Name: identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes
Uploaded: 2018-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

نعترف روبين اكساجولا "العلاقات العامة" (مدرسة طب هارفرد، بوسطن، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى حد كبير لهدية ثمينة للمسخ المكتبة، والدكتور مارشال بن (كلية الطب، جامعة ساوثهامبتون، المملكة المتحدة) لتصويبات المخطوطة. ونعترف "الرابطة الفرنسية المريض" كثيرا التليف الكيسي "Vaincre la Mucoviscidose" و "الرابطة غريغوري لومارشال" لدعمها المالي (RF20150501377). ونشكر أيضا الوكالة الوطنية للبحوث (ANR برنامج ديميفير (ANR-13-BSV3-0007-01))، والقارسة ضمور (Domaine د ' الاهتمام القاهرة علل إينفيكتيوسيس et اميرجينتيس) لتمويل زمالات ما بعد الدكتوراه إلى V.L-م. ل. ل. وزميل دكتوراه من "وزارة التعليم العالي et de la البحوث".

1-مكتبة الفرز
<ol><li>بناء المكتبة متحولة تينيسي
	<ol>
<li>الحصول على مكتبة ينقول. ملاحظة: هذه التجربة، حصل مكتبة ينقول متحولة من روبين اكساجولا، "مدرسة هارفارد للصحة العامة"، بوسطن، الولايات المتحدة الأمريكية. المكتبة شيد من سلالة سريرية سلس (43S) أبسسيسوس م. مجمع (م. أبسسيسو...

