Name: detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay
Uploaded: 2018-10-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

En iyi duruma getirme ve bu protokol, belirli Maria Radu ve Galina Semenova, doğrulanması için katkıda bulunmak için tüm Chernoff laboratuvar teşekkür ediyoruz. Andrey Efimov hücre Imaging tesisin Fox Chase Kanser Merkezi ayrıca teşekkür ederiz. Bu eser NIH (R01 CA148805) bir hibe için Dizayn Merkezi tarafından desteklenmiştir.

1. hazırlanması çözümleri
<ol><li>Sabitleştirici çözüm hazırlamak: %4 paraformaldehyde (PFA) 1 x PBS. 10 mL için 2.5 mL % 16 almak PFA ve 7,5 mL 1 x PBS ekleyin. Tehlikeler: İngiltere'de yılın düşük dozlarda kanserojen. Duman ve Ciltle temas tehlikeli. -20 ° C'de mağaza</li>
	<li>Permeabilization çözüm hazırlamak: %0,1 1 x PBS Triton X-100. 100 mL için çözeltisi, Triton X-100 100 µL 100 mL 1 x PBS ekleyin. (RT) Oda sıcaklığında saklayın.</li>
	<li>Yıkama arabellek ha...

<ol>
	<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nore1B/Mst1+complex+restrains+antigen+receptor-induced+proliferation+of+na&#239;ve+T+cells.">The Nore1B/Mst1 complex restrains antigen receptor-induced proliferation of na&#239;ve T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20321-20326 (2008).</li><li>Praskova, M., Xia, F., Avruch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOBKL1A/MOBKL1B+phosphorylation+by+MST1+and+MST2+inhibits+cell+proliferation.">MOBKL1A/MOBKL1B phosphorylation by MST1 and MST2 inhibits cell proliferation.</a> Current Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Dan, I., Watanabe, N. M., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20+group+kinases+as+regulators+of+MAP+kinase+cascades.">The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinase cascades.</a> Trends in Cell Biology. 11 (5), 220-230 (2001).</li><li>Rawat, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H-ras+Inhibits+the+Hippo+Pathway+by+Promoting+Mst1/Mst2Heterodimerization.">H-ras Inhibits the Hippo Pathway by Promoting Mst1/Mst2Heterodimerization.</a> Current Biology. 26 (12), 1556-1563 (2016).</li><li>Creasy, C. L., Ambrose, D. M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ste20-like+protein+kinase,+Mst1,+dimerizes+and+contains+an+inhibitory+domain.">The Ste20-like protein kinase, Mst1, dimerizes and contains an inhibitory domain.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (35), 21049-21053 (1996).</li><li>Buntru, A., Trepte, P., Klockmeier, K., Schnoegl, S., Wanker, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Approaches+Toward+Quantitative+Mapping+of+the+Interactome.">Current Approaches Toward Quantitative Mapping of the Interactome.</a> Frontiers in Genetics. 74 (7), (2016).</li><li>Greenwood, C., Ruff, D., Kirvell, S., Johnson, G., Dhillon, H. S., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+assays+for+sensitive+quantification+of+proteins.">Proximity assays for sensitive quantification of proteins.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 4, 10-16 (2015).</li><li>Fredriksson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+detection+using+proximity-dependent+DNA+ligation+assays.">Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays.</a> Nature Biotechnology. 20 (5), 473-477 (2002).</li><li>Leuchowius, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+visualization+of+multiple+protein+complexes+in+individual+cells+in+tumor+tissue.">Parallel visualization of multiple protein complexes in individual cells in tumor tissue.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 12 (6), 1563-1571 (2013).</li><li>S&#246;derberg, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+individual+endogenous+protein+complexes+in+situ+by+proximity+ligation.">Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation.</a> Nature Methods. 3 (12), 995-1000 (2006).</li></ol>

Cam odası slaytlar gibi çok çeşitli (14-16) hücre hatları ile deneme gerçekleştirmek uygundur ve örnek mikroskobu analizi sırasında her zaman değiştirmek için gerek yoktur bu deneme için kullanmak yararlı bulduk. Bir antikor ile çapraz bulaşma riski gibi bazı komplikasyonlar ortaya çıkabilir. Bu nedenle, biz her şey yıkama öneririz deneme artan süre rağmen bir Coplin kavanoz kullanmak yerine tek tek. Buna ek olarak, silikon Ekle kaldırılması hassas bir meseledir ve özen ve sabır ile yapılm...

