Name: detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay
Uploaded: 2018-10-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Vi takker hele Chernoff laboratorium for bidra til optimalisering og validering av denne protokollen, særlig Maria Radu og Galina Semenova. Vi takker også Andrey Efimov av cellen Imaging anlegget ved Fox Chase Cancer Center. Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra NIH (R01 CA148805) å JC.

1. forberedelse av løsninger
<ol><li>Forberede etappe, den stabiliserende løsning: 4% paraformaldehyde (PFA) i 1 x PBS. 10 mL, ta 2,5 mL av 16% PFA og legge 7,5 mL 1 x PBS. Farer: PFA er kreftfremkallende ved lave doser. Røyk og hudkontakt er farlig. Butikken på 20 ° C.</li>
	<li>Forberede permeabilization løsning: 0,1% Triton X-100 i 1 x PBS. For 100 mL løsning, kan du legge 100 µL av Triton X-100 til 100 mL 1 x PBS. Lagre ved romtemperatur (RT).</li>
	<li>Forbered vaskebuffer: 1 x TBST. 1 ...

<ol>
	<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nore1B/Mst1+complex+restrains+antigen+receptor-induced+proliferation+of+na&#239;ve+T+cells.">The Nore1B/Mst1 complex restrains antigen receptor-induced proliferation of na&#239;ve T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20321-20326 (2008).</li><li>Praskova, M., Xia, F., Avruch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOBKL1A/MOBKL1B+phosphorylation+by+MST1+and+MST2+inhibits+cell+proliferation.">MOBKL1A/MOBKL1B phosphorylation by MST1 and MST2 inhibits cell proliferation.</a> Current Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Dan, I., Watanabe, N. M., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20+group+kinases+as+regulators+of+MAP+kinase+cascades.">The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinase cascades.</a> Trends in Cell Biology. 11 (5), 220-230 (2001).</li><li>Rawat, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H-ras+Inhibits+the+Hippo+Pathway+by+Promoting+Mst1/Mst2Heterodimerization.">H-ras Inhibits the Hippo Pathway by Promoting Mst1/Mst2Heterodimerization.</a> Current Biology. 26 (12), 1556-1563 (2016).</li><li>Creasy, C. L., Ambrose, D. M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20-like+protein+kinase,+Mst1,+dimerizes+and+contains+an+inhibitory+domain.">The Ste20-like protein kinase, Mst1, dimerizes and contains an inhibitory domain.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (35), 21049-21053 (1996).</li><li>Buntru, A., Trepte, P., Klockmeier, K., Schnoegl, S., Wanker, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Approaches+Toward+Quantitative+Mapping+of+the+Interactome.">Current Approaches Toward Quantitative Mapping of the Interactome.</a> Frontiers in Genetics. 74 (7), (2016).</li><li>Greenwood, C., Ruff, D., Kirvell, S., Johnson, G., Dhillon, H. S., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+assays+for+sensitive+quantification+of+proteins.">Proximity assays for sensitive quantification of proteins.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 4, 10-16 (2015).</li><li>Fredriksson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+detection+using+proximity-dependent+DNA+ligation+assays.">Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays.</a> Nature Biotechnology. 20 (5), 473-477 (2002).</li><li>Leuchowius, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+visualization+of+multiple+protein+complexes+in+individual+cells+in+tumor+tissue.">Parallel visualization of multiple protein complexes in individual cells in tumor tissue.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 12 (6), 1563-1571 (2013).</li><li>S&#246;derberg, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+individual+endogenous+protein+complexes+in+situ+by+proximity+ligation.">Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation.</a> Nature Methods. 3 (12), 995-1000 (2006).</li></ol>

Vi fant det nyttig å bruke glass kammer lysbilder for dette eksperimentet, som det er veldig praktisk å utføre eksperimenter med flere (14-16) linjer og det er ikke nødvendig å endre utvalget hver gang under mikroskopi analyse. Noen komplikasjoner kan oppstå, som økt risiko for kryssforurensning med antistoffer. Derfor foreslår vi vaske hver brønn individuelt istedet for benytter en Coplin krukke, til tross for økt varighet av eksperimentet. I tillegg, fjerning av silikon sette er en delikat affære og må gjø...

