Name: identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes
Uploaded: 2018-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

Vi erkjenner sterkt Pr. E.J. Rubin (Harvard Medical School, Boston, USA) for dyrebare gave mutant biblioteket og Dr. Ben Marshall (fakultet, Universitetet i Southampton, UK) for korreksjoner manuskriptet. Vi erkjenner sterkt den franske pasienten Association for cystisk fibrose "Vaincre la Mucoviscidose" og "L'Association Gregory Lemarchal" for deres finansielle støtte (RF20150501377). Vi også takke National Agency for forskning (ANR program DIMIVYR (ANR-13-BSV3-0007-01)) og Région Ile-de-France (Domaine d'Intérêt Majeur sykdommer Infectieuses et Emergentes) for finansiering postdoktorstipend V.L-m. L. L. er en doktorgrad fra den "Ministère de L'Enseignement Supérieur et de la Recherche".

1. biblioteket Screening
<ol><li>Byggingen av Tn mutant biblioteket
	<ol>
<li>Få en transposon biblioteket. Merk: For dette eksperimentet, et transposon mutant bibliotek er Hentet fra E.J. Rubin, Harvard School of Public Health, Boston, USA. Biblioteket ble konstruert fra en glatt klinisk belastning (43S) av den M. abscessus kompleks (M. abscessus subsp. massiliense) med en phagemid introdusert i M. abscessus slik at tilfeldige innsetting av en enkelt <e...

