Name: identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes
Uploaded: 2018-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

אנו מאוד להכיר pr. אי. ג'יי רובין (הספר לרפואה של הרווארד, בוסטון, ארה ב) על המתנה היקרה של המוטציה ספריה, ד ר בן מרשל (הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת סאות'המפטון, אנגליה) עבור התיקונים של כתב היד. אנו מאוד להכיר התאחדות החולה צרפתית סיסטיק פיברוזיס "Vaincre la Mucoviscidose", "L'Association גרגורי Lemarchal" על תמיכתם פיננסיים (RF20150501377). אנו מודים גם הסוכנות הלאומית למחקר (ANR תוכנית DIMIVYR (ANR-13-BSV3-0007-01)), את Région ile-de-(Domaine d'Intérêt Majeur מחלות Infectieuses et Emergentes) למימון הבתר את הנר-מ'. ל' ל' הוא בחור דוקטורט מ "ומוסרת Ministère de L'Enseignement et de la Recherche".

1. ספריית ההקרנה
<ol><li>הקמת ספריית מוטנטים Tn
	<ol>
<li>להשיג את ספריית transposon. הערה: עבור ניסוי זה, ספריית מוטנטים transposon ממנו הושג אי. ג'יי רובין, הרווארד בית הספר לבריאות הציבור, בוסטון, ארה ב. הספרייה נבנה זן קליניים חלקה (43S) של מ' abscessus מורכבים (מ abscessus subsp. massiliense) עם phag...