<ol>
	<li>Qvist, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+the+harmful+effects+of+nontuberculous+mycobacteria+and+Gram+negative+bacteria+on+lung+function+in+patients+with+cystic+fibrosis.">Comparing the harmful effects of nontuberculous mycobacteria and Gram negative bacteria on lung function in patients with cystic fibrosis.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 15 (3), 380-385 (2016).</li><li>Roux, A. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+fate+of+smooth+and+rough+Mycobacterium+abscessus+variants+inside+macrophages.">The distinct fate of smooth and rough Mycobacterium abscessus variants inside macrophages.</a> Open Biology. 6 (11), 160185 (2016).</li><li>Casta&#241;eda-S&#225;nchez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensin+Production+by+Human+Limbo-Corneal+Fibroblasts+Infected+with+Mycobacteria.">Defensin Production by Human Limbo-Corneal Fibroblasts Infected with Mycobacteria.</a> Pathogens. 2 (4), 13-32 (2013).</li><li>Bakala N'Goma, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+abscessus+phospholipase+C+expression+is+induced+during+coculture+within+amoebae+and+enhances+M.+abscessus+virulence+in+mice.">Mycobacterium abscessus phospholipase C expression is induced during coculture within amoebae and enhances M. abscessus virulence in mice.</a> Infection and Immunity. 83 (2), 780-791 (2015).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Tailleux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrained+intracellular+survival+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+human+dendritic+cells.">Constrained intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis in human dendritic cells.</a> Journal of Immunology. 170 (4), 1939-1948 (2003).</li><li>Jacquier, N., Aeby, S., Lienard, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+new+intracellular+pathogens+by+amoebal+coculture+and+amoebal+enrichment+approaches.">Discovery of new intracellular pathogens by amoebal coculture and amoebal enrichment approaches.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e51055 (2013).</li><li>Ad&#233;kambi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amoebal+coculture+of+"Mycobacterium+massiliense"+sp.+nov.+from+the+sputum+of+a+patient+with+hemoptoic+pneumonia.">Amoebal coculture of "Mycobacterium massiliense" sp. nov. from the sputum of a patient with hemoptoic pneumonia.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (12), (2004).</li><li>Rubin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+transposition+of+mariner-based+elements+in+enteric+bacteria+and+mycobacteria.">In vivo transposition of mariner-based elements in enteric bacteria and mycobacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (4), 1645-1650 (1999).</li><li>Laencina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+required+for+Mycobacterium+abscessus+growth+in+vivo+with+a+prominent+role+of+the+ESX-4+locus.">Identification of genes required for Mycobacterium abscessus growth in vivo with a prominent role of the ESX-4 locus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1002-1011 (2018).</li><li>Rowbotham, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Legionella+pneumophila+from+clinical+specimens+via+amoebae,+and+the+interaction+of+those+and+other+isolates+with+amoebae.">Isolation of Legionella pneumophila from clinical specimens via amoebae, and the interaction of those and other isolates with amoebae.</a> Journal of Clinical Pathology. 36 (9), 978-986 (1983).</li><li>Moffat, J. F., Tompkins, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+model+of+intracellular+growth+of+Legionella+pneumophila+in+Acanthamoeba+castellanii.">A quantitative model of intracellular growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii.</a> Infection and Immunity. 60 (1), 296-301 (1992).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Choo, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+reconnaissance+of+clinical+isolates+of+emerging+human+pathogen+Mycobacterium+abscessus+reveals+high+evolutionary+potential.">Genomic reconnaissance of clinical isolates of emerging human pathogen Mycobacterium abscessus reveals high evolutionary potential.</a> Science Reports. 4, (2015).</li><li>Greub, G., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microorganisms+Resistant+to+Free-Living+Amoebae.">Microorganisms Resistant to Free-Living Amoebae.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 413-433 (2004).</li><li>Kicka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+Validation+of+Whole-Cell+Based+Fluorescence+Assays+to+Identify+Anti-Mycobacterial+Compounds+Using+the+Acanthamoeba+castellanii+-+Mycobacterium+marinum+Host-Pathogen+System.">Establishment and Validation of Whole-Cell Based Fluorescence Assays to Identify Anti-Mycobacterial Compounds Using the Acanthamoeba castellanii - Mycobacterium marinum Host-Pathogen System.</a> Public Library of Science One. 9 (1), 87834 (2014).</li><li>Thomas, V., Loret, J. -. F., Jousset, M., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+of+amoebae+and+amoebae-resisting+bacteria+in+a+drinking+water+treatment+plant.">Biodiversity of amoebae and amoebae-resisting bacteria in a drinking water treatment plant.</a> Environmental Microbiology. 10 (10), 2728-2745 (2008).