<ol>
	<li>Qvist, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+the+harmful+effects+of+nontuberculous+mycobacteria+and+Gram+negative+bacteria+on+lung+function+in+patients+with+cystic+fibrosis.">Comparing the harmful effects of nontuberculous mycobacteria and Gram negative bacteria on lung function in patients with cystic fibrosis.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 15 (3), 380-385 (2016).</li><li>Roux, A. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+fate+of+smooth+and+rough+Mycobacterium+abscessus+variants+inside+macrophages.">The distinct fate of smooth and rough Mycobacterium abscessus variants inside macrophages.</a> Open Biology. 6 (11), 160185 (2016).</li><li>Casta&#241;eda-S&#225;nchez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensin+Production+by+Human+Limbo-Corneal+Fibroblasts+Infected+with+Mycobacteria.">Defensin Production by Human Limbo-Corneal Fibroblasts Infected with Mycobacteria.</a> Pathogens. 2 (4), 13-32 (2013).</li><li>Bakala N'Goma, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+abscessus+phospholipase+C+expression+is+induced+during+coculture+within+amoebae+and+enhances+M.+abscessus+virulence+in+mice.">Mycobacterium abscessus phospholipase C expression is induced during coculture within amoebae and enhances M. abscessus virulence in mice.</a> Infection and Immunity. 83 (2), 780-791 (2015).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Tailleux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrained+intracellular+survival+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+human+dendritic+cells.">Constrained intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis in human dendritic cells.</a> Journal of Immunology. 170 (4), 1939-1948 (2003).</li><li>Jacquier, N., Aeby, S., Lienard, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+new+intracellular+pathogens+by+amoebal+coculture+and+amoebal+enrichment+approaches.">Discovery of new intracellular pathogens by amoebal coculture and amoebal enrichment approaches.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e51055 (2013).</li><li>Ad&#233;kambi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amoebal+coculture+of+"Mycobacterium+massiliense"+sp.+nov.+from+the+sputum+of+a+patient+with+hemoptoic+pneumonia.">Amoebal coculture of "Mycobacterium massiliense" sp. nov. from the sputum of a patient with hemoptoic pneumonia.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (12), (2004).</li><li>Rubin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+transposition+of+mariner-based+elements+in+enteric+bacteria+and+mycobacteria.">In vivo transposition of mariner-based elements in enteric bacteria and mycobacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (4), 1645-1650 (1999).</li><li>Laencina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+required+for+Mycobacterium+abscessus+growth+in+vivo+with+a+prominent+role+of+the+ESX-4+locus.">Identification of genes required for Mycobacterium abscessus growth in vivo with a prominent role of the ESX-4 locus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1002-1011 (2018).</li><li>Rowbotham, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Legionella+pneumophila+from+clinical+specimens+via+amoebae,+and+the+interaction+of+those+and+other+isolates+with+amoebae.">Isolation of Legionella pneumophila from clinical specimens via amoebae, and the interaction of those and other isolates with amoebae.</a> Journal of Clinical Pathology. 36 (9), 978-986 (1983).</li><li>Moffat, J. F., Tompkins, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+model+of+intracellular+growth+of+Legionella+pneumophila+in+Acanthamoeba+castellanii.">A quantitative model of intracellular growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii.</a> Infection and Immunity. 60 (1), 296-301 (1992).</li><li>Ripoll, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+mycobacterial+virulence+genes+in+the+genome+of+the+emerging+pathogen+Mycobacterium+abscessus.">Non mycobacterial virulence genes in the genome of the emerging pathogen Mycobacterium abscessus.</a> Public Library of Science One. 4 (6), 5660 (2009).</li><li>Choo, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+reconnaissance+of+clinical+isolates+of+emerging+human+pathogen+Mycobacterium+abscessus+reveals+high+evolutionary+potential.">Genomic reconnaissance of clinical isolates of emerging human pathogen Mycobacterium abscessus reveals high evolutionary potential.</a> Science Reports. 4, (2015).</li><li>Greub, G., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microorganisms+Resistant+to+Free-Living+Amoebae.">Microorganisms Resistant to Free-Living Amoebae.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 413-433 (2004).</li><li>Kicka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+Validation+of+Whole-Cell+Based+Fluorescence+Assays+to+Identify+Anti-Mycobacterial+Compounds+Using+the+Acanthamoeba+castellanii+-+Mycobacterium+marinum+Host-Pathogen+System.">Establishment and Validation of Whole-Cell Based Fluorescence Assays to Identify Anti-Mycobacterial Compounds Using the Acanthamoeba castellanii - Mycobacterium marinum Host-Pathogen System.</a> Public Library of Science One. 9 (1), 87834 (2014).</li><li>Thomas, V., Loret, J. -. F., Jousset, M., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+of+amoebae+and+amoebae-resisting+bacteria+in+a+drinking+water+treatment+plant.">Biodiversity of amoebae and amoebae-resisting bacteria in a drinking water treatment plant.