Name: protocols for testing the toxicity of novel insecticidal chemistries to mosquitoes
Uploaded: 2019-02-13T12:30:00
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लेखकों परख विकास और लाइट प्रोटोकॉल के प्रावधान के साथ सहायता के लिए एच राँसन, उष्णकटिबंधीय चिकित्सा के लिवरपूल स्कूल धंयवाद, और एम Scharf, सलाह के लिए इन्होने विश्वविद्यालय परख डिजाइन के बारे में ।

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A global brief on vector-borne diseases. , (2014).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Vector-borne diseases. , (2016).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Report by the Secretariat. Neglected tropical diseases; Prevention, control, elimination and eradication. , (2013).</li><li>Tolle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+diseases.">Mosquito-borne diseases.</a> Curr Probl Pediatr Adolesc Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).</li><li>Chen, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vectors+surveillance+in+endemic+areas+in+kuala+lumpur+city+centre+and+selangor+state,+malaysia.">Dengue vectors surveillance in endemic areas in kuala lumpur city centre and selangor state, malaysia.</a> Dengue Bulletin. 30, (2006).</li><li>Marcombe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+status+of+united+states+populations+of+Aedes+albopictus+and+mechanisms+involved.">Insecticide resistance status of united states populations of Aedes albopictus and mechanisms involved.</a> PLoS ONE. 9 (7), e101992 (2014).</li><li>Ranson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrethroid+resistance+in+African+anopheline+mosquitoes:+what+are+the+implications+for+malaria+control?.">Pyrethroid resistance in African anopheline mosquitoes: what are the implications for malaria control?.</a> Trends in Parasitology. , 1-8 (2010).</li><li>Hemingway, J., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+in+insect+vectors+of+human+disease.">Insecticide resistance in insect vectors of human disease.</a> Annual Review of Entomology. 45, 371-391 (2000).</li><li>Hemingway, J., Beaty, B. J., Rowland, M., Scott, T. W., Sharp, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Innovative+Vector+Control+Consortium:+improved+control+of+mosquito-borne+diseases.">The Innovative Vector Control Consortium: improved control of mosquito-borne diseases.</a> Trends in Parasitology. 22 (7), 308-312 (2006).</li><li>Meyer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+&amp;#34;genome-to-lead&amp;#34;+approach+for+insecticide+discovery:+Pharmacological+characterization+and+screening+of+Aedes+aegypti+D+1-like+dopamine+receptors.">A &amp;#34;genome-to-lead&amp;#34; approach for insecticide discovery: Pharmacological characterization and screening of Aedes aegypti D 1-like dopamine receptors.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 6 (1), e1478 (2012).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Instructions for determining the susceptibility or resistance of mosquito larvae to insecticides. , (1981).</li><li>Hill, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-invigorating+the+insecticide+discovery+pipeline+for+vector+control:+GPCRs+as+targets+for+the+identification+of+next+gen+insecticides.">Re-invigorating the insecticide discovery pipeline for vector control: GPCRs as targets for the identification of next gen insecticides.</a> Pestide Biochemistry and Physiology. 106 (3), 141-148 (2013).</li><li>Conley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+AaDOP2+Receptor+antagonists+reveals+antidepressants+and+antipsychotics+as+novel+lead+molecules+for+control+of+the+yellow+fever+mosquito,+Aedes+aegypti.">Evaluation of AaDOP2 Receptor antagonists reveals antidepressants and antipsychotics as novel lead molecules for control of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeautics. 352 (1), 53-60 (2015).</li><li>Ahmed, M. A. I., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+actions+of+formamidine+insecticides+on+the+activity+of+pyrethroids+and+neonicotinoids+against+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae).">Synergistic actions of formamidine insecticides on the activity of pyrethroids and neonicotinoids against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 49 (6), 1405-1410 (2012).</li><li>Ahmed, M. A. I., Vogel, C. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+action+of+octopamine+receptor+agonists+on+the+activity+of+selected+novel+insecticides+for+control+of+dengue+vector+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae)+mosquito.">Synergistic action of octopamine receptor agonists on the activity of selected novel insecticides for control of dengue vector Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) mosquito.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 120, 51-56 (2015).</li><li>Hill, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacological+characterization+of+D1-like+dopamine+receptors+from+Anopheles+gambiae,+Aedes+aegypti+and+Culex+quinquefasciatus+suggests+pleiotropic+signaling+in+mosquito+vector+lineages.">Comparative pharmacological characterization of D1-like dopamine receptors from Anopheles gambiae, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus suggests pleiotropic signaling in mosquito vector lineages.</a> Parasites Vectors. 9 (1), 192 (2016).</li><li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guideline for evaluating insecticide resistance in vectors using the CDC bottle bioassay. , (2011).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Test procedures for insecticide resistance monitoring in malaria vector mosquitoes. , (2013).</li><li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidelines for efficacy testing of insecticides for indoor and outdoor ground-applied space spray applications control of neglected tropical diseases who pesticide evaluation scheme. , 2-53 (2009).</li><li>Pridgeon, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+Aedes+aegypti,+Culex+quinquefasciatus+Say,+and+Anopheles+quadrimaculatus+Say+to+19+pesticides+with+different+modes+of+action.">Susceptibility of Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus Say, and Anopheles quadrimaculatus Say to 19 pesticides with different modes of action.</a> Journal of Medical Entomolog. 45 (1), 82-87 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liverpool Insect Testing Establishment. , (2018).</li><li>A&#239;zoun, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+standard+WHO+susceptibility+tests+and+the+CDC+bottle+bioassay+for+the+determination+of+insecticide+susceptibility+in+malaria+vectors+and+their+correlation+with+biochemical+and+molecular+biology+assays+in+Benin,+West+Africa.">Comparison of the standard WHO susceptibility tests and the CDC bottle bioassay for the determination of insecticide susceptibility in malaria vectors and their correlation with biochemical and molecular biology assays in Benin, West Africa.</a> Parasites Vectors. 6, 147 (2013).</li><li>Owusu, H. F., Jan&#269;&#225;ryov&#225;, D., Malone, D., M&#252;ller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparability+between+insecticide+resistance+bioassays+for+mosquito+vectors:+time+to+review+current+methodology?.">Comparability between insecticide resistance bioassays for mosquito vectors: time to review current methodology?.</a> Parasites Vectors. 8, 357 (2015).</li><li>Savignac, R., Maire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A simple character for recognizing second and third instar larvae of five Canadian mosquito genera (Diptera: Culicidae). , (1981).</li><li>Bhatt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coverage+and+system+efficiencies+of+insecticide-treated+nets+in+Africa+from+2000+to+2017.">Coverage and system efficiencies of insecticide-treated nets in Africa from 2000 to 2017.</a> eLife. 4, 174 (2015).</li><li>Zaim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+insecticides:+an+urgent+need.">Alternative insecticides: an urgent need.</a> Trends in Parasitology. 18 (4), 161-163 (2002).</li><li>Fonseca, I., Quino&#241;es, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistencia+a+insecticidas+en+mosquitos+(Diptera:+Culicidae):+mecanismos,+deteccion+y+vigilancia+en+salud+publica.">Resistencia a insecticidas en mosquitos (Diptera: Culicidae): mecanismos, deteccion y vigilancia en salud publica.</a> Revista Colombiana de Entomologia. 31 (2), 107-115 (2005).</li><li>Fonseca-Gon Alez, I., Qu, M. L., Lenhart, A., Brogdon, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+status+of+Aedes+aegypti+(L.)+from+Colombia.">Insecticide resistance status of Aedes aegypti (L.) from Colombia.</a> Pest Management Science. 67, 430-437 (2011).</li><li>Nuss, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptor+antagonists+as+new+mode-of-action+insecticide+leads+for+control+of+Aedes+and+Culex+mosquito+vectors.">Dopamine receptor antagonists as new mode-of-action insecticide leads for control of Aedes and Culex mosquito vectors.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 9 (3), 1-19 (2015).</li><li>Shidrawi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+WHO+Global+Programme+for+monitoring+vector+resistance+to+pesticides.">A WHO Global Programme for monitoring vector resistance to pesticides.</a> Bulletin of the World Health Organization. 68 (4), 403 (1990).</li><li>Sylla, M., Kobylinski, K. C., Foy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gates+grand+challenges+explorations+award:+endectocides+for+controlling+transmission+of+mosquito-borne+diseases.">Gates grand challenges explorations award: endectocides for controlling transmission of mosquito-borne diseases.</a> Malariaworld Journal. 4 (5), (2013).</li><li>Foy, B. D., Kobylinski, K. C., da Silva, I. M., Rasgon, J. L., Sylla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endectocides+for+malaria+control.">Endectocides for malaria control.</a> Trends in Parasitology. 27 (10), 423-428 (2011).</li><li>Chaccour, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+to+reduce+malaria+transmission:+a+research+agenda+for+a+promising+new+tool+for+elimination.">Ivermectin to reduce malaria transmission: a research agenda for a promising new tool for elimination.</a> Malaria Journal. 12 (1), 153 (2013).</li><li>Olson, D. M., Fadamiro, H., Lundgren, J. G., Heimpel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sugar+feeding+on+carbohydrate+and+lipid+metabolism+in+a+parasitoid+wasp.">Effects of sugar feeding on carbohydrate and lipid metabolism in a parasitoid wasp.</a> Physiol Entomol. 25, 17-26 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Report of the WHO Informal Consultation. Evaluation and testing of insecticides. , (1996).</li><li>Huang, Q., Deng, Y., Zhan, T., He, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+and+antagonistic+effects+of+piperonyl+butoxide+in+fipronil-susceptible+and+resistant+rice+stem+borrers,+Chilo+suppressalis.">Synergistic and antagonistic effects of piperonyl butoxide in fipronil-susceptible and resistant rice stem borrers, Chilo suppressalis.</a> Journal of Insect Science. 10, 182 (2010).</li></ol>

