने के लिए, UGA स्टार्टअप धन V.M. करने के लिए, सिक्का फाउंडेशन के मार्च से अनुदान (तुलसी कॉनर स्टार्टर विद्वान अनुसंधान पुरस्कार) V.M. के लिए, और अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान संस्थान (R00AI099156 और R01AI130139) को V.M. और (T32AI060546) को H.M.K.

फाल्सीपेरम की निरंतर संस्कृति मानव RBCs के उपयोग की आवश्यकता है, और हम सभी पहचानकर्ता और गुमनामी से छीन लिया गया है कि खून की व्यावसायिक रूप से खरीदी इकाइयों का उपयोग किया । संस्थागत समीक्षा बोर्ड और ज...

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> World Malaria Report. , (2017).</li><li>Miller, L. H., Baruch, D. I., Marsh, K., Doumbo, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenic+basis+of+malaria.">The pathogenic basis of malaria.</a> Nature. 415 (6872), 673-679 (2002).</li><li>Florentin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PfClpC+Is+an+Essential+Clp+Chaperone+Required+for+Plastid+Integrity+and+Clp+Protease+Stability+in+Plasmodium+falciparum.">PfClpC Is an Essential Clp Chaperone Required for Plastid Integrity and Clp Protease Stability in Plasmodium falciparum.</a> Cell Reports. 21 (7), 1746-1756 (2017).</li><li>Muralidharan, V., Oksman, A., Pal, P., Lindquist, S., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+heat+shock+protein+110+stabilizes+the+asparagine+repeat-rich+parasite+proteome+during+malarial+fevers.">Plasmodium falciparum heat shock protein 110 stabilizes the asparagine repeat-rich parasite proteome during malarial fevers.</a> Nature Communications. 3, 1310 (2012).</li><li>Muralidharan, V., Oksman, A., Iwamoto, M., Wandless, T. J., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asparagine+repeat+function+in+a+Plasmodium+falciparum+protein+assessed+via+a+regulatable+fluorescent+affinity+tag.">Asparagine repeat function in a Plasmodium falciparum protein assessed via a regulatable fluorescent affinity tag.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences the USA. 108 (11), 4411-4416 (2011).</li><li>Beck, J. R., Muralidharan, V., Oksman, A., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEX+component+HSP101+mediates+export+of+diverse+malaria+effectors+into+host+erythrocytes.">PTEX component HSP101 mediates export of diverse malaria effectors into host erythrocytes.</a> Nature. 511 (7511), 592-595 (2014).</li><li>Ghorbal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+in+the+human+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome editing in the human malaria parasite Plasmodium falciparum using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nature Biotechnology. 32 (8), 819-821 (2014).</li><li>Wagner, J. C., Platt, R. J., Goldfless, S. J., Zhang, F., Niles, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+CRISPR-Cas9-mediated+genome+editing+in+Plasmodium+falciparum.">Efficient CRISPR-Cas9-mediated genome editing in Plasmodium falciparum.</a> Nature Methods. 11 (9), 915-918 (2014).</li><li>Doudna, J. A., Charpentier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing.+The+new+frontier+of+genome+engineering+with+CRISPR-Cas9.">Genome editing. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9.</a> Science. 346 (6213), 1258096 (2014).</li><li>Wang, H., La Russa, M., Qi, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+in+Genome+Editing+and+Beyond.">CRISPR/Cas9 in Genome Editing and Beyond.</a> Annual Review of Biochemistry. 85, 227-264 (2016).</li><li>Kirkman, L. A., Deitsch, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+and+the+generation+of+diversity+in+malaria+parasites.">Antigenic variation and the generation of diversity in malaria parasites.</a> Current Opinion in Microbiology. 15 (4), 456-462 (2012).</li><li>Lee, A. H., Symington, L. S., Fidock, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+Repair+Mechanisms+and+Their+Biological+Roles+in+the+Malaria+Parasite+Plasmodium+falciparum.">DNA Repair Mechanisms and Their Biological Roles in the Malaria Parasite Plasmodium falciparum.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 78 (3), 469-486 (2014).</li><li>Cobb, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Exported+Chaperone+PfHsp70x+Is+Dispensable+for+the+Plasmodium+falciparum+Intraerythrocytic+Life+Cycle.">The Exported Chaperone PfHsp70x Is Dispensable for the Plasmodium falciparum Intraerythrocytic Life Cycle.</a> mSphere. 2 (5), (2017).</li><li>Prommana, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+knockdown+of+Plasmodium+gene+expression+using+the+glmS+ribozyme.">Inducible knockdown of Plasmodium gene expression using the glmS ribozyme.</a> Public Library of Science One. 8 (8), e73783 (2013).</li><li>Ganesan, S. M., Falla, A., Goldfless, S. J., Nasamu, A. S., Niles, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+RNA-protein+modules+integrated+with+native+translation+mechanisms+to+control+gene+expression+in+malaria+parasites.">Synthetic RNA-protein modules integrated with native translation mechanisms to control gene expression in malaria parasites.</a> Nature Communications. 7, 10727 (2016).</li><li>Li, M. Z., Elledge, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+homologous+recombination+in+vitro+to+generate+recombinant+DNA+via+SLIC.">Harnessing homologous recombination in vitro to generate recombinant DNA via SLIC.</a> Nature Methods. 4 (3), 251-256 (2007).</li><li>Drew, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+food+vacuole+plasmepsins+are+activated+by+falcipains.">Plasmodium food vacuole plasmepsins are activated by falcipains.