</a> Environmental Microbiology. 10 (10), 2728-2745 (2008).</li><li>Lamrabet, O., Medie, F. M., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acanthamoeba+polyphaga-enhanced+growth+of+mycobacterium+smegmatis.">Acanthamoeba polyphaga-enhanced growth of mycobacterium smegmatis.</a> Public Library of Science One. 7 (1), (2012).</li><li>Cosson, P., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eat,+kill+or+die:+when+amoeba+meets+bacteria.">Eat, kill or die: when amoeba meets bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 11 (3), 271-276 (2008).</li><li>Lelong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+magnesium+and+a+phagosomal+P-type+ATPase+in+intracellular+bacterial+killing.">Role of magnesium and a phagosomal P-type ATPase in intracellular bacterial killing.</a> Cellular microbiology. 13, 246-258 (2011).</li><li>Ouertatani-Sakouhi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+Mycobacterium+marinum+virulence+identified+in+a+Dictyostelium+discoideum+host+model.">Inhibitors of Mycobacterium marinum virulence identified in a Dictyostelium discoideum host model.</a> Public Library of Science One. 12 (7), 0181121 (2017).</li><li>Trofimov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimycobacterial+drug+discovery+using+Mycobacteria-infected+amoebae+identifies+anti-infectives+and+new+molecular+targets.">Antimycobacterial drug discovery using Mycobacteria-infected amoebae identifies anti-infectives and new molecular targets.</a> Science Reports. 8 (1), 3939 (2018).</li><li>Cardenal-Mu&#241;oz, E., Barisch, C., Lefran&#231;ois, L. H., L&#243;pez-Jim&#233;nez, A. T., Soldati, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+Dicty+Met+Myco,+a+(Not+So)+Romantic+Story+about+One+Amoeba+and+Its+Intracellular+Pathogen.">When Dicty Met Myco, a (Not So) Romantic Story about One Amoeba and Its Intracellular Pathogen.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 529 (2017).</li><li>Delafont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+amoebae-mycobacteria+association+in+drinking+water+network.">First evidence of amoebae-mycobacteria association in drinking water network.</a> Environmental Science &amp; Technology. 48 (20), (2014).</li><li>Cirillo, J. D., Falkow, S., Tompkins, L. S., Bermudez, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+Mycobacterium+avium+with+environmental+amoebae+enhances+virulence.">Interaction of Mycobacterium avium with environmental amoebae enhances virulence.</a> Infection and Immunity. 65 (9), (1997).</li><li>Stamm, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium+marinum+escapes+from+phagosomes+and+is+propelled+by+actin-based+motility.">Mycobacterium marinum escapes from phagosomes and is propelled by actin-based motility.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (9), 1361-1368 (2003).</li><li>Groschel, M. I., Sayes, F., Simeone, R., Majlessi, L., Brosch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESX+secretion+systems:+mycobacterial+evolution+to+counter+host+immunity.">ESX secretion systems: mycobacterial evolution to counter host immunity.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (11), 677-691 (2016).</li><li>Pym, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+BCG+exporting+ESAT-6+confers+enhanced+protection+against+tuberculosis.">Recombinant BCG exporting ESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis.</a> Nature Medicine. 9 (5), 533-539 (2003).</li><li>Hsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+mechanism+of+attenuation+of+bacillus+Calmette-Guerin+is+a+loss+of+secreted+lytic+function+required+for+invasion+of+lung+interstitial+tissue.">The primary mechanism of attenuation of bacillus Calmette-Guerin is a loss of secreted lytic function required for invasion of lung interstitial tissue.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (21), 12420-12425 (2003).</li><li>Smith, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+pore+formation+in+host+cell+membranes+by+ESX-1-secreted+ESAT-6+and+its+role+in+Mycobacterium+marinum+escape+from+the+vacuole.">Evidence for pore formation in host cell membranes by ESX-1-secreted ESAT-6 and its role in Mycobacterium marinum escape from the vacuole.</a> Infection and Immunity. 76 (12), 5478-5487 (2008).</li><li>Schnappinger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Adaptation+of+Mycobacterium+tuberculosis.+within+Macrophages.">Transcriptional Adaptation of Mycobacterium tuberculosis. within Macrophages.</a> Journal of Experimental Medicine. 198 (5), 693-704 (2003).</li><li>Fontan, P., Aris, V., Ghanny, S., Soteropoulos, P., Smith, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Transcriptional+Profile+of+Mycobacterium+tuberculosis+during+THP-1+Human+Macrophage+Infection.">Global Transcriptional Profile of Mycobacterium tuberculosis during THP-1 Human Macrophage Infection.</a> Infection and Immunity. 76 (2), 717-725 (2008).</li><li>Miranda-CasoLuengo, A. A., Staunton, P. M., Dinan, A. M., Lohan, A. J., Loftus, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+the+Mycobacterium+abscessus+genome+coupled+with+condition+specific+transcriptomics+reveals+conserved+molecular+strategies+for+host+adaptation+and+persistence.">Functional characterization of the Mycobacterium abscessus genome coupled with condition specific transcriptomics reveals conserved molecular strategies for host adaptation and persistence.</a> BMC Genomics. 17 (1), 553 (2016).</li></ol>