लेखकों के हितों का कोई टकराव की घोषणा ।

कीटनाशक मलेरिया25, डेंगू और Zika26जैसे मच्छर जनित रोगों से निपटने के लिए शक्तिशाली औजार हैं । व्यापक कीटनाशक उपयोग मच्छर आबादी है कि रासायनिक नियंत्रण के लिए प्रतिरोधी रहे है का उत्पादन किया है, कीटनाशक प्रतिरोध है, जो जारी रोग नियंत्रण के लिए एक सबसे बड़ा खतरा माना जाता है के विकास के लिए अग्रणी । पिछले दशक Anopheles एसपीपी की आबादी में एक नाटकीय वृद्धि देखी गई है । सिंथेटिक पायरेथ्रोइड्स के लिए प्रतिरोधी (एसपीएस)7अफ्रीका में बिस्तर जाल में इस्तेमाल किया । एडीज albopictus, डेंगू और Zika के एक वेक्टर की आबादी, फ्लोरिडा और ंयू जर्सी में सूचित किया गया है कि6organophosphates के लिए प्रतिरोधी रहे हैं । इसी तरह, डीडीटी और पायरेथ्रोइड्स के प्रतिरोध Anopheles और एडीज एसपीपी की आबादी में प्रलेखित किया गया है । कोलंबिया में27,28. ज्ञात आणविक लक्ष्यों पर विविध orthosteric या allosteric साइटों को बाँधने वाले नए डिमंकनाशी और adulticides को विकसित करने की तत्काल आवश्यकता है या जो नए लक्ष्य (अर्थात, उपन्यास मुआ chemistries)२९,३० और कम पर्यावरणीय प्रभाव है । वहीं मच्छर नियंत्रण के लिए endectocides के आसपास संभावितों की मान्यता भी बढ़ाकर31,३२,३३कर रही है ।
इस तरह के उत्पादों के तेजी से विकास की सुविधा के लिए, हम दो वितरण मार्गों के माध्यम से मच्छर के लार्वा और वयस्कों के लिए छोटे अणु chemistries की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला का वर्णन-संपर्क और घूस । ऐसी डब्ल्यूएचओ संवेदनशीलता परीक्षण और सीडीसी बोतल परख के रूप में प्रोटोकॉल विषाक्तता और मौजूदा कीटनाशक योगों1,2के repellency मूल्यांकन के लिए आम उपयोग में हैं । हालांकि, इन परख unformulat उपंयास रासायनिक संस्थाओं (NCEs) के विश्लेषण के लिए सीमाएं है और मध्यम या उच्च प्रवाह में chemistries की बड़ी संख्या के परीक्षण के लिए उत्तरदाई नहीं हैं ।
यहां हम एक मानक लार्वा परख का वर्णन तेजी से एक बिंदु खुराक में NCEs मूल्यांकन कि उच्च प्रवाह विश्लेषण के लिए पैमाने पर कर सकते हैं । हम भी वयस्क मच्छरों के लिए छोटे अणु chemistries के संपर्क विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए एक लाइट21 द्वारा विकसित परख के एक अनुकूलन का वर्णन । अंत में, हम एक घूस परख का वर्णन करने के लिए वयस्क मादा मच्छरों को रक्त भोजन के माध्यम से दिया NCEs की विषाक्तता का मूल्यांकन और endectocide क्षमता का पता लगाने । इन लार्वा और वयस्क परख मात्रा की एक सीमा पर प्रदर्शन किया जा सकता है ताकि नियंत्रण रेखा और LD मूल्यों, क्रमशः निर्धारित करने के लिए, और दोनों लार्वा और वयस्क संपर्क परख एक या एक से अधिक मौजूदा रासायनिक योगों की तुलना में किया जा सकता है । वयस्क सामयिक परख भी व्यक्ति मच्छर प्रति LD मूल्यों की गणना में सक्षम बनाता है । प्रोटोकॉल एडीज, Anopheles और Culex16,29 की प्रजातियों का उपयोग किया जा सकता है और एक प्रजाति के विशिष्ट जैविक विशेषताओं को समायोजित करने के लिए संशोधित किया जा सकता है, यदि वांछित । हमारे अनुभव में, mosquitocidal chemistries आम तौर पर इन तीन पीढ़ी16,29भर में व्यापक गतिविधि का प्रदर्शन, लेकिन वहां selectivity प्रजातियों के आकलन के लिए मूल्य है ।
परख तेजी से कीटनाशक गतिविधि के लिए कई chemistries स्क्रीन करने के लिए एक प्रारंभिक बिंदु हैं । उन chemistries है कि एक या एक से अधिक परख में प्रदर्शन विषाक्तता माध्यमिक और तृतीयक परख के माध्यम से आगे विश्लेषण के लिए चुना जा सकता है । उदाहरण लाइट तरसल परख और चीनी खिला परख३४,३५शामिल हैं । अतिरिक्त परख के चयन आमतौर पर प्रत्याशित बाजार और आवेदन के आसपास विचार द्वारा निर्धारित किया जाता है, परिणाम संभव उत्पाद वितरण मोड के लिए अंतर्दृष्टि प्रदान करने के साथ । प्रतिनिधि परिणाम में यहां दिखाया गया है, हम ऐमिट्रिप्टिलाइन, स्तनधारी और invertebrate डोपामाइन रिसेप्टर्स कि एक उपंयास मुआ कीटनाशक10,12के रूप में क्षमता के लिए मूल्यांकन किया गया है के एक विरोधी की विषाक्तता का पता लगाने, 13 , 16. ऐमिट्रिप्टिलाइन μg रेंज में लार्वा और एई. aegytpi के वयस्कों के लिए विषाक्तता का प्रदर्शन larvicidal और