</li><li>Lamrabet, O., Medie, F. M., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acanthamoeba+polyphaga-enhanced+growth+of+mycobacterium+smegmatis.">Acanthamoeba polyphaga-enhanced growth of mycobacterium smegmatis.</a> Public Library of Science One. 7 (1), (2012).</li><li>Cosson, P., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eat,+kill+or+die:+when+amoeba+meets+bacteria.">Eat, kill or die: when amoeba meets bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 11 (3), 271-276 (2008).</li><li>Lelong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+magnesium+and+a+phagosomal+P-type+ATPase+in+intracellular+bacterial+killing.">Role of magnesium and a phagosomal P-type ATPase in intracellular bacterial killing.</a> Cellular microbiology. 13, 246-258 (2011).</li><li>Ouertatani-Sakouhi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+Mycobacterium+marinum+virulence+identified+in+a+Dictyostelium+discoideum+host+model.">Inhibitors of Mycobacterium marinum virulence identified in a Dictyostelium discoideum host model.</a> Public Library of Science One. 12 (7), 0181121 (2017).</li><li>Trofimov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimycobacterial+drug+discovery+using+Mycobacteria-infected+amoebae+identifies+anti-infectives+and+new+molecular+targets.">Antimycobacterial drug discovery using Mycobacteria-infected amoebae identifies anti-infectives and new molecular targets.</a> Science Reports. 8 (1), 3939 (2018).</li><li>Cardenal-Mu&#241;oz, E., Barisch, C., Lefran&#231;ois, L. H., L&#243;pez-Jim&#233;nez, A. T., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+Dicty+Met+Myco,+a+(Not+So)+Romantic+Story+about+One+Amoeba+and+Its+Intracellular+Pathogen.">When Dicty Met Myco, a (Not So) Romantic Story about One Amoeba and Its Intracellular Pathogen.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 529 (2017).</li><li>Delafont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+amoebae-mycobacteria+association+in+drinking+water+network.">First evidence of amoebae-mycobacteria association in drinking water network.</a> Environmental Science &amp; Technology. 48 (20), (2014).</li><li>Cirillo, J. D., Falkow, S., Tompkins, L. S., Bermudez, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+Mycobacterium+avium+with+environmental+amoebae+enhances+virulence.">Interaction of Mycobacterium avium with environmental amoebae enhances virulence.</a> Infection and Immunity. 65 (9), (1997).</li><li>Stamm, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+marinum+escapes+from+phagosomes+and+is+propelled+by+actin-based+motility.">Mycobacterium marinum escapes from phagosomes and is propelled by actin-based motility.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (9), 1361-1368 (2003).</li><li>Groschel, M. I., Sayes, F., Simeone, R., Majlessi, L., Brosch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESX+secretion+systems:+mycobacterial+evolution+to+counter+host+immunity.">ESX secretion systems: mycobacterial evolution to counter host immunity.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (11), 677-691 (2016).</li><li>Pym, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+BCG+exporting+ESAT-6+confers+enhanced+protection+against+tuberculosis.">Recombinant BCG exporting ESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis.</a> Nature Medicine. 9 (5), 533-539 (2003).</li><li>Hsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+mechanism+of+attenuation+of+bacillus+Calmette-Guerin+is+a+loss+of+secreted+lytic+function+required+for+invasion+of+lung+interstitial+tissue.">The primary mechanism of attenuation of bacillus Calmette-Guerin is a loss of secreted lytic function required for invasion of lung interstitial tissue.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (21), 12420-12425 (2003).</li><li>Smith, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+pore+formation+in+host+cell+membranes+by+ESX-1-secreted+ESAT-6+and+its+role+in+Mycobacterium+marinum+escape+from+the+vacuole.">Evidence for pore formation in host cell membranes by ESX-1-secreted ESAT-6 and its role in Mycobacterium marinum escape from the vacuole.</a> Infection and Immunity. 76 (12), 5478-5487 (2008).</li><li>Schnappinger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Adaptation+of+Mycobacterium+tuberculosis.+within+Macrophages.">Transcriptional Adaptation of Mycobacterium tuberculosis. within Macrophages.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (5), 693-704 (2003).</li><li>Fontan, P., Aris, V., Ghanny, S., Soteropoulos, P., Smith, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Transcriptional+Profile+of+Mycobacterium+tuberculosis+during+THP-1+Human+Macrophage+Infection.">Global Transcriptional Profile of Mycobacterium tuberculosis during THP-1 Human Macrophage Infection.</a> Infection and Immunity. 76 (2), 717-725 (2008).</li><li>Miranda-CasoLuengo, A. A., Staunton, P. M., Dinan, A. M., Lohan, A. J., Loftus, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+the+Mycobacterium+abscessus+genome+coupled+with+condition+specific+transcriptomics+reveals+conserved+molecular+strategies+for+host+adaptation+and+persistence.">Functional characterization of the Mycobacterium abscessus genome coupled with condition specific transcriptomics reveals conserved molecular strategies for host adaptation and persistence.</a> BMC Genomics. 17 (1), 553 (2016).</li></ol>