MST1/Hippo sinyal kesintileri gelişimsel bozuklukları ve karsinojenezis1bağlı olmuştur. Memelilerde, MST1 ve MST2 kinaz etkinleştirin (fazdan) MOB1 ve LATS1/2, ikincisi olan daha sonra phosphorylates ve transkripsiyon ortak harekete geçirmek Evet ilişkili protein (YAP)2inaktive. Etkin (unphosphorylated) haliyle YAP oncogenic etkinlik, hücre proliferasyonu genlerin transkripsiyon artırılması vardır; Bunun tersi olarak, YAP Hippo yolu tarafından inaktive, hücre çoğalması bastırılır ve Apoptozis3terfi. Dokularda, esas olarak active homodimers, MST1 ve MST2 var ama oncogenic uyaranlara MST1/MST2 heterodimers düzeyleri artırabilir ve böyle heterodimers etkin olmayan4vardır. Ancak, MST1/MST2 heterodimerization nasıl düzenlenir kötü anlaşılır kalır. Homo - hem heterodimers aracılı ile C-terminal dolandı-coil MST1 bölgelerinde ve SARAH etki alanları5olarak bilinen MST2 arasındaki etkileşimler vardır. Bir in situ kullanarak PLA Bu makalede, biz insan Schwann hücreleri (HSC) ve insan embriyonik böbrek hücrelerinde (HEK-293) MST1/MST2 heterodimers varlığını göstermek gösterdi. Tespit ve transgene ifade ihtiyacı veya epitope Etiketler kullanımı sayısal endojen protein-protein etkileşimleri algılanmasını sağlar çünkü PLA diğer protein/protein etkileşim algılama yöntemleri üzerinde bir avantaj vardır 6.
Sinyal iletim yollarının büyük ölçüde bileşen proteinler koşullu Derneği tarafından kontrol edilir. Örneğin, çoğu reseptör Tirozin kinaz uyarılması kendi homo veya heteroseksüel dimerization ve ek hücre içi sinyal proteinleri, kendilerini izleyen ilişkilendirmesiyle formu daha fazla kompleksleri yol açar. Proteinler daha az 30-40 nm parçalara olması koşuluyla PLA yöntemin amacı hücrelerdeki proteinler arasında yakınlık görselleştirmek etmektir. Protein yakınlık genellikle ilk hücre içinde farklı tür kaldırdı uygun birincil antikorlar ile kuluçka tarafından tespit (Örn., tavşan ve fare) karşı etkileşen her protein, sonra species-specific ikincil antikorlar, ekleme önceden birleştiğinde kısa DNA sondalar. DNA probları yakın iseniz, belirli bir bağlantı DNA oligonükleotid aynı anda hem in situ PCR veya daire mekanizması haddeleme tarafından amplifikasyon için bir platform oluşturan Bu sondalar bağlayabilirsiniz. Floresan Etiketler amplifikasyon tepki eklendi görselleştirme kolayca sayılabilir ve hücre7,8, belirli bölgelere lokalize floresan noktalar olarak görünür etkileşen proteinlerin izin 9 , 10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Chamber slides</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:344px;">178599</td>
			<td style="width:167px;">16 well, glass slide</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA probe Anti-Mouse Minus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92004</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PLA Probe Anti-Rabbit PLUS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92002</td>
			<td>Contains 1x Blocking solution, 1x antibody Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Wash Buffers, Flurescence</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Detection Reagents Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DUO92008</td>
			<td>Contains 5x Ligation, 1x Ligase, 5x Amlification Red, 1x Polymerase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9102s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Phospho-p44/42 MAPK (Erk1) (Tyr204)/(Erk2) (Tyr187)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5726s</td>
			<td>pERK antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MST2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3952s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Krs-2 (RJ-5)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-100449</td>
			<td>MST1 antibody</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA in PBS for fixing solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton x100</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td>To prepare 0.1% Triton x-100 in 1xPBS for Permeabilization solution</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Confocal microscopy</td>
			<td>Leica TCS SP8, 63x</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis with ImageJ software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay

Düzenlenmiş protein-protein etkileşimleri çok sayıda sinyal olayı için temel bir ilke vardır ve bu tür olayların tespiti böyle yolları nasıl düzenlendiğini ve şekilleriyle anlamada önemli bir unsurdur. Protein-protein etkileşimleri hücrelerde algılamak için pek çok yöntem vardır, ancak nispeten az endojen proteinler arasındaki etkileşimler algılamak için kullanılabilir. Böyle bir yöntem, yakınlık ligasyonu tahlil (PLA), kullanımı tavsiye bir çok avantajı vardır. Protein-protein etkileşimi analiz ortak diğer yöntemlerine göre PLA nispeten yüksek duyarlılık ve özgüllük vardır, çok az hücre düzenleme ile burada açıklanan protokol yapılabilir, sadece iki hedef özgü gerektirir antikorlar farklı türlerden elde edilen (e.g., fare ve tavşan) ve bir özel reaktif: bir dizi belirli kovalent bağlı oligonucleotides olan ikincil antikorlar, birbirine yakın getirdiğimde, oluşturmak bir situ PCR veya çalışırken daire amplifikasyon amplifiable platformu. Bu sunum, biz MST1 ve MST2 yakınlık sabit hücrelerdeki değişiklikler görselleştirmek için PLA tekniği uygulamak gösterilmiştir. Bu el yazması açıklanan tekniği, özellikle hücre çalışmaları sinyal analizi için geçerlidir.

PLA tahlil HEK-293 ve iHSC MST1 ve MST2 arasındaki etkileşimi sınamak için kullanılır. Hücreleri sabit, permeabilized ve in situ amplifikasyon PLA Protokolü (Şekil 1) göre ardından çeşitli antikorlar ile lekeli. MST1/MST2 heterodimerization düzeyini belgelemek için hücreleri MST1 ve MST2 antikorlar ile (Şekil 1A, 1 C ve 1 G) lekeli. Pozitif kontrol olarak biz de ERK kullanılır ve hücr...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay at JoVE.com

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

İşte, bir yakınlık ligasyonu tahlil (PLA) ile yüksek hassasiyet MST1/MST2 heterodimerization sabit hücrelerdeki görselleştirmek için nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Heterodimerization in Situ yakınlık ligasyonu tahlil kullanarak Protein izoformlarının tespiti

