Name: protocols for testing the toxicity of novel insecticidal chemistries to mosquitoes
Uploaded: 2019-02-13T12:30:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes at JoVE.com

M. Scharf, Purdue Üniversitesi tahlil ile ilgili tavsiyeler için dizayn ve yazarlar H. Ranson, Liverpool tropikal Tıp Fakültesi tahlil geliştirme ve LITE Protokolü sağlanması ile ilgili yardım için teşekkür ederiz.

Not: Tüm suşları ve çalışma izni için gerekli kimyasalları aşağıdaki protokolleri açıklanan ve tedarikçiler Malzemeler tabloyer almaktadır.
1. kültür sivrisinek larva ve yetişkin
Not: Sivrisinekler böcek ilacı duyarlı suşları sıtma araştırma ve reaktif başvuru deposu mevcuttur. Suşları gibidir tavsiye: Aedes aegypti Liverpool (LVP) zorlanma, anofel gambiae Kisumu (KISUMU1) zorlanma ve Culex quinquefasciatus Johannesburg (JHB) süzün.
<ol><li>Kültür sivrisinek larvası bir 12 h gün/12 s gecesi yumurtadan döngüsü 28 ° C ve % 75-85 bağıl nem (RH) 25 cm x 40 cm plastik kasetlerine, (~ tepsi başına 400 larva) Nuss29tarafından açıklandığı gibi. Besleme larva zemin fare (A. aegypti ve An. gambiae) veya pul balık yemi (C. quinquefasciatus). Larva deneyleri için üçüncü larva (L3) biçim aşamada larva toplamak.</li>
	<li>Yetişkin devredilmiştir pupa plastik bardak ve yukarıda açıklanan koşullar altında bir insectary 20 L plastik kafeslerde yerde sivrisinek arka. Sivrisinekler üzerinde başka bir yerde29açıklandığı gibi % 20 şeker çözeltisi korumak. 3-5 gün sonrası ortaya çıkması, Yetişkin toplamak.</li>
</ol>2. larva kişi tahlil (tek nokta doz veya doz yanıt tahlil)
Not: test Wells DMSO son konsantrasyonu % 1 aşmadığı koşuluyla tahlil su veya dimetil sülfoksit (DMSO), çözünür kimyaları ile yapılabilir. Alternatif çözücüler bir seçenek olabilir ama öncelikle son konsantrasyon neden olmaz onaylamak için temel 72 h mesaj pozda mortalite % 10 daha fazla. Tahlil bir tek doz veya doz yanıt tahlil olarak gerçekleştirilebilir. İkinci sahne, konsantrasyonları (en az beş), bir dizi test için önerilir beklenen LC50kapsayan.
<ol><li>Bir açık 24-şey doku tabak kuyu Şekil 1' de gösterildiği gibi etiketleyin.</li>
	<li>1.5 mL tüp testi kimyada stok çözeltisi hazırlamak.<ol>
<li>Bir analitik denge kullanarak her kimya tartmak ve çözünürlük özelliklere bağlı olarak steril GKD2O, DMSO veya diğer uygun organik çözücü seçim yeniden askıya alma (bkz. Şekil 2). Not: Hesaplamalar Kimya saflığı dikkate almak zorundayım. Örneğin, %99 saf bir Kimya için 1000 µL % 1 çözüm elde etmek için aseton 10,1 mg geçiyoruz. Tutkal ile parafin film ve -20 ° C'de depolayın</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bu değerlendirmeye alınacak ve hisse senedi çözümden seri dilutions buna göre uygun çözücüyü kullanarak hazırlamak testi Kimya son konsantrasyonu belirlemek. Not: Konsantrasyon ve hacmi kimya ve solvent formülü C1kullanılarak hesaplanabilir * V1C2= * V2 nerede C1konsantrasyon örnek 1, C2= = örnek 2, V1konsantrasyon hacmi = Örnek 1 ve V2örnek 2 hacmi =. Bkz: Şekil 2 ve Tablo 1' de gösterilen örnek hesaplamalar.<ol>
<li>Bir 10 mM hisse senedi çözüm ve seri dilutions istenen test konsantrasyonları (tablo 1B) elde etmek için gerektiği şekilde hazırlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wide-geçişli plastik transfer pipet kullanarak, beş L3 larva bir doku kültürü testi plaka iyi transfer; L3 larva uzunluğu tarafından tanınan (~ 2,5-3,5 mm) ve baş kapsül genişliğini ~ 0.025 mm24. Yavaşça su 1 mL pipet ile kaldırın ve GKD2O istediğiniz birim (aşağıya bakınız) ile değiştirin. N elde etmek için tekrar tedavi (Yani, 20 larva tedavi toplam) başına 4 Teknik çoğaltır =.</li>
	<li>Her dört Çoğalt Wells 24-şey testi plaka içinde uygun birim testi Kimya ekleyin ve hafifçe Tekdüzen kimyası karıştırma sağlamak için plaka girdap. Sürekli koşullar altında test veya büyüme odası plaka koyun (Örneğin, 25 ° C ve ~ 75-%85 RH tavsiye edilir ve bir 12 saat ışık/12 h karanlık döngüsü mümkünse). Not: sonraki deneyleri aynı çevre koşullarında gerçekleştirilen deneyler arasında tekrarlanabilirlik için emin olun.</li>
	<li>Ölü/non-yanıt veren larva 30 dk, 1, her iyi kaydedin 1.5, 2, 3, 24, 48 ve 72 s sonrası maruz kalma (veya alternatif zaman puan) skor sayfası (Tablo 2). Yan plaka hafifçe dokunun. Hiçbir hareketi gözlenen, yavaşça steril bir kürdan ile larva dokunma. Skor larva dokunarak / "ölü gibi" dokunmatik yanıt vermez. Not: Diğer morfolojik ve davranışsal fenotipleri gözlenen ve kaydedilebilir.</li>
	<li>Aşağıdaki gibi isterseniz, değiştirilmiş Abbott'ın formülü kullanarak denetim mortalite için düzeltin: Ölüm oranı (%) = (X-Y) * 100/(100-Y), nerede X yüzde ölüm tedavi örnek ve Y = denetimdeki yüzde ölüm =.</li>
	<li>Sonuç olarak bir çubuk grafik veya grafik-pad prizma 6 veya benzer gibi yazılım kullanarak Logaritmik eğrisi grafik ve öldürücü konsantrasyon (LC) değerleri denetime göre hesaplar.</li>
	<li>N elde etmek için sivrisinek ayrı bir toplu iş kullanarak tahlil tekrar 3 veya daha fazla biyolojik çoğaltır =.</li>
</ol>3. yetişkin topikal tahlil (tek nokta doz veya doz yanıt tahlil)
Not: Yetişkin topikal tahlil aseton solvent kullanarak yapılır. Alternatif çözücüler bir seçenek olabilir ama öncelikle son konsantrasyon neden olmaz onaylamak için temel 48 saat sonrası pozda mortalite % 10 daha fazla. Bir tek doz veya doz yanıt tahlil gelin ve öldürücü doz (LD) belirlemek için kullanılan gibi tahlil gerçekleştirilebilir. İkinci sahne, konsantrasyonları (en az beş), bir dizi test için önerilir beklenen LD50kapsayan.