adulticidal गतिविधि का सुझाव है, और एक ऐमिट्रिप्टिलाइन आधारित रासायनिक श्रृंखला की खोज के लिए तर्क प्रदान करने की पहचान उच्च शक्ति के साथ एनालॉग । मृत्यु दर या fecundity पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव एई में मनाया गया । aegypti से रक्त भोजन में ऐमिट्रिप्टिलाइन से अवगत कराया । जबकि defibrinated रक्त और प्रभावी खुराक प्रति मच्छर प्राप्त में रसायन विज्ञान की स्थिरता ज्ञात नहीं है, परख की उल्लेखनीय सीमाओं, डेटा का सुझाव है कि ऐमिट्रिप्टिलाइन और अंय GPCR-सक्रिय यौगिकों endectocides के रूप में कम क्षमता हो सकता है, पर सबसे कम में unformulat राज्य ।
सावधानियों परख के बीच जैविक भिन्नता को सीमित करने के लिए आवश्यक हैं. सभी परख तापमान और आर्द्रता के मानक शर्तों के तहत किया जाना चाहिए, अधिमानतः एक कीट विकास कक्ष में, ताकि reproducibility सुनिश्चित करने के लिए । यह phenotypic अंत अंक स्कोरिंग के लिए प्रक्रियाओं का मानकीकरण अनिवार्य है के रूप में इन अत्यधिक व्यक्तिपरक, विभिंन प्रयोगशाला कर्मियों द्वारा दर्ज आंकड़ों में महत्वपूर्ण बदलाव के लिए अग्रणी हो सकता है । लार्वा परख सबसे अच्छा chemistries है कि पानी में घुलनशील है के मूल्यांकन के लिए अनुकूल है, हालांकि परख ऐसे DMSO के रूप में कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग किया जा सकता है बशर्ते कि अंतिम एकाग्रता से कम 1% प्रति अच्छी तरह से है । हम वयस्क सामयिक परख करने के लिए कई सीमाओं को पहचाना । सबसे पहले, यह तेजी से काम करने के लिए जब सीरियल कमजोर पड़ने की तैयारी और वाहक (एसीटोन) के रूप में खुराक देने के लिए आवश्यक है अत्यधिक अस्थिर और वाष्पीकरण दिया रसायन विज्ञान की राशि में भिन्नता का उत्पादन हो सकता है. दूसरा, देखभाल के लिए संज्ञाहरण की अवधि सीमा के रूप में इस मृत्यु दर में योगदान कर सकते है लिया जाना चाहिए । यह भी ध्यान दिया जाना चाहिए कि ऐसे एसीटोन के रूप में सॉल्वैंट्स सामयिक परख, जो परीक्षण रसायन विज्ञान के कारण प्रभाव के साथ भ्रमित नहीं किया जाना चाहिए के पहले कई घंटे में एक तेजी से "दस्तक नीचे प्रभाव" उत्पादन कर सकते हैं । हम ध्यान दें कि मच्छर रक्त भोजन की मात्रा व्यक्तियों के बीच बदलता है, खुराक वयस्क घूस परख में वयस्क प्रति प्राप्त की एक आकलन उलझी । अंत में, परख डेटा मामलों में विचार नहीं किया जाना चाहिए, जहां नकारात्मक नियंत्रण में मृत्यु दर 10% से अधिक है ।
उत्पाद है कि अधिनियम synergistically तेजी से अपनी क्षमता के लिए मांयता प्राप्त कर रहे है मौजूदा उत्पादों की उपयोगिता का विस्तार और कीटनाशक प्रतिरोधी कीट के नियंत्रण आबादी15,16,३६। लार्वा परख formamidine कीटनाशक, amitraz और chemistries की एक किस्म है कि व्यवधान invertebrate octopamine रिसेप्टर्स14,15के बीच तालमेल की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । लार्वा परख और वयस्क सामयिक परख वर्णित परीक्षण chemistries के संयोजन के बीच synergistic या additive प्रभाव के मूल्यांकन के लिए उपयुक्त हैं । हम ध्यान दें कि इस तरह के piperonyl butoxide (PBO) के रूप में तालमेल तीन यहां वर्णित परख में से प्रत्येक में शामिल किया जा सकता है ।
उपर्युक्त परख जलीय और स्थलीय मच्छर जीवन चरणों के खिलाफ unformulat, छोटे अणु दवाओं के मूल्यांकन के लिए एक मानकीकृत प्रायोगिक श्रृंखला प्रदान करते हैं । इन परख विशेष रूप से विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन कर रहे है और आम उपयोग में मौजूदा परख पर कई लाभ प्रदान करते हैं । महत्वपूर्ण बात, परख स्वचालन के लिए उत्तरदाई है और औद्योगिक पैमाने पर प्रदर्शन के लिए परीक्षण यौगिकों के हजारों के मूल्यांकन को सक्षम कर सकते हैं । अंत में, के रूप में क्षेत्र के उत्पादों के विकास पर विचार करता है कि नए MoAs के माध्यम से अधिनियम, उपंयास आणविक लक्ष्यों और जैव रासायनिक रास्ते के विघटन के माध्यम सहित, यह इस तरह की मृत्यु के रूप में उन लोगों के अलावा कई phenotypic अंतिमबिंदु स्कोर करने के लिए आवश्यक हो जाएगा और पक्षाघात. इसके बाद के संस्करण परख ऐसी जांच की अनुमति है, इस प्रकार कल अत्यधिक अभिनव कीटनाशक प्रौद्योगिकियों की दिशा में एक कदम प्रदान ।

