Name: detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay
Uploaded: 2018-10-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

אנו מודים המעבדה Chernoff כל תורם אופטימיזציה של אימות של פרוטוקול זה, מריה ראדו, גלינה Semenova מסוים. אנו מודים גם אנדריי Efimov מתקן הדמיה תא ב- Fox Chase Cancer Center. עבודה זו נתמכה על ידי מענק של NIH (R01 CA148805) לשם פורשים.

1. הכנת פתרונות
<ol><li>להכין מקבע פתרון: 4% paraformaldehyde (PFA) ב 1 x PBS. 10 מ"ל, סעו 2.5 מ של 16% PFA ולהוסיף 7.5 mL ל- PBS 1 x. סכנות: כדורגלן הוא מסרטנים במינון נמוך. אדי במגע עם העור הם מסוכנים. חנות ב-20 ° C.</li>
	<li>להכין פתרון permeabilization: 0.1% טריטון X-100 ב 1 x PBS. עבור 100 מ של פתרון, להוסיף 100 µL של טריטון X-100 100 מ של 1 x PBS...

<ol>
	<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nore1B/Mst1+complex+restrains+antigen+receptor-induced+proliferation+of+na&#239;ve+T+cells.">The Nore1B/Mst1 complex restrains antigen receptor-induced proliferation of na&#239;ve T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20321-20326 (2008).</li><li>Praskova, M., Xia, F., Avruch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOBKL1A/MOBKL1B+phosphorylation+by+MST1+and+MST2+inhibits+cell+proliferation.">MOBKL1A/MOBKL1B phosphorylation by MST1 and MST2 inhibits cell proliferation.</a> Current Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Dan, I., Watanabe, N. M., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20+group+kinases+as+regulators+of+MAP+kinase+cascades.">The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinase cascades.</a> Trends in Cell Biology. 11 (5), 220-230 (2001).</li><li>Rawat, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H-ras+Inhibits+the+Hippo+Pathway+by+Promoting+Mst1/Mst2Heterodimerization.">H-ras Inhibits the Hippo Pathway by Promoting Mst1/Mst2Heterodimerization.</a> Current Biology. 26 (12), 1556-1563 (2016).</li><li>Creasy, C. L., Ambrose, D. M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20-like+protein+kinase,+Mst1,+dimerizes+and+contains+an+inhibitory+domain.">The Ste20-like protein kinase, Mst1, dimerizes and contains an inhibitory domain.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (35), 21049-21053 (1996).</li><li>Buntru, A., Trepte, P., Klockmeier, K., Schnoegl, S., Wanker, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Approaches+Toward+Quantitative+Mapping+of+the+Interactome.">Current Approaches Toward Quantitative Mapping of the Interactome.</a> Frontiers in Genetics. 74 (7), (2016).</li><li>Greenwood, C., Ruff, D., Kirvell, S., Johnson, G., Dhillon, H. S., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+assays+for+sensitive+quantification+of+proteins.">Proximity assays for sensitive quantification of proteins.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 4, 10-16 (2015).</li><li>Fredriksson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+detection+using+proximity-dependent+DNA+ligation+assays.">Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays.</a> Nature Biotechnology. 20 (5), 473-477 (2002).</li><li>Leuchowius, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+visualization+of+multiple+protein+complexes+in+individual+cells+in+tumor+tissue.">Parallel visualization of multiple protein complexes in individual cells in tumor tissue.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 12 (6), 1563-1571 (2013).</li><li>S&#246;derberg, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+individual+endogenous+protein+complexes+in+situ+by+proximity+ligation.">Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation.</a> Nature Methods. 3 (12), 995-1000 (2006).</li></ol>

מצאנו את זה שימושי כדי להשתמש זכוכית קאמרית שקופיות עבור הניסוי זה מאוד נוח לבצע ניסוי עם מספר שורות תאים (14-16), אין צורך לשנות את הדגימה בכל פעם במהלך ניתוח מיקרוסקופ. כמה סיבוכים שעלולים להתעורר, כגון סיכון מוגבר זיהום, עם נוגדנים. לכן, אנו ממליצים לשטוף כל טוב בנפרד במקום להשתמש צנצנת Coplin, ...