<ol><li>Yetişkin dişi sivrisinekler tahlil tamamlamak için gereken sayısını belirleyin. Not: Bir nokta doz tahlil tek bir kimya ile 90 sivrisinekler (30 olumlu denetim, salt aseton negatif kontrol için 30 ila 30 test Kimya için) en az gerektirir.</li>
	<li>3-5 gün çocuk yetişkin dişi sivrisinekler kültür ve bir ayrı 20 mL plastik kova bir aspiratör (Şekil 3) kullanarak hareket ettirin.</li>
	<li>9 oz kağıt bardak testi Kimya konsantrasyonu ve adı ile etiketleyin. 10 cm x 10 cm kafes kareler ve lastik bantlar her fincan için bir kenara koyun (bkz. Şekil 4).</li>
	<li>Varolan bir böcek ilacı olumlu denetim (Örneğin, sentetik pyrethroid, bifenthrin) seçin ve % 1'stok çözeltilerine (10 µg/µL) aseton hazırlamak. Not: Hesaplamalar Kimya saflığı dikkate almak zorundayım. Örneğin, %99 saf bir Kimya için 1000 µL % 1 çözüm elde etmek için aseton 10,1 mg geçiyoruz. Tutkal ile parafin film ve -20 ° C'de depolayın</li>
	<li>Yukarıdaki aynı yordamı kullanarak, test Kimya stok çözeltisi hazırlamak. Not: Birçok test kimyaları son derece değişken ve çözümleri tercihen bioassay gerçekleştirilen her saat taze yapılmalıdır.</li>
	<li>Olumlu denetiminin seri dilutions hazırlamak ve daha önce aseton ile durulanır 20 mL cam şişeleri kullanarak Şekil 5 ' te gösterildiği gibi hisse senedi çözümlerinden kimyaları sınayın.</li>
	<li>1 mL Cam şırınga aseton ile tasfiye, aseton ile doldurun ve mikro-aplikatör 0,25 µL hacmi teslim etmek için ayarlanmış güvenli.</li>
	<li>On gruplar halinde çalışma, 3 - 5 - gün eski yetişkin dişi sivrisinekler bir aspiratör kullanarak kafesleri üzerinden kaldır ve 4 ° C'de buzdolabı veya buz üzerinde beş dakikaya kadar için anestezi. Ardından, sivrisinek bir Petri kabına ve yer 10 dakikaya kadar buz aktarmak.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde çalışma, tek bir erkek ile iyi cımbız kaldırmak ve 0,25 µL test çözüm şırınga mikro-aplikatör kullanarak dorsal toraks uygulayın. Uygun birim testi kimya Kimya her sivrisinek sağlamak için diseksiyon mikroskop kullanarak gözlem tarafından teslim alır onaylayın.</li>
	<li>Ve buz üzerinde dinlenme etiketli kağıt bardak sivrisinek transfer n elde etmek için dokuz kez tekrarlayın 10 tedavi sivrisinekler =. Bir lastik bant ve transferinde bir plastik küvet veya büyüme Odası'na 28 ° C ve 75-%85 RH sürekli koşullar altında (bir 12 saat gün/12 s gündüz döngüsü tercih edilir) ile güvenli sivrisinekler Kupası bir kafes kare ile kapatın.</li>
	<li>İki kez n elde etmek için yukarıdaki denemeyi tekrarlamak tedavi ya da kontrol grubuna göre 3 Teknik çoğaltır (Yani, 30 sivrisinekler toplam) =.</li>
	<li>3.7-3.10 ilk test kimya ve olumlu denetim ile yineleyin. Not: yeterli sivrisinekler kullanılabiliyorsa için başka bir yararlı test Kimya veya solvent almazsınız 30 imzalat sivrisinek "boş" olduğu.</li>
	<li>30 dk, 60 dk, 2, 24 ve 48 s sonrası maruz kalma "ölü/non-yanıt veren" Sivrisinek kaydedin (veya alternatif zaman puan) kullanarak skor levha (Tablo 3). Eğer onlar hareketi, eksikliği göstermek "ölü/non-yanıt veren" bir tarafında veya arkasında ve uçmak için yetersizlik ile döşeme olarak tanımlanan sivrisinekler puan.</li>
	<li>İstenirse, değiştirilmiş Abbott'ın formülü aşağıdaki gibi kullanarak denetim mortalite için düzeltin: Ölüm oranı (%) = (X-Y) * 100/(100-Y), nerede X yüzde ölüm tedavi örnek ve Y = denetimdeki yüzde ölüm =.</li>
	<li>Sonuçları bir çubuk grafik veya üssel bir eğri görüntüler. Bir doz yanıt tahlil için LD50, LD75 veya denetime göre test Kimya LD90 değeri hesaplamak.</li>
	<li>En az iki kez n elde etmek için sivrisinek ayrı toplu işlemleri kullanma tahlil tekrar 3 veya daha fazla biyolojik çoğaltır =.</li>
</ol>4. yetişkin kan besleme tahlil (tek nokta doz veya doz yanıt tahlil)
<ol><li>Toplamak yaklaşık 150 4-5 günlük eski yetişkin dişi sivrisinekler ve ayrı bir kafes aktarmak. 6 kafesleri bir doz yanıt tahlil performans elde etmek için yineleyin. Şeker 1 / 24 h öncesinde beslenme tahlil için kaynağı kaldırın.</li>
	<li>Kimya stok çözeltisi (hisse senedi bir çözüme su veya salt arabellek 80 mM olan) Kimya saflığı için muhasebe yukarıda açıklandığı gibi ve daha sonra su/tampon gerektiği gibi seri dilutions hazırlayın.</li>
	<li>Her birinin dilutions 40 µL istediğiniz test konsantrasyonu elde etmek için defibrinated tavşan kanı 960 µL için ekleyin. Membran film bir beslenme geçerli ve kauçuk halka ile mühür. Pipet ile 1 mL kan aktarmak ve besleme birimi için Isıtma birim ekleyebilirsiniz.</li>
	<li>Yavaşça membran yüzey ile taze çubukla % 10 laktik asit çözüm ve yer besleme ünitesi yetişkin sivrisinekler kafesin içine yaptı. Bir karanlık bez veya siyah çöp torbası ile kafes kapsar ve bir saatliğine beslemek sivrisinek olanak sağlar.</li>
	<li>Test çözümleri ve negatif (yalnızca kan) kontrol kalanı için 4.2-4.4 adımları yineleyin.</li>
	<li>Tamamlanma beslenme kovaları sivrisinekler anestezi 5 min için bir buzdolabında 4 ° C'de yerleştirin. Erkek sivrisinekler ve dişi sivrisinekler, Sigara beslemeli kaldırmak ve saymak ve beslenen ve kısmen sivrisinekler tarafından karın muayene beslenen toplam sayısını kaydetmek.</li>
	<li>En az 50 kan beslemeli sivrisinek doz başına nişan kısmen ve tamamen beslenen dişi sivrisinekler korur.</li>
	<li>Kova bir plastik küvet veya büyüme odası 28 ° C ve 75-%85 RH sürekli koşullar altında (üzerinde bir 12 gün/12 s gündüz döngüsü tercih edilir s) aktarın.</li>
	<li>Ölü/non-yanıt veren sivrisinekler 0.5, 1, 1.5, 2, 24, 48 toplam sayısını kaydetmek ve skor kullanarak 72 h (veya istediğiniz gibi alternatif zaman puan) (Tablo 4) sayfası.</li>
	<li>Üçüncü gün sonrası kan besleme, kafesin içine bir yumurta kupa tanıtmak ve 72 h dönemde yumurta toplamak. Yumurta tedavi diseksiyon mikroskop altında başına üretilen toplam sayısını saymak.</li>