<ol>
	<li>Qvist, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+the+harmful+effects+of+nontuberculous+mycobacteria+and+Gram+negative+bacteria+on+lung+function+in+patients+with+cystic+fibrosis.">Comparing the harmful effects of nontuberculous mycobacteria and Gram negative bacteria on lung function in patients with cystic fibrosis.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 15 (3), 380-385 (2016).</li><li>Roux, A. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+fate+of+smooth+and+rough+Mycobacterium+abscessus+variants+inside+macrophages.">The distinct fate of smooth and rough Mycobacterium abscessus variants inside macrophages.</a> Open Biology. 6 (11), 160185 (2016).</li><li>Casta&#241;eda-S&#225;nchez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensin+Production+by+Human+Limbo-Corneal+Fibroblasts+Infected+with+Mycobacteria.">Defensin Production by Human Limbo-Corneal Fibroblasts Infected with Mycobacteria.</a> Pathogens. 2 (4), 13-32 (2013).</li><li>Bakala N'Goma, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+abscessus+phospholipase+C+expression+is+induced+during+coculture+within+amoebae+and+enhances+M.+abscessus+virulence+in+mice.">Mycobacterium abscessus phospholipase C expression is induced during coculture within amoebae and enhances M. abscessus virulence in mice.</a> Infection and Immunity. 83 (2), 780-791 (2015).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Tailleux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrained+intracellular+survival+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+human+dendritic+cells.">Constrained intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis in human dendritic cells.</a> Journal of Immunology. 170 (4), 1939-1948 (2003).</li><li>Jacquier, N., Aeby, S., Lienard, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+new+intracellular+pathogens+by+amoebal+coculture+and+amoebal+enrichment+approaches.">Discovery of new intracellular pathogens by amoebal coculture and amoebal enrichment approaches.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e51055 (2013).</li><li>Ad&#233;kambi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amoebal+coculture+of+"Mycobacterium+massiliense"+sp.+nov.+from+the+sputum+of+a+patient+with+hemoptoic+pneumonia.">Amoebal coculture of "Mycobacterium massiliense" sp. nov. from the sputum of a patient with hemoptoic pneumonia.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (12), (2004).</li><li>Rubin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+transposition+of+mariner-based+elements+in+enteric+bacteria+and+mycobacteria.">In vivo transposition of mariner-based elements in enteric bacteria and mycobacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (4), 1645-1650 (1999).</li><li>Laencina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+required+for+Mycobacterium+abscessus+growth+in+vivo+with+a+prominent+role+of+the+ESX-4+locus.">Identification of genes required for Mycobacterium abscessus growth in vivo with a prominent role of the ESX-4 locus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1002-1011 (2018).</li><li>Rowbotham, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Legionella+pneumophila+from+clinical+specimens+via+amoebae,+and+the+interaction+of+those+and+other+isolates+with+amoebae.">Isolation of Legionella pneumophila from clinical specimens via amoebae, and the interaction of those and other isolates with amoebae.</a> Journal of Clinical Pathology. 36 (9), 978-986 (1983).</li><li>Moffat, J. F., Tompkins, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+model+of+intracellular+growth+of+Legionella+pneumophila+in+Acanthamoeba+castellanii.">A quantitative model of intracellular growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii.</a> Infection and Immunity. 60 (1), 296-301 (1992).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Choo, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+reconnaissance+of+clinical+isolates+of+emerging+human+pathogen+Mycobacterium+abscessus+reveals+high+evolutionary+potential.">Genomic reconnaissance of clinical isolates of emerging human pathogen Mycobacterium abscessus reveals high evolutionary potential.</a> Science Reports. 4, (2015).</li><li>Greub, G., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microorganisms+Resistant+to+Free-Living+Amoebae.">Microorganisms Resistant to Free-Living Amoebae.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 413-433 (2004).</li><li>Kicka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+Validation+of+Whole-Cell+Based+Fluorescence+Assays+to+Identify+Anti-Mycobacterial+Compounds+Using+the+Acanthamoeba+castellanii+-+Mycobacterium+marinum+Host-Pathogen+System.">Establishment and Validation of Whole-Cell Based Fluorescence Assays to Identify Anti-Mycobacterial Compounds Using the Acanthamoeba castellanii - Mycobacterium marinum Host-Pathogen System.</a> Public Library of Science One. 9 (1), 87834 (2014).</li><li>Thomas, V., Loret, J. -. F., Jousset, M., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+of+amoebae+and+amoebae-resisting+bacteria+in+a+drinking+water+treatment+plant.">Biodiversity of amoebae and amoebae-resisting bacteria in a drinking water treatment plant.</a> Environmental Microbiology. 10 (10), 2728-2745 (2008).