שיבוש MST1/היפו איתות חובר ל הפרעות התפתחותיות carcinogenesis1. ביונקים, להפעיל kinases MST1 ו- MST2 (phosphorylate) MOB1 ו- LATS1/2, הצופות על phosphorylates ואז חלבונית תעתיק שיתוף activator חלבונים הקשורים כן (הפה)2. (Unphosphorylated) בצורתו הפעילה, הפה יש פעילות oncogenic, שיפור שעתוק של גנים התפשטות תאים; לעומת זאת, כאשר הפה הוא מומת על ידי השביל היפו, התפשטות תאים מדוכא, אפופטוזיס בדרגה3. ברקמות, MST1 ו- MST2 קיים בעיקר בתור homodimers פעיל, אבל גירויים oncogenic יכול להגביר את רמות של MST1/MST2 heterodimers, ויש כאלה heterodimers לא פעיל4. עם זאת, כמה heterodimerization MST1/MST2 מוסדר נשאר ממעטים להבין. גם הומו - וגם heterodimers הם בתיווך דרך אינטראקציות בין C-מסוף סליל מפותל מחוזות MST1 MST2 הידועה בשם שרה תחומים5. באמצעות יישום בחיי עיר PLA הפגינו במאמר זה, נוכל להציג את הנוכחות של MST1/MST2 heterodimers בתאים תאי שוואן אנושי (HSC) וכליות עובריים אנושיים (HEK-293). PLA יש יתרון על פני אחרים/חלבון עצבו זיהוי משום שהיא מאפשרת הגילוי של אינטראקציות חלבון אנדוגני, אשר ניתן לזהות לכמת ללא הצורך של ביטוי transgene או את השימוש epitope תגיות 6.
התמרה חושית איתות המסלולים נשלטים במידה רבה על ידי האגודה מותנה של רכיב חלבונים. לדוגמה, גירוי של רוב קולטן טירוזין kinases מוביל שלהם הומו - או הטרו-dimerization הבאים שיוך נוספים חלבונים איתות תאיים, אשר עצמם מתחמי טופס נוסף. המטרה של שיטת ה-PLA היא להמחיש את הקרבה בין סוגי החלבונים בתאים, ובלבד החלבונים נמצאים פחות מ 30-40 ננומטר בנפרד. חלבון קרבה לרוב מאותרים על ידי הראשון המקננת התאים עם נוגדנים הראשי המתאים העולות מינים שונים (למשל., ראביט, עכבר) נגד כל חלבון אינטראקציה, ואז הוספת נוגדנים תלויי מין משניים, DNA מראש בשילוב כדי קצר רגשים. אם הגששים DNA בסמיכות, oligonucleotide דנ א קישור ספציפי באפשרותך לאגוד בו זמנית הן של אלה הגששים, ויצרו פלטפורמה עבור הגברה באמצעות בחיי עיר PCR או על ידי גלגול מנגנון מעגל. תגיות פלורסנט נוספו התגובה הגברה לאפשר ויזואליזציה של החלבונים אינטראקציה, אשר מופיעים כנקודות פלורסנט שניתן בקלות לכמת או מקומית אזורים מסוימים ב-7,תא8, 9 , 10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Chamber slides</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:344px;">178599</td>
			<td style="width:167px;">16 well, glass slide</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA probe Anti-Mouse Minus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92004</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA Probe Anti-Rabbit PLUS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92002</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Wash Buffers, Flurescence</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Detection Reagents Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92008</td>
			<td>Contains 5x Ligation, 1x Ligase, 5x Amlification Red, 1x Polymerase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9102s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Phospho-p44/42 MAPK (Erk1) (Tyr204)/(Erk2) (Tyr187)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5726s</td>
			<td>pERK antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MST2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3952s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Krs-2 (RJ-5)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-100449</td>
			<td>MST1 antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA in PBS for fixing solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton x100</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td>To prepare 0.1% Triton x-100 in 1xPBS for Permeabilization solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Confocal microscopy</td>
			<td>Leica TCS SP8, 63x</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis with ImageJ software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay

אינטראקציות חלבון מוסדר כעיקרון המנחה לאירועים איתות רבים, זיהוי אירועים כאלה הוא מרכיב חשוב בהבנת כמה מסלולים כאלה מאורגנים, כיצד הן פועלות. ישנן שיטות רבות לזהות אינטראקציות חלבון-חלבון בתאים, אבל יחסית מעטים ניתן להשתמש כדי לזהות אינטראקציות בין חלבונים אנדוגני. אחד שיטה כזו, הקרבה מצדו וזמינותו (PLA), יש מספר יתרונות להמליץ על השימוש בו. לעומת שיטות נפוצות אחרות של ניתוח אינטראקציית חלבון-חלבון, פלה יש רגישות גבוהה יחסית, ניתן לבצע עם מניפולציה תא מינימלי, ו, ב פרוטוקול המתוארים בזאת, מחייב רק שני במטרה נוגדנים נגזר מינים שונים (למשל., עכבר, ארנב), ריאגנט מתמחה אחד: ערכה של נוגדנים משניים שאינם oligonucleotides covalently מקושר ספציפי זה, הביאה בסמיכות אחד לשני, ליצור פלטפורמת amplifiable בחיי עיר PCR או מתגלגל מעגל ההגברה. במצגת זו, אנו מציגים כיצד ליישם את הטכניקה PLA להמחיש שינויים בסמיכות MST1 ו- MST2 בתאים קבוע. בטכניקה המתוארת בכתב היד ישימה במיוחד לניתוח של התא איתות מחקרים.

השתמשנו וזמינותו PLA לבחון את האינטראקציה בין MST1 לבין MST2 HEK-293, iHSC. התאים היו קבועים, permeabilized, מוכתם נוגדנים שונים, ואחריו בחיי עיר הגברה לפי הפרוטוקול פלה (איור 1). לתעד את רמת heterodimerization MST1/MST2, התאים היו מוכתמים נוגדנים MST1 ו- MST2 (איור 1 א'...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

כאן, אנו מראים כיצד להשתמש Assay מצדו קרבה (PLA) כדי להמחיש את MST1/MST2 heterodimerization בתאים קבוע עם רגישות גבוהה.

