Name: detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay
Uploaded: 2018-10-20T12:30:00
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우리는 최적화 및 특정 마리아 Radu 갈리 나 Semenova에서이 프로토콜의 검증에 기여에 대 한 전체 Chernoff 연구소 감사. 우리는 또한 세포 이미징 시설 폭스 체이스 암 센터의 안드레이 Efimov 감사합니다. 이 작품은 JC (R01 CA148805) NIH에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

1입니다. 솔루션의 준비
<ol><li>통 솔루션 준비: 1 x PBS에 4 %paraformaldehyde (PFA). 10 ml, 16%의 2.5 mL 걸릴 PFA 1 x PBS의 7.5 mL를 추가. 위험: PFA는 낮은 복용량에 발암 성. 가스 및 피부 접촉 유해 있습니다. -20 ° c.에 게</li>
	<li>Permeabilization 솔루션을 준비: 0.1 %1 x PBS에 트라이 톤 X-100. 솔루션의 100 ml, 1 x PBS의 100 mL에 Triton X-100의 100 µ L를 추가 합니다. 실내 온도 (RT)에 저장 합니다.</li>
	<li>워시 버...

<ol>
	<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nore1B/Mst1+complex+restrains+antigen+receptor-induced+proliferation+of+na&#239;ve+T+cells.">The Nore1B/Mst1 complex restrains antigen receptor-induced proliferation of na&#239;ve T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20321-20326 (2008).</li><li>Praskova, M., Xia, F., Avruch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOBKL1A/MOBKL1B+phosphorylation+by+MST1+and+MST2+inhibits+cell+proliferation.">MOBKL1A/MOBKL1B phosphorylation by MST1 and MST2 inhibits cell proliferation.</a> Current Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Dan, I., Watanabe, N. M., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20+group+kinases+as+regulators+of+MAP+kinase+cascades.">The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinase cascades.</a> Trends in Cell Biology. 11 (5), 220-230 (2001).</li><li>Rawat, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H-ras+Inhibits+the+Hippo+Pathway+by+Promoting+Mst1/Mst2Heterodimerization.">H-ras Inhibits the Hippo Pathway by Promoting Mst1/Mst2Heterodimerization.</a> Current Biology. 26 (12), 1556-1563 (2016).</li><li>Creasy, C. L., Ambrose, D. M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20-like+protein+kinase,+Mst1,+dimerizes+and+contains+an+inhibitory+domain.">The Ste20-like protein kinase, Mst1, dimerizes and contains an inhibitory domain.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (35), 21049-21053 (1996).</li><li>Buntru, A., Trepte, P., Klockmeier, K., Schnoegl, S., Wanker, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Approaches+Toward+Quantitative+Mapping+of+the+Interactome.">Current Approaches Toward Quantitative Mapping of the Interactome.</a> Frontiers in Genetics. 74 (7), (2016).</li><li>Greenwood, C., Ruff, D., Kirvell, S., Johnson, G., Dhillon, H. S., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+assays+for+sensitive+quantification+of+proteins.">Proximity assays for sensitive quantification of proteins.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 4, 10-16 (2015).</li><li>Fredriksson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+detection+using+proximity-dependent+DNA+ligation+assays.">Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays.</a> Nature Biotechnology. 20 (5), 473-477 (2002).</li><li>Leuchowius, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+visualization+of+multiple+protein+complexes+in+individual+cells+in+tumor+tissue.">Parallel visualization of multiple protein complexes in individual cells in tumor tissue.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 12 (6), 1563-1571 (2013).</li><li>S&#246;derberg, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+individual+endogenous+protein+complexes+in+situ+by+proximity+ligation.">Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation.</a> Nature Methods. 3 (12), 995-1000 (2006).</li></ol>

우리는 그것은 매우 편리 하 게 여러 (14-16) 셀 라인 실험을 수행 하 고 현미경 분석 하는 동안 모든 시간 샘플을 변경할 필요가 없습니다이 실험을 위해 유리 챔버 슬라이드를 사용 하 여 유용한 발견. 항 체와 교차 오염에 대 한 위험 증가 등, 몇 가지 합병증이 발생할 수 있습니다. 따라서, 우리는 것이 좋습니다 모든 잘 세척 실험의 증가 기간에도 불구 하 고 Coplin jar를 사용 하 여 대신 개별적으로...

