Name: detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay
Uploaded: 2018-10-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Мы благодарим весь Чернова лаборатории для содействия оптимизации и проверки этого протокола, в частности Мария Раду и Семенова Галина. Мы также благодарим Андрей Ефимов визуализации объекта ячейки на рака Фокс Чейз центр. Эта работа была поддержана гранта NIH (R01 CA148805) для JC.

1. Подготовка решений
<ol><li>Подготовить фиксирующие решение: параформальдегида 4% (PFA) в однократном ПБС. По 10 мл, принимать 2,5 мл 16% PFA и добавить 7,5 мл ПБС. Опасности: PFA канцерогенных при низких дозах. Опасных дымов и контакт с кожей. Хранить при температуре от-20 ° C.</li>
	<li>Приготовл?...

<ol>
	<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nore1B/Mst1+complex+restrains+antigen+receptor-induced+proliferation+of+na&#239;ve+T+cells.">The Nore1B/Mst1 complex restrains antigen receptor-induced proliferation of na&#239;ve T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20321-20326 (2008).</li><li>Praskova, M., Xia, F., Avruch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOBKL1A/MOBKL1B+phosphorylation+by+MST1+and+MST2+inhibits+cell+proliferation.">MOBKL1A/MOBKL1B phosphorylation by MST1 and MST2 inhibits cell proliferation.</a> Current Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Dan, I., Watanabe, N. M., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20+group+kinases+as+regulators+of+MAP+kinase+cascades.">The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinase cascades.</a> Trends in Cell Biology. 11 (5), 220-230 (2001).</li><li>Rawat, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H-ras+Inhibits+the+Hippo+Pathway+by+Promoting+Mst1/Mst2Heterodimerization.">H-ras Inhibits the Hippo Pathway by Promoting Mst1/Mst2Heterodimerization.</a> Current Biology. 26 (12), 1556-1563 (2016).</li><li>Creasy, C. L., Ambrose, D. M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20-like+protein+kinase,+Mst1,+dimerizes+and+contains+an+inhibitory+domain.">The Ste20-like protein kinase, Mst1, dimerizes and contains an inhibitory domain.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (35), 21049-21053 (1996).</li><li>Buntru, A., Trepte, P., Klockmeier, K., Schnoegl, S., Wanker, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Approaches+Toward+Quantitative+Mapping+of+the+Interactome.">Current Approaches Toward Quantitative Mapping of the Interactome.</a> Frontiers in Genetics. 74 (7), (2016).</li><li>Greenwood, C., Ruff, D., Kirvell, S., Johnson, G., Dhillon, H. S., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+assays+for+sensitive+quantification+of+proteins.">Proximity assays for sensitive quantification of proteins.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 4, 10-16 (2015).</li><li>Fredriksson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+detection+using+proximity-dependent+DNA+ligation+assays.">Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays.</a> Nature Biotechnology. 20 (5), 473-477 (2002).</li><li>Leuchowius, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+visualization+of+multiple+protein+complexes+in+individual+cells+in+tumor+tissue.">Parallel visualization of multiple protein complexes in individual cells in tumor tissue.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 12 (6), 1563-1571 (2013).</li><li>S&#246;derberg, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+individual+endogenous+protein+complexes+in+situ+by+proximity+ligation.">Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation.</a> Nature Methods. 3 (12), 995-1000 (2006).</li></ol>

Мы нашли его полезным использовать стекло камеры слайды для этого эксперимента, как это очень удобно для выполнения эксперимент с несколькими линиями клетки (14-16), и нет необходимости изменить образец каждый раз во время анализа в микроскопии. Несколько осложнения могут возникать, напр...