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (19), 12870-12876 (2008).</li><li>Wu, Y., Sifri, C. D., Lei, H. -. H., Su, X. -. Z., Wellems, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Plasmodium+falciparum+within+human+red+blood+cells.">Transfection of Plasmodium falciparum within human red blood cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 92, 973-977 (1995).</li><li>Janse, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+efficiency+transfection+of+Plasmodium+berghei+facilitates+novel+selection+procedures.">High efficiency transfection of Plasmodium berghei facilitates novel selection procedures.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 145 (1), 60-70 (2006).</li><li>Counihan, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+parasites+deploy+RhopH2+into+the+host+erythrocyte+to+obtain+nutrients,+grow+and+replicate.">Plasmodium falciparum parasites deploy RhopH2 into the host erythrocyte to obtain nutrients, grow and replicate.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Klemba, M., Beatty, W., Gluzman, I., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trafficking+of+plasmepsin+II+to+the+food+vacuole+of+the+malaria+parasite+Plasmodium+falciparum.">Trafficking of plasmepsin II to the food vacuole of the malaria parasite Plasmodium falciparum.</a> Journal of Cell Biology. 164 (1), 47-56 (2004).</li><li>Labun, K., Montague, T. G., Gagnon, J. A., Thyme, S. B., Valen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHOPCHOP+v2:+a+web+tool+for+the+next+generation+of+CRISPR+genome+engineering.">CHOPCHOP v2: a web tool for the next generation of CRISPR genome engineering.</a> Nucleic Acids Resesarch. 44 (W1), W272-W276 (2016).</li><li>Peng, D., Tarleton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EuPaGDT:+a+web+tool+tailored+to+design+CRISPR+guide+RNAs+for+eukaryotic+pathogens.">EuPaGDT: a web tool tailored to design CRISPR guide RNAs for eukaryotic pathogens.</a> Microbial Genomes. 1 (4), e000033 (2015).</li><li>Shen, B., Brown, K. M., Lee, T. D., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Gene+Disruption+in+Diverse+Strains+of+Toxoplasma+gondii+Using+CRISPR/CAS9.">Efficient Gene Disruption in Diverse Strains of Toxoplasma gondii Using CRISPR/CAS9.</a> mBio. 5 (3), (2014).</li><li>Janssen, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-mediated+gene+modification+and+gene+knock+out+in+the+human-infective+parasite+Trichomonas+vaginalis.">CRISPR/Cas9-mediated gene modification and gene knock out in the human-infective parasite Trichomonas vaginalis.</a> Scientific Reports. 8 (1), 270 (2018).</li><li>Spillman, N. J., Beck, J. R., Ganesan, S. M., Niles, J. C., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chaperonin+TRiC+forms+an+oligomeric+complex+in+the+malaria+parasite+cytosol.">The chaperonin TRiC forms an oligomeric complex in the malaria parasite cytosol.</a> Cellular Microbiology. 19 (6), (2017).</li><li>Brancucci, N. M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidylcholine+Regulates+Sexual+Stage+Differentiation+in+the+Human+Malaria+Parasite+Plasmodium+falciparum.">Lysophosphatidylcholine Regulates Sexual Stage Differentiation in the Human Malaria Parasite Plasmodium falciparum.</a> Cell. , (2017).</li><li>Ng, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9-modified+pfmdr1+protects+Plasmodium+falciparum+asexual+blood+stages+and+gametocytes+against+a+class+of+piperazine-containing+compounds+but+potentiates+artemisinin-based+combination+therapy+partner+drugs.">CRISPR-Cas9-modified pfmdr1 protects Plasmodium falciparum asexual blood stages and gametocytes against a class of piperazine-containing compounds but potentiates artemisinin-based combination therapy partner drugs.</a> Molecular Microbiology. 101 (3), 381-393 (2016).</li><li>Lim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UDP-galactose+and+acetyl-CoA+transporters+as+Plasmodium+multidrug+resistance+genes.">UDP-galactose and acetyl-CoA transporters as Plasmodium multidrug resistance genes.</a> Nature Microbiology. , (2016).</li><li>Adjalley, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+Plasmodium+falciparum+sexual+development+reveals+potent+transmission+blocking+activity+by+methylene+blue.">Quantitative assessment of Plasmodium falciparum sexual development reveals potent transmission blocking activity by methylene blue.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 108 (47), E1214-E1223 (2011).</li><li>Sidik, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-wide+CRISPR+Screen+in+Toxoplasma+Identifies+Essential+Apicomplexan+Genes.">A Genome-wide CRISPR Screen in Toxoplasma Identifies Essential Apicomplexan Genes.</a> Cell. 166 (6), 1423-1435 (2016).</li><li>Amberg-Johnson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecule+inhibition+of+apicomplexan+FtsH1+disrupts+plastid+biogenesis+in+human+pathogens.">Small molecule inhibition of apicomplexan FtsH1 disrupts plastid biogenesis in human pathogens.</a> elife. 6, (2017).</li><li>Crawford, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid-free+CRISPR/Cas9+genome+editing+in+Plasmodium+falciparum+confirms+mutations+conferring+resistance+to+the+dihydroisoquinolone+clinical+candidate+SJ733.">Plasmid-free CRISPR/Cas9 genome editing in Plasmodium falciparum confirms mutations conferring resistance to the dihydroisoquinolone clinical candidate SJ733.</a> Public Library of Science One. 12 (5), e0178163 (2017).</li></ol>