मच्छरों संक्रामक रोगों कि प्रभाव मानव स्वास्थ्य विश्व स्तर पर1के प्रेरणा का एजेंट संचारित । मानव स्वास्थ्य को प्रभावित करने वाले तीन सबसे महत्वपूर्ण मच्छर पीढ़ी एडीज, Anopheles, और Culexहैं । एडीज मच्छरों की प्रजातियों वेक्टर arboviruses जो Zika, डेंगू, पीत ज्वर और chikungunya का कारण है । Anopheles प्रजातियों वेक्टर मलेरिया परजीवी और Culex प्रजातियों पश्चिम नील नदी वायरस और filarial सूत्रकृमि2संचारित । विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) २०२०3 द्वारा दस उपेक्षित उष्णकटिबंधीय रोगों (NTD) के उंमूलन के लिए बुलाया गया है और सबसे व्यवहार्य रणनीति के रूप में मच्छर नियंत्रण की पहचान की । कीटनाशकों मच्छरों को नियंत्रित करने और रोग संचरण को कम करने के लिए शक्तिशाली उपकरण हैं4,5. हालांकि, कीटनाशक प्रतिरोधी मच्छर आबादी के उद्भव के कई रोगों के निरंतर नियंत्रण की धमकी6,7,8। अभिनव वेक्टर नियंत्रण कंसोर्टियम (IVCC) ने मच्छर नियंत्रण9के लिए प्रतिस्थापन कीटनाशक विकसित करने का पहला समर्पित प्रयास शुरू किया है । क्रिया के उपंयास मोड (मुआ) के साथ नए कीटनाशकों को पूरा करने के लिए जो लक्ष्य और रोग नियंत्रण प्राप्त करने की जरूरत है । खोज और उपंयास MoAs के साथ नए कीटनाशक वर्गों के विकास तेजी से, उच्च chemistries के प्रवाह विश्लेषण और उद्योग के मानकों की तुलना में10के लिए पूरे जीव परख की आवश्यकता होती है ।
कई परख लार्वा और वयस्क मच्छरों के लिए कीटनाशकों की repellency और विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए उपलब्ध हैं, और कुछ उपन्यास के मूल्यांकन के लिए उपयुक्त है या तैयार की chemistries । डब्ल्यूएचओ प्रोटोकॉल11 एक संपर्क परख चौथे instar लार्वा के खिलाफ उत्पादों के परीक्षण के लिए प्रयोग किया जाता है । प्रकाशित अध्ययन भी लार्वा की एक किस्म का वर्णन करने के लिए छोटे अणु chemistries की विषाक्तता का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया एडीज aegypti के लार्वा , Anopheles gambiae और Culex quinquefasciatus10,12, 13,14,15,16. रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए केंद्र (सीडीसी) बोतल परख क्षेत्र में कीटनाशक प्रतिरोध का आकलन करने के लिए घातक एकाग्रता (नियंत्रण रेखा) और घातक समय (लेफ्टिनेंट) एक मानक नैदानिक की तुलना में मूल्यांकन के माध्यम से वयस्क मच्छरों की आबादी पकड़ लिया जाता है एक वाणिज्यिक कीटनाशक की खुराक17. डब्ल्यूएचओ संवेदनशीलता परीक्षण एक और दृष्टिकोण के लिए वयस्क मच्छरों में कीटनाशक प्रतिरोध का मूल्यांकन जिससे मच्छरों कीटनाशक के संपर्क में आ रहे है प्रदान करता है-गर्भवती कागज कांच शीशियों के अंदर 1 घंटे और मृत्यु के लिए 24 ज18में मूल्यांकन किया है । अंय परख सील पिंजरों और रिकॉर्ड मच्छर पछाड़ना और वांछित timepoints19में मौत के अंदर स्प्रे योगों । मच्छर छाती को सामयिक आवेदन के लिए विभिंन कीटनाशकों की शक्ति का मूल्यांकन किया गया है20। लिवरपूल कीट परीक्षण स्थापना (लाइट)21 मानक संचालन प्रक्रियाओंको रोजगार के लिए वयस्क मच्छरों के लिए chemistries की गतिविधियों का मूल्यांकन । लाइट वयस्क सामयिक परख ४८ एच में बनाए गए मृत्यु दर के साथ वयस्क मच्छरों के छाती के लिए परीक्षण उत्पाद की एक छोटी मात्रा पर लागू होता है । परख ठहराव प्रति व्यक्ति मच्छर21प्राप्त की खुराक के सक्षम बनाता है । लाइट तरसल परख एक रासायनिक उपचार सतह पर आराम वयस्क मच्छरों के लिए परीक्षण उत्पाद की विषाक्तता का मूल्यांकन करता है और इनडोर अवशिष्ट स्प्रे (आईआरएस) या कीटनाशक में उपयोग के रूप में विकास के लिए क्षमता के साथ chemistries की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया बिस्तर-जाल (ITNs) Anopheles मच्छरों को नियंत्रित करने के लिए ।
डब्ल्यूएचओ और सीडीसी परख उपंयास, unformulat chemistries परीक्षण के लिए सीमाएं हैं, और सीडीसी बोतल परख का लक्ष्य कम परख अवधि (दो घंटे) के बजाय विषाक्तता22,23से अधिक संवेदनशीलता का मूल्यांकन है । इसके अतिरिक्त, रक्त भोजन और प्रणालीगत-अभिनय उत्पादों (यानी, endectocides) के विकास के लिए क्षमता में दिया chemistries की विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए परख की कमी है । यहां, हम उपंयास chemistries के mosquitocidal गतिविधि है कि पानी में घुलनशील है या लार्वा और एडीज, Anopheles और Culexके वयस्कों के खिलाफ कई कार्बनिक सॉल्वैंट्स में से एक के परीक्षण के लिए परख का वर्णन । सबसे पहले, हम एक लार्वा पहले हमारे समूह द्वारा वर्णित परख प्रदर्शन10,12,13,16, और यहां के रूप में (1) एक स्क्रीन तेजी से एक बिंदु खुराक में कई chemistries का मूल्यांकन करने के लिए प्रदर्शन किया, और (2) एक खुराक प्रतिक्रिया परख एक एकल रसायन विज्ञान के घातक एकाग्रता (जैसे, नियंत्रण रेखा५०, नियंत्रण रेखा७५ या नियंत्रण रेखा९०,) निर्धारित करने के लिए । अगले, हम घातक खुराक के निर्धारण के लिए दो वयस्क परख का वर्णन (LD) । इनमें से पहले एक सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में वयस्क मच्छरों के खिलाफ सामयिक लागू, उपंयास chemistries के परीक्षण के लिए लाइट प्रोटोकॉल का एक अनुकूलन है । दूसरा रक्त भोजन के माध्यम से प्रणालीबद्ध दिया chemistries के मूल्यांकन के लिए एक खिला परख है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1215">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Insecticide susceptible mosquito strains&#160;</td>
			<td colspan="2" style="width:313px;">Malaria Research and Reagent Reference Repository&#160;</td>
			<td style="width:525px;">https://www.beiresources.org/MR4Home.aspx; Recommended strains: Aedes aegypti Liverpool (LVP) strain, Anopheles gambiae Kisumu (KISUMU1) strain and Culex quinquefasciatus Johannesburg (JHB) strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetone</td>
			<td>Mallinckrodt Chemical</td>
			<td>CAS 67-64-1</td>
			<td>Use for dilutions and control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amitraz</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS 33089-61-1</td>
			<td>Requires dilution in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amitriptyline</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 549-18-8</td>
			<td>Can be diluted in acetone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bifenthrin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 51529-01-2</td>
			<td>Synthetic pyrethorid used as positive control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cis-(Z)-flupenthixol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 51529-01-2</td>
			<td>Pharmacologically tested as disruptor of dop-like receptors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Defibrinated rabbit blood</td>
			<td>Hemostat</td>
			<td>DRB0100</td>
			<td>Blood source for adapted mosquitoes to artificial feeding</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dimethylsulphoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>MKBF2985</td>
			<td>Organic solvent used to disolve amitraz</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Hemotek membrane feeding system&#160;</td>
			<td>Hemotek Ltd</td>
			<td>Serial no. 1303</td>
			<td>Used for feeding mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Micro-applicator</td>
			<td>Burkard Manufacturing Co.&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>Tool needed for topical application experiments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well cell culture plate with lid</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3526</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Advantage rubber bands</td>
			<td>Alliance Rubber Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to seal the paper cups</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass syringe (1 ml)</td>
			<td>Becton Dickinson and Co.</td>
			<td>512004</td>
			<td>Needed for the micro-applications. Glass is better than plastic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scintillation vials (20 ml)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>74505-20</td>
			<td>Glass vials prevent evaporation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tulle fabric, white</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paper cups</td>
			<td>Dixie Consumer Products LLC.</td>
			<td>PF15675/13D</td>
			<td>Used to keep adult mosquitoes in adult topical assays</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes (150 mm)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to maintain the mosquitoes &#34;slept&#34; on cold without direct contact with ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td>Used to sort larvae</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereo microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ6045</td>
			<td>Used to score larval assays and perform micro-applications</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezers (fine)</td>
			<td>Fontax&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to handle adult mosquitoes</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for testing the toxicity of novel insecticidal chemistries to mosquitoes