Нарушение MST1/Бегемот сигнализации были связаны с отклонениями и канцерогенеза1. В млекопитающих, активировать киназы MST1 и MST2 (фосфорилировать) MOB1 и LATS1/2, последний из которых затем фосфорилирует и инактивирует транскрипционный анализ совместного активатор да связанные белком (YAP)2. В его активную форму (unphosphorylated) Яп имеет онкогенных активность, повышение транскрипцию генов распространения клеток; и наоборот когда YAP инактивированная Бегемот дорожка, пролиферацию клеток подавляется и апоптоз передовой3. В тканях существуют главным образом в качестве активного homodimers, MST1 и MST2 но онкогенных раздражителей может увеличить уровни гетеродимерами MST1/MST2, и такие гетеродимерами являются неактивными4. Однако как регулируется MST1/MST2 heterodimerization по-прежнему осознаются. Гомо - и гетеродимерами, опосредованное через взаимодействия между регионами биспиральных C-терминала MST1 и MST2, известная как Сара домены5. Использование в situ PLA продемонстрировал в этой статье, мы покажем присутствие гетеродимерами MST1/MST2 в клетках человека Шванновские клетки (HSC) и человеческих эмбриональных почек (ГЭС-293). PLA имеет преимущество перед другими методами обнаружения взаимодействия протеин/потому что она позволяет обнаруживать эндогенного белок белковых взаимодействий, которые могут быть определены и количественно без необходимости трансген выражения или использование epitope тегов 6.
Сигнальных путей значительной степени контролируется ассоциацией условного компонента белков. К примеру стимуляция большинства рецепторов тирозин киназ приводит к их гомо - и гетеро димеризации и последующего объединения с дополнительной внутриклеточных сигнальных белков, которые сами формы дальнейшего комплексов. PLA метод предназначен для визуализации близости между белков в клетках, условии, что белки не менее 30-40 Нм друг от друга. Близость белка обычно определяется первой инкубации клеток с соответствующей первичной антител, поднятые в различных видов (например., кролик и мышь) против каждый протеин, затем добавляя вегетационных вторичные антитела, предварительно спаренных к краткости ДНК зонды. Если ДНК-зонды находятся в непосредственной близости, конкретных ссылок ДНК олигонуклеотида одновременно можно связать оба эти зонды, формирование платформы для усиления в situ ПЦР или подвижного круга механизм. Флуоресцентный теги, добавленные к реакции амплификации позволяют визуализация взаимодействия белков, которые появляются как люминесцентные точки, которые могут быть легко количественно и локализованы в отдельных регионах в ячейке7,,8, 9 , 10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Chamber slides</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:344px;">178599</td>
			<td style="width:167px;">16 well, glass slide</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA probe Anti-Mouse Minus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92004</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA Probe Anti-Rabbit PLUS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92002</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Wash Buffers, Flurescence</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Detection Reagents Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92008</td>
			<td>Contains 5x Ligation, 1x Ligase, 5x Amlification Red, 1x Polymerase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9102s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Phospho-p44/42 MAPK (Erk1) (Tyr204)/(Erk2) (Tyr187)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5726s</td>
			<td>pERK antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MST2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3952s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Krs-2 (RJ-5)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-100449</td>
			<td>MST1 antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA in PBS for fixing solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton x100</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td>To prepare 0.1% Triton x-100 in 1xPBS for Permeabilization solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Confocal microscopy</td>
			<td>Leica TCS SP8, 63x</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis with ImageJ software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay

Регулируемые белок белковых взаимодействий являются руководящим принципом для многих событий, сигнализации, и обнаружение таких событий является важным элементом в понимании того, как организованы такие пути и как они функционируют. Есть много методов для обнаружения белок белковых взаимодействий в клетках, но относительно немногие может использоваться для определения взаимодействия между эндогенного белков. Один из таких методов, близость лигирование пробирного (НОАК), имеет несколько преимуществ рекомендовать ее использование. По сравнению с другими общие методы анализа взаимодействия протеин протеина, PLA имеет относительно высокую чувствительность и специфичность, могут выполняться с минимальными клеток манипуляции и в протоколе, описанные здесь, требует только два целевых антитела, полученных от разных видов (например., от мыши и кролика) и одно специализированное реагента: набор вторичных антител, которые являются ковалентно связан с конкретным олигонуклеотиды, когда принес в непосредственной близости друг от друга, создать Мы платформа в situ ПЦР или подвижного круга амплификации. В этой презентации мы покажем как применять технику НОАК визуализировать изменения в MST1 и MST2 близости в стационарных клетках. Метод, описанный в этой рукописи особенно применима для анализа клеток сигнализации исследования.

Мы использовали НОАК assay для тестирования взаимодействия между MST1 и MST2 ГЭС-293 и iHSC. Клетки были исправлены, permeabilized и витражи с различных антител, следуют в situ амплификации согласно протоколу PLA (рис. 1). Для документирования уровня MST1/MST2 heterodimerization, кле...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Здесь мы покажем, как использовать Assay лигирование близости (НОАК) для визуализации MST1/MST2 heterodimerization в фиксированных ячейках с высокой чувствительностью.