CRISPR/Cas9 के कार्यांवयन फाल्सीपेरम में दोनों की क्षमता में वृद्धि हुई है और परजीवी जीनोम को संशोधित करने के लिए आवश्यक समय की मात्रा में कमी आई, आनुवंशिक हेरफेर के पिछले तरीकों की तुलना में । इस व्यापक प?...

मलेरिया एक विनाशकारी जीनस प्लाज्मोडियमके प्रोटोजोआ परजीवी की वजह से बीमारी है । पी फाल्सीपेरम, सबसे घातक मानव मलेरिया परजीवी, प्रति वर्ष लगभग ४४५,००० मौतों का कारण बनता है, ज्यादातर पांच साल की उंर के तहतबच्चों में ज्यादातर । प्लाज्मोडियम परजीवी एक जटिल जीवन एक मच्छर वेक्टर और एक हड्डीवाला मेजबान शामिल चक्र है । मनुष्य पहले संक्रमित हो जाता है जब एक संक्रमित मच्छर एक रक्त भोजन लेता है । फिर, परजीवी जिगर पर हमला करता है, जहां यह बढ़ता है, विकसित करता है, और लगभग एक सप्ताह के लिए विभाजित । इस प्रक्रिया के बाद, परजीवी खून, जहां वे लाल रक्त कोशिकाओं (RBCs) में अलैंगिक प्रतिकृति से गुजरना में जारी कर रहे हैं । RBCs के भीतर परजीवी के विकास मलेरिया2के साथ जुड़े नैदानिक लक्षणों के लिए सीधे जिंमेदार हैं ।
हाल ही में जब तक, ट्रांसजेनिक पी फाल्सीपेरम का उत्पादन एक श्रमसाध्य प्रक्रिया थी, दवा चयन के कई दौर है कि कई महीने लग गए और एक उच्च विफलता की दर को शामिल किया गया । इस बार लेने वाली प्रक्रिया relieson ब्याज के क्षेत्र में यादृच्छिक डीएनए टूट जाता है की पीढ़ी और परजीवी की अंतर्जात क्षमता को अपने जीनोम ठीक हालांकि मुताबिक़ मरंमत3,4,5,6 . हाल ही में, संकुल नियमित रूप से अंतराल Palindromic दोहराने/Cas9 (CRISPR/Cas9) जीनोम संपादन सफलतापूर्वक पी फाल्सीपेरम7,8में उपयोग किया गया है । मलेरिया अनुसंधान में इस नई तकनीक की शुरूआत इन घातक प्लाज्मोडियम परजीवी के जीवविज्ञान की समझ को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण रही है. CRISPR/Cas9 गाइड RNAs (gRNAs) के माध्यम से जीन के विशिष्ट लक्ष्यीकरण के लिए अनुमति देता है कि ब्याज की जीन के लिए मुताबिक़ हैं । gRNA/Cas9 परिसर gRNA के माध्यम से जीन पहचानता है, और Cas9 तो एक डबल किनारा तोड़ परिचय, जीव9,10में मरंमत तंत्र की दीक्षा मजबूर । क्योंकि P. फाल्सीपेरम गैर के माध्यम से डीएनए टूट जाता है मुताबिक़ अंत में शामिल होने की मरंमत मशीनरी का अभाव है, यह मुताबिक़ पुनर्संयोजन तंत्र का इस्तेमाल करता है और transfected मुताबिक़ डीएनए को एकीकृत Cas9 की मरंमत के लिए टेंपलेट्स/gRNA-प्रेरित डबल-कतरा तोड़11,12।
यहां, हम CRISPR/Cas9 जीनोम संपादन का उपयोग पी फाल्सीपेरम में सशर्त पछाड़ना म्यूटेंट की पीढ़ी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । प्रोटोकॉल glmS ribozyme के उपयोग को सशर्त पछाड़ना PfHsp70x (PF3D7_0831700) के प्रोटीन स्तर को दर्शाता है, निगरानी13,14फाल्सीपेरम की मेजबानी में पी RBCs द्वारा निर्यात किया जाता है । glmS ribozyme glucosamine के साथ उपचार द्वारा सक्रिय है (जो कोशिकाओं में glucosamine-6-फॉस्फेट में परिवर्तित कर दिया जाता है) अपने संबद्ध mRNA सट करने के लिए, प्रोटीन14में कमी करने के लिए अग्रणी. इस प्रोटोकॉल को आसानी से स्थिरीकरण डोमेन या आरएनए aptamers4,5,15के रूप में अन्य सशर्त पछाड़ना उपकरण, का उपयोग करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है । हमारे प्रोटोकॉल विवरण एक hemagglutinin (हा) टैग और glmS ribozyme कोडन अनुक्रम है कि मुताबिक़ खुले पढ़ने के फ्रेम (ओआरएफ) और 3 '-PfHsp70x के लिए कर रहे है के साथ मिलकर प्लाज्मिड की मरंमत की पीढ़ी का ब्यौरा । हम भी gRNA की अभिव्यक्ति ड्राइव करने के लिए एक दूसरे प्लाज्मिड की पीढ़ी का वर्णन । इन दो plasmids, एक तिहाई है कि Cas9 की अभिव्यक्ति ड्राइव के साथ, RBCs में transfected और पी फाल्सीपेरम परजीवी के जीनोम को संशोधित किया जाता है । अंत में, हम एक पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (पीसीआर) आधारित तकनीक का वर्णन टैग और glmS ribozyme के एकीकरण की पुष्टि करने के लिए । इस प्रोटोकॉल संशोधन या किसी भी पी फाल्सीपेरम जीन के पूर्ण नॉकआउट के लिए अत्यधिक अनुकूलनीय है, हमारे मलेरिया परजीवी के जीवविज्ञान में नई अंतर्दृष्टि उत्पंन करने की क्षमता को बढ़ाने ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gene Pulser Xcell Electroporator</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1652660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Pulser Xcell Electroporator</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>165-2086</td>
			<td>We buy the ones that are individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889-250g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSM1</td>
			<td>Gift from Akhil Vaidya lab</td>
			<td>Ganesan et al. Mol. Biochem. Parasitol. 2011 177:29-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP Tissue Culture 6 Well Plates</td>
			<td>MIDSCI</td>
			<td>TP92006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP 100mm Tissue Culture Dishes (12 mL Plate)</td>
			<td>MIDSCI</td>
			<td>TP93100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP Tissue Culture 96 Well Plates</td>