Virkemåten til M. abscessus er mye mer lik oppførsel av patogene SGM som M. tuberkulose enn noen andre mykobakterier tilhører RGM2. Viktig element i virusets av CMS er deres evne til å overleve eller selv multiplisere antigen presentere celler, som makrofager og dendrittiske celler.
M. abscessus har kjøpt visse genomisk fordeler som vist av totale sekvensen av sine genom14 for å overleve i en eukaryot phagocytic c...

Slekten Mycobacterium omfatter arter fra ufarlig saprophytic organismer til store human patogener. Kjente sykdomsfremkallende arter som Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium marinum og Mycobacterium ulcerans tilhører undergruppen av langsom voksende mykobakterier (sdb). I kontrast, undergruppe av hurtig voksende mykobakterier (RGM) er preget av evnen til å danne synlig kolonier på mindre enn 7 dager på agar medium. RGM gruppen består av mer enn 180 arter, hovedsakelig ikke-patogene saprophytic mykobakterier. Studier på RGM vekselsvirkningene med deres verter fokusert hovedsakelig på Mycobacterium smegmatis og vise at disse mykobakterier fjernes raskt av bakteriedrepende handling av makrofager.
Mycobacterium abscessus er en av de sjeldne RGM som er patogene for mennesker og er ansvarlig for en rekke infeksjoner mellom huden og bløtvevet infeksjoner lunge og spres infeksjoner. M. abscessus regnes, sammen med Mycobacterium avium, viktigste mycobacterial patogen i cystisk fibrose pasienter1.
Ulike studier utført på M. abscessus indikerer at denne mycobacterium oppfører seg som en intracellulær patogen, i stand til gjenlevende bakteriedrepende svar makrofager og fibroblaster i lungene og huden, som ikke er vanligvis observert i RGM 2 , 3 , 4. M. abscessus genomet analyse har identifisert metabolske veier vanligvis finnes i miljømessige mikroorganismer i kontakt med jord, planter og akvatiske miljøer, der gratis amoebae ofte presentere5. De har også vist at M. abscessus er utstyrt med flere virulens gener ikke funnet i saprophytic og ikke-patogene RGM, trolig kjøpt av den horisontale genoverføring i en nisje gunstige genetisk Exchange som kan samles ulike amoeba resistente bakterier.
Eksperimentelt, var en av de første slående resultatene observasjon av intracellulær veksten av M. abscessus i makrofager så vel som for M. tuberkulose6. M. abscessus også motstår forsuring av phagosome, apoptose og autophagy, tre sentrale mekanismene for mobilnettet motstanden til infeksjon2. Det har også vist at M. abscessus er i stand til å etablere en umiddelbar kommunikasjon mellom phagosome og stoffer et mer næringsrik miljø som kan favorisere bakteriell multiplikasjon2. Svært lite er kjent om genomisk fordelene som M. abscessus besitter eller fått tillatelse overlevelse i et intracellulær miljø. Amoeba coculture er en effektiv metode som tillot isolering av mange nye amoeba resistente bakterier som Mycobacterium massiliense7,8. En evne til å multiplisere innen amoebae ble observert i en modell av aerosolization av M. abscessus i mus, som kan gi en økt virulens M. abscessus4. En hypotese er at M. abscessus hadde utviklet genetiske egenskaper oppstått innenfor dette miljøet å overleve i phagocytic celler, som er forskjellig fra andre ikke-patogene RGM. Disse oppkjøpene kan favorisere muligheten til å spre og dens virulens i menneskelig verten.
Denne rapporten beskriver verktøy og metoder for å fremheve genomisk fordelene overdratt til M. abscessus å overleve i amoebae miljøet. For dette formålet beskrevet screening av M. abscessus transposon mutanter først, på Acanthamoeba castellanii type belastningen, hvilke innrømmer identifikasjon av mutant's defekt for intracellulær vekst. En andre screening i makrofager er også rapportert å bekrefte hvis denne feilen vedvarer i menneskelig verten. For det andre, for å forstå mekanismene som er brukt i M. abscessus å tilpasse seg livet i phagocytic celler og øke sin virulens i dyr verten, en metode spesielt tilrettelagt for M. abscessus ble utviklet, etter co kultur i nærvær av amoebae som tillot utvinning av totale RNA fra intra-amoebal bakterier. Som en konsekvens, ble en omfattende visning av M. abscessus gener som kreves for en intracellulær liv utviklet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:815px;" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">24-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>11874235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">96-well plates</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Beadbeater&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Bertin</td>
			<td style="width:135px;">Precellys 24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Bioanalyzer</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Genepulser Xcell</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">Nanodrop spectrophotometer 2000</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;">QuBit fluorometer</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">zirconium beads/silica beads</td>
			<td style="width:128px;">Biospec products</td>
			<td style="width:135px;">11079101Z</td>
			<td>Beads</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:341px;">Name of reagent/cells</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acanthamoeba&#160;castellanii&#160;</td>
			<td style="width:128px;">ATCC</td>
			<td style="width:135px;">30010</td>
			<td>strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amikacin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Mylan</td>
			<td style="width:135px;">150927-A</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B-mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">M6250</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">C1016</td>
			<td>&#62;93% granular anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloroform&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Fluka</td>
			<td style="width:135px;">25666</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ClaI enzyme</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">R0197S</td>
			<td>enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Columbia agar&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Biomerieux</td>
			<td style="width:135px;">43041</td>
			<td>90 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G8270&#160;</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">DMEM&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11500596</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase and RNase free water&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">10977-035</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E.&#160;coli electrocompetent&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">18265017</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E4884</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Escherichia coli&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Clinical isolate</td>
			<td style="width:135px;">personal stock</td>
			<td>bacteria</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fe(NH4)2(SO4)-6H20&#160;</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:135px;">15505-40</td>
			<td>sulfate solution 4% aqueous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td style="width:128px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10270</td>
			<td>serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Glycerol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">G5516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Guanidium thiocyanate&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Euromedex</td>
			<td style="width:135px;">EU0046-D</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">I9516</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">J774.2 macrophages</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">J774.2</td>
			<td>Strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kanamycin&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P0662</td>
			<td>Monobasic, anhydrous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB liquid medium&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">12795-027</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lysozyme</td>
			<td style="width:128px;">Roche</td>
			<td style="width:135px;">10837059001</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>Labosi</td>
			<td style="width:135px;">M275</td>
			<td>pur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Microbank TM (cryotubes with beads)</td>
			<td style="width:128px;">Pro-Lab Diagnostic</td>
			<td style="width:135px;">PL.170/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H11 medium</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0428</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Middlebrook 7H9 medium</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">11753473</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M&#252;ller-Hinton agar</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td>3563901</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-Lauryl-sarcosine</td>
			<td style="width:128px;">Merck</td>
			<td style="width:135px;">S37700 416</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4-7H2O</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S9390</td>
			<td>98-102%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol/chloroforme&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">77617</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Proteinase K</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">EO0491</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">proteose peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">211684</td>
			<td>enzymatic digest of animal tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pUC19 plasmid</td>
			<td style="width:128px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:135px;">54357</td>
			<td>plasmid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS&#160; 20%</td>
			<td style="width:128px;">Biorad</td>
			<td style="width:135px;">1610418</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium citrate</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td style="width:135px;">567446</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">88810</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Tris</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">154563</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizol&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>12044977</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween 80</td>
			<td style="width:128px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">P1754&#160;</td>
			<td>solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast extract&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td style="width:135px;">212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:341px;">Kit</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AMBION DNase kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td>10792877</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA Agilent Chip</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td>5067-1504</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GeneJET Plasmid Miniprep kit&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">K0503</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PureLink PCR Purification kit</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">K310001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quant-It&#34; assays kit</td>
			<td style="width:128px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:135px;">Q33140/Q32884</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T4 DNA ligase&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">Y90001</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TruSeq Stranded RNA LT prep kit</td>
			<td style="width:128px;">Illumina</td>
			<td>15032611</td>
			<td>kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of virulence markers of mycobacterium abscessus for intracellular replication in phagocytes