कार्रवाई के उपंयास मोड के साथ कीटनाशकों की नई कक्षाएं Zika, डेंगू और मलेरिया जैसे रोगों संचारित कि मच्छरों की कीटनाशक प्रतिरोधी आबादी को नियंत्रित करने के लिए आवश्यक हैं । तेजी के लिए परख, मच्छर लार्वा और वयस्कों के खिलाफ unformulat उपंयास chemistries के उच्च प्रवाह विश्लेषण प्रस्तुत कर रहे हैं । हम एकल बिंदु के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन-खुराक और प्रतिक्रिया परख के लिए छोटे अणु chemistries की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए Zika के एडीज aegypti वेक्टर, डेंगू और पीत ज्वर, मलेरिया वेक्टर, Anopheles gambiae और उत्तरी घर मच्छर, Culex quinquefasciatus, संपर्क पर और घूस के जरिए । एक उदाहरण के रूप में, हम ऐमिट्रिप्टिलाइन, जी प्रोटीन के एक छोटे अणु विरोधी रिसेप्टर्स युग्मित, लार्वा, वयस्क सामयिक और वयस्क रक्त के माध्यम से खिला परख के विषाक्तता का मूल्यांकन किया । प्रोटोकॉल कीटनाशक क्षमता की जांच करने के लिए एक प्रारंभिक बिंदु प्रदान करते हैं । परिणाम वितरण के लिए उत्पाद अनुप्रयोगों और तंत्र का पता लगाने के लिए अतिरिक्त प्रयोगों के संदर्भ में चर्चा कर रहे हैं ।