			<td>MIDSCI</td>
			<td>TP92096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP Tissue Culture 24 Well Plates</td>
			<td>MIDSCI</td>
			<td>TP92024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 2</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#B7002S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 2.1</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#B7202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BtgZI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#R0703L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SacII</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#R0157L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HindIII-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#R3104S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Afe1</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#R0652S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nhe1-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#R3131L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>#M0203S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL Steritop bottle top filter unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU10RE</td>
			<td>You can use any size that fits your needs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4378-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7902-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMK-U6</td>
			<td>Generated by the Muralidharan Lab</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pHA-glmS</td>
			<td>Generated by the Muralidharan Lab</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pUF1-Cas9</td>
			<td>Gift from the Jose-Juan Lopez-Rubio Lab</td>
			<td>Ghorbal et al. Nature Biotech 2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9636-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin Reagent</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15710-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thymidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1895-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PL6-eGFP BSD</td>
			<td>Generated by the Muralidharan Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puf1-cas9 eGFP gRNA</td>
			<td>Generated by the Muralidharan Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoSpin Gel and PCR Clean-up</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740609.250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumax I</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>N/A</td>
			<td>You will want to try a few batches to find out what the parasites will grow in best</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Red Blood Cells</td>
			<td>Interstate Blood Bank, Inc</td>
			<td>Email or call them directly for ordering</td>
			<td>We typically use O+ blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D7 parasite line</td>
			<td>Available upon request</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysogeny Broth (LB)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>You can make your own, it is not necessary to use exactly this</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicilin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1760-25</td>
			<td>We make a 1000X stock at 100mg/ml in water and store in the -20C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicilin</td>
			<td>Clonetech</td>
			<td>R050A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-EF1alpha</td>
			<td>Dr. Daniel Goldberg&#39;s Lab</td>
			<td>Washington University in St. Louis</td>
			<td>You can use your preferred loading control for western blots. This is just the one we use in our laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Anti-HA Clone 3F10, monoclonal</td>
			<td>Made by Roche, sold by Sigma</td>
			<td>11867423001</td>
			<td>You can use your preferred anti-HA antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.6 mL tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AB0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher HealthCare* PROTOCOL* Hema 3* Manual Staining System (Fixative+Solution I and II)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-122-911</td>
			<td>You can also use giemsa stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherfines Premium Frosted Microscope Slides - Size: 3 x 1 in.</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-544-3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