Обнаружение Heterodimerization изоформ белка, используя Assay в Situ близости лигирование

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

In situ Близость Лигация Анализ или НОАК, является технология, способная обнаруживать взаимодействия между белками, прикрепленные ткани, и клетки. Связи между белками могут быть определены и количественно без необходимости трансгенного выражения или дополнительных технологий. Единственным требованием является наличие специфических высок эффективности антител, которые могут быть изменены с помощью олигонуклеотидов ДНК.В тканях MST1 и MST2 существуют в основном как активные гомодимеры, но онкогенные стимулы могут повысить уровень гетеродимеров MST1 MST2 и такие гетеродимеры неактивны. После инкубации с конкретными антителами грунтовки против белков, представляющих интерес, специальные специфические вторичные антитела, каждый из которых связан с уникальной, короткой, бесплатной нити ДНК прилагается к нему, добавляются в слот, чтобы связать с первичными антителами. Если белки в вопросах гетенодимеризированы, как первичные антитела, так и вторичные антитела, связанные с ними, будут в непосредственной близости.В этом состоянии прикрепленные нити ДНК на вторых антителах могут взаимодействовать через последующее добавление двух других кругообразующих олигонуклеотидов ДНК. Несколько сотенкратная репликация круга ДНК может произойти после реакции усиления и флуоресценции сигнал генерируется выравнивается бесплатный олигонуклеотид зондов. Таким образом, каждый обнаруженный сигнал визуализируется как индивидуальная флуоресцентная точка, которая может быть назначена в определенном подклеточном месте на основе изображений микроскопа.За день до эксперимента, пальто 16 хорошо камерных слайдов, добавив от 50 до 100 микролитров мыши ламинина или поли-L-лизина и инкубировать при 37 градусов по Цельсию. Через 30 минут удалите холодный раствор, разделите клетки с помощью трипсина и пластины от 15 000 до 25 000 клеток на 16 хорошо камерных слайдов. Инкубировать клетки при 37 градусах по Цельсию в увлажненные 5%углекислый газ инкубатор в течение 24 часов.Через 24 часа, удалить среду из колодцев и аккуратно промыть клетки с PBS. Используйте micropipette, чтобы свести к минимуму риск принятия образца затем аспирировать PBS и исправить клетки, добавив 50 микролитров 4%PFA на колодец и инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре без агитации. Не пипетки раствор непосредственно на клетки, так как это может привести к отслоею клеток.После фиксации, мыть клетки с TBST три раза в течение пяти минут каждый с легким возбуждением. Далее пронизывают клетки и инкубируют в течение 10 минут при комнатной температуре без возбуждения. После завершения протеабилизации промыть клетки с TBST три раза в течение пяти минут за стирку с возбуждением.После удаления TBST добавить одну каплю блокирующего раствора в каждую колодец и инкубировать горки в камере предварительно разогретой влажности в течение одного часа при 37 градусах по Цельсию. Разбавить первичные антитела. Удалите блокирующий раствор с помощью микропайетта, но не позволяйте слайдам высохнуть.Vortex и добавить 40 микролитров разбавленного раствора антитела в соответствующие скважины и инкубировать образцы при 37 градусов по Цельсию в предварительно разогретой камере влажности в течение одного часа. Во время инкубации разбавьте два зонда НОАК в разбавляющий антитела. Для каждого образца готовят 40 микролитров зонда НОАК.После одного часа инкубации, аспирировать раствор антитела и мыть слайды дважды в течение пяти минут с TBST при комнатной температуре. Аккуратно удалите TBST со слайдов и добавьте 40 микролитров раствора зонда НОАК к каждой колодец. Инкубировать горки в камере разогретой влажности в течение одного часа при 37 градусах по Цельсию.Vortex и разбавить необходимые объемы перевязки бульона от 1 до 5 в высокой чистоте воды непосредственно перед использованием. Для каждой колодец требуется 40 микролитров раствора перевязки. После инкубации снимите раствор НОАК со слайдов и дважды промойте их в ТБСТ в течение пяти минут при комнатной температуре с возбуждением.Используйте замораживающий блок при удалении лигазы из морозильной камеры и перед добавлением его в клетки, вихрь и разбавить его с перевязки раствора. Удалите TBST со слайдов и добавьте 40 микролитров раствора перевязки лигазы к каждой колодец. Инкубировать слайды в камере разогретой влажности в течение 30 минут при 37 градусах по Цельсию.После инкубации аспирировать раствор и мыть дважды с TBST в течение пяти минут при комнатной температуре с возбуждением. Избегайте подвергая хорошо яркий свет, как реагенты светочувствительны. Во время последней стирки вихрь и разбавляют необходимое количество раствора усиления в высокой чистоте воды непосредственно перед использованием.Держите полимеразу на льду или в охлаждающем блоке и перед тем, как добавить ее в вихрь клеток и разбавить раствором усиления. Аспирировать TBST из скважин и добавить 40 микролитров усиления раствора для каждой скважины. Инкубировать слайды в темной камере разогретой влажности в течение 100 минут при 37 градусах по Цельсию.После инкубации аспирировать раствор полимеразы усиления со слайдов и мыть два раза по десять минут каждый при комнатной температуре. Удалите камеры и силикон вокруг колодцев с горки полностью. Соскречьте оставшиеся бусинки из силикона бритвой.Нарисуйте сетку на слайде, разделяющей каждую колодец. Добавьте около 40 микролитров монтажной среды с DAPI, гарантируя, что пузырьки воздуха не будут пойманы под крышкой скольжения. Используйте лак для ногтей, чтобы исправить крышку стекла.Микроскопический анализ может быть выполнен в течение 20 минут после фиксации, но на практике мы находим наиболее удобным для выполнения анализа изображения на следующий день. Для анализа образцов мы используем лазерный сканирующий микроскоп Leica SP8. Здесь приведены примеры на месте близости перевязки анализа визуализации непосредственной близости между MST 1 и MST2 белков в эмбриональных клетках почек человека в панелях A через D, и человека Schwann клетки в панелях E через H.In все панели ядра клеток окрашены синим DAPI и красные точки указывают на положительную близость перевязки сигналов в результате близости между указанными белками.Панель А показывает близость MST1 и MST2 и панель B показывает близость ERK и phosphoERK, поскольку эти эпитопы находятся на том же белке. Панель C представляет собой отрицательный контроль, поскольку эти клетки, такие как MST1 и MST2 и Группа D представляет собой второй отрицательный контроль, окрашенный антителами для MST1 и ERK, которые, как ожидается, не будут в непосредственной близости друг от друга. Панели E и F показывают близость MST1 с MST2 и ERK с phosphoERK в клетках Шванн.Панель G и H являются отрицательными контроля окрашены только с антителами MST1 или с MST1 и ERK антител. Крайне важно использовать не кросс-реактивных первичных антител, что он должен признать только один член гетенодимера. Также важно помнить, чтобы использовать различные советы, чтобы избежать перекрестного загрязнения первичных антител и PLA зондов, чтобы избежать прикосновения к нижней части хорошо, и, чтобы избежать трубопроводов непосредственно на образцах.После просмотра этого видео вы должны иметь хорошее понимание того, как использовать in situ PLA для изучения белка димеризации в фиксированных клетках.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Капиллярный электрофорез Разделение моноклональных антител изоформ с нейтральным капилляра