	<li>Yüzde mortalite ve verimlilik beslenen sivrisinekler her tedavi grubu ve denetimi için toplam sayısı bir fonksiyonu olarak hesaplayın. İstenirse değiştirilen Abbott'ın formülü kullanarak denetim mortalite için düzeltin.</li>
	<li>Toksisite ve verimlilik verileri görüntüleyin bir çubuk grafik arsa veya üssel bir eğri Eğer (bir doz yanıt tahlil gerçekleştirerek) yazılım kullanarak. Bir doz yanıt tahlil gerçekleştirme, LD50, LD75 veya LD90 değeri test Kimya denetime göre hesaplar.</li>
	<li>En az iki kez n elde etmek için sivrisinek ayrı toplu işlemleri kullanma tahlil tekrar 3 veya daha fazla biyolojik çoğaltır =.</li>
</ol>

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A global brief on vector-borne diseases. , (2014).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Vector-borne diseases. , (2016).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Report by the Secretariat. Neglected tropical diseases; Prevention, control, elimination and eradication. , (2013).</li><li>Tolle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+diseases.">Mosquito-borne diseases.</a> Curr Probl Pediatr Adolesc Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).</li><li>Chen, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vectors+surveillance+in+endemic+areas+in+kuala+lumpur+city+centre+and+selangor+state,+malaysia.">Dengue vectors surveillance in endemic areas in kuala lumpur city centre and selangor state, malaysia.</a> Dengue Bulletin. 30, (2006).</li><li>Marcombe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+status+of+united+states+populations+of+Aedes+albopictus+and+mechanisms+involved.">Insecticide resistance status of united states populations of Aedes albopictus and mechanisms involved.</a> PLoS ONE. 9 (7), e101992 (2014).</li><li>Ranson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrethroid+resistance+in+African+anopheline+mosquitoes:+what+are+the+implications+for+malaria+control?.">Pyrethroid resistance in African anopheline mosquitoes: what are the implications for malaria control?.</a> Trends in Parasitology. , 1-8 (2010).</li><li>Hemingway, J., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+in+insect+vectors+of+human+disease.">Insecticide resistance in insect vectors of human disease.</a> Annual Review of Entomology. 45, 371-391 (2000).</li><li>Hemingway, J., Beaty, B. J., Rowland, M., Scott, T. W., Sharp, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Innovative+Vector+Control+Consortium:+improved+control+of+mosquito-borne+diseases.">The Innovative Vector Control Consortium: improved control of mosquito-borne diseases.</a> Trends in Parasitology. 22 (7), 308-312 (2006).</li><li>Meyer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+&amp;#34;genome-to-lead&amp;#34;+approach+for+insecticide+discovery:+Pharmacological+characterization+and+screening+of+Aedes+aegypti+D+1-like+dopamine+receptors.">A &amp;#34;genome-to-lead&amp;#34; approach for insecticide discovery: Pharmacological characterization and screening of Aedes aegypti D 1-like dopamine receptors.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 6 (1), e1478 (2012).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Instructions for determining the susceptibility or resistance of mosquito larvae to insecticides. , (1981).</li><li>Hill, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-invigorating+the+insecticide+discovery+pipeline+for+vector+control:+GPCRs+as+targets+for+the+identification+of+next+gen+insecticides.">Re-invigorating the insecticide discovery pipeline for vector control: GPCRs as targets for the identification of next gen insecticides.</a> Pestide Biochemistry and Physiology. 106 (3), 141-148 (2013).</li><li>Conley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+AaDOP2+Receptor+antagonists+reveals+antidepressants+and+antipsychotics+as+novel+lead+molecules+for+control+of+the+yellow+fever+mosquito,+Aedes+aegypti.">Evaluation of AaDOP2 Receptor antagonists reveals antidepressants and antipsychotics as novel lead molecules for control of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeautics. 352 (1), 53-60 (2015).</li><li>Ahmed, M. A. I., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+actions+of+formamidine+insecticides+on+the+activity+of+pyrethroids+and+neonicotinoids+against+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae).">Synergistic actions of formamidine insecticides on the activity of pyrethroids and neonicotinoids against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 49 (6), 1405-1410 (2012).</li><li>Ahmed, M. A. I., Vogel, C. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+action+of+octopamine+receptor+agonists+on+the+activity+of+selected+novel+insecticides+for+control+of+dengue+vector+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae)+mosquito.">Synergistic action of octopamine receptor agonists on the activity of selected novel insecticides for control of dengue vector Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) mosquito.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 120, 51-56 (2015).</li><li>Hill, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacological+characterization+of+D1-like+dopamine+receptors+from+Anopheles+gambiae,+Aedes+aegypti+and+Culex+quinquefasciatus+suggests+pleiotropic+signaling+in+mosquito+vector+lineages.">Comparative pharmacological characterization of D1-like dopamine receptors from Anopheles gambiae, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus suggests pleiotropic signaling in mosquito vector lineages.</a> Parasites Vectors. 9 (1), 192 (2016).</li><li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guideline for evaluating insecticide resistance in vectors using the CDC bottle bioassay. , (2011).