MST1/Hippo 신호 장애 발달 장애 및 발암1에 연결 되었습니다. 포유류에서 MST1 및 MST2 kinases 활성화 (phosphorylate) MOB1 및 LATS1/2, 후자는 phosphorylates 그리고 transcriptional 공동 활성 제 예 관련 단백질 (YAP)2생긴다. 활성 (unphosphorylated) 형태로 얍에 종양 활동, 세포 증식 유전자;의 녹음을 향상 반대로, 야프 뚱 땡 통로 의해 비활성화 됩니다, 세포 증식을 억제 하 고 apoptosis 승진3. 조직, MST1 및 MST2 활성 homodimers, 주로 존재 하지만 종양 자극 MST1/MST2 heterodimers의 수준을 높일 수 있으며 같은 heterodimers 비활성4. 그러나, MST1/MST2 heterodimerization 규제 어떻게 제대로 이해 남아 있다. 호모-및 heterodimers MST1의 C-터미널 코일 코일 지역 및 MST2 사라 도메인5로 알려진 사이의 상호 작용 중재 를 통해 있습니다. 사용 하는 제자리에서 PLA 시연이 문서에서 우리는 인간의 Schwann 세포 (HSC)와 인간 미 발달 신장 세포 (HEK 293)에 MST1/MST2 heterodimers의 존재를 표시. PLA 생 단백질-단백질 상호 작용, 식별 하 고 transgene 식의 필요 또는 피토 프 태그의 사용 없이 측정할 수 있는 감지를 허용 하기 때문에 다른 단백질/단백질 상호 작용 검출 방법에 비해 이점이 있다 6.
신호 변환 통로 크게 구성 단백질의 조건부 협회에 의해 제어 됩니다. 예를 들어 대부분 수용 체 티로신 kinases의 자극 양식 추가 단지 그들의 호모 이합체 또는 이종 화 및 후속 연관 추가 세포내 신호 전달 단백질를 스스로 리드. PLA 방법의 목적은 셀, 단백질 사이 근접 시각화 하 단백질 보다 30-40 nm 간격에 제공. 단백질 근접 일반적으로 첫 번째 종에 발생 하는 적절 한 기본 항 체와 세포 잠복기에 의해 검출 된다 (예., 토끼와 마우스) 각 상호 작용 단백질에 대 한 추가 종의 2 차 항 체, 전 짧은 결합 된 DNA 프로브합니다. DNA 프로브 가까운 위치에, 모두 제자리에서 PCR에 의해 또는 원 메커니즘을 압 연 하 여 확대를 위한 플랫폼을 형성 하는 이러한 프로브는 특정 연결 DNA oligonucleotide 동시에 바인딩할 수 있습니다. 증폭 반응에 추가 하는 형광 태그 허용 쉽게 계량 하 고 셀7,8, 에서 특정 영역에 지역화 된 수 있는 형광 점으로 표시 되는 상호 작용 단백질의 시각화 9 , 10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Chamber slides</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:344px;">178599</td>
			<td style="width:167px;">16 well, glass slide</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA probe Anti-Mouse Minus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92004</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA Probe Anti-Rabbit PLUS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92002</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Wash Buffers, Flurescence</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Detection Reagents Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92008</td>
			<td>Contains 5x Ligation, 1x Ligase, 5x Amlification Red, 1x Polymerase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9102s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Phospho-p44/42 MAPK (Erk1) (Tyr204)/(Erk2) (Tyr187)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5726s</td>
			<td>pERK antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MST2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3952s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Krs-2 (RJ-5)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-100449</td>
			<td>MST1 antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA in PBS for fixing solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton x100</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td>To prepare 0.1% Triton x-100 in 1xPBS for Permeabilization solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Confocal microscopy</td>
			<td>Leica TCS SP8, 63x</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis with ImageJ software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay

레 귤 레이트 된 단백질-단백질 상호 작용은 많은 신호 이벤트, 지도 원리 이며 이러한 이벤트의 검출 같은 경로 구성 하는 방법을 그들이 작동 하는 방식 이해는 중요 한 요소. 셀, 단백질 단백질 상호 작용을 검출 하는 많은 방법이 있다 그러나 상대적으로 몇 가지를 사용할 수 있는 내 생 단백질 사이 상호 작용을 검출. 그러한 한 방법, 근접 결 찰 분석 결과 (PLA), 그것의 사용을 추천 하 몇 가지 장점이 있습니다. 단백질 단백질 상호 작용 분석의 다른 일반적인 방법에 비해, PLA는 상대적으로 높은 감도 특이성, 최소 셀 조작, 그리고, 여기에 설명 된 프로토콜에서 수행할 수 있습니다, 그리고 특정 대상만 두 필요 다른 종에서 파생 된 항 체 (예., 마우스와 토끼에서)와 1 개의 특수 시 약: covalently 특정 연결 된 oligonucleotides는 이차 항 체의 집합, 서로 가까이에 때, 만들는 제자리에서 PCR 또는 압 연 원형 증폭에 대 한 amplifiable 플랫폼. 이 프레 젠 테이이 션에서 우리 고정된 셀에 MST1 및 MST2에에서 변화를 시각화 하기 위해 PLA 기법을 적용 하는 방법을 보여 줍니다. 이 원고에 설명 된 기술은 세포 신호 전달 연구의 분석에 특히 적용 됩니다.

우리는 HEK 293와 iHSC MST1와 MST2 사이 상호 작용을 테스트 하려면 PLA 분석 결과 사용. 셀 고정 했다, permeabilized, 및 다양 한 항 체, PLA 프로토콜 (그림 1)에 따라 현장에서 증폭 다음으로 물. MST1/MST2 heterodimerization의 수준을 문서화 하 셀 MST1와 MST2 항 체 (그림 1A, 1 C 및 1 G)으로 얼룩이 있었다. 긍정적인 통제로 우리 E...

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Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

여기, 우리가 근접 결 찰 분석 결과 (PLA)를 사용 하 여 높은 감도와 고정된 셀에 MST1/MST2 heterodimerization를 시각화 하는 방법을 보여 줍니다.