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Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

प्रोटोकॉल डिमंकनाशी, adulticides और endectocides की नई कक्षाओं के रूप में विकास के लिए अपरिपक्व और वयस्क मच्छरों के लिए chemistries की विषाक्तता का आकलन करने के लिए वर्णित हैं । प्रोटोकॉल एकल बिंदु खुराक और बाद में मूल्यांकन पर एकाधिक chemistries के उच्च प्रवाह परीक्षण सक्षम करें खुराक प्रतिक्रिया परख के माध्यम से संपर्क पर विषाक्तता निर्धारित करने के लिए या घूस के माध्यम.

उपंयास कीटनाशक Chemistries मच्छरों के विषाक्तता के परीक्षण के लिए प्रोटोकॉल

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

यह विधि कीटनाशक खोज और वेक्टर नियंत्रण क्षेत्रों में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। जैसे, मच्छर लार्वा या वयस्कों की आबादी के लिए एक असुधारित रसायन कितना विषाक्त है? क्या रसायन विज्ञान में लार्वानाशक या व्यभिचार के रूप में विकास की संभावना है?और, सबसे प्रभावी वितरण मार्ग क्या हो सकता है? इस तकनीक के मुख्य फायदे यह हैं कि इसका उपयोग असंफॉर्मेटेड रसायनों की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है वेक्टर मच्छरों की कई प्रजातियों के खिलाफ रसायन शास्त्र की विषाक्तता, और इसे उच्च थ्रूपुट क्षमता में सैकड़ों यौगिकों को अवमूल्यन करने के लिए बढ़ाया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन जसलीन कौर, मेरी प्रयोगशाला से एक वैज्ञानिक तकनीशियन होगा ।शुरू करने के लिए, एक 24 अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति प्लेट के कुओं लेबल । टेस्ट कंपाउंड को तौलने के लिए एनालिटिकल बैलेंस का इस्तेमाल करें। फिर, 1.5 मीटर ट्यूब में बाँझ डबल आसुत पानी में यौगिक को उजाड़ दें, जिसके परिणामस्वरूप 80 मीटर स्टॉक समाधान होता है।इसके बाद, वांछित सांद्रता के काम करने वाले स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए डबल आसुत पानी का उपयोग करके स्टॉक समाधान को क्रमिक रूप से पतला करें। ध्यान दें कि देखभाल की जानी चाहिए लार्वा को अतिरिक्त पानी को हटाने के दौरान कुओं में जोड़ा जाता है, और जब लार्वा को शारीरिक क्षति से बचने के लिए परीक्षण रसायन शास्त्र जोड़ा जाता है। चोट मृत्यु दर में वृद्धि हो सकती है, और इस प्रकार झूठे सकारात्मक परिणाम पैदा या परख अमान्य ।प्लेट के प्रत्येक कुएं में पांच तिहाई इंस्टार लार्वा स्थानांतरित करने के लिए एक विस्तृत बोर प्लास्टिक ट्रांसफर पिपेट का उपयोग करें। फिर, पानी को धीरे-धीरे हटाने के लिए एक एमएल पिपेट का उपयोग करें, और इसे डबल आसुत पानी की वांछित मात्रा से बदलें। ध्यान रखें कि पानी को हटाते समय लार्वा को जल्दी से न छूना ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि लार्वा कम न हो, और धीरे-धीरे प्लास्टिक के विपरीत पक्ष के खिलाफ पाइपिंग करके परीक्षण रसायन को जोड़ें।प्रत्येक अच्छी तरह से परीक्षण समाधान की एक उपयुक्त मात्रा जोड़ें, और एक समान मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए धीरे से प्लेट घुमाएं। 75 से 85 प्रतिशत सापेक्ष आर्द्रता के साथ 25 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटे प्रकाश/अंधेरे चक्र को बनाए रखने के विकास कक्ष में प्लेट रखें। लार्वा आंदोलन की जांच करने के लिए, धीरे-धीरे प्लेट पर टैप करें।यदि कोई आंदोलन नहीं देखा जाता है, तो धीरे-धीरे लार्वा को बाँझ टूथपिक से स्पर्श करें। यदि कोई प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है तो लार्वा को मृत के रूप में स्कोर करें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में वर्णित समय बिंदुओं पर, प्रत्येक कुएं में मृत लार्वा की कुल संख्या को रिकॉर्ड करने के लिए एक स्कोर शीट का उपयोग करें। संस्कृति एक 20 लीटर प्लास्टिक पिंजरे में तीन से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों ।परीक्षण यौगिक के नाम और एकाग्रता के साथ नौ औंस पेपर कप लेबल करें। इसके बाद, 20mL ग्लास शीशी में एसीटोन में परीक्षण यौगिक का 10mg/एमएल स्टॉक समाधान तैयार करें। फिर, वांछित काम सांद्रता प्राप्त करने के लिए स्टॉक समाधान को क्रमिक रूप से पतला करें।एसीटोन के साथ एक एमएल ग्लास सिरिंज को साफ करें। फिर इसे उचित एकाग्रता पर परीक्षण समाधान के साथ भरें। 0.25uL की मात्रा देने के लिए समायोजित माइक्रो-एप्लीकेटर में सिरिंज को सुरक्षित करें।इसके बाद, पिंजरे से 10, तीन से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों को हटाने के लिए एक एस्पिरेटर का उपयोग करें। उन्हें चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए एनेस्थेटाइज करें। फिर मच्छरों को पेट्री डिश में स्थानांतरित करें।