זיהוי של Heterodimerization של חלבון איזופורמים שימוש בחיי עיר הקרבה מצדו Assay

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

Assay רצועות קרבה במקום או PLA, היא טכנולוגיה המסוגלת לזהות אינטראקציות בין חלבונים, רקמות מודבקות, ותאים. הקשרים בין חלבונים ניתן לזהות ולכומת ללא צורך בביטוי מהופנט או טכנאים נוספים. הדרישה היחידה היא הזמינות של נוגדנים ספציפיים ביעילות גבוהה שניתן לשנות עם אוליגונוקלאוטידים DNA.ברקמות MST1 ו MST2 קיימים בעיקר כמו homodimers פעיל, אבל גירויים אונקוגניים יכולים להגדיל את הרמה של MST1 MST2 הטרודימרים הטרודימרים כאלה אינם פעילים. לאחר הדגירה עם נוגדני פריימר ספציפיים נגד חלבוני העניין, נוגדנים משניים ספציפיים מיוחדים, שכל אחד מהם מקושר לגדיל DNA ייחודי, קצר ומחמיל המחובר אליו, מתווספים לחריץ כדי להיקשר לנוגדנים העיקריים. אם החלבונים בשאלות הם הטרודימרים, הן הנוגדנים העיקריים והן הנוגדנים המשניים הקשורים אליהם יהיו בסמיכות.במצב זה, גדילי הדנ"א המצורפים על הנוגדנים השניים יכולים לקיים אינטראקציה באמצעות תוספת עוקבת של שני אוליגונוקלאוטידים דנ"א אחרים יוצרי מעגל. כמה מאות שכפול של מעגל ה- DNA יכול להתרחש לאחר תגובת הגברה ואות פלואורסצנטי נוצר על ידי בדיקות אוליגונוקלאוטיד משלימות. לכן, כל אות שזוהה הוא חזותי כנקודה פלואורסצנטי בודדת אשר ניתן להקצות למיקום תת תאי ספציפי המבוסס על תמונות מיקרוסקופ.ביום שלפני הניסוי, מעיל 16 מגלשות היטב על ידי הוספת 50 עד 100 microliters של למינין העכבר או פולי-L-ליסין ודגירה ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר 30 דקות להסיר פתרון קר, לפצל את התאים באמצעות טריפסין צלחת 15, 000 כדי 25, 000 תאים לכל גם לתוך 16 שקופית תאים היטב. תאי דגירה ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% פחמן דו חמצני לח אינקובטור במשך 24 שעות.לאחר 24 שעות, להסיר את המדיום מן בארות בעדינות לשטוף את התאים עם PBS. השתמש micropipette כדי למזער את לקיחת הסיכון של המדגם ואז לשאוב את PBS ולתקן תאים על ידי הוספת 50 microliters של 4% PFA לגם דגירה במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר ללא תסיסה. אין לצנרת את הפתרון ישירות על התאים, שכן הדבר עלול לגרום לניתוק התאים.לאחר הקיבעון, לשטוף את התאים עם TBST שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחד עם תסיסה קלה. לאחר מכן לחלחל את התאים דגירה במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר ללא תסיסה. לאחר permeabilization הושלם, לשטוף את התאים עם TBST שלוש פעמים במשך חמש דקות לכל לשטוף עם תסיסה.לאחר הסרת TBST להוסיף טיפה אחת של פתרון חסימה לתוך כל באר הדגירה את השקופיות בתא לחות שחומם מראש במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס. לדלל נוגדנים ראשוניים. הסר את פתרון החסימה באמצעות מיקרופיגט אך אל תאפשר לשקופיות להתייבש.Vortex ולהוסיף 40 microliters של פתרון נוגדנים מדולל ל בארות המתאימות להדגיר את הדגימות ב 37 מעלות צלזיוס בתא לחות שחומם מראש במשך שעה אחת. במהלך הדגירה, לדלל את שתי בדיקות PLA בדילול נוגדנים. עבור כל מדגם להכין 40 microliters של בדיקה PLA.לאחר שעה אחת של דגירה, שאפו את תסנובת הנוגדנים ושטפו שקופיות פעמיים במשך חמש דקות עם TBST בטמפרטורת החדר. הסר בעדינות את ה- TBST מהשקופיות והוסף 40 מיקרוליטרים של פתרון הבדיקה PLA לכל באר. הדגירה את המגלשות בתא לחות שחומם מראש במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס.Vortex ולדלל את הנפחים הנדרשים של מלאי קשירה 1 עד 5 במים טוהר גבוה מיד לפני השימוש. 40 מיקרוליטרים של פתרון הרצועה נדרשים עבור כל באר. לאחר הדגירה, הסר את פתרון PLA מהמגלשות ושטף אותם פעמיים ב- TBST במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר בתסיסה.השתמש בלוק הקפאה בעת הסרת רצועות מהמקפיא וקצת לפני הוספתו לתאים, מערבולת לדלל אותו עם פתרון קשירה. הסר את ה- TBST מהשקופיות והוסף 40 מיקרוליטרים של פתרון רצועות הרצועה לכל באר. הדגירה מחליקה בתא לחות שחומם מראש למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.לאחר הדגירה שאפו את הפתרון ושטפו פעמיים עם TBST במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר בתסיסה. הימנע מחשיפת באר לאור בהיר כמו reagents רגישים לאור. במהלך הכביסה האחרונה, מערבולת לדלל את כמויות הדרישה של פתרון הגברה במים טוהר גבוהה מיד לפני השימוש.שמור את הפולימראז על קרח או בבלוק קירור וקצת לפני הוספתו למערבולת התאים ולדלל עם פתרון ההגברה. שאפו את ה- TBST מהבארים והוסיפו 40 מיקרוליטרים של פתרון הגברה לכל באר. דגירה מחליקה בתא לחות מחומם מראש כהה במשך 100 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.לאחר הדגירה, שאפו את פתרון הפולימראז של ההגברה מהמגלשות ושטפו פעמיים עשר דקות כל אחת ב- TBST בטמפרטורת החדר. הסר את התאים ואת הסיליקון סביב בארות מן השקופית לחלוטין. לגרד את חרוזים הנותרים של סיליקון עם סכין גילוח.צייר רשת בשקופית המפרידה בין כל באר. הוסף כ-40 מיקרוליטרים של מדיום ההרכבה באמצעות DAPI, כדי להבטיח שאף בועות אוויר לא ייתפסו מתחת לפתק הכיסוי. השתמש לק כדי לתקן זכוכית כיסוי.ניתוח מיקרוסקופי יכול להתבצע בתוך 20 דקות לאחר קיבעון, אבל בפועל אנו מוצאים את זה הכי נוח לבצע ניתוח תמונה למחרת. כדי לנתח את הדגימות, אנו משתמשים Leica SP8 להגדיר מיקרוסקופ סריקת לייזר. מוצגות להלן דוגמאות של חקירה של רצועות קרבה במקום המדמיין קרבה בין חלבוני MST 1 ו- MST2 בתאי כליות עובריים אנושיים בלוחות A עד D, ותאי שוואן אנושיים בלוחות E עד H.In כל גרעיני התאים של הלוחות מוכתמים בכחול על ידי DAPI ונקודות אדומות מצביעות על אותות סחיטה חיוביים של רצועות קירבה הנובעים מקרבה בין החלבונים שצוינו.פאנל A מראה קרבה של MST1 ו MST2 ו פאנל B מראה קרבה של ERK ו phosphoERK כמו epitopes אלה נמצאים על אותו חלבון. לוח C מייצג פקד שלילי כמו תאים אלה כמו MST1 ו MST2 ו לוח D מייצג פקד שלילי שני מוכתם בנוגדנים עבור MST1 ו- ERK אשר אינם צפויים להיות בסמיכות זה לזה. לוחות E ו- F מראים קרבה של MST1 עם MST2 ו- ERK עם phosphoERK בתאי שוואן.לוח G ו- H הם פקדים שליליים מוכתמים רק בנוגדני MST1 או בנוגדני MST1 ו- ERK. זה הכרחי להשתמש בנוגדנים ראשוניים שאינם חוצי תגובתי כי זה צריך להכיר רק חבר אחד של הטרודימר. כמו כן חשוב לזכור להשתמש בטיפים שונים כדי למנוע זיהום צולב של נוגדנים ראשוניים ובדיקות PLA, כדי למנוע נגיעה בתחתית הבאר, ולהימנע צינורות ישירות על דגימות.לאחר צפייה בסרטון זה אתה צריך הבנה טובה של איך להשתמש situ PLA ללמוד דימריזציה חלבון בתאים קבועים.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