제자리에 근접 결 찰 분석 결과 사용 하 여 단백질 Isoforms의 Heterodimerization의 검출

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

시상 근접 리깅 분석 또는 PLA에서 단백질, 부착 된 조직 및 세포 간의 상호 작용을 감지 할 수있는 기술입니다. 단백질 간의 연관성은 형질전환 발현 또는 추가 기술 없이 식별되고 정량화될 수 있다. 유일한 요구 사항은 DNA 올리고뉴클레오티드로 변형될 수 있는 특정 고효율 항체의 가용성입니다.조직에서 MST1 및 MST2는 주로 활성 호모이머로 존재하지만, 온코겐 자극은 MST1 MST2 이종기의 수준을 증가시킬 수 있으며 이러한 이종성중무는 비활성이다. 관심있는 단백질에 대한 특정 프라이머 항체를 사용하여 배양한 다음, 특수 특이적 특이적 이차 항체는 각각 고유하고 짧고 무료 DNA 가닥에 연결되어 1 차 항체에 결합하기 위해 슬롯에 첨가됩니다. 문제의 단백질이 이성구화되면 1차 항체와 이차 항체가 모두 가까이 에 있을 것입니다.이 상태에서, 제2 항체에 부착된 DNA 가닥은 2개의 다른 원 형성 DNA 올리고뉴클레오티드의 후속 첨가를 통해 상호작용할 수 있다. DNA 원의 수백 배 의 복제는 증폭 반응 후에 발생할 수 있고 형광 신호는 평준화 된 무료 올리고뉴클레오티드 프로브에 의해 생성된다. 따라서, 검출된 각 신호는 현미경 심상을 기반으로 특정 세포외 위치에 할당될 수 있는 개별 형광점으로 시각화된다.실험 전날, 마우스 라미닌 또는 폴리 L-리신50~100마이크로리터를 추가하여 16개의 잘 챔버슬라이드를 코팅하고 섭씨 37도에서 배양합니다. 30분 후에 차가운 용액을 제거한 후 트립신과 플레이트 15, 000 ~ 25, 000 세포를 잘 하여 16개의 잘 챔버슬라이드로 분할합니다. 가습된 5%의 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 24시간 동안 세포를 배양합니다.24 시간 후, 우물에서 배지를 제거하고 부드럽게 PBS로 세포를 씻어. 마이크로파이프를 사용하여 샘플의 위험 복용을 최소화한 다음 PBS를 흡습하고 웰당 4%PFA의 50마이크로리터를 추가하고 교반 없이 실온에서 10분 동안 배양하여 세포를 수정합니다. 세포의 분리가 발생할 수 있기 때문에 용액을 셀에 직접 피펫하지 마십시오.고정 후, 가벼운 동요와 함께 각각 5 분 동안 TBST로 세포를 세 번 씻으라. 다음으로 세포를 투약화하고 동요없이 실온에서 10 분 동안 배양합니다. 투과가 완료되면 TBST로 셀을 3회 세척하여 교반하여 세척할 수 있습니다.TBST를 제거한 후 각 우물에 블로킹 용액 한 방울을 추가하고 예열된 습도 챔버에서 슬라이드를 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다. 1 차적인 항체를 희석하십시오. 마이크로 피펫을 사용하여 차단 용액을 제거하지만 슬라이드가 건조되는 것을 허용하지 않습니다.소용돌이와 적절한 우물에 희석 된 항체 용액의 40 마이크로 리터를 추가하고 1 시간 동안 예열 된 습도 챔버에서 섭씨 37도에서 샘플을 배양하십시오. 인큐베이션 동안, 항체 희석제에서 두 개의 PLA 프로브를 희석시. 각 샘플에 대해 PLA 프로브의 40 마이크로리터를 준비합니다.1시간 동안 인큐베이션을 한 후, 항체 용액을 흡습하고 실온에서 TBST로 5분 동안 슬라이드를 두 번 세척합니다. 슬라이드에서 TBST를 부드럽게 제거하고 PLA 프로브 용액의 40 마이크로리터를 각 웰에 추가합니다. 예열된 습도 챔버에서 슬라이드를 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다.소용돌이및 사용 직전에 고순도물에 1~5의 결찰 육수의 필요한 부피를 희석한다. 각 웰에 대해 40개의 리차레이션 솔루션이 필요합니다. 인큐베이션 후 슬라이드에서 PLA 용액을 제거하고 동요와 실온에서 5 분 동안 TBST에서 두 번 세척하십시오.냉동고에서 리구아제를 제거하고 세포, 소용돌이에 추가하기 직전에 동결 블록을 사용하고 결찰 용액으로 희석하십시오. 슬라이드에서 TBST를 제거하고 각 웰에 40 마이크로리터의 리그레이션 리갈아제 용액을 추가합니다. 섭씨 37도에서 30분 동안 예열된 습도 챔버에서 인큐베이션 슬라이드가 있습니다.인큐베이션 후 용액을 흡인시키고 동요와 함께 실온에서 5 분 동안 TBST로 두 번 세척하십시오. 시약이 빛에 민감하기 때문에 밝은 빛에 우물을 노출하지 마십시오. 마지막 세척 하는 동안, 소용돌이 및 사용 직전에 고순도 물에 증폭 용액의 요구 볼륨을 희석.폴리머라제를 얼음이나 냉각 블록에 보관하고 세포 소용돌이에 첨가하기 직전에 증폭 용액으로 희석하십시오. 우물에서 TBST를 흡인하고 각 우물에 40 마이크로 리터의 증폭 솔루션을 추가합니다. 인큐베이터는 어두운 예열 된 습도 챔버에서 섭씨 37도에서 100 분 동안 슬라이드합니다.인큐베이션 후, 슬라이드에서 증폭 폴리머라제 용액을 흡습하고 실온에서 TBST에서 각각 2회 10분 세척한다. 슬라이드에서 우물 주위의 챔버와 실리콘을 완전히 제거합니다. 면도기와 실리콘의 나머지 구슬을 긁어.각 우물을 분리하는 슬라이드에 그리드를 그립니다. DAPI를 장착한 배지의 약 40마이크로리터를 추가하여 커버 슬립 아래에 기포가 걸리지 않도록 합니다. 매니큐어를 사용하여 커버 글래스를 수정합니다.현미경 분석은 고정 후 20 분 안에 수행 될 수 있지만 실제로는 다음 날 이미지 분석을 수행하는 것이 가장 편리하다는 것을 알게됩니다. 샘플을 분석하기 위해 라이카 SP8 구성 레이저 스캐닝 현미경을 사용합니다. 여기에 도시된 시투 근접 결찰 분석에서 패널 A에서 인간 배아 신장 세포에서 MST 1과 MST2 단백질 사이의 근접성을 시각화하는 예가 있으며, 패널 H.In E의 인간 슈완 세포는 모든 패널 세포 핵이 DAPI와 적색점에 의해 파란색으로 염색되어 표시된 단백질 간의 근접성에서 발생하는 긍정적인 근접 성결 분석 신호를 나타낸다.패널 A는 MST1 과 MST2및 패널 B의 근접성을 나타내며 이러한 에피토프가 동일한 단백질에 있기 때문에 ERK와 인의 근접성을 나타낸다. 패널 C는 MST1 및 MST2 및 패널 D와 같은 이러한 세포가 서로 근접할 것으로 예상되지 않는 MST1 및 ERK에 대한 항체로 염색된 두 번째 음수 대조군을 나타내기 때문에 음의 대조군을 나타낸다. 패널 E와 F는 슈완 세포에서 인을 가진 MST2 및 ERK를 가진 MST1의 근접성을 보여줍니다.패널 G와 H는 MST1 항체 또는 MST1 및 ERK 항체로만 염색된 음의 대조군이다. 이종수의 단 한 부재만 인식해야 하는 비 반응성 1차 항체를 사용하는 것이 필수적이다. 또한 1 차적인 항체 및 PLA 프로브의 교차 오염을 피하기 위하여, 우물의 바닥을 만지지 않도록, 그리고 견본에 직접 피하 되기 위하여 다른 팁을 사용하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 비디오를 시청 한 후 고정 된 세포에서 단백질 이산화를 연구하기 위해 시투 PLA에서 사용하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야합니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