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Test procedures for insecticide resistance monitoring in malaria vector mosquitoes. , (2013).</li><li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidelines for efficacy testing of insecticides for indoor and outdoor ground-applied space spray applications control of neglected tropical diseases who pesticide evaluation scheme. , 2-53 (2009).</li><li>Pridgeon, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+Aedes+aegypti,+Culex+quinquefasciatus+Say,+and+Anopheles+quadrimaculatus+Say+to+19+pesticides+with+different+modes+of+action.">Susceptibility of Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus Say, and Anopheles quadrimaculatus Say to 19 pesticides with different modes of action.</a> Journal of Medical Entomolog. 45 (1), 82-87 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liverpool Insect Testing Establishment. , (2018).</li><li>A&#239;zoun, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+standard+WHO+susceptibility+tests+and+the+CDC+bottle+bioassay+for+the+determination+of+insecticide+susceptibility+in+malaria+vectors+and+their+correlation+with+biochemical+and+molecular+biology+assays+in+Benin,+West+Africa.">Comparison of the standard WHO susceptibility tests and the CDC bottle bioassay for the determination of insecticide susceptibility in malaria vectors and their correlation with biochemical and molecular biology assays in Benin, West Africa.</a> Parasites Vectors. 6, 147 (2013).</li><li>Owusu, H. F., Jan&#269;&#225;ryov&#225;, D., Malone, D., M&#252;ller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparability+between+insecticide+resistance+bioassays+for+mosquito+vectors:+time+to+review+current+methodology?.">Comparability between insecticide resistance bioassays for mosquito vectors: time to review current methodology?.</a> Parasites Vectors. 8, 357 (2015).</li><li>Savignac, R., Maire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A simple character for recognizing second and third instar larvae of five Canadian mosquito genera (Diptera: Culicidae). , (1981).</li><li>Bhatt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coverage+and+system+efficiencies+of+insecticide-treated+nets+in+Africa+from+2000+to+2017.">Coverage and system efficiencies of insecticide-treated nets in Africa from 2000 to 2017.</a> eLife. 4, 174 (2015).</li><li>Zaim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+insecticides:+an+urgent+need.">Alternative insecticides: an urgent need.</a> Trends in Parasitology. 18 (4), 161-163 (2002).</li><li>Fonseca, I., Quino&#241;es, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistencia+a+insecticidas+en+mosquitos+(Diptera:+Culicidae):+mecanismos,+deteccion+y+vigilancia+en+salud+publica.">Resistencia a insecticidas en mosquitos (Diptera: Culicidae): mecanismos, deteccion y vigilancia en salud publica.</a> Revista Colombiana de Entomologia. 31 (2), 107-115 (2005).</li><li>Fonseca-Gon Alez, I., Qu, M. L., Lenhart, A., Brogdon, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+resistance+status+of+Aedes+aegypti+(L.)+from+Colombia.">Insecticide resistance status of Aedes aegypti (L.) from Colombia.</a> Pest Management Science. 67, 430-437 (2011).</li><li>Nuss, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptor+antagonists+as+new+mode-of-action+insecticide+leads+for+control+of+Aedes+and+Culex+mosquito+vectors.">Dopamine receptor antagonists as new mode-of-action insecticide leads for control of Aedes and Culex mosquito vectors.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 9 (3), 1-19 (2015).</li><li>Shidrawi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+WHO+Global+Programme+for+monitoring+vector+resistance+to+pesticides.">A WHO Global Programme for monitoring vector resistance to pesticides.</a> Bulletin of the World Health Organization. 68 (4), 403 (1990).</li><li>Sylla, M., Kobylinski, K. C., Foy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gates+grand+challenges+explorations+award:+endectocides+for+controlling+transmission+of+mosquito-borne+diseases.">Gates grand challenges explorations award: endectocides for controlling transmission of mosquito-borne diseases.</a> Malariaworld Journal. 4 (5), (2013).</li><li>Foy, B. D., Kobylinski, K. C., da Silva, I. M., Rasgon, J. L., Sylla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endectocides+for+malaria+control.">Endectocides for malaria control.</a> Trends in Parasitology. 27 (10), 423-428 (2011).</li><li>Chaccour, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+to+reduce+malaria+transmission:+a+research+agenda+for+a+promising+new+tool+for+elimination.">Ivermectin to reduce malaria transmission: a research agenda for a promising new tool for elimination.</a> Malaria Journal. 12 (1), 153 (2013).</li><li>Olson, D. M., Fadamiro, H., Lundgren, J. G., Heimpel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sugar+feeding+on+carbohydrate+and+lipid+metabolism+in+a+parasitoid+wasp.">Effects of sugar feeding on carbohydrate and lipid metabolism in a parasitoid wasp.</a> Physiol Entomol. 25, 17-26 (2000).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Report of the WHO Informal Consultation. Evaluation and testing of insecticides. , (1996).</li><li>Huang, Q., Deng, Y., Zhan, T., He, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+and+antagonistic+effects+of+piperonyl+butoxide+in+fipronil-susceptible+and+resistant+rice+stem+borrers,+Chilo+suppressalis.">Synergistic and antagonistic effects of piperonyl butoxide in fipronil-susceptible and resistant rice stem borrers, Chilo suppressalis.</a> Journal of Insect Science. 10, 182 (2010).</li></ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışmaları bildirin.