</li><li>Lamrabet, O., Medie, F. M., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acanthamoeba+polyphaga-enhanced+growth+of+mycobacterium+smegmatis.">Acanthamoeba polyphaga-enhanced growth of mycobacterium smegmatis.</a> Public Library of Science One. 7 (1), (2012).</li><li>Cosson, P., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eat,+kill+or+die:+when+amoeba+meets+bacteria.">Eat, kill or die: when amoeba meets bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 11 (3), 271-276 (2008).</li><li>Lelong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+magnesium+and+a+phagosomal+P-type+ATPase+in+intracellular+bacterial+killing.">Role of magnesium and a phagosomal P-type ATPase in intracellular bacterial killing.</a> Cellular microbiology. 13, 246-258 (2011).</li><li>Ouertatani-Sakouhi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+Mycobacterium+marinum+virulence+identified+in+a+Dictyostelium+discoideum+host+model.">Inhibitors of Mycobacterium marinum virulence identified in a Dictyostelium discoideum host model.</a> Public Library of Science One. 12 (7), 0181121 (2017).</li><li>Trofimov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimycobacterial+drug+discovery+using+Mycobacteria-infected+amoebae+identifies+anti-infectives+and+new+molecular+targets.">Antimycobacterial drug discovery using Mycobacteria-infected amoebae identifies anti-infectives and new molecular targets.</a> Science Reports. 8 (1), 3939 (2018).</li><li>Cardenal-Mu&#241;oz, E., Barisch, C., Lefran&#231;ois, L. H., L&#243;pez-Jim&#233;nez, A. T., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+Dicty+Met+Myco,+a+(Not+So)+Romantic+Story+about+One+Amoeba+and+Its+Intracellular+Pathogen.">When Dicty Met Myco, a (Not So) Romantic Story about One Amoeba and Its Intracellular Pathogen.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 529 (2017).</li><li>Delafont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+amoebae-mycobacteria+association+in+drinking+water+network.">First evidence of amoebae-mycobacteria association in drinking water network.</a> Environmental Science &amp; Technology. 48 (20), (2014).</li><li>Cirillo, J. D., Falkow, S., Tompkins, L. S., Bermudez, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+Mycobacterium+avium+with+environmental+amoebae+enhances+virulence.">Interaction of Mycobacterium avium with environmental amoebae enhances virulence.</a> Infection and Immunity. 65 (9), (1997).</li><li>Stamm, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+marinum+escapes+from+phagosomes+and+is+propelled+by+actin-based+motility.">Mycobacterium marinum escapes from phagosomes and is propelled by actin-based motility.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (9), 1361-1368 (2003).</li><li>Groschel, M. I., Sayes, F., Simeone, R., Majlessi, L., Brosch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESX+secretion+systems:+mycobacterial+evolution+to+counter+host+immunity.">ESX secretion systems: mycobacterial evolution to counter host immunity.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (11), 677-691 (2016).</li><li>Pym, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+BCG+exporting+ESAT-6+confers+enhanced+protection+against+tuberculosis.">Recombinant BCG exporting ESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis.</a> Nature Medicine. 9 (5), 533-539 (2003).</li><li>Hsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+mechanism+of+attenuation+of+bacillus+Calmette-Guerin+is+a+loss+of+secreted+lytic+function+required+for+invasion+of+lung+interstitial+tissue.">The primary mechanism of attenuation of bacillus Calmette-Guerin is a loss of secreted lytic function required for invasion of lung interstitial tissue.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (21), 12420-12425 (2003).</li><li>Smith, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+pore+formation+in+host+cell+membranes+by+ESX-1-secreted+ESAT-6+and+its+role+in+Mycobacterium+marinum+escape+from+the+vacuole.">Evidence for pore formation in host cell membranes by ESX-1-secreted ESAT-6 and its role in Mycobacterium marinum escape from the vacuole.</a> Infection and Immunity. 76 (12), 5478-5487 (2008).</li><li>Schnappinger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Adaptation+of+Mycobacterium+tuberculosis.+within+Macrophages.">Transcriptional Adaptation of Mycobacterium tuberculosis. within Macrophages.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (5), 693-704 (2003).</li><li>Fontan, P., Aris, V., Ghanny, S., Soteropoulos, P., Smith, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Transcriptional+Profile+of+Mycobacterium+tuberculosis+during+THP-1+Human+Macrophage+Infection.">Global Transcriptional Profile of Mycobacterium tuberculosis during THP-1 Human Macrophage Infection.</a> Infection and Immunity. 76 (2), 717-725 (2008).</li><li>Miranda-CasoLuengo, A. A., Staunton, P. M., Dinan, A. M., Lohan, A. J., Loftus, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+the+Mycobacterium+abscessus+genome+coupled+with+condition+specific+transcriptomics+reveals+conserved+molecular+strategies+for+host+adaptation+and+persistence.">Functional characterization of the Mycobacterium abscessus genome coupled with condition specific transcriptomics reveals conserved molecular strategies for host adaptation and persistence.</a> BMC Genomics. 17 (1), 553 (2016).</li></ol>