Avbrudd MST1/Hippo signalnettverk er koblet til utviklingsforstyrrelser og kreft1. I pattedyr, aktivere kinaser MST1 og MST2 (phosphorylate) MOB1 og LATS1/2, som deretter phosphorylates og deaktiverer transcriptional co aktivatoren Ja-assosiert protein (YAP)2. I sin aktive (unphosphorylated) form har YAP kreftfremkallende aktivitet, styrke transkripsjon av celle spredning gener; motsatt, når YAP er inaktivert av Hippo veien, celle spredning er undertrykt og apoptose forfremmet3. I vev, MST1 og MST2 finnes hovedsakelig som aktiv homodimerer, men kreftfremkallende stimuli kan øke nivåene av MST1/MST2 heterodimerer, og slike heterodimerer er inaktiv4. Hvordan MST1/MST2 heterodimerization er regulert imidlertid dårlig forstått. Både homo- og heterodimerer er formidlet via interaksjoner mellom C-terminalen kveilet-coil regionene MST1 og MST2 kjent som SARAH domener5. Bruke en i situ vist PLA i denne artikkelen viser vi tilstedeværelsen av MST1/MST2 heterodimerer i menneskelig Schwann celler (HSC) og menneskelige embryonale nyre celler (HEK-293). PLA har en fordel over andre protein/protein samhandling gjenkjenningsmetoder fordi gjør påvisning av endogene protein-protein interaksjoner, som kan identifiseres og kvantifisert uten behovet av transgene uttrykk eller bruk av epitope tags 6.
Signalnettverk signaltransduksjon trasé er i stor grad kontrollert av betinget association komponent proteiner. For eksempel fører stimulering av de fleste receptor tyrosine kinaser til homo - eller hetero-dimerization og påfølgende tilknytning ekstra intracellulær signalnettverk proteiner, som selv skjemaet ytterligere komplekser. Formålet med metoden PLA er å visualisere nærhet mellom proteiner i celler, forutsatt at proteiner er mindre enn 30-40-nm fra hverandre. Protein nærhet oppdages vanligvis av første rugende cellene med passende primære antistoffer i ulike arter (f.eks., kanin og mus) mot hver samspill protein, deretter legge artsspesifikke sekundære antistoffer, pre kombinert til korte DNA sonder. Hvis DNA sonder i nærheten, kan en bestemt kobling DNA oligonucleotide samtidig binde begge disse sonder, danner en plattform for forsterkning ved i situ PCR eller rullende sirkel mekanisme. Fluorescerende kodene til forsterkning reaksjonen kan visualisering av samspill proteiner, som vises som fluorescerende prikker som lett kan kvantifisert og lokalisert til bestemte regioner i cellen7,8, 9 , 10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Chamber slides</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:344px;">178599</td>
			<td style="width:167px;">16 well, glass slide</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA probe Anti-Mouse Minus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92004</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA Probe Anti-Rabbit PLUS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92002</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Wash Buffers, Flurescence</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Detection Reagents Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92008</td>
			<td>Contains 5x Ligation, 1x Ligase, 5x Amlification Red, 1x Polymerase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9102s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Phospho-p44/42 MAPK (Erk1) (Tyr204)/(Erk2) (Tyr187)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5726s</td>
			<td>pERK antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MST2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3952s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Krs-2 (RJ-5)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-100449</td>
			<td>MST1 antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA in PBS for fixing solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton x100</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td>To prepare 0.1% Triton x-100 in 1xPBS for Permeabilization solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Confocal microscopy</td>
			<td>Leica TCS SP8, 63x</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis with ImageJ software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay

Regulert protein-protein interaksjoner er en retningsgivende for mange signalnettverk arrangementer, og oppdagelsen av slike hendelser er et viktig element i å forstå hvordan slike veier er organisert og hvordan de fungerer. Det finnes mange metoder å oppdage protein-protein interaksjoner i celler, men relativt få kan brukes til å oppdage interaksjoner mellom endogene proteiner. En slik metode, nærhet ligation analysen (PLA), har flere fordeler å anbefale bruk. Sammenlignet med andre vanlige metoder for protein-protein samhandling analyse, PLA har relativt høy sensitivitet og spesifisitet, kan utføres med minimal celle manipulasjon, og, i protokollen beskrevet her, krever bare to mål-spesifikke antistoffer avledet fra ulike arter (f.eks., fra mus og kaninen) og en spesialisert reagens: et sett med sekundær antistoffer som covalently knyttet til bestemte oligonucleotides at når brakt i nærheten av hverandre, opprette en amplifiable plattform for i situ PCR eller rullende sirkel forsterkning. I denne presentasjonen viser vi hvordan du bruker PLA teknikken for å se endringer i MST1 og MST2 nærhet i fast celler. Teknikken er beskrevet i dette manuskriptet er særlig aktuelt for analyse av celle signalisering studier.

Vi brukte PLA analysen teste samspillet mellom MST1 og MST2 i HEK-293 og iHSC. Cellene var fast, permeabilized og farget med ulike antistoffer, etterfulgt av i situ forsterkning i henhold til PLA protokollen (figur 1). For å dokumentere nivået på MST1/MST2 heterodimerization, var celler farget med MST1 og MST2 antistoffer (figur 1A, 1 C, og 1 G). Som en positiv, vi også brukt ERK og pERK antistoffer ...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Her viser vi hvordan du bruker en nærhet Ligation analysen (PLA) for å visualisere MST1/MST2 heterodimerization i fast celler med høy følsomhet.