crispr/cas9 gene editing to make conditional mutants of human malaria parasite p. falciparum

मलेरिया दुनिया भर में रुग्णता और मृत्युदर का एक महत्वपूर्ण कारण है. इस रोग है, जो मुख्य रूप से उष्णकटिबंधीय और उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में रहने वाले लोगों को प्रभावित करता है, प्लाज्मोडियम परजीवी के साथ संक्रमण के कारण होता है । मलेरिया से निपटने के लिए अधिक प्रभावी औषधियों के विकास से इस जटिल परजीवी के जीव-जंतु की हमारी समझ में सुधार लाकर त्वरित किया जा सकता है. इन परजीवियों के आनुवंशिक हेरफेर उनके जीव विज्ञान को समझने के लिए महत्वपूर्ण है; हालांकि, ऐतिहासिक रूप से पी फाल्सीपेरम के जीनोम में हेरफेर मुश्किल हो गया है । हाल ही में, CRISPR/Cas9 जीनोम संपादन मलेरिया परजीवी में उपयोग किया गया है, आसान प्रोटीन टैगिंग, सशर्त प्रोटीन knockdowns की पीढ़ी, और जीन के विलोपन के लिए अनुमति दी । CRISPR/Cas9 जीनोम संपादन मलेरिया अनुसंधान के क्षेत्र में आगे बढ़ने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण साबित हो गया है । यहाँ, हम पी. म्यूटेंटमें glmS-आधारित सशर्त पछाड़ना फाल्सीपेरम पैदा करने के लिए एक CRISPR/Cas9 विधि का वर्णन करते हैं । इस विधि अत्यधिक प्रोटीन टैगिंग और जीन नॉकआउट सहित आनुवंशिक जोड़तोड़, के अंय प्रकार के लिए अनुकूलनीय है ।

plasmids के एक योजनाबद्ध इस विधि में इस्तेमाल के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एक ढाल उत्परिवर्तन का एक उदाहरण चित्रा 1में दिखाया गया है । कैसे अभिकर्मक के बाद उत्परिवर्ती परजीवी की ?...

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CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

CRISPR/Cas9 जीन संपादन मानव मलेरिया परजीवी पी. फाल्सीपेरम की सशर्त म्यूटेंट बनाने के लिए

हम फाल्सीपेरम/CRISPR जीनोम संपादन का उपयोग प्लाज्मोडियम Cas9 में glmSआधारित सशर्त पछाड़ना म्यूटेंट पैदा करने के लिए एक विधि का वर्णन ।

Malaria is a significant cause of morbidity and mortality worldwide. This disease, which primarily affects those living in tropical and subtropical ...