سلوك أبسسيسوس م. يشبه أكثر بكثير لسلوك SGM المسببة للأمراض مثل السل م من أي المتفطرة أخرى تنتمي إلى رجم2. والعنصر الأساسي في الأمراض التي تسببها SGM هو قدرتها على البقاء على قيد الحياة أو حتى تتكاثر داخل خلايا مستضد-عرض، مثل الضامة، والخلايا الجذعية.
أب?...

جنس متفطره يشمل الأنواع تتراوح بين الكائنات saprophytic غير مؤذية لمسببات الأمراض البشرية الرئيسية. الأنواع المسببة للأمراض المعروفة مثل بكتريا السلو بكتريا marinum المقرحة متفطره تنتمي إلى المجموعة فرعية النمو البطيء المتفطرة (SGM). وفي المقابل، الفريق الفرعي للنمو السريع المتفطرة (رجم) تتميز بقدرتها على تشكيل مستعمرات مرئية في أقل من 7 أيام في المتوسط أجار. وتضم المجموعة رجم الأنواع أكثر من 180، المتفطرة saprophytic غير ممرضة أساسا. الدراسات المتعلقة برجم التفاعلات مع مضيفيهم ركزت أساسا على بكتريا سميجماتيس وإثبات أن هذه البكتيريا قد أزيلت سريعاً بفعل جراثيم الضامة.
متفطره أبسسيسوس هو واحد من رجم النادرة التي المسببة للأمراض للبشر، ومسؤولة عن طائفة واسعة من الأمراض بدءاً بالجلد والتهابات الأنسجة الرخوة للالتهابات الرئوية ونشرها. ويعتبر أبسسيسوس م. ، جنبا إلى جنب مع بكتريا بالمتفطره، أن الممرض المتفطرات الرئيسي في مرضى التليف الكيسي1.
تشير مختلف الدراسات التي أجريت على أبسسيسوس م. أن هذا المتفطرة يسلك ممرض داخل الخلايا، قادرة على النجاة من جراثيم استجابة الضامة والليفية في الرئتين والجلد، والتي لا تحترم عادة في رجم 2 , 3 , 4-تحليل الجينوم أبسسيسوس م. وقد حددت المسارات الأيضية التي توجد عادة في الكائنات المجهرية البيئية على اتصال مع التربة، والنباتات والبيئات المائية، حيث غالباً ما تكون الزحارية الحرة الحالية5. قد أثبتت أيضا أن أبسسيسوس م. يتمتع بجينات الفوعة عدة لا توجد في رجم saprophytic وغير ممرضة، ربما حصل عليها نقل الجينات الأفقي في مكانة مواتية لتبادل الوراثية التي قد جمع البكتيريا المقاومة أميبا المختلفة.
تجريبيا، كان أحد نتائج ملفتة للنظر الأولى مراقبة النمو داخل الخلايا من أبسسيسوس م. في الضامة، وكذلك فيما يتعلق السل م.6. أبسسيسوس م. كما يقاوم التحمض يبلوع والمبرمج وأوتوفاجي، ثلاث آليات أساسية لمقاومة العدوى2الخلوية. بل ثبت أن أبسسيسوس م. يكون قادراً على إنشاء رسالة فورية بين يبلوع وسيتوسول، بيئة أكثر الغنية بالمغذيات التي قد تشجع على تكاثر البكتيريا2. جداً لا يعرف الكثير عن مزايا الجينوم أن أبسسيسوس م. تمتلك أو اكتسب للسماح بالبقاء على قيد الحياة في بيئة داخل الخلايا. كوكولتوري أميبا هو أسلوب فعال يسمح بعزل العديد من البكتيريا المقاومة أميبا جديدة بكتريا ماسيلينسي7،8. ولوحظ قدرة على ضرب داخل الزحارية، في نموذج هباء M. أبسسيسوس في الفئران، التي يمكن أن تضفي زيادة فوعة إلى أبسسيسوس م.4. فرضية واحدة هي أن أبسسيسوس م. وضعت الصفات الوراثية مصادفة في إطار هذه البيئة البقاء على قيد الحياة في خلايا متجولة، التي تختلف عن الأخرى رجم غير ممرضة. قد تفضل هذه المقتنيات قدرة على الانتشار وشدته في المضيف البشري.
ويصف هذا التقرير أدوات وأساليب لتسليط الضوء على مزايا الجينوم الممنوحة إلى أبسسيسوس م. البقاء على قيد الحياة في بيئة الزحارية. لهذا الغرض، فحص طفرات ينقول م. أبسسيسوس هو وصف لأول مرة، في سلالة نوع شوكميبة كاستيلاني ، مما يتيح تحديد معيبة للمسخ للنمو داخل الخلايا. ويقال أيضا لفحص ثان في الضامة، لتأكيد إذا كان هذا الخلل ما زال قائما في المضيف البشري. وثانيا، لفهم الآليات التي يتم تسخيره في أبسسيسوس م للتكيف مع الحياة في متجولة الخلايا وزيادة شدته في البلد المضيف الحيواني، وأسلوب مكيفة خصيصا أبسسيسوس م. وقد وضعت، بعد ثقافة المشارك حضور الزحارية الذي يسمح باستخراج الحمض النووي الريبي مجموع من البكتيريا داخل أمويبال. نتيجة لذلك، تم تطوير رؤية شاملة للجينات أبسسيسوس م. التي مطلوبة من أجل حياة داخل الخلايا.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:815px;" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">24-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>11874235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">96-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Beadbeater&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Bertin</td>
			<td style="width:135px;">Precellys 24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Bioanalyzer</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Genepulser Xcell</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Nanodrop spectrophotometer 2000</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">QuBit fluorometer</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">zirconium beads/silica beads</td>
			<td style="width:128px;">Biospec products</td>
			<td style="width:135px;">11079101Z</td>
			<td>Beads</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Name of reagent/cells</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acanthamoeba&#160;castellanii&#160;</td>
			<td style="width:128px;">ATCC</td>
			<td style="width:135px;">30010</td>
			<td>strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amikacin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Mylan</td>
			<td style="width:135px;">150927-A</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B-mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">M6250</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">C1016</td>
			<td>&#62;93% granular anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloroform&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Fluka</td>
			<td style="width:135px;">25666</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ClaI enzyme</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">R0197S</td>
			<td>enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Columbia agar&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Biomerieux</td>
			<td style="width:135px;">43041</td>
			<td>90 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G8270&#160;</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">DMEM&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11500596</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase and RNase free water&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">10977-035</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E.&#160;coli electrocompetent&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">18265017</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E4884</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Escherichia coli&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Clinical isolate</td>
			<td style="width:135px;">personal stock</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fe(NH4)2(SO4)-6H20&#160;</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:135px;">15505-40</td>
			<td>sulfate solution 4% aqueous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td style="width:128px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10270</td>
			<td>serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Glycerol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G5516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Guanidium thiocyanate&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Euromedex</td>
			<td style="width:135px;">EU0046-D</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">I9516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">J774.2 macrophages</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">J774.2</td>
			<td>Strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kanamycin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P0662</td>
			<td>Monobasic, anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB liquid medium&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">12795-027</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lysozyme</td>
			<td style="width:128px;">Roche</td>
			<td style="width:135px;">10837059001</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>Labosi</td>
			<td style="width:135px;">M275</td>
			<td>pur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Microbank TM (cryotubes with beads)</td>
			<td style="width:128px;">Pro-Lab Diagnostic</td>
			<td style="width:135px;">PL.170/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H11 medium</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0428</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H9 medium</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11753473</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M&#252;ller-Hinton agar</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td>3563901</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-Lauryl-sarcosine</td>
			<td style="width:128px;">Merck</td>
			<td style="width:135px;">S37700 416</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4-7H2O</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S9390</td>
			<td>98-102%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol/chloroforme&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">77617</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Proteinase K</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">EO0491</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">proteose peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">211684</td>
			<td>enzymatic digest of animal tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pUC19 plasmid</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">54357</td>
			<td>plasmid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS&#160; 20%</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;">1610418</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium citrate</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td style="width:135px;">567446</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">88810</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Tris</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">154563</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>12044977</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween 80</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P1754&#160;</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast extract&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Kit</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AMBION DNase kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>10792877</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA Agilent Chip</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td>5067-1504</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GeneJET Plasmid Miniprep kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">K0503</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PureLink PCR Purification kit</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">K310001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quant-It&#34; assays kit</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33140/Q32884</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T4 DNA ligase&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">Y90001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TruSeq Stranded RNA LT prep kit</td>
			<td style="width:128px;">Illumina</td>
			<td>15032611</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes

ما يميز بكتريا أبسسيسوس من المتفطرة saprophytic الأخرى هو القدرة على مقاومة البلعمه بالضامة البشرية والقدرة على ضرب داخل هذه الخلايا. تجعل هذه الصفات الفوعة م. أبسسيسوس المسببة للأمراض، لا سيما في المضيفين الضعيفة مع أمراض الرئة الهيكلية الأساسية، مثل التليف الكيسي أو القصبات أو السل. كيف يصاب المرضى مع أبسسيسوس م. لا تزال غير واضحة. خلافا للعديد من البكتيريا، أبسسيسوس م. لم يتم العثور على في البيئة لكن قد تتواجد داخل الزحارية، البالعات البيئية التي تمثل خزان محتملة أبسسيسوس م. وفي الواقع، أبسسيسوس م. مقاومة البلعمه أمويبال والحياة داخل-أميبا ويبدو أن زيادة ضراوة م. أبسسيسوس في نموذج تجريبي للعدوى. ومع ذلك، يعرف الكثير عن ضراوة م. أبسسيسوس في حد ذاته. فك جينات تمنح ميزة للحياة داخل الخلايا أبسسيسوس م. ، وضعت عرض مكتبة متحولة ينقول م. أبسسيسوس . في موازاة ذلك، تم تطوير طريقة لاستخراج الحمض النووي الريبي من البكتيريا داخل الخلايا بعد ثقافة المشارك مع الزحارية. هذا الأسلوب تم التحقق من صحتها ويسمح تسلسل كله أبسسيسوس م. ترانسكريبتوميس داخل الخلايا؛ تقدم، لأول مرة، نظرة عالمية على أبسسيسوس م. التكيف مع الحياة داخل الخلايا. كلا النهجين تعطينا نظرة ثاقبة في عوامل الفوعة أبسسيسوس م. تمكن م. أبسسيسوس لاستعمار الشعب الهوائية في البشر.