डिश को 10 मिनट के लिए बर्फ पर रखें। वयस्क मच्छर को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए, जो मृत्यु दर में योगदान दे सकता है, यह सुनिश्चित करें कि वे पांच मिनट से अधिक समय तक फ्रिज में एनेस्थेटाइज्ड न हों, या 10 से अधिक के लिए बर्फ पर स्थिर न हों, और मच्छरों की हैंडलिंग को कम करें। यदि आपके पास ठंडी प्लेट और चल चरण के साथ एक माइक्रोमैनीपुलेटर तक पहुंच है, जो मच्छरों की हैंडलिंग को और कम कर सकता है।डिश से प्रत्येक मच्छर को हटाने के लिए ठीक चिमटी का प्रयोग करें। सिरिंज माइक्रो-एप्लीकेटर के साथ एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप नेक्स्ट के तहत, पृष्ठीय छाती के लिए परीक्षण समाधान के 0.25uL लागू होते हैं, मच्छरों को बर्फ पर एक लेबल पेपर कप में स्थानांतरित करें। कप को 10 बाय 10 सेमी जाल स्क्वायर और एक रबर बैंड के साथ सील करें, इसे विकास कक्ष में स्थानांतरित करें, और पहले वर्णित मृत मच्छरों की संख्या रिकॉर्ड करें।एक एस्पिरेटर के साथ लगभग 150 चार से पांच दिन पुराने वयस्क मादा मच्छरों को इकट्ठा करें, और उन्हें एक अलग पिंजरे में स्थानांतरित करें। भोजन परख से एक से 24 घंटे पहले चीनी के स्रोत को हटा दें। पानी में परीक्षण यौगिक का 80mM स्टॉक समाधान तैयार करें।फिर, वांछित सांद्रता के काम स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए, पानी के साथ इसे क्रमिक रूप से पतला करें। वांछित परीक्षण सांद्रता प्राप्त करने के लिए, प्रत्येक कमजोर पड़ने के 40uL को 1.5 मीटर ट्यूब में डिफिब्रिनेट खरगोश रक्त के 960uL में जोड़ें, और पाइपिंग द्वारा मिलाएं। एक फीडिंग यूनिट पर एक सदस्य फिल्टर रखें और इसे रबर की अंगूठी से सील करें।इसके बाद, फीडिंग यूनिट के रिवर्स साइड पर स्थित डिलीवरी पोर्ट के माध्यम से परीक्षण समाधान के साथ रक्त के एक एमएल को स्थानांतरित करने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें। एक हीटिंग यूनिट के लिए खिला इकाई संलग्न करें। फिर, ताजा तैयार 10 प्रतिशत लैक्टिक एसिड समाधान के साथ झिल्ली की सतह धीरे झाड़ू।पिंजरे में फीडिंग यूनिट रखें। पिंजरे को एक काले कपड़े से ढक दें, और मच्छरों को एक घंटे तक खिलाने की अनुमति दें। मच्छरों को खिलाने के बाद पिंजरे को मच्छरों को एनेस्थेटाइज करने के लिए पांच मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर फ्रिज में रखें।फिर, पिंजरे में मच्छरों की कुल संख्या को गिनें और रिकॉर्ड करें। पेट की जांच करके, पूरी तरह से और आंशिक रूप से खिलाया मादा मच्छरों की कुल संख्या को गिनें और रिकॉर्ड करें। प्रति खुराक कम से कम 50 रक्त खिलाया मच्छरों प्राप्त किया जाना चाहिए।किसी भी मच्छर को हटा दें जिन्होंने खिलाया नहीं है। इसके बाद, पिंजरे को एक विकास कक्ष में स्थानांतरित करें, और उचित समय बिंदुओं पर मृत मच्छरों की संख्या रिकॉर्ड करने के लिए एक स्कोर शीट का उपयोग करें। दिन तीन पोस्ट ब्लड फीडिंग पर 72 घंटे तक पिंजरे में एक एगकप रखें।उपचार के अनुसार उत्पादित अंडों की कुल संख्या की गणना करने के लिए एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। समय के साथ लार्वा मृत्यु दर पर एक डोपामाइन रिसेप्टर विरोधी, अमित्रिप्टीलिन के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक लार्वा संपर्क परख का प्रदर्शन किया गया था। आंकड़ों से पता चला है कि प्रयोग के समय पाठ्यक्रम के साथ एलसी ५० मूल्य कम हो जाता है ।वयस्क मादा मच्छरों की मृत्यु दर पर अमितिप्टीलिन के प्रभाव की तुलना बिफेन्थ्रिन और दो नकारात्मक नियंत्रणों से की गई थी। एसीटोन उपचारित और अनुपचारित नकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में, अमित्रिप्टीलाइन और बिफेन्थ्रिन दोनों ने प्रत्येक प्रयोगात्मक समय बिंदु पर महत्वपूर्ण मृत्यु दर को प्रेरित किया। वयस्क मादा मच्छरों की मल और प्रतिशत मृत्यु दर पर एमिरिप्टिलीन की तीन अलग-अलग खुराकों के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक मात्रात्मक भोजन परख की गई थी।आंकड़ों से पता चला है कि केवल रक्त-फेड नियंत्रणों की तुलना में उच्चतम खुराक पर एमिरिप्टिलिन फेड मच्छरों की fecundity में कोई सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर नहीं है । एक बार महारत हासिल है, परख हम यहां वर्णित है की किसी भी, लगभग दो घंटे में एक ही व्यक्ति द्वारा पूरा किया जा सकता है, अगर ठीक से प्रदर्शन किया । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, जीव को धीरे-धीरे संभालना याद रखना महत्वपूर्ण है, और सामयिक अनुप्रयोगों के दौरान और स्कोरिंग लार्वा या वयस्क परख के दौरान स्थिरता होनी चाहिए।इस प्रक्रिया के बाद, जैव-परख जैसे अन्य तरीके अवशोषण के माध्यम से विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए, मच्छर टार्सी के माध्यम से, सीडीसी बोतल परख, और डब्ल्यूएचओ ट्यूब परख को असुधारित रसायन विज्ञान, या एक तैयार उत्पाद की प्रभावकारिता के बारे में अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है, और संपर्क कीटनाशक या अंतरिक्ष स्प्रे के रूप में विकास की क्षमता।