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

In situ Yakınlık Ligasyon Asaveya PLA, proteinler arasındaki etkileşimleri tespit yeteneğine sahip bir teknolojidir, yapıştırılmış doku, ve hücreler. Proteinler arasındaki ilişki transgenik ekspresyon veya ek teknolojiye gerek kalmadan tanımlanabilir ve ölçülebilir. Tek gereklilik, DNA oligonükleotidleri ile modifiye edilebilen spesifik yüksek verimli antikorların bulunmasıdır.Dokularda MST1 ve MST2 esas olarak aktif homodimerolarak bulunur, ancak onkojenik uyaranlar MST1 MST2 heterodimer seviyesini artırabilir ve bu tür heterodimerler inaktiftir. İlgi proteinleri karşı özel astar antikorları ile inkübasyon, özel spesifik ikincil antikorlar, her biri ona bağlı benzersiz, kısa, ücretsiz DNA iplikçik bağlı, birincil antikorlara bağlamak için yuvaya eklenir. Sorulardaki proteinler heterodimerize edilirse, hem primer antikorlar hem de onlara bağlı sekonder antikorlar yakın olacaktır.Bu durumda, ikinci antikorlar üzerinde bağlı DNA iplikçikleri diğer iki daire oluşturan DNA oligonükleotidbir sonraki eklenmesi ile etkileşime olabilir. DNA çemberinin birkaç yüz kat replikasyonu bir amplifikasyon reaksiyonu ve bir floresan sinyali tesviye ücretsiz oligonükleotid probları tarafından oluşturulan sonra oluşabilir. Bu nedenle, algılanan her sinyal, mikroskop görüntülerine dayalı olarak belirli bir hücre altı konumuna atanabilen tek bir floresan nokta olarak görselleştirilir.Deneyden bir gün önce, 37 santigrat derecede 50 ila 100 mikrolitre fare laminin veya poli-L-l-lizin ve kuluçka ekleyerek 16 iyi odalı slaytkat edin. 30 dakika sonra soğuk çözeltiyi çıkarın, Trypsin ve plaka 15, 000 ila 25, 000 hücreleri iyi başına kullanarak hücreleri bölün 16 iyi odalı slayt içine. 37 derecedeki hücreleri nemlendirilmiş %5 karbondioksit inkübatörde 24 saat boyunca kuluçkaya yatırın.24 saat sonra, kuyulardan orta çıkarın ve yavaşça PBS ile hücreleri yıkayın. Numunenin risk almasını en aza indirmek için bir mikropipet kullanın, ardından PBS'yi aspire edin ve hücreleri kuyu başına %4 PFA'dan 50 mikrolitre ekleyerek düzeltin ve ajitasyon olmadan oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatırın. Bu da hücrelerin ayrılmasına neden olabileceğinden, çözeltiyi doğrudan hücrelere sıkıştırmayın.Fiksasyondan sonra hücreleri TBST ile üç kez beş er dakika boyunca hafif ajitasyonla yıkayın. Sonraki hücreleri permeabilize ve ajitasyon olmadan oda sıcaklığında 10 dakika kuluçka. Permeabilizasyon tamamlandıktan sonra, ajitasyon ile yıkama başına beş dakika tbst ile üç kez hücreleri yıkayın.TBST çıkardıktan sonra her kuyuya bir damla engelleme çözeltisi ekleyin ve slaytları önceden ısıtılmış nem odasında 37 santigrat derecede bir saat kuluçkaya yatırın. Birincil antikorları seyreltin. Bir mikropipet kullanarak engelleme çözeltisini çıkarın, ancak slaytların kurumasını izin vermeyin.Girdap ve uygun kuyulara seyreltilmiş antikor çözeltisi 40 mikrolitre ekleyin ve bir saat boyunca önceden ısıtılmış nem odasında 37 santigrat derece örnekleri inküb. Kuluçka sırasında, antikor seyreltici iki PLA probları seyreltin. Her numune için 40 mikrolitre PLA probu hazırlayın.Kuluçka bir saat sonra, antikor çözeltisi aspire ve oda sıcaklığında TBST ile beş dakika boyunca iki kez slaytlar yıkayın. TBST'yi slaytlardan hafifçe çıkarın ve her kuyuya 40 mikrolitre PLA prob çözeltisi ekleyin. 37 santigrat derece bir saat için önceden ısıtılmış nem odasında slaytlar kuluçka.Vortex ve yüksek saflıkta su hemen önce ligasyon stok 1 ila 5 gerekli hacimleri seyreltin. Her kuyu için 40 mikrolitre ligasyon çözeltisi gereklidir. Kuluçkadan sonra, slaytlardan PLA çözeltisini çıkarın ve ajitasyon la oda sıcaklığında beş dakika tbst iki kez yıkayın.Dondurucudan ligaz çıkarırken ve hücrelere eklemeden hemen önce bir dondurucu blok kullanın, girdap ve ligasyon çözeltisi ile seyreltin. Slaytlardan TBST çıkarın ve her kuyuya ligasyon ligaz çözeltisi 40 mikrolitre ekleyin. Önceden ısıtılmış nem odasında 37 santigrat derecede 30 dakika kuluçkaya yat.Kuluçkadan sonra çözeltiyi aspire edin ve tbst ile iki kez çalkalama ile oda sıcaklığında beş dakika yıkayın. Reaktifler ışığa duyarlı olduğundan kuyuyu parlak ışığa maruz bırakmaktan kaçının. Son yıkama sırasında, girdap ve kullanmadan hemen önce yüksek saflıkta su amplifikasyon çözeltisi gereksinimi hacimleri seyreltin.Polimerazı buzüzerinde veya bir soğutma bloğunda tutun ve hücre girdabına eklemeden hemen önce ve amplifikasyon çözeltisi ile seyreltin. TBST'yi kuyulardan aspire edin ve her kuyuya 40 mikrolitre amplifikasyon çözeltisi ekleyin. Karanlık önceden ısıtılmış nem odasında 37 santigrat derecede 100 dakika kuluçkaya yat.Kuluçkadan sonra, slaytlardan amplifikasyon polimeraz çözeltisini aspire edin ve oda sıcaklığında TBST'de her biri iki kez on dakika yıkayın. Tamamen slayt kuyuların etrafında odacıkları ve silikon çıkarın. Kalan silikon boncuklarını jiletle kazıyın.Her iyi ayıran slayt üzerinde bir ızgara çizin. DAPI ile montaj ortamının yaklaşık 40 mikrolitresini ekleyerek, kapak altında hava kabarcıklarının yakalanmamasını sağlar. Kapak camı düzeltmek için oje kullanın.Mikroskobik analiz fiksasyondan sonra 20 dakika içinde yapılabilir, ancak pratikte ertesi gün görüntü analizi yapmayı en uygun şekilde buluyoruz. Örnekleri analiz etmek için Leica SP8 lazer tarama mikroskobu kullanıyoruz. Burada gösterilen yerinde yakınlık ligasyon testi örnekleri paneller A ile D arasında insan embriyonik böbrek hücrelerinde MST 1 ve MST2 proteinleri arasındaki yakın yakınlık görselleştirme, ve paneller E ile Tüm paneller hücre çekirdekleri H.IN ile İnsan Schwann hücreleri DAPI ve kırmızı noktalar tarafından mavi boyanmış olduğunu gösteren pozitif yakınlık ligasyon tahlil sinyalleri belirtilen proteinler arasında yakın yakınlık kaynaklanan gösterir.Panel A, MST1 ve MST2'nin yakınlığını gösterir ken, Panel B ise ERK ve fosfoerk'e yakınlığı gösterir, çünkü bu epitoplar aynı proteindedir. MST1 ve MST2 ve Panel D gibi bu hücrelerin mst1 ve ERK için antikorlarla boyanmış ikinci bir negatif kontrolü temsil ettiği ve birbirlerine yakın olması beklenmez. E ve F panelleri MST1'in Schwann hücrelerinde fosfoERK ile MST2 ve ERK ile yakınlığını gösterir.Panel G ve H, sadece MST1 antikorları veya MST1 ve ERK antikorları ile boyanmış negatif kontrollerdir. Heterodimer'in sadece bir üyesini tanıması gereken çapraz reaktif olmayan primer antikorların kullanılması zorunludur. Ayrıca, primer antikorların ve PLA problarının çapraz kontaminasyonunu önlemek, kuyunun dibine dokunmaktan kaçınmak ve numuneler üzerinde doğrudan borulamayı önlemek için farklı ipuçları kullanmayı unutmamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra sabit hücrelerde protein dimerization çalışma yerinde PLA nasıl kullanılacağını iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Nötr Kılcal kullanılarak monoklonal antikor izoformlannın Kapiler Elektroforez Ayırma

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

Co-immunoprecipitation tarafından Nükleer ve Sitoplazmik Kesirler Protein-protein Etkileşim görselleştirme ve<em&gt; In Situ</em&gt; Proximity ligasyon Testi

Protein-protein interactions are involved in thousands of cellular processes and occur in distinct spatial context. Traditionally, co-immunoprecipitation ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

Proximity Ligation Testi ile Süspansiyon Hücre Kültürlerinde DNA Hasarına Bağlı Protein Komplekslerinin Saptanması ve Görselleştirilmesi

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Kuvvet spektroskopisi bir Atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak tek Protein moleküllerinin

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Proteinler ve onların izoformlarının kapiller Isoelectric odaklanarak yöntemi tarafından son derece hassas ve nicel tespiti

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Situ dinamik ışık saçılma ile birleştiğinde kristalizasyon büyüyen Protein kristalleri kullanarak farklı boyutları ile otomatik

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

Küçük GTPazlar prenilasyon ve bağlayıcı kullanarak membran ayırma ve GTPazlar bağlı Immunosorbent Assay GTP tespiti

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Transkripsiyon faktörü-DNA bağlayıcı Affinities floresans mikroskobu kullanarak rekabet titrasyon tarafından yüksek hassasiyet ölçümü

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Protein katlanması, taşıma ve canlı hücreler radyoaktif darbe Chase tarafından bozulması Analizi

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Bir on-membran sindirim tekniği kullanılarak protein-protein etkileşimlerinin değerlendirilmesi

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...