أبسسيسوس م. لديه القدرة على مقاومة والهروب من الردود جراثيم الضامة والبروتوزوا البيئية مثل الزحارية. أبسسيسوس م. وتعرب عن عوامل الفوعة عندما نمت على اتصال الزحارية، مما يجعلها أكثر شراسة في الفئران4. وكان الهدف الأول لهذه الأساليب لتحديد الجينات ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

نقدم هنا، بروتوكولين لدراسة التفاعلات بلعمية-بكتريا أبسسيسوس : فحص مكتبة ينقول متحولة لعوز داخل الخلايا البكتيرية وتصميم الترنسكربيتوم داخل الخلايا البكتيرية من الحمض النووي الريبي التسلسل. كلا النهجين التبصير مزايا الجينوم والتكيفات ترانسكريبتوميك تعزيز اللياقة البدنية البكتيريا داخل الخلايا.

تحديد "علامات الفوعة" بكتريا أبسسيسوس "النسخ المتماثل داخل الخلايا" في البالعات

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

يمكن أن يساعد فحص المكتبة المتحولة والدراسات المستنسخة لمسببات الأمراض داخل الخلايا في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول التكيفات الجينومية والتنظيمية لمسببات الأمراض ذات الاهتمام التي تستخدم للبقاء على قيد الحياة داخل المضيف. المزايا الرئيسية لهذه التقنيات هي أنها تقنيات واسعة النطاق التحقيق, وأنها توفر رؤية موضوعية في التكيف مع الحياة داخل الخلايا. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنيات نحو علاج خراج المتفطرة الذي يرتبط بهذا المرض من خلال إعطاء نظرة ثاقبة عن الأهداف المحتملة للعلاج باللقاحات.تبدأ من خلال زراعة أميبا Acanthamoeba كاستيلاني، أو AC، في 30 ملليلتر من بيبتون الخميرة المتوسط في 75 قارورة زراعة 75 سم مربع النسيج في درجة حرارة الغرفة. بعد ساعة واحدة استخدام ماصة 25 ملليلتر لإزالة افرنح، وغسل الخلايا ثلاث مرات مع 10 ملليلتر من AC العازلة دون الكربون أو النيتروجين في غسل. بعد الغسيل الأخير، قم بفصل الأميبا من قاع القارورة مع هزة قوية واحدة، وضبط الخلايا في أنبوب فالكون، إلى خمس مرة 10 إلى الأميبا الخمسة لكل ميل تركيز في عازلة AC الطازجة.البذور خمس مرات 10 إلى الأميبا الأربعة في بئر في لوحة 96-well. ضع اللوحة عند درجة 32 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة دون اهتزاز ، للسماح لـ الأميبا العائمة بالارتباك على الآبار. وفي الوقت نفسه، تدفئة البكتيريا على الجليد، وإضافة خمسة ميكرولترات من البكتيريا المذابة إلى كل بئر في نهاية الحضانة.بعد 1.5 ساعة في 32 درجة مئوية، والتخلص من المنافق عن طريق عكس لوحة على كومة من الشاش العقيم في علبة معدنية معقمة تحت غطاء الدخان. غسل كل بئر ثلاث مرات مع 200 ميكرولترات من متوسطة Ac الطازجة في البئر. بعد الغسيل الأخير ، احتضان الثقافة المشتركة مع 20 ميكرولترات من المتوسط الطازجة المكملة مع الأميكاسين في البئر ، للقضاء على أي بكتيريا ميكروباتيريا خارج الخلية المتبقية لمدة ساعتين.تليها ثلاثة يغسل في المتوسط AC الطازجة، كما أظهرت للتو. ثم، إضافة 200 ميكرولترات من المتوسط، تستكمل مع أميكاسين الطازجة إلى كل بئر، تليها إضافة خمسة أضعاف 10 إلى البكتيريا الإشريكية القولونية Escherichia المعطلة الحرارة السبعة. بعد 48 ساعة، lyse الخلايا مع 10 ميكرولترات من 10٪ الصوديوم دوديسيل كبريتات في البئر، لمدة 30 دقيقة في 32 درجة مئوية، ونشر خمسة ميكرولترات من lysate على لوحات كولومبيا أجار التي تحتوي على 5٪ من دم الأغنام.مزيد من تخفيف lysates بإضافة 25 ميكرولترات من الماء المعقم على كل قطرة. عندما تم مطلي جميع ال ليسات، ختم لوحات مع فيلم البارافين البلاستيك، واحتضان الثقافات لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام في 37 درجة مئوية. عندما تظهر المستعمرات على اللوحات ، تصور الثقافات وتعرف على المسوخ التي تضعف للنمو داخل الخلايا من الرواسب مع أقل عدد من المستعمرات البكتيرية.لاستخراج الحمض النووي الريبي داخل الخلايا، تنمو أولا M.