Deteksjon av Heterodimerization av Protein isoformene bruker in Situ nærhet Ligation analysen

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

In situ Proximity Ligation Assay eller PLA, er en teknologi som er i stand til å oppdage interaksjoner mellom proteiner, festet vev og celler. Sammenhengene mellom proteiner kan identifiseres og kvantifiseres uten behov for transgene uttrykk eller ytterligere teknologi. Det eneste kravet er tilgjengeligheten av spesifikke høyeffektive antistoffer som kan endres med DNA oligonukleotider.I vev mst1 og MST2 eksisterer hovedsakelig som aktive homodimerer, men onkogene stimuli kan øke nivået av MST1 MST2 heterodimerer og slike heterodimerer er inaktive. Etter inkubasjon med spesifikke primer antistoffer mot proteiner av interesse, legges spesielle spesifikke sekundære antistoffer, hver knyttet til en unik, kort, gratis DNA-tråd festet til den, til sporet for å binde seg til de primære antistoffene. Hvis proteinene i spørsmål er heterodimerert, vil både de primære antistoffene og sekundære antistoffene som er bundet til dem, være i umiddelbar nærhet.I denne tilstanden kan de vedlagte DNA-trådene på de andre antistoffene samhandle gjennom et etterfølgende tillegg av to andre sirkeldannende DNA-oligonukleotider. Flere hundrefolds replikering av DNA-sirkelen kan oppstå etter en forsterkningsreaksjon og et fluorescenssignal genereres av utjevnede gratis oligonukleotidsonder. Derfor visualiseres hvert oppdagede signal som en individuell fluorescerende prikk som kan tilordnes til en bestemt subcellulær plassering basert på mikroskopbilder.Dagen før eksperimentet, pels 16 godt kamret lysbilder ved å legge til 50 til 100 mikroliter mus laminin eller poly-L-lysin og inkubere på 37 grader Celsius. Etter 30 minutter fjerne kald løsning, dele cellene ved hjelp av Trypsin og plate 15, 000 til 25, 000 celler per godt i 16 godt kamret lysbilde. Inkuber celler ved 37 grader Celsius i en fuktet 5% karbondioksidinkubator i 24 timer.Etter 24 timer, fjern mediet fra brønnene og vask forsiktig cellene med PBS. Bruk en mikropipette til å minimere risikotaking av prøven og aspirer deretter PBS og fikse celler ved å legge til 50 mikroliter på 4% PFA per brønn og inkubere i 10 minutter ved romtemperatur uten agitasjon. Ikke pipette oppløsningen direkte på cellene, da det kan føre til løsrivelse av cellene.Etter fikseringen vasker cellene med TBST tre ganger i fem minutter hver med mild agitasjon. Deretter gjennomsyrer cellene og inkuberer i 10 minutter ved romtemperatur uten agitasjon. Etter at permeabilisering er fullført, vask cellene med TBST tre ganger i fem minutter per vask med agitasjon.Etter å ha fjernet TBST legge til en dråpe blokkering løsning i hver brønn og inkubere lysbildene i et forvarmet fuktighetskammer i en time ved 37 grader Celsius. Fortynn primære antistoffer. Fjern blokkeringsløsningen ved hjelp av en mikropipette, men ikke la lysbildene tørke.Vortex og tilsett 40 mikroliter av den fortynnede antistoffløsningen til de aktuelle brønnene og inkuber prøvene ved 37 grader Celsius i et forvarmet fuktighetskammer i en time. Under inkubasjonen, fortynne de to PLA-sondene i antistofffortynningsmiddel. For hver prøve forberede 40 mikroliter av PLA sonde.Etter en time med inkubasjon, aspirer antistoffoppløsningen og vask lysbildene to ganger i fem minutter med TBST ved romtemperatur. Fjern TBST forsiktig fra lysbildene og tilsett 40 mikroliter av PLA-probeløsningen til hver brønn. Inkuber lysbildene i et forvarmet fuktighetskammer i en time ved 37 grader Celsius.Vortex og fortynne de nødvendige volumene av ligation lager 1 til 5 i høy renhet vann umiddelbart før bruk. 40 mikroliter av ligationsløsningen er nødvendig for hver brønn. Etter inkubasjonen fjerner du PLA-oppløsningen fra lysbildene og vasker dem to ganger i TBST i fem minutter ved romtemperatur med omrøring.Bruk en fryseblokk når du fjerner ligase fra fryseren og like før du legger den til cellene, vortex og fortynne den med ligation løsningen. Fjern TBST fra lysbildene og legg til 40 mikroliter av ligation ligase-løsningen til hver brønn. Inkuber glir i et forvarmet fuktighetskammer i 30 minutter ved 37 grader Celsius.Etter inkubasjonen aspirerer oppløsningen og vask to ganger med TBST i fem minutter ved romtemperatur med agitasjon. Unngå å utsette brønnen for sterkt lys, da reagensene er lysfølsomme. Under den siste vasken, vortex og fortynne kravet volumer av forsterkning løsning i høy renhet vann umiddelbart før bruk.Hold polymerase på is eller i en kjøleblokk og like før du legger den til cellene vortex og fortynne med forsterkningsløsningen. Aspirer TBST fra brønnene og tilsett 40 mikroliter forsterkningsløsning til hver brønn. Inkuber glir i et mørkt forvarmet fuktighetskammer i 100 minutter ved 37 grader Celsius.Etter inkubasjonen aspirerer du forsterkningspolymeraseløsningen fra lysbildene og vasker to ganger ti minutter hver i TBST ved romtemperatur. Fjern kamrene og silikon rundt brønnene fra lysbildet helt. Skrap av de gjenværende perlene av silikon med en barberhøvel.Tegn et rutenett på lysbildet som skiller hver brønn. Tilsett ca. 40 mikroliter av monteringsmediet med DAPI, slik at ingen luftbobler blir fanget under dekselet slip. Bruk neglelakk til å fikse dekkglass.Mikroskopisk analyse kan utføres innen 20 minutter etter fiksering, men i praksis finner vi det mest praktisk å utføre bildeanalyse neste dag. For å analysere prøvene bruker vi et Leica SP8-konfigurerer laserskanningsmikroskop. Vist her er eksempler på in situ nærhet ligation analyse visualisere nærhet mellom MST 1 og MST2 proteiner i menneskelige embryonale nyreceller i panel A til D, og Human Schwann celler i panelene E gjennom H.In alle paneler cellekjerner er farget blå av DAPI og røde prikker indikerer positiv nærhet ligation analyse signaler som følge av nærhet mellom de angitte proteiner.Panel A viser nærhet til MST1 og MST2 og panel B viser nærhet til ERK og fosfoerk som disse epitoper er på samme protein. Panel C representerer en negativ kontroll som disse cellene som MST1 og MST2 og Panel D representerer en annen negativ kontroll farget med antistoffer for MST1 og ERK som ikke forventes å være i nærheten av hverandre. Panelene E og F viser nærhet til MST1 med MST2 og ERK med fosfoERK i Schwann-celler.Panel G og H er negative kontroller farget bare med MST1 antistoffer eller med MST1 og ERK antistoffer. Det er viktig å bruke ikke kryssreaktive primære antistoffer at det bare skal gjenkjenne ett medlem av heterodimer. Det er også viktig å huske å bruke forskjellige tips for å unngå krysskontaminering av primære antistoffer og PLA-sonder, for å unngå å berøre bunnen av brønnen, og for å unngå pipettering direkte på prøver.Etter å ha sett denne videoen bør du ha en god forståelse av hvordan du bruker in situ PLA til å studere proteindyderisering i faste celler.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Kapillær elektroforese Separasjon av monoklonalt antistoff isoformer Ved hjelp av en nøytral kapillær