ההתנהגות של מ' abscessus דומה הרבה יותר אופן הפעולה של SGM פתוגניים כגון מ. שחפת מאשר כל mycobacteria אחרים השייכים RGM2. רכיב המפתח ב- פתוגניות של SGM הוא היכולת שלהם לשרוד או אפילו להכפיל בתוך תאים אנטיגן, כגון מקרופאגים, תאים דנדריטים.
מ abscessus רכשה את יתרונות גנו...

הסוג Mycobacterium כוללת מינים ועד אורגניזמים מזיקים saprophytic פתוגנים אנושי הגדולות. זנים פתוגניים ידועים כגון שחפת Mycobacterium, התחממות עולמית Mycobacterium ulcerans שייך קבוצת המשנה של הגדלים לאט mycobacteria (SGM). לעומת זאת, קבוצת המשנה של בצמיחה מהירה mycobacteria (RGM) מאופיין על ידי יכולתם להקים מושבות גלוי פחות מ 7 ימים באמצעי אגר. הקבוצה RGM כוללת יותר מ-180 מינים, בעיקר פתוגניים שאינם mycobacteria saprophytic. מחקרים על אינטראקציות RGM עם מארחיהם התמקדו בעיקר Mycobacterium smegmatis ומדגימים כי mycobacteria האלה מסולקות במהירות על-ידי הפעולה אחרים של מקרופאגים.
Mycobacterium abscessus הוא אחד RGM נדיר כי הם פתוגניים לבני והוא אחראי על מגוון רחב של זיהומים בעור, זיהומים רקמות רכות ועד דלקות ריאות, המופץ. מ abscessus הוא נחשב, יחד עם Mycobacterium avium, המחלה mycobacterial הראשי חולי סיסטיק פיברוזיס1.
מחקרים שונים שבוצעו במ abscessus מציינים כי mycobacterium הזה מתנהג כמו הפתוגן תאיים, מסוגלת לשרוד את התגובה אחרים של מקרופאגים ו fibroblasts הריאות, העור, אשר לא נצפית בדרך כלל ב- RGM 2 , 3 , 4. ניתוח הגנום מ abscessus זיהה משעולים חילוף החומרים הנמצאים בדרך כלל מיקרואורגניזמים סביבתיים במגע עם הקרקע, הצמחים וסביבות הימית, איפה amoebae חינם לעתים קרובות להציג5. הם הוכיחו abscessus מ' ניחן מספר גנים התקפה אלימה לא למצוא את RGM saprophytic ואת פתוגניים שאינם, כנראה נרכשה על ידי העברה גנטית אופקית שנישה חיובית ל- exchange גנטי עשויה לאסוף חיידקים עמידים אמבה שונים.
השפעול, אחת התוצאות הבולט הראשון היה התבוננות צמיחה תאיים של מ abscessus ב מקרופאגים כמו גם באשר מ. שחפת6. מ abscessus מתנגד גם לחומצי phagosome, אפופטוזיס, autophagy, שלושה מנגנונים חיוניים של המחתרת הסלולר זיהום2. אפילו הוכח כי מ abscessus הוא מסוגל ליצור תקשורת מיידית בין phagosome את ציטוזול, סביבה יותר עשירות אולי טובה כפל חיידקים2. מעט מאוד ידוע על היתרונות גנומית מ abscessus הנו או רכשה כדי לאפשר הישרדות בסביבה תאיים. אמבה coculture היא שיטה יעילה אשר איפשר את ניתוקה של חיידקים עמידים אמבה חדשים רבים כמו Mycobacterium massiliense7,8. יכולת להתרבות בתוך amoebae נצפתה, במודל של חשוד מ abscessus בעכברים, אשר ניתן להתייעץ על התקפה אלימה גדל מ abscessus4. אחת ההשערות היא כי abscessus מ פותחו תכונות גנטיות נתקל בתוך סביבה זו כדי לשרוד בתאים phagocytic, אשר שונים אחרים RGM פתוגניים שאינם. רכישות אלה אולי טובה היכולת, התקפה שלה אלימה במארח אנושי.
הדו ח מתאר כלים ושיטות כדי להדגיש את היתרונות גנומית הוענקו ל מ abscessus כדי לשרוד בסביבת amoebae. למטרה זו, ההקרנה של מוטציות transposon מ abscessus הוא תיאר לראשונה, על המתח מסוג Acanthamoeba castellanii , אשר מאפשר הזיהוי תקינה של מוטציות לצמיחה תאיים. הקרנה שנייה מקרופאגים הוא גם דיווח, כדי לוודא אם הפגם הזה נמשכת ב לארח אדם. שנית, כדי להבין אילו מנגנונים הם רתמו ב abscessus מ להסתגל לחיים phagocytic תאים ולהגדיל התקפה שלה אלימה במארח בבעלי חיים, שיטת מותאם מ abscessus היה פיתחה, לאחר תרבות משותפת בנוכחות amoebae שמותר החילוץ של RNA הכולל מחיידקים אינטרה-amoebal. כתוצאה מכך, פותחה תצוגה מקיפה של גנים abscessus מ הנדרשים עבור חיים תאיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:815px;" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">24-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>11874235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">96-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Beadbeater&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Bertin</td>
			<td style="width:135px;">Precellys 24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Bioanalyzer</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Genepulser Xcell</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Nanodrop spectrophotometer 2000</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">QuBit fluorometer</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">zirconium beads/silica beads</td>
			<td style="width:128px;">Biospec products</td>
			<td style="width:135px;">11079101Z</td>
			<td>Beads</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Name of reagent/cells</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acanthamoeba&#160;castellanii&#160;</td>
			<td style="width:128px;">ATCC</td>
			<td style="width:135px;">30010</td>
			<td>strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amikacin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Mylan</td>
			<td style="width:135px;">150927-A</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B-mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">M6250</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">C1016</td>
			<td>&#62;93% granular anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloroform&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Fluka</td>
			<td style="width:135px;">25666</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ClaI enzyme</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">R0197S</td>
			<td>enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Columbia agar&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Biomerieux</td>
			<td style="width:135px;">43041</td>
			<td>90 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G8270&#160;</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">DMEM&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11500596</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase and RNase free water&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">10977-035</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E.&#160;coli electrocompetent&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">18265017</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E4884</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Escherichia coli&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Clinical isolate</td>
			<td style="width:135px;">personal stock</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fe(NH4)2(SO4)-6H20&#160;</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:135px;">15505-40</td>
			<td>sulfate solution 4% aqueous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td style="width:128px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10270</td>
			<td>serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Glycerol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G5516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Guanidium thiocyanate&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Euromedex</td>
			<td style="width:135px;">EU0046-D</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">I9516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">J774.2 macrophages</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">J774.2</td>
			<td>Strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kanamycin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P0662</td>
			<td>Monobasic, anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB liquid medium&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">12795-027</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lysozyme</td>
			<td style="width:128px;">Roche</td>
			<td style="width:135px;">10837059001</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>Labosi</td>
			<td style="width:135px;">M275</td>
			<td>pur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Microbank TM (cryotubes with beads)</td>
			<td style="width:128px;">Pro-Lab Diagnostic</td>
			<td style="width:135px;">PL.170/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H11 medium</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0428</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H9 medium</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11753473</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M&#252;ller-Hinton agar</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td>3563901</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-Lauryl-sarcosine</td>
			<td style="width:128px;">Merck</td>
			<td style="width:135px;">S37700 416</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4-7H2O</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S9390</td>
			<td>98-102%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol/chloroforme&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">77617</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Proteinase K</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">EO0491</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">proteose peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">211684</td>
			<td>enzymatic digest of animal tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pUC19 plasmid</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">54357</td>
			<td>plasmid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS&#160; 20%</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;">1610418</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium citrate</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td style="width:135px;">567446</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">88810</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Tris</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">154563</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>12044977</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween 80</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P1754&#160;</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast extract&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Kit</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AMBION DNase kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>10792877</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA Agilent Chip</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td>5067-1504</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GeneJET Plasmid Miniprep kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">K0503</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PureLink PCR Purification kit</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">K310001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quant-It&#34; assays kit</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33140/Q32884</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T4 DNA ligase&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">Y90001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TruSeq Stranded RNA LT prep kit</td>
			<td style="width:128px;">Illumina</td>
			<td>15032611</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes

מה מבדיל בין Mycobacterium abscessus מן mycobacteria saprophytic אחרות הוא היכולת להתנגד phagocytosis על ידי מקרופאגים האדם את היכולת להתרבות בתוך תאים כאלה. התכונות הללו התקפה אלימה לבלתי abscessus מ פתוגניים, במיוחד אצל המארחים פגיע עם מחלת ריאות המבנית הבסיסית, כגון סיסטיק פיברוזיס, ברונכיאקטזיס או שחפת. כמה חולים להידבק מ abscessus עדיין לא ברור. בניגוד mycobacteria רבים, מ abscessus לא נמצא בסביבה, אבל שעשויים לשכון בתוך amoebae, phagocytes סביבתיים המייצגים מאגר פוטנציאלי עבור abscessus מ'. אכן, abscessus מ עמיד amoebal phagocytosis ונראה החיים אינטרה-אמבה להגדיל התקפה אלימה abscessus מ במודל ניסיוני של זיהום. עם זאת, מעט מאוד ידוע על התקפה אלימה מ abscessus בפני עצמו. כדי לפענח את הגנים הענקת יתרון לחיים תאיים מ' abscessus , פותחה הקרנה של ספריית מוטנטים של transposon מ abscessus . במקביל, פותחה שיטה של RNA מן Mycobacteria תאיים החילוץ לאחר תרבות משותפת עם amoebae. שיטה זו היה מאומת והתירו את הרצף של כל מ abscessus transcriptomes בתוך התאים; מתן, בפעם הראשונה, תצוגה גלובלית על abscessus מ הסתגלות לחיים תאיים. שתי הגישות לתת לנו תובנה הגורמים התקפה אלימה מ abscessus המאפשרים abscessus מ ליישב את דרכי הנשימה אצל בני אדם.