Hva skiller Mycobacterium abscessus fra andre saprophytic mykobakterier er evnen å motstå fagocytose av menneskelig makrofager og evnen til å formere seg i slike celler. Disse virulens egenskaper gjengi M. abscessus patogene, spesielt i sårbare verter med underliggende strukturelle lungesykdom, som cystisk fibrose, bronkiektasier eller tuberkulose. Hvordan pasienter bli infisert med M. abscessus uklar. I motsetning til mange mykobakterier, M. abscessus finnes ikke i miljøet, men kan ligge inne amoebae, miljømessige phagocytes som representerer en potensiell reservoaret for M. abscessus. Faktisk M. abscessus er motstandsdyktig mot amoebal fagocytose og intra-amoeba livet synes å øke M. abscessus virulens i en eksperimentell modell av infeksjon. Men er lite kjent om M. abscessus virulens i seg selv. Dechiffrere genene overdragelse en fordel M. abscessus intracellulær liv, ble en screening av en M. abscessus transposon mutant biblioteket utviklet. Parallelt utviklet en metode for RNA utvinning fra intracellulær mykobakterier etter co kultur med amoebae. Denne metoden var godkjent og lov sekvensering av hele M. abscessus transcriptomes i cellene, gi, for første gang, en global oversikt på M. abscessus tilpasning til intracellulær liv. Begge metodene gir oss et innblikk i M. abscessus virulens faktorer som aktiverer M. abscessus å colonize luftveiene hos mennesker.

M. abscessus har evnen å motstå og unnslippe bakteriedrepende svarene makrofager og miljømessige protozoer som amoebae. M. abscessus uttrykker virulens faktorer når dyrket i kontakt med amoebae, som gjør det mer virulente i mus4. Det første målet for disse metodene var å identifisere genene i M. abscessus slik at den overlevelse og multiplikasjon innen amoebae.
For dette...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes at JoVE.com

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Her presenterer vi to protokoller for å studere Phagocyte -Mycobacterium abscessus vekselsvirkningene: screening av et transposon mutant bibliotek for bakteriell intracellulær mangel og fastsettelse av bakteriell intracellulær transcriptome fra RNA sekvensering. Begge metodene gir innsikt i genomisk fordeler og transcriptomic tilpasninger styrke intracellulære bakterier fitness.