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualisering av Protein-protein Interaksjon i Kjerne- og cytoplasmatiske Fraksjoner av Co-immunoprecipitation og<em&gt; In Situ</em&gt; Nærhet hemorroider Assay

Protein-protein interactions are involved in thousands of cellular processes and occur in distinct spatial context. Traditionally, co-immunoprecipitation ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Deteksjon og visualisering av DNA-skadeinducerte proteinkomplekser i suspensjoncellekulturer ved bruk av næringslysanalysen

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Tvinge spektroskopi enkelt Protein molekyler med en Atomic Force mikroskopet

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Svært Sensitive og kvantitative påvisning av proteiner og deres isoformene av kapillær Isoelectric fokuserer metoden

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Voksende Protein krystaller med forskjellige dimensjoner bruke automatisert krystallisering kombinert med In Situ dynamisk lysspredning

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

Påvisning av små GTPase Prenylation og GTP bindende ved hjelp av membran fraksjoneres og GTPase-koblede Immunosorbent analysen

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Høy følsomhet måling av transkripsjon faktor-DNA Binding slektskap av konkurransedyktige titrering bruker fluorescens mikroskopi

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse av proteinfolding, Transport og nedbrytning i levende celler av radioaktivt puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluering av protein-protein interaksjoner ved hjelp av en on-membran fordøyelsen Technique

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...