מ abscessus יש את היכולת להתנגד ולברוח התגובות אחרים של מקרופאגים, חד-תאיים סביבתיים כגון amoebae. מ abscessus מבטא הגורמים התקפה אלימה כאשר גדל עם amoebae, מה שהופך אותו יותר מידבק עכברים4. המטרה הראשונה של שיטות אלה היה כדי לזהות את הגנים נוכח מ abscessus המאפשר את...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

להלן מוצגים שני פרוטוקולים ללמוד אינטראקציות פגוציט -Mycobacterium abscessus : הקרנת transposon מוטציה ספריה עבור לקוי תאיים חיידקי וגם הקביעה של חיידקי תאיים transcriptome מ- RNA . רצף. שתי הגישות לספק תובנות יתרונות גנומית ועיבודים transcriptomic שיפור כושר חיידקים תאיים.

זיהוי סמנים התקפה אלימה של Mycobacterium abscessus עבור שכפול תאיים ב Phagocytes

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

הקרנת ספריית מוטנטים ומחקרים תמלוליים של פתוגנים תאיים יכולים לעזור לענות על שאלות מפתח על התאמות גנומיות ורגולטוריות של פתוגנים של עניין המשמשים כדי לשרוד בתוך המארח. היתרונות העיקריים של טכניקות אלה הם כי הם טכניקות חקירה בקנה מידה גדול, כי הם מספקים תובנה אובייקטיבית לתוך הסתגלות לחיים תאיים. ההשלכות של טכניקות אלה להרחיב לכיוון הטיפול של מורסה Mycobacterium לשייך למחלה זו על ידי מתן תובנה על מטרות פוטנציאליות לטיפול בחיסון.התחל על ידי culturing amoeba Acanthamoeba castellani, או Ac, ב 30 מיליליטר של פפטון שמרים גלוקוז בינוני ב 75 פתיתי רקמת סנטימטר מרובע בטמפרטורת החדר. לאחר שעה אחת להשתמש פיפטה 25 מיליליטר כדי להסיר את supernatant, ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם 10 מיליליטר של חיץ Ac ללא פחמן או חנקן לכל לשטוף. לאחר הכביסה האחרונה, נתק את האמבה מתחתית הבקבוק עם טלטול נמרץ אחד, והתאם את התאים בצינור פלקון, לחמש פעמים 10 לריכוז של חמש אמבה למיל במאגר AC טרי.זרעים חמש פעמים 10 לארבעה אמבה לגם בצלחת 96 באר. מניחים את הצלחת ב 32 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת בלי לרעוד, כדי לאפשר את אמבה צף tropho-zoites לדבוק בארות. בינתיים, לחמם את החיידקים על קרח, ולהוסיף חמישה microliters של חיידקים מופשרים לכל באר בסוף הדגירה.לאחר 1.5 שעות ב 32 מעלות צלזיוס, להשליך את supernatant על ידי היפוך הצלחת על ערימה של גזה סטרילית במגש מתכת מעקר מתחת למכסה המנוע אדים. לשטוף כל באר שלוש פעמים עם 200 microliters של מדיום Ac טרי לגם. לאחר הכביסה האחרונה, הדגירה את התרבות השיתוף עם 20 microliters של מדיום טרי בתוספת אמיקצין לגם, כדי לחסל את כל mycobacteria חוץ תאי שנותר במשך שעתיים.ואחריו שלוש שטיפות במדיום Ac טרי, כפי שהודגם רק. לאחר מכן, מוסיפים 200 מיקרוליטרים של מדיום, בתוספת אמיקצין טרי לכל באר, ואחריו תוספת של חמש פעמים 10 לשבע חיידקים Escherichia coli מושבת חום. לאחר 48 שעות, lyse התאים עם 10 microliters של 10% נתרן dodecyl סולפט לגם, במשך 30 דקות ב 32 מעלות צלזיוס, ולהפיץ חמישה microliters של lysate על קולומביה אגר צלחות המכיל 5% דם כבשים.עוד לדלל את lysates על ידי הוספת 25 microliters של מים סטריליים על כל טיפה. כאשר כל הlysates כבר מצופה, לאטום את הצלחות עם סרט פרפין פלסטיק, ו דגירה התרבויות במשך שלושה עד ארבעה ימים ב 37 מעלות צלזיוס. כאשר מושבות מופיעות על הלוחות, לצלם את התרבויות ולזהות את המוטנטים לקוי לצמיחה תאית על ידי מרבצים עם המספר הנמוך ביותר של מושבות חיידקים.עבור מיצוי RNA mycobacteria תאיים, לגדל תחילה M.