Böcek öldürücüler, sıtma25, Dang ve Zika26gibi sivrisinek kaynaklı hastalıklar ile mücadele için güçlü araçlardır. Geniş böcek ilacı kullanımı, dirençli kimyasal kontrol etmek için tek en büyük tehdit olarak kabul edilir böcek ilacı direnç gelişimi için önde gelen hastalık kontrol devam ettiği sivrisinek nüfus üretti. Son on yılda anofel spp. dayanıklı sentetik pyrethroids (SPs) yatak tülleri Afrika7kullanılan nüfus dramatik bir artış gördü. Nüfus Aedes albopictus, Dang vektör ve Zika, Florida ve New Jersey Organofosfatlar6için dayanıklı bildirilmiştir. Benzer şekilde, DDT ve pyrethroids nüfus Kolombiya27,28 anofel ve Aedes spp., belgelenmiş oldu. Yeni larvicides ve çeşitli orthosteric için bağlamak adulticides geliştirmek için acil ihtiyaç veya bilinen moleküler hedef veya bu allosteric sitelerinde bozacak yeni hedefler (Yani, roman MoA kimyaları)29,30 ve en az çevresel etkiye sahip. Orada da tanıma çevresinde endectocides sivrisinek kontrolü31,32,33için potansiyel artmaktadır.
Bu tür ürünler hızlı gelişimi kolaylaştırmak için bir dizi küçük molekül kimyaları sivrisinek larva ve yetişkin iki teslimat rotalarını - iletişim ve sindirim yolu ile toksisitesi değerlendirmek için tasarlanmış protokol açıklar. WHO duyarlılık testi ve CDC şişe tahlil gibi ortak iticilik varolan böcek formülasyonları1,2ve toksisitesi değerlendirmek için kullanın iletişim kurallarıdır. Ancak, bu deneyleri unformulated roman kimyasal varlıklar (NCEs) analizleri için kısıtlamalar bulunmaktadır ve orta ya da yüksek üretilen iş kimyaları çok sayıda test için mükellef değildir.
Burada hızlı bir şekilde yüksek üretilen iş analizleri için ölçeklendirebilirsiniz tek noktadan dozda NCEs değerlendirmek için standart bir larva tahlil açıklayın. Ayrıca bir adaptasyon küçük molekül kimyaları yetişkin sivrisinekler için kişi toksisitesi değerlendirmek için LITE21 tarafından geliştirilen bir testin açıklar. Son olarak, yolu ile kan yemek yetişkin dişi sivrisinekler için teslim NCEs toksisitesi değerlendirmek için bir sindirim tahlil tarif ve endectocide potansiyel keşfetmek. Bu larva ve yetişkin deneyleri LC ve LD değerleri, sırasıyla belirlemek için doz aralığı gerçekleştirilebilir ve larva ve yetişkin kişi deneyleri ile karşılaştırıldığında bir veya daha fazla varolan kimyasal formüller gerçekleştirilebilir. Yetişkin topikal tahlil Ayrıca bireysel sivrisinek her LD değer hesaplama sağlar. İletişim kuralları Aedes, anofel ve Culex16,29 türler kullanılarak yapılır ve bir türün belirli biyolojik özelliklerini içerecek şekilde isterseniz değişiklik. Bizim deneyim, mosquitocidal kimyaları genellikle geniş aktivite arasında bu 3 cinsi16,29sergi. ama türler seçicilik değerlendirilmesi için değer.
Deneyleri hızla birden fazla kimyaları böcek faaliyeti için ekran için bir başlangıç noktası vardır. Bir veya daha fazla deneyleri toksisite sergilemek bu kimyaları daha fazla analizleri yolu ile ikincil ve üçüncül deneyleri için seçilmiş olabilir. LITE tarsal tahlil ve deneyleri34,35besleme şeker örnekleri içerir. Ek deneyleri yelpazesi anlayışlar olası ürün teslimat modları sağlayan sonuçlar genellikle beklenen piyasa ve uygulama, etrafında konuları belirlenir. Burada gösterilen temsilcisi sonuçlarında amitriptilin, için potansiyel bir roman MoA böcek ilacı10,12, olarak değerlendirilen bir memeli ve omurgasız dopamin reseptör antagonist toksisite keşfetmek 13 , 16. amitriptilin sergilenen toksisite larva ve μg aralığı telkin içinde yetişkin Ae. aegytpi , larvicidal ve adulticidal etkinlik ve amitriptilin tabanlı kimyasal serisi bir arama için mantığı sağlayan tanımlamak için analogları ile yüksek kudret. Ölüm ya da verimlilik üzerinde önemli bir etkisi amitriptilin kan öğünde maruz Ae. aegypti gözlendi. Defibrinated kan ve etkili doz sivrisinek alınan kimyada kararlılığını bilinen değil iken, testin önemli sınırlamalar amitriptilin ve diğer GPCR aktif bileşikler küçük potansiyeli endectocides, olabilir ki verileri göstermektedir En azından içinde unformulated durumu.
Deneyleri arasında biyolojik değişim sınırlamak için önlemler gereklidir. Tüm deneyleri tekrarlanabilirlik sağlamak için sıcaklık ve nem, tercihen bir böcek büyüme odası standart koşullar altında yapılmalıdır. Bunlar son derece öznel, önemli veri değişimi için önde gelen farklı laboratuar personeli tarafından kaydedilmiş olabilir gibi fenotipik endpoints Puanlama yordamları standartlaştırmak için zorunludur. Larva tahlil tahlil son konsantrasyonu iyi başına daha az % 1 koşuluyla DMSO gibi organik çözücüler kullanılarak gerçekleştirilebilir olsa da suda çözünür kimyaları değerlendirilmesi için uygundur. Biz yetişkin topikal tahlil için bazı sınırlamaları tanır. İlk olarak, hızla seri dilutions hazırlarken çalışmak gereklidir ve taşıyıcı (aseton) son derece kırılgandır ve buharlaşma varyasyon Kimya miktarında doğurabilir dozda teslim teslim. İkinci olarak, bu ölüm katkıda bulunabilir gibi anestezi dönemini sınırlandırmak için özen gösterilmelidir. Ayrıca aseton gibi solventler etkileri nedeniyle test kimya ile karıştırılmamalıdır topikal tahlil ilk birkaç saatlik hızlı bir "knock-down" etki yol açabilir unutulmamalıdır. Biz sivrisinek kan yemek hacmi yetişkin yenmesi tahlil yetişkin başına alınan doz bir değerlendirmesini karmaşık hale getiren kişi arasındaki değiştiğini unutmayın. Son olarak, tahlil veri nerede negatif kontrol mortalite % 10 aşan durumlarda düşünülmemelidir.