Identifikasjon av virulens markører av Mycobacterium abscessus for intracellulær replikering i Phagocytes

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

Mutant bibliotekscreening og transkripsjonsstudier av intracellulære patogener kan bidra til å svare på viktige spørsmål om genomiske og regulatoriske tilpasninger av patogener av interesse som brukes til å overleve inne i verten. De viktigste fordelene med disse teknikkene er at de er store undersøkelsesteknikker, og at de gir et objektivt innblikk i tilpasning til intracellulært liv. Implikasjonene av disse teknikkene strekker seg mot behandling av Mycobacterium abscessus som knytter seg til denne sykdommen ved å gi innsikt i potensielle mål for vaksinebehandling.Begynn med å dyrke amoeba Acanthamoeba castellani, eller Ac, i 30 milliliter Peptone Gjær Glukose medium i 75 kvadratcentimeter vev kultur kolbe ved romtemperatur. Etter en time bruk en 25 milliliter pipette for å fjerne det overnaturlige, og vask cellene tre ganger med 10 milliliter Ac buffer uten karbon eller nitrogen per vask. Etter den siste vasken, løsne amøbe fra bunnen av kolben med en enkelt kraftig risting, og juster cellene i et Falcon-rør, til en fem ganger 10 til fem amoebae per mil konsentrasjon i frisk Ac buffer.Seed fem ganger 10 til fire amoebae per brønn i en 96-brønns plate. Plasser platen på 32 grader celsius i en time uten å riste, slik at de flytende amoeba tropho-zoites å holde seg til brønnene. I mellomtiden varmer bakteriene på is, og tilsett fem mikroliter av de tinte bakteriene til hver brønn på slutten av inkubasjonen.Etter 1,5 timer ved 32 grader celsius, kast overnatanten ved å snu platen på en stabel steril gasbind i et sterilisert metallbrett under en røykhette. Vask hver brønn tre ganger med 200 mikroliter frisk ac medium per brønn. Etter den siste vasken, inkubere samkulturen med 20 mikroliter av friskt medium supplert med amikacin per brønn, for å eliminere eventuelle gjenværende ekstracellulære mykobakterier i to timer.Etterfulgt av tre vasker i frisk Ac medium, som nettopp demonstrert. Deretter legger du til 200 mikroliter medium, supplert med frisk amikacin til hver brønn, etterfulgt av tillegg av fem ganger 10 til de syv varmeinaktiverte Escherichia coli-bakteriene. Etter 48 timer, lyse cellene med 10 mikroliter på 10% natrium dodecyl sulfat per brønn, i 30 minutter ved 32 grader celsius, og spre fem mikroliter av lysatet på Columbia Agar plater som inneholder 5% saublod.Fortynn lysates ytterligere ved å tilsette 25 mikroliter sterilt vann på hver dråpe. Når alle lysates er belagt, forsegle platene med plast parafin film, og inkubere kulturer i tre til fire dager på 37 grader celsius. Når kolonier vises på platene, fotografer kulturene og identifiser mutantene som er svekket for intracellulær vekst av innskuddene med det laveste antallet bakterielle kolonier.For intracellulær mykobakterier RNA ekstraksjon, først vokse M.abscessus i 7H9 medium supplert med glyserol og glukose til midten eksponentiell fase i 50 milliliter rør ved 120 RPM. På slutten av kulturen, vask bakteriene to ganger med 10 milliliter Ac buffer per vask, og måle O.D.600 for å estimere bakteriekonsentrasjonen. Deretter legger du til 8,5 ganger 10 til de åtte mykobakteriene til 8,5 ganger 10 til seks amoebae i 10 milliliter friskt Ac medium for en time inkubasjon ved 30 grader celsius og 80 RPM.På slutten av inkubasjonen høster cellene ved sentrifugering, og vasker pelleten tre ganger i 10 milliliter frisk Ac buffer per vask under samme sentrifugeforhold. Deretter re-suspendere cellene i 10 milliliter frisk Ac buffer supplert med amikacin for å eliminere eventuelle ekstracellulære bakterier, og inkubere cellene i fire timer ved 30 grader celsius og 80 RPM, etterfulgt av to vasker i frisk Ac buffer. Etter siste vask, re-suspendere den infiserte amoebae i fire milliliter kald løsning tre, supplert med 280 mikroliter beta mercaptoetanol å forstyrre amoebae på is i 10 minutter.På slutten av inkubasjonen sentrifugerer cellen lysate for å pellet de frigjorte intracellulære bakteriene, og