הפרדת אלקטרופורזה הנימים של חד השבטי הנוגדן isoforms באמצעות נימי Neutral

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

ויזואליזציה של אינטראקציה בין חלבונים ב גרעיני cytoplasmic שברים על ידי Co-immunoprecipitation ו<em&gt; באתרו</em&gt; Assay קשירת הסמיכות

Protein-protein interactions are involved in thousands of cellular processes and occur in distinct spatial context. Traditionally, co-immunoprecipitation ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

איתור ויזואליזציה של DNA הנזק- Induced חלבון קומפלקסים ההשעיה תא תרבויות באמצעות Assay קשירת הקרבה

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

כוח ספקטרוסקופיה של מולקולות חלבון יחיד באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

זיהוי רגיש מאוד, כמותית של חלבונים ושל שלהם איזופורמים בשיטה התמקדות לגירויי כאב נימי

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

גידול גבישים חלבון עם ממדים ברורים באמצעות כלים אוטומטיים התגבשות בשילוב עם בחיי עיר פיזור אור דינאמי

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

זיהוי של GTPase Prenylation קטן ו GTP איגוד באמצעות ממברנה Fractionation ו GTPase-מקושרים Immunosorbent Assay

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

רגישות גבוהה מדידה של שעתוק הזיקות איגוד מקדם-DNA על ידי טיטור תחרותי באמצעות מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

ניתוח של קיפול חלבונים, תחבורה, והשפלה בתאים חיים על ידי הדופק רדיואקטיבי צ'ייס

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

הערכה של אינטראקציות חלבונים-חלבונים באמצעות טכניקת העיכול האנטי-ממברנה

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...