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Визуализация белокбелковых взаимодействия в ядерной и цитоплазматических фракций Co-иммунопреципитации и<em&gt; В Ситу</em&gt; Пробирной Расстояние Лигирование

Protein-protein interactions are involved in thousands of cellular processes and occur in distinct spatial context. Traditionally, co-immunoprecipitation ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Обнаружение и визуализация ДНК-индуцированных белковых комплексов в суспензионных клеточных культурах с использованием анализа лигирования близости

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Спектроскопия силы одного белковых молекул с помощью атомно-силового микроскопа

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Весьма деликатного и количественного обнаружения белков и их изоформы методом капиллярной изоэлектрической упором

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Растущий белок кристаллы с отдельных измерений с помощью автоматизированных кристаллизации, в сочетании с в Situ Динамическое рассеяние света

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

Обнаружение малых ГТФазы Prenylation и GTP привязки с помощью мембраны фракционирования и ГТФазы-Assay иммуносорбента

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Высокая чувствительность измерение транскрипции фактор ДНК привязки родство по конкурентоспособным титрования, с помощью микроскопии флуоресцирования

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Анализ сворачивание белков, транспорта и деградации в живых клетках, радиоактивных пульс Чейз

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Оценка взаимодействия белкови-белков с использованием метода пищеварения On-Membrane

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...