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

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Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

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एक उपन्यास आरएफपी रिपोर्टर आँखों Imaginal डिस्क के विज़ुअलाइज़ेशन में सहायता ड्रोसोफिला</em

The Drosophila eye is a powerful model system for studying areas such as neurogenesis, signal transduction and neurodegeneration. Many of the discoveries ...

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Lignocellulosic सामग्री के लिए उच्च throughput Saccharification परख

Polysaccharides that make up plant lignocellulosic biomass can be broken down to produce a range of sugars that subsequently can be 
used in establishing ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

मलेरिया मच्छरों के विकास, उपजाऊपन और उत्तरजीविता पर एक epigenetic ड्रग के परीक्षण प्रभावों के लिए विषाक्तता Assays

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Metazoan मॉडल जीव का प्रयोग फैल और विषाक्तता prion-तरह प्रोटीन की जांच कर<em&gt; सी। एलिगेंस</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

प्रयोगशाला में विषाक्तता परीक्षण के लिए एक Invertebrate मॉडल प्रणाली के रूप में Drosophila का उपयोग करने के लिए प्रायोगिक प्रोटोकॉल

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

एक विधि के रूप में मजबूर लार मच्छरों की वेक्टर क्षमता का विश्लेषण करने के लिए

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...

An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing

विषाक्तता परीक्षण के लिए हवाई कणों के लिए यथार्थवादी, दोहराया साँस लेना एक्सपोजर के लिए एक एयर-लिक्विड इंटरफेस ब्रोंकियल एपिथेलियल मॉडल

For toxicity testing of airborne particles, air-liquid interface (ALI) exposure systems have been developed for in vitro tests in order to mimic realistic ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 का उपयोग करके नल उत्परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए क्यूलेक्स मच्छरों के भ्रूण तैयार करना और इंजेक्शन लगाना

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...