מורססוס ב 7H9 בינוני בתוספת גליצרול וגלוקוז לשלב אמצע מעריכי ב 50 צינורות מיליליטר ב 120 סל"ד. בסוף התרבות, לשטוף את החיידקים פעמיים עם 10 מיליליטר של חיץ Ac לכל לשטוף, ולמדוד את O.D.600 כדי להעריך את ריכוז החיידקים. לאחר מכן, להוסיף 8.5 פעמים 10 לשמונה mycobacteria ל 8.5 פעמים 10 לשישה amoebae ב 10 מיליליטר של מדיום AC טרי עבור דגירה של שעה אחת ב 30 מעלות צלזיוס ו 80 סל"ד.בסוף הדגירה, קוצר את התאים על ידי צנטריפוגה, ולשטוף את גלולה שלוש פעמים ב 10 מיליליטר של חיץ Ac טרי לכל לשטוף באותם תנאי צנטריפוגה. לאחר מכן להשעות מחדש את התאים ב 10 מיליליטר של חיץ Ac טרי בתוספת amikacin לחסל כל חיידקים חוץ תאיים, ו דגירה התאים במשך ארבע שעות ב 30 מעלות צלזיוס ו 80 סל"ד, ואחריו שתי שטיפות במאגר AC טרי. לאחר הכביסה האחרונה, להשעות מחדש את amoebae נגוע בארבעה מיליליטר של פתרון קר שלוש, בתוספת 280 microliters של בטא mercaptoethanol לשבש את amoebae על הקרח במשך 10 דקות.בסוף הדגירה, צנטריפוגה התא lysate כדי גלולה חיידקים תאיים ששוחררו, ולהשעות מחדש את גלולת חיידקי במיליליטר אחד של פתרון קר שלוש. חשוב להסיר את כל על טבעי כדי למנוע זיהום עם RNA אמובה או פרוטאזות שאולי עשה את הדגימות. לקצור את החיידקים ששוחררו עם צנטריפוגה שנייה, ולהשעות מחדש את גלולה במיליליטר אחד של חיץ החילוץ.ואז דגירה במשך 24 שעות ב 80 מעלות צלזיוס שליליות. מעבירים את הפתרון המיקובקטריאלי לשני צינורות בורג מיליליטר המכילים חרוזי זירקוניום עד לסימן ההדרגה של 500 מיקרוליטר, ואחסנו את הצינורות למשך 24 שעות נוספות ב-80 מעלות צלזיוס שליליות כדי להקל על הפעלת סינון RNA ופירוק תאים. ביום הניתוח, להפשיר את הדגימות על קרח, ו lyse התאים עם שני סיבובים של הומוגניזציה ב 6000 סל"ד במשך 25 שניות, ואחריו הומוגניזציה סיבוב אחד ב 6000 סל"ד במשך 20 שניות.בין כל סיבוב של הומוגניזציה, לקרר את הדגימות על הקרח במשך דקה אחת, כדי למנוע השפלה RNA. לאחר הסיבוב השלישי של הומוגניזציה, לקרר את הדגימות על קרח במשך 20 דקות, ולהוסיף 200 microliters של כלורופורם מדולל אלכוהול isoamyl לכל צינור. מערבולת לדקה אחת, ואז צנטריפוגה הדגימות, ולהוסיף 0.8 מיליליטר של isopropanol קר לשלב המימי עבור דגירה של שעתיים עד שלוש שעות ב 20 מעלות צלזיוס שלילי.בסוף הדגירה, צנטריפוגה הדגימות שוב, ולשטוף את כדורי 500 microliters של קר 70% אתנול מבלי לערבב. ואז מיד להסיר את האתנול על ידי צנטריפוגה. שאף את העל-טבעי לייבוש הכדורים ברכז צנטריפוגלי, והשהה מחדש את הכדורים ב-100 מיקרוליטרים של מים נטולי DNA/RNA.מיצוי MRNA Mycobacterial כפי שהוכח, מאפשר הערכה של משפחות גנים המושרה והמודחק על ידי קיבוץ הגנים על פי תפקידם בתגובה לסביבה מוגבלת במקור של חומרים מזינים ומינרלים, או לסביבה היפוקסית או חומצית. בהתנגדות ללחץ חמצוני וניטרוזטיבי, או בביטוי של גורמי ארסיות בתגובה לאמבה סביבתית. בעת ניסיון הליכים אלה, חשוב לזכור לבצע את התרבות ואת בידוד RNA של דגימות מבוקרות נגועות בו זמנית, כדי למנוע השפעות אצווה.בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו רצף RNA כפול ניתן ליצור מראש כדי לענות על שאלות נוספות על אינטראקציות פתוגן המארח. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום המיקרוביולוגיה כלפי ארסיות מיקובקטריה במודל המארח של האמבה. אל תשכח כי עבודה עם amoebae עלול להיות מסוכן מאוד, כמו amoebae עלול להפוך ציסטות אם אתה לא בצע את השלבים המתוארים בהליך.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