re-suspendere bakteriell pellet i en milliliter kald løsning tre. Det er viktig å fjerne alle de supernatante for å unngå forurensning med amoeba RNA eller proteaser som kan ha gjort prøvene. Høst de frigjorte bakteriene med en ny sentrifugering, og re-suspendere pellet i en milliliter ekstraksjon buffer.Deretter inkuber i 24 timer ved negativ 80 grader celsius. Overfør mykobakterielle oppløsningen til to milliliter skruerør som inneholder zirkoniumperler opp til 500 mikroliter graderingsmerket, og lagre rørene i ytterligere 24 timer ved negativ 80 grader celsius for å lette RNA syn aktivering og celleoppløsning. På analysedagen tiner prøvene på is, og lyser cellene med to runder homogenisering ved 6000 RPM i 25 sekunder, etterfulgt av en runde homogenisering ved 6000 RPM i 20 sekunder.Mellom hver runde homogenisering, avkjøl prøvene på is i ett minutt for å unngå RNA nedbrytning. Etter den tredje runden med homogenisering, avkjøl prøvene på is i 20 minutter, og tilsett 200 mikroliter kloroform fortynnet i isoamylalkohol til hvert rør. Vortex i ett minutt, sentrifuger prøvene, og tilsett 0,8 milliliter kald isopropanol til vandig fase for en to til tre timers inkubasjon ved negativ 20 grader celsius.På slutten av inkubasjonen sentrifuger prøvene igjen, og vask pellets i 500 mikroliter kaldt 70% etanol uten blanding. Fjern deretter umiddelbart etanol ved sentrifugering. Aspirer supernatanten for tørking av pellets i en sentrifugalkonsentrator, og re-suspendere pellets i 100 mikroliter dna / RNA-fritt vann.Mycobacterial MRNA utvinning som demonstrert, tillater evaluering av induserte og undertrykte genfamilier ved å gruppere genene i henhold til deres roller i å reagere på et miljø begrenset i sin kilde til næringsstoffer og mineraler, eller til et hypoksisk eller surt miljø. I motstanden mot oksidativt og nitrosativt stress, eller i uttrykk for virulensfaktorer som svar på miljømessig amøbe. Mens du prøver disse prosedyrene, er det viktig å huske å utføre kulturen og RNA-isolasjonen av de kontrollerte og infiserte prøvene samtidig for å unngå batcheffekter.Etter denne prosedyren kan andre metoder som dobbel RNA-sekvensering forhåndsformes for å svare på flere spørsmål om vertspatogeninteraksjoner. Etter utviklingen banet denne teknikken vei for forskere innen mikrobiologi mot mykobakterier i amøbevertsmodellen. Ikke glem at det å jobbe med amøbe kan være ekstremt farlig, da amøbe kan forvandle seg til cyster hvis du ikke følger trinnene som er beskrevet i prosedyren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Vekst av Mycobacterium tuberculosis Biofilm

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Rensing av Patogen vakuoler fra<em&gt; Legionella</em&gt;-Infiserte fagocytter

The opportunistic pathogen Legionella pneumophila is an amoeba-resistant bacterium, which also replicates in alveolar macrophages thus causing the severe ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Etter i Real Time Impact of Pneumokokk virulens faktorer i en akutt Mouse Lungebetennelse Modell Bruke Bioluminescent Bakterier

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

Påføre en induserbar Expression System for å studere forstyrrelser av bakteriell virulensfaktorer med intracellulære signal

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Tyde og Imaging Patogenese og snor av<em&gt; Mycobacterium abscessus</em&gt; I sebrafisk embryo

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Utvikling og identifikasjon av en Novel undergruppe av menneskelige nøytrofilmedierte avledet Giant Fagocytter<em&gt; In Vitro</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

System for Effekt og Cytotoksisitet Screening av inhibitorer målretting Intracellulær<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

Kvantifisering av intracellulær vekst i makrofager er en rask og pålitelig metode for å vurdere virulens av Leishmania parasitter

The lifecycle of Leishmania, the causative agent of leishmaniasis, alternates between promastigote and amastigote stages inside the insect and vertebrate ...