Sinerjik hareket ürünleri giderek potansiyellerini yardımcı programını varolan ürünlerin genişletmek ve böcek ilacı dayanıklı haşere nüfusu15,16,36kontrolünü sağlamak kabul edilmektedir. Larva deneyleri synergism formamidine böcek ilacı, amitraz ve omurgasız octopamine reseptörleri14,15bozabilir kimyaları çeşitli arasında incelemek için kullanılmaktadır. Larva tahlil ve yetişkin topikal tahlil açıklanan sinerjik veya katkı etkileri test kimyaları kombinasyonları arasında değerlendirmek için uygundur. Biz synergists piperonyl butoxide (PBO) gibi her burada açıklanan üç deneyleri içine eklenebilir unutmayın.
Yukarıda açıklanan deneyleri unformulated, küçük molekül ilaçlara karşı su ve karasal sivrisinek yaşam evreleri değerlendirilmesi için deneysel standartlaştırılmış bir dizi sağlar. Bu deneyleri özellikle toksisitesi değerlendirmek ve mevcut üzerinde birkaç avantajları deneyleri ortak kullanım sunmak için tasarlanmıştır. Önemlisi, deneyleri için Otomasyon mükellef bulunmaktadır ve endüstriyel ölçekte değerlendirme testi bileşiklerin binlerce etkinleştirmek için gerçekleştirilebilir. Alanı yeni adalardaki hareket ürünlerinin geliştirilmesine dikkate alır gibi son olarak, roman moleküler hedeflerin ve biyokimyasal yollar, bozulma ile de dahil olmak üzere birden çok fenotipik uç nokta bu ölüm gibi ek olarak puanı için gerekli olacak ve felç. Yukarıdaki deneyleri böylece yarının son derece yenilikçi böcek teknolojileri doğru bir adım sağlayan gibi soruşturma izni.

Sivrisinekler iletimi, genel olarak insan sağlığını etkileyen bulaşıcı hastalıkların sorumlu ajanlar1. İnsan sağlığını etkileyen en önemli 3 sivrisinek cinsi Aedes, anofel ve Culexvardır. Aedes sivrisinek tür Zika, Dang, sarı humma ve chikungunya neden arboviruses vektör. Anofel türlerinin sıtma parazit vektör ve Batı Nil virüsü ve filarial nematodlar2 Culex tür iletimi. Dünya Sağlık Örgütü (WHO), on ihmal tropikal hastalıklar (NTD) ortadan kaldırılması için 20203 tarafından gördü ve sivrisinek kontrolü en uygun strateji olarak tanımlanan. Böcek öldürücüler, sivrisinek kontrol etmek ve hastalık iletim4,5azaltmak güçlü araçlardır. Ancak, böcek ilacı dayanıklı sivrisinek nüfus ortaya çıkması pek çok hastalıkları6,7,8sürekli kontrolünü tehdit ediyor. Yenilikçi vektör kontrol Konsorsiyumu (IVCC) ilk özel çaba yerine böcek sivrisinek kontrolü9için geliştirmek başlattı. Eylem (MoA) roman modları ile yeni böcek öldürücüler hedefleri karşılamak ve hastalık kontrol elde etmek için ihtiyaç vardır. Keşif ve geliştirme roman adalardaki ile yeni böcek ilacı sınıfların bütün organizma deneyleri için hızlı, yüksek üretilen iş analizi kimyaları ve endüstri standartları10ile karşılaştırıldığında gerektirir.
Birden çok testleri iticilik ve böcek larvaları ve yetişkin sivrisinekler toksisitesi değerlendirmek kullanılabilir ve bazı yeni formüle veya unformulated kimyaları değerlendirme için uygundur. WHO Protokolü11 ürünleri dördüncü INSTAR larva karşı test etmek için kullanılan bir iletişim tahlil olduğunu. Yayımlanan çalışmaları da tarif larva deneyleri küçük molekül kimyaları Aedes aegypti, anofel gambiae ve Culex quinquefasciatus10,12, larva için toksisite sınamak için kullanılan bir çeşitli 13,14,15,16. Merkezleri hastalık kontrol ve önleme (CDC) şişe bioassay için böcek ilacı direnç yakalanan alan nüfus yetişkin sivrisinek öldürücü konsantrasyon (LC) ve öldürücü zaman (LT) ile karşılaştırıldığında bir standart tanı değerlendirilmesi yoluyla değerlendirmek için kullanılır bir ticari böcek ilacı17doz. WHO duyarlılık testi mademki sivrisinekler böcek ilacı emdirilmiş kağıt 1 h için cam şişe içinde maruz kalır ve ölüm 24 h18, değerlendirilir mi yetişkin sivrisinekler direnişinde böcek ilacı değerlendirmek için başka bir yaklaşım sunmaktadır. Diğer deneyleri formülasyonları mühürlü kafesleri ve kayıt sivrisinek nakavt ve ölüm içinde istenen timepoints19, sprey. Sivrisinek toraks için topikal uygulama farklı böcek ilacı20potens değerlendirmek için kullanılmıştır. Liverpool böcek test kuruluş (LITE)21 standart işletim yordamlar istihdamkimyaları yetişkin sivrisinekler için bioactivity değerlendirmek için. LITE yetişkin topikal tahlil test ürün küçük bir hacim 48 h attı mortalite ile yetişkin sivrisinekler toraks için geçerlidir. Tahlil miktar bireysel sivrisinek21alınan doz sağlar. LITE tarsal tahlil yetişkin sivrisinekler kimyasal tedavi bir yüzey üzerinde dinlenme için sınama ürünü toksisite değerlendirir ve kimyaları kapalı kalan spreyler (IRS) olarak gelişme potansiyeli ile tanımlamak veya insektisit tedavi yatak-tülleri (ITNs) kullanmak için kullanılır anofel sivrisinekler denetlemek için.