중립 모세관을 사용하여 단일 클론 항체 동종의 모세관 전기 영동 분리

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

연구

생화학

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

공동 면역 침전에 의한 핵 및 세포질 분수에서 단백질 - 단백질 상호 작용의 시각화 및<em&gt; 현장에서</em&gt; 근접 내고 분석

Protein-protein interactions are involved in thousands of cellular processes and occur in distinct spatial context. Traditionally, co-immunoprecipitation ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Proximity Ligation Assay를 이용한 현탁 세포 배양에서의 DNA 손상 유발 단백질 복합체의 검출 및 가시화

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자 힘 분광학

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

단백질 및 모 세관 전자 초점 방법으로 그들의 Isoforms의 매우 민감하고 정량적 검출

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

사용 하 여 다른 크기와 성장 단백질 결정 자동화 현장에서 동적 산란과 함께 결정 화

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

작은 GTPase Prenylation와 GTP 바인딩 사용 하 여 막 분류 및 GTPase 연결 된 Immunosorbent 분석 결과의 검색

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

경쟁 적정 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 녹음 방송 요인 DNA 바인딩 선호도의 높은 감도 측정

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

단백질 폴딩, 전송, 및 방사성 펄스 체이스 하 여 살아있는 세포의 저하의 분석

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

온-막 소화 기술을 사용한 단백질-단백질 상호 작용의 평가

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...