אינטראקצית מארח וירוס ביתור בשכפול של וירוס ההרפס ממוסס דגם

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

לדוגמא הכנה של<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; תמציות ללימודי metabolomic תהודה מגנטיים גרעיניים

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

גידול של שחפת Mycobacterium Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

טיהור vacuoles הפתוגן מ<em&gt; הלגיונלה</em&gt; נגועים phagocytes

The opportunistic pathogen Legionella pneumophila is an amoeba-resistant bacterium, which also replicates in alveolar macrophages thus causing the severe ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

בעקבות בזמן אמת השפעת גורמי דלקת ריאות ארסיים בעכבר דלקת ריאות דגם אקוטי באמצעות חיידקי Bioluminescent

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

יישום מערכת ביטוי עין מתנהלת לחקר הפרעות של גורמים בקטריאלי ארסיות עם איתות תאיים

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות<em&gt; Abscessus Mycobacterium</em&gt; בעוברי דג הזברה

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

פיתוח זיהוי של subpopulation רומן של אדם נויטרופילים הנגזר הענק Phagocytes<em&gt; במבחנה</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

מערכת לסינון יעילות Cytotoxicity של מעכבי מיקוד תאי<em&gt; שחפת Mycobacterium</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

כימות של צמיחה תאיים בתוך המקרופאגים הוא מהיר, שיטה אמינה להערכת של התקפה אלימה של טפילים לישמניה

The lifecycle of Leishmania, the causative agent of leishmaniasis, alternates between promastigote and amastigote stages inside the insect and vertebrate ...