DSÖ ve CDC deneyleri var roman, unformulated kimyaları test için sınırlamalar ve CDC şişe bioassay amacı duyarlılık değerlendirilmesi kısa tahlil dönemleri (iki saat) üzerinde toksisite22,23yerine. Buna ek olarak, deneyleri kimyaları toksisitesi değerlendirmek için kan yemek teslim ve sistemik etkili ürünler geliştirmek için potansiyel (yani endectocides) eksik vardır. Burada, su ya da bir larva karşı çeşitli organik çözücüler ve yetişkin Aedes, anofel ve Culex' çözünür roman kimyaları mosquitocidal etkinliğini test etmek için deneyleri tarif. İlk olarak, biz daha önce bizim grup10,12,13,16tarafından açıklanan ve burada gerçekleştirilen larva bir tahlil göstermek (1) hızla tek noktada birden çok kimyaları değerlendirmek için bir ekran doz, ve (2) tek bir kimya öldürücü konsantrasyon (Örneğin, LC50, LC75 veya LC90,) belirlemek için bir doz yanıt tahlil. Ardından, öldürücü doz (LD) belirlenmesi için iki yetişkin deneyleri tarif. Bunlardan ilki topikal uygulanan, roman kimyaları olumlu bir denetim ile karşılaştırıldığında yetişkin sivrisinekler karşı test için LITE protokolü bir uyarlamasıdır. İkinci sistemik kan yemek teslim kimyaları değerlendirilmesi için beslenme bir tahlil olduğunu.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1215">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Insecticide susceptible mosquito strains&#160;</td>
			<td colspan="2" style="width:313px;">Malaria Research and Reagent Reference Repository&#160;</td>
			<td style="width:525px;">https://www.beiresources.org/MR4Home.aspx; Recommended strains: Aedes aegypti Liverpool (LVP) strain, Anopheles gambiae Kisumu (KISUMU1) strain and Culex quinquefasciatus Johannesburg (JHB) strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetone</td>
			<td>Mallinckrodt Chemical</td>
			<td>CAS 67-64-1</td>
			<td>Use for dilutions and control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amitraz</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS 33089-61-1</td>
			<td>Requires dilution in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amitriptyline</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 549-18-8</td>
			<td>Can be diluted in acetone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bifenthrin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 51529-01-2</td>
			<td>Synthetic pyrethorid used as positive control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cis-(Z)-flupenthixol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>CAS: 51529-01-2</td>
			<td>Pharmacologically tested as disruptor of dop-like receptors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Defibrinated rabbit blood</td>
			<td>Hemostat</td>
			<td>DRB0100</td>
			<td>Blood source for adapted mosquitoes to artificial feeding</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dimethylsulphoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>MKBF2985</td>
			<td>Organic solvent used to disolve amitraz</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Hemotek membrane feeding system&#160;</td>
			<td>Hemotek Ltd</td>
			<td>Serial no. 1303</td>
			<td>Used for feeding mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:376px;">Micro-applicator</td>
			<td>Burkard Manufacturing Co.&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>Tool needed for topical application experiments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well cell culture plate with lid</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3526</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Advantage rubber bands</td>
			<td>Alliance Rubber Co.</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to seal the paper cups</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass syringe (1 ml)</td>
			<td>Becton Dickinson and Co.</td>
			<td>512004</td>
			<td>Needed for the micro-applications. Glass is better than plastic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scintillation vials (20 ml)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>74505-20</td>
			<td>Glass vials prevent evaporation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tulle fabric, white</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paper cups</td>
			<td>Dixie Consumer Products LLC.</td>
			<td>PF15675/13D</td>
			<td>Used to keep adult mosquitoes in adult topical assays</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes (150 mm)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to maintain the mosquitoes &#34;slept&#34; on cold without direct contact with ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td>Used to sort larvae</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereo microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ6045</td>
			<td>Used to score larval assays and perform micro-applications</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezers (fine)</td>
			<td>Fontax&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to handle adult mosquitoes</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for testing the toxicity of novel insecticidal chemistries to mosquitoes

Böcek öldürücüler yeni sınıflar eylem roman modlarıyla Zika, Dang ve sıtma gibi hastalıkları iletimi sivrisinek böcek ilacı dayanıklı nüfus kontrol etmek için ihtiyaç vardır. Deneyleri için hızlı, yüksek üretilen iş analizleri sivrisinek larva ve yetişkin karşı unformulated roman kimyaları sunulmaktadır. Biz iletişim kuralları tek nokta-doz ve küçük molekül kimyaları için Aedes aegypti vektör Zika, Dang ve sarı humma, sıtma vektör, anofel gambiae ve Kuzey toksisitesinin değerlendirmek için doz yanıt deneyleri için tarif ev sivrisinek, Culex quinquefasciatus, temas ve sindirim yolu ile. Örnek olarak, biz amitriptilin, G protein birleştiğinde reseptörleri, larva, Yetişkin topikal ve yetişkin kan besleme tahlil ile küçük molekül antagonist toksisitesi değerlendirildi. Protokoller, böcek ilacı potansiyel araştırmak için bir başlangıç noktası sağlar. Sonuçları ürün uygulamaları ve teslim mekanizmaları keşfetmek için ek deneyleri kapsamında ele alınmıştır.

Şekil 6 gösterir beş doz dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin su ile karşılaştırıldığında maruz takip L3 Ae. aegypti yüzde mortalite (negatif) kontrol 24, 48 ve 72 s. Bu örnekte, her zaman puan de toplanan veriler tipik bir logaritmik eğrisi görüntülemek ve amitriptilin larva ölüm üzerinde bir doz bağımlı etkisi ortaya koyuyor. LC50 değeri deneme süresi boyunca azalır ve 72 h veri (Yani, Logaritmik eğrisi orta noktasını) kullanılarak hesaplanabilir.
Şekil 7 gösterir 3 - 5 gün çocuk yetişkin kadın Ae. aegypti yüzde mortalite dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin ve sentetik pyrethroid ile karşılaştırıldığında bir 400 µM doz (10 µg/µL) maruz takip Bifenthrin pozitif kontrolü (teknik notu; 500 pg/µL), salt aseton negatif kontrol ve tedavi edilmezse sivrisinekler (boş). Bu örnekte, amitriptilin ve bifenthrin negatif denetime göre önemli yetişkin ölüm neden olur. Yetişkin ölüm muhtemelen metabolik test kimyaları detoksifikasyon nedeniyle, zaman içinde azalır unutmayın.