خراج في 7H9 المتوسطة تكمل مع الجلسرين والجلوكوز إلى مرحلة منتصف الأسية في أنابيب 50 ملليلتر في 120 دورة في الدقيقة. في نهاية الثقافة، وغسل البكتيريا مرتين مع 10 ملليلتر من AC العازلة في غسل، وقياس O.D.600 لتقدير تركيز البكتيريا. بعد ذلك، إضافة 8.5 مرات 10 إلى ثمانية mycobacteria إلى 8.5 مرات 10 إلى الأميبا الستة في 10 ملليلتر من متوسطة Ac الطازجة لاحتضان ساعة واحدة في 30 درجة مئوية و 80 دورة في الدقيقة.في نهاية الحضانة، حصاد الخلايا عن طريق الطرد المركزي، وغسل بيليه ثلاث مرات في 10 ملليلتر من عازلة AC الطازجة في غسل تحت نفس شروط الطرد المركزي. ثم إعادة تعليق الخلايا في 10 ملليلتر من المخزن المؤقت AC الطازجة تكملها amikacin للقضاء على أي بكتيريا خارج الخلية، واحتضان الخلايا لمدة أربع ساعات في 30 درجة مئوية و 80 دورة في الدقيقة، تليها اثنين من يغسل في عازلة AC الطازجة. بعد الغسيل الأخير ، إعادة تعليق الأميبا المصابة في أربعة ملليلتر من محلول بارد ثلاثة ، تكملها 280 ميكرولتر من بيتا mercaptoethanol لتعطيل الأميبا على الجليد لمدة 10 دقائق.في نهاية الحضانة، الطرد المركزي الخلية lysate إلى بيليه البكتيريا داخل الخلايا المنبعثة، وإعادة تعليق بيليه البكتيرية في ملليلتر واحد من محلول بارد ثلاثة. من المهم إزالة جميع المنافقين لتجنب التلوث بالحمض النووي الريبي أو البروتياز الذي قد يكون صنع العينات. حصاد البكتيريا المفرج عنها مع الطرد المركزي الثاني، وإعادة تعليق بيليه في ملليلتر واحد من العازلة استخراج.ثم احتضان لمدة 24 ساعة في درجة مئوية سلبية 80. نقل الحل الفطري في اثنين من أنابيب المسمار ملليلتر التي تحتوي على حبات الزركونيوم تصل إلى 500 ميكرولتر تدرج علامة، وتخزين الأنابيب لمدة 24 ساعة أخرى في درجة مئوية سلبية 80 لتسهيل تنشيط SYN RNA و انحلال الخلية. في يوم التحليل ، ذوبان العينات على الجليد ، وتحلل الخلايا بجولتين من التجانس عند 6000 دورة في الدقيقة لمدة 25 ثانية ، تليها التجانس جولة واحدة عند 6000 دورة في الدقيقة لمدة 20 ثانية.بين كل جولة من التجانس، تبريد العينات على الجليد لمدة دقيقة واحدة لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي. بعد الجولة الثالثة من التجانس، تبريد العينات على الجليد لمدة 20 دقيقة، وإضافة 200 ميكرولترات من الكلوروفورم المخفف في الكحول ايساميل إلى كل أنبوب. دوامة لمدة دقيقة واحدة، ثم الطرد المركزي العينات، وإضافة 0.8 ملليلتر من isopropanol الباردة إلى المرحلة مائي لمدة ساعتين إلى ثلاث حضانة في درجة حرارة سالبة 20 درجة مئوية.في نهاية الحضانة، الطرد المركزي العينات مرة أخرى، وغسل الكريات في 500 ميكرولترات من الإيثانول البارد 70٪دون خلط. ثم إزالة فورا الإيثانول عن طريق الطرد المركزي. التعرق لتجفيف الكريات في مكثف الطرد المركزي، وإعادة تعليق الكريات في 100 ميكرولترات من الحمض النووي / RNA خالية من المياه.استخراج MRNA Mycobacterial كما هو موضح، يسمح بتقييم الأسر الجينات المستحثة ومكبوتة عن طريق تجميع الجينات وفقا لأدوارهم في الاستجابة للبيئة محدودة في انها مصدر المواد الغذائية والمعادن، أو إلى نقص الأكسجة أو بيئة حمضية. في مقاومة الإجهاد التأسدي والنيتروسمي ، أو في التعبير عن عوامل الفوعة استجابة لـ الأميبا البيئية. أثناء محاولة تلك الإجراءات، من المهم أن نتذكر أن تؤدي إلى عزل الرنا والثقافة للعينات الخاضعة للرقابة والمصابين في نفس الوقت لتجنب الآثار دفعة.بعد هذا الإجراء، يمكن أن تكون أساليب أخرى مثل تسلسل الحمض النووي الريبي المزدوج preformed للإجابة على أسئلة إضافية حول التفاعلات المسببة للأمراض المضيف. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الميكروبيولوجيا نحو الفوعة الفطرية في نموذج مضيف الأميبا. لا ننسى أن العمل مع الأميبا قد تكون خطرة للغاية، كما قد تتحول الأميبا إلى الخراجات إذا كنت لا تتبع الخطوات المذكورة في الإجراء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

تشريح المضيف للفيروسات التفاعل في النسخ المتماثل التحللي من الفيروسة الموديل

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

تحضير العينة من<em&gt; المتفطرة السلية</em&gt; خلاصات لدراسات النووية المغناطيسي الرنين Metabolomic

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

نمو المتفطرة السلية الأغشية الحيوية

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

تنقية من الفجوات المرضي من<em&gt; البكتيريا</em&gt; المصابة البالعات

The opportunistic pathogen Legionella pneumophila is an amoeba-resistant bacterium, which also replicates in alveolar macrophages thus causing the severe ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

التالية في الوقت الحقيقي تأثير العوامل الالتهاب الرئوي الحاد الفوعة في نموذج الفأر الالتهاب الرئوي عن طريق البكتيريا للإضاءة الحيوية

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

تطبيق نظام التعبير محرض لدراسة التدخل من العوامل البكتيرية الفوعة مع اشارة بين الخلايا

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

فك رموز والتصوير إمراض وحبال من<em&gt; المتفطرة خراج</em&gt; في الزرد الأجنة

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

التنمية وتحديد جزء من السكان رواية من المستمدة العدلات-الإنسان البالعات العملاق<em&gt; في المختبر</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

نظام لفعالية والسمسة فحص مثبطات استهداف بين الخلايا<em&gt; المتفطرة السلية</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

التحديد الكمي "النمو داخل الخلايا داخل الضامة" هو سريع وطريقة يمكن الاعتماد عليها لتقييم الفوعة طفيليات الليشمانيا

The lifecycle of Leishmania, the causative agent of leishmaniasis, alternates between promastigote and amastigote stages inside the insect and vertebrate ...