यह विधि सशर्त नॉकआउट के माध्यम से प्रोटीन फ़ंक्शन को उजागर करने में मदद करके मानव मलेरिया परजीवी, पी फाल्सीपेरम के जीव विज्ञान में महत्वपूर्ण प्रश्नों का उत्तर देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह पिछले तरीकों की तुलना में सशर्त म्यूटेंट की अपेक्षाकृत आसान पीढ़ी के लिए अनुमति देता है। शुरू करने के लिए, काट काट करने के लिए जाओ और लक्ष्य के तहत Fasta Target'under का चयन करें, जीन के तीन प्रमुख यूटीआर की शुरुआत से एक जीन और २०० आधार जोड़े के खुले पढ़ने के फ्रेम के तीन प्रमुख अंत से २०० आधार जोड़े पेस्ट करें ।In'select P.Falciparum' के तहत और CRISPR/Cas9'in का चयन करें ' नेक्स्ट, क्लिक करें लक्ष्य साइट्स ' प्रस्तुत विकल्पों में से एक gRNA अनुक्रम चुनें, जो सबसे कुशल gRNA को वरीयता दे रहा है जो संशोधन की साइट के सबसे करीब है और इसमें सबसे कम ऑफ-टारगेट साइटें हैं । ग्रएनए अनुक्रम और इसके रिवर्स पूरक को पॉलीएक्रीलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस शुद्ध ओलिगोस के रूप में खरीदें। पीएफएच-sp70x को लक्षित करने के लिए उपयोग किया जाने वाला ग्रएनए अनुक्रम टेक्स्ट प्रोटोकॉल में पाया जा सकता है।एक बाँझ १.५ मिलीमीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में PMK-U6, pUF1-Cas9, और पीएचए-glmS डीएनए के ४० माइक्रोग्राम जोड़ें । ट्यूब में पानी में तीन मोलर सोडियम एसीटेट के डीएनए की मात्रा का दसवां हिस्सा जोड़ें और इसे भंवर का उपयोग करके अच्छी तरह से मिलाएं। फिर, ट्यूब में 100 प्रतिशत इथेनॉल की मात्रा का 2.5 गुना जोड़ें और कम से कम 30 सेकंड के लिए भंवर का उपयोग करके इसे अच्छी तरह से मिलाएं।ट्यूब को बर्फ पर या माइनस 20 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए रखें। इसके बाद 18, 300 बार जी पर 30 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर ट्यूब को सेंट्रलाइज करें। अपकेंद्रित्र के बाद, ध्यान से गोली परेशान किए बिना ट्यूब से सुपरनैंट हटा दें।ट्यूब में 70 प्रतिशत इथेनॉल की मात्रा तीन गुना जोड़ें और भंवर का उपयोग करके इसे संक्षेप में मिलाएं। 18 पर ट्यूब अपकेंद्रित्र, ३०० बार जी चार डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए । फिर, ध्यान से गोली परेशान किए बिना ट्यूब से सुपरनिटेंट को हटा दें।ट्यूब को खुला छोड़ दें और गोली को 15 मिनट के लिए सूखने दें। जब तक यह ट्रांसफैक्शन के लिए आवश्यक नहीं है, तब तक उपजी डीएनए को शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। आरबीसी को ट्रांसफेक्ट करने के लिए, टेक्स्ट प्रोटोकॉल में वर्णित 1X साइटोमिक्स बफर के साथ-साथ अधूरा और पूर्ण आरपीएमआई तैयार करें।फ़िल्टर 0.22 माइक्रोन फ़िल्टर का उपयोग करके बफर को स्टरलाइज करें। डीएनए और भंवर को भंग करने के लिए 1X साइटोमिक्स के 380 माइक्रोलीटर जोड़ें। डीएनए को 10 मिनट के लिए 1X साइटोमिक्स में भंग करने दें, हर तीन मिनट में 10 सेकंड के लिए भंवर दें।एक बाँझ, 15 मिलीलीटर शंकु नली में, 1X साइटोमिक्स के चार मिलीलीटर के साथ अधूरे आरपीएमआई में अलग मानव आरबीसी के 300 माइक्रोलीटर गठबंधन करते हैं। तीन मिनट के लिए ८७० बार जी पर आरबीसी अपकेंद्रित्र । इसके बाद आरबीसी पैलेट से सुपरनिट निकालें।डीएनए-साइटोमिक्स मिश्रण के साथ आरबीसी गोली को फिर से निलंबित करें और इसे 0.2 सेंटीमीटर इलेक्ट्रोपॉरेशन क्यूवेट में स्थानांतरित करें। पाठ प्रोटोकॉल में सूचीबद्ध शर्तों का उपयोग करके आरबीसी को पोरेट करें। इलेक्ट्रोपाउशन के बाद, सामग्री को क्यूवेट से 15 मिलीलीटर शंकु नली में स्थानांतरित करें जिसमें पांच मिलीलीटर पूर्ण आरपीएमआई होते हैं।20 डिग्री सेल्सियस पर तीन मिनट के लिए ८७० बार जी पर ट्यूब अपकेंद्रित्र । इसके बाद सुपरनेट को डिसेंट करें। अब, पूर्ण RPMI के चार मिलीलीटर में गोली फिर से निलंबित और एक अच्छी तरह से एक छह अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति की थाली में एक अच्छी तरह से हस्तांतरण ।स्थानांतरित आरबीसी में एक उच्च schizont संस्कृति के ४०० माइक्रोलीटर जोड़ें । तीन प्रतिशत ऑक्सीजन, तीन प्रतिशत CO2, और ९४ प्रतिशत नाइट्रोजन के तहत ३७ डिग्री सेल्सियस पर सभी संस्कृतियों को बनाए रखें । अगले दिन, संस्कृति को पूरी आरपीएमआई के चार मिलीलीटर के साथ धोएं।तीन मिनट के लिए ८७० बार जी पर संस्कृति अपकेंद्रित्र । सुपरनेट को एस्पिरेट करें। पूर्ण RPMI के चार मिलीलीटर में संस्कृति को फिर से निलंबित करें ।48 घंटे बाद, संस्कृति को चार मिलीलीटर पूर्ण आरपीएमआई के साथ धोएं। फिर, Cas9 प्लाज्मिड के लिए चयन करने के लिए एक माइक्रोमोलर डीएसएम1 युक्त पूर्ण आरपीएमआई में संस्कृति को फिर से निलंबित करें। इस बिंदु के बाद, संस्कृति माध्यम को ताजा पूर्ण आरपीएमआई प्लस एक माइक्रोमॉलर डीएसएम1 के साथ हर 48 घंटे में बदलें।प्रत्येक दिन संस्कृतियों को पूर्ण आरपीएमआई के साथ धोना जारी रखें जब तक कि परजीवी रक्त धब्बा से दिखाई नहीं देते हैं। एक रक्त धब्बा बनाने के लिए, एक 0.6 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में संस्कृति के 150 माइक्रोलीटर पिपेट करें। 30 सेकंड के लिए 1, 700 बार जी पर अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को गोली देने के बाद, सुपरनेट से दूर हो जाते हैं।एक पिपेट का उपयोग करें ताकि छर्र कोशिकाओं को ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जा सके। पहली स्लाइड के लिए एक 45 डिग्री कोण पर आयोजित एक दूसरे गिलास स्लाइड का उपयोग करना, रक्त की बूंद धब्बा। निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध धुंधला किट का उपयोग कर स्लाइड दाग।100 गुना तेल विसर्जन उद्देश्य का उपयोग कर परजीवी देखें। ट्रांसफैक्शन के बाद पांच दिन की शुरुआत, संस्कृति माध्यम में आरबीसी को फिर से निलंबित करने के साथ संस्कृति के दो मिलीलीटर को हटा दें । दो प्रतिशत हेमेटोरिट पर ताजा माध्यम और रक्त के दो मिलीलीटर वापस जोड़ें।सप्ताह में एक बार इस तरीके से ताजा रक्त जोड़ें जब तक परजीवी फिर से प्रकट होता है, जैसा कि पतले रक्त धब्बा द्वारा निर्धारित किया जाता है। 200 माइक्रोलीटर प्रति 0.5 परजीवी की अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए परजीवी संस्कृति के सीरियल कमजोर पड़ने का प्रदर्शन करें। एक ९६ अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति प्लेट के कुओं के लिए पतला संस्कृति के २०० माइक्रोलीटर जोड़ें ।क्लोनिंग प्लेट को तब तक बनाए रखें जब तक कि कुओं में परजीवी पता नहीं लगा लेते। हर 48 घंटे में 96-वेल प्लेट में मीडियम को फ्रेश मीडियम से बदलें। सप्ताह में एक बार, क्लोनिंग प्लेट शुरू करने के पांच दिन बाद, प्रत्येक कुएं से 100 माइक्रोलीटर निकालें और ताजा मध्यम प्लस रक्त के 100 माइक्रोलीटर वापस जोड़ें।परजीवी युक्त किसी भी कुओं की पहचान करने के लिए, लगभग 20 मिनट के लिए 45 डिग्री कोण पर 96-अच्छी तरह से प्लेट रखें, जिससे रक्त प्लेट के भीतर एक कोण पर व्यवस्थित हो सके। इसके बाद 96-वेल प्लेट को लाइट बॉक्स पर रखें। ध्यान दें कि परजीवी युक्त कुओं में परजीवी द्वारा माध्यम के अम्लीकरण के कारण परजीवी मुक्त कुओं के गुलाबी मीडिया की तुलना में रंग में पीले रंग का मीडिया होता है।एक सीरोलॉजिकल पिपेट का उपयोग करके, परजीवी युक्त कुओं की सामग्री को परजीवी के विस्तार की अनुमति देने के लिए 24-अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति प्लेट में ले जाएं। पीसीआर विश्लेषण का उपयोग करके, सही एकीकरण के लिए इन क्लोनल परजीवी लाइनों की जांच करें। एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख के परिणाम यहां दिखाए जाते हैं, जो पीएफएच-sp70x की सफलतापूर्वक एचए टैगिंग का प्रदर्शन करते हैं।पीएफएच-sp70x glmS परजीवी तय किए गए थे और एक नाभिक मार्कर के रूप में DAPI के साथ दाग, साथ ही एचए के लिए एंटीबॉडी। झिल्ली से जुड़े हिस्टिडीन समृद्ध प्रोटीन एक, मेजबान आरबीसी के लिए प्रोटीन निर्यात का एक मार्कर । ग्लूकोसामाइन के साथ उपचार के बाद पीएफएच-sp70x प्रोटीन स्तर का एक पश्चिमी दाग विश्लेषण यहां दिखाया गया है । जैसा कि अपेक्षित था, उपचार की अवधि के दौरान प्रोटीन का स्तर कम हो जाता है।यह तकनीक परजीवी विज्ञान के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए मलेरिया परजीवी के जीव विज्ञान में बुनियादी सवालों की जांच करने का मार्ग प्रशस्त करती है। यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि P.Falciparum एक रक्त जनित रोगजनक है और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहना जाना चाहिए।

Research

JoVE Journal

Genetics

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

QTL मैपिंग और सीआरआईएसपीआर / सीएस 9 में एक ड्रग प्रतिरोध जीन को पहचानने के लिए संपादन<em&gt; टोक्सोप्लाज्मा गोंडी</em

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the ...

Using a Fluorescent PCR-capillary Gel Electrophoresis Technique to Genotype CRISPR/Cas9-mediated Knockout Mutants in a High-throughput Format

एक उच्च throughput प्रारूप में / Cas9 की मध्यस्थता नॉकआउट म्यूटेंट CRISPR जीनोटाइप के लिए एक फ्लोरोसेंट पीसीआर केशिका जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीक का उपयोग करते हुए

The development of programmable genome-editing tools has facilitated the use of reverse genetics to understand the roles specific genomic sequences play ...

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

स्तनधारी कोशिकाओं में सीआरआईएसपीआर / कैस 9-मध्यस्थता वाली जीन नॉकआउट्स के चयन-आश्रित और स्वतंत्र जनरेशन

The CRISPR/Cas9 genome engineering system has revolutionized biology by allowing for precise genome editing with little effort. Guided by a single guide ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

एक मानक पद्धति पर जांच करने के लिए साइट Mutagenicity के एक समारोह के रूप में बिंदु उत्परिवर्तन मरंमत Catalyzed द्वारा CRISPR/Cas9 और SsODN मानव कोशिकाओं में

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection CRISPR/Cas9 प्रोटीन की चैनल कैटफ़िश, Ictalurus punctatus, जीन संपादन के लिए भ्रूण

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Murine और मानव टेम जनक कोशिकाओं के अत्यधिक कुशल जीन व्यवधान CRISPR द्वारा Cas9/

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

C. एलिगेंस में जीनोमिक पॉइंट म्यूटेंट पैदा करने के लिए एक रैपिड और सतही पाइपलाइन का उपयोग CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

The clustered regularly interspersed palindromic repeats (CRISPR)-CRISPR-associated protein 9 (Cas9) prokaryotic adaptive immune defense system has been ...

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediated Precise Gene Editing by Tube Electroporation

CRISPR/Cas9 Ribonucleoप्रोटीन-मध्यस्थ सटीक जीन संपादन द्वारा ट्यूब इलेक्ट्रोपोरेशन

Gene editing nucleases, represented by CRISPR-associated protein 9 (Cas9), are becoming mainstream tools in biomedical research. Successful delivery of ...

Generation of Defined Genomic Modifications Using CRISPR-CAS9 in Human Pluripotent Stem Cells

मानव Pluripotent स्टेम सेल में CRISPR-CAS9 का उपयोग कर परिभाषित जीनोमिक संशोधनों का उत्पादन

Human pluripotent stem cells offer a powerful system to study gene function and model specific mutations relevant to disease. The generation of precise ...

CRISPR-Cas9-Mediated Genome Editing in the Filamentous Ascomycete Huntiella omanensis

CRISPR-Cas9-Mediated Genome Editing in the Filamentous Ascomycete Huntiella omanensis

CRISPR-Cas9-मध्यस्थता जीनोम संपादन में फिलामेंटस Ascomycete व्याईला ओमानेन्सिस

The CRISPR-Cas9 genome editing system is a molecular tool that can be used to introduce precise changes into the genomes of model and non-model species ...