Şekil 8 Ae. aegypti beslenen dört doz dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin ve verimlilik ile tedavi bir kan yemek 3-5 gün eski yetişkin kadın yüzde mortalite (soldaki y ekseninde) gösterir (sağdaki y eksenindedir; ortalama yumurta sayısı / kadın) ilk gonotrophic döngüsü sonrası maruz Denetim sivrisinek ile karşılaştırıldığında (kan sadece beslenir; negatif kontrol). Veriler denetime göre yetişkin ölüm önemli etkisi amitriptilin, ama göstermek amitriptilin önemli ölçüde yüksek doz (400 µM), verimlilik artar olduğunu ortaya koymaktadır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig1.jpg"> Resim 1 . Larva doz yanıt testin set-up. Aedes aegypti L3 larva 24-şey plaka kullanılarak gerçekleştirilen larva doz yanıt tahlil up gösterilen görüntü.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig2v2.jpg"> Resim 2 . Şematik yordam kümesi için (A) tek doz veya (B) doz yanıt larva tahlil 24-şey tabak içinde gösterilmesini. Beş L3 larva wells için transfer aşırı su yavaşça pipet ile kaldırılır ve taze, steril GKD2ile O. değiştirilir Daha sonra hisse senedi ve test Kimya seri dilutions hazırlanan ve 1 mL/iyi bir son hacim için ekledi. <a href="/files/ftp_upload/57768/57768fig2v2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig3.jpg"> Şekil 3 . Yetişkin sivrisinek kültür. Görüntü gösteren 20 L plastik kova kültür yetişkin sivrisinek ve bir aspiratör kullanımı için sivrisinek. kaldırmak için kullanılan
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig4.jpg"> Şekil 4 . 4-5 gün eski erkek kullanılarak gerçekleştirilen yetişkin topikal tahlil Aedes aegypti. Kimya ile aşağıdaki tedavi veya solvent, Yetişkin sivrisinekler kağıt bardak içinde yerleştirilir ve bir test odası için tahlil süresince transfer.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig5.jpg"> Şekil 5 . Hisse senedi ve seri dilutions. (A)hisse senedi hazırlanması için prosedür ve (B) seri testi çözümleri yetişkin topikal tahlil için gösteren Şematik diyagramı. <a href="/files/ftp_upload/57768/57768fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig6.jpg"> Şekil 6 . Temsil edici bir larva kişi doz yanıt tahlil verilerden. Dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin, 24, 48 ve 72 h maruz takip Aedes aegypti L3 larva yüzde mortalite gösterilen bir larva kişi doz yanıt tahlil temsilcisi verileri. Her bir veri noktasını temsil eden µM ± SEM veri temsil n Bu arada 3 biyolojik çoğaltır =.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig7.jpg"> Şekil 7 . Bir yetişkin topikal doz yanıt tahlil temsilcisi verilerden. Dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin (10 µg/µL) 3-5 gün için toksisite gösterilen bir yetişkin topikal doz yanıt tahlil temsilcisi verileri eski dişi Aedes aegypti sentetik pyrethroid, bifenthrin (500 pg/µL) pozitif göreli denetimi) ve negatif kontrol (sadece aseton araç) 2, 24 ve 48 s. Verileri göstermek n = 3 biyolojik çoğaltır. Hata çubukları SEM belirtmek
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57768/57768fig8.jpg"> Şekil 8 . Bir yetişkin yenmesi tahlil temsilcisi verilerden. Dopamin reseptör antagonisti, amitriptilin 100 µM, 200 µM ve 400 µM toksisitesi gösterilen bir yetişkin yenmesi tahlil temsilcisi verileri doz 3-5 gün için eski yetişkin dişi Aedes aegypti ve (ortalama toplam yumurta olarak ifade edilir verimlilik üzerinde etkisi Erkek ilk gonotrophic döngüsü üzerinde saymak). Verileri göstermek n = 3 biyolojik çoğaltır ± SEM
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="6">A. tek noktadan doz deneyleri ile üç kimyaları</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kimya</td>
			<td colspan="5">Konsantrasyonu (400 uM)</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Amitriptilin</td>
			<td colspan="5">
80 mM stok: 2 mg amitriptilin X %98 (toz saflığı) X 0,001 g / 1 mg X 1 mol /313.86 g X 1 L/0,08 mol X 106 µL/L su 78.06 µL =.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
Seri Dilutions: Hisse senedi 1:2 GKD2O ile ve daha sonra 10 mM elde etmek için 1:4 oranında seyreltin. 10 mM stokunun 40 µL de GKD2400 µM/iyi bir final konsantrasyon ulaşmak için 0 960 µL içeren için ekleyin.  10 mM stok 5 mM, 2.5 mM, 1,25 mM ve 0.625 mM hisse senetleri elde etmek için 1:2 seri dilutions hazırlayın.</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">BDT-(z)-flupenthixol</td>
			<td colspan="5">
CIS (z) flupenthixol X %98 (toz saflığı) 0,001 g / 1 mg X 1 mol/507.44 g CIS (z) flupenthixol X 1 L/0.08 mol X 106 µL/M X 80 mM stok: 2 mg 48.28 µL su =.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
Seri Dilutions: Yukarıdaki gibi.</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Amitraz</td>
			<td colspan="5">
80 mM stok: 2 mg amitraz X 1 L/0.08 mol X 106 µL/1 L Amitraz X 0,001 g / 1 mg X 1 mol/293.4 g DMSO 85.21 µL = (Not: Amitraz sadece DMSO içinde çözünür).</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
Seri Dilutions: Yukarıdaki gibi.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">B. doz yanıt tahlil</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Kimya</td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
		</tr>
<tr>
<td>400 ΜM</td>
			<td>200 ΜM</td>
			<td>100 ΜM</td>
			<td>50 ΜM</td>
			<td>25 ΜM</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">««Örneğin, amitriptilin, CIS-(Z)-flupenthixol veya amitraz</td>
			<td>40 ΜL</td>
			<td>40 ΜL</td>
			<td>40 ΜL</td>
			<td>40 ΜL</td>
			<td>40 ΜL</td>
		</tr>
<tr>
<td>10 mM hisse senedi</td>
			<td>5 mM hisse senedi</td>
			<td>2.5 mM hisse senedi</td>
			<td>1,25 mM hisse senedi</td>
			<td>0.625 mM hisse senedi</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1. Örnek hesaplamalar için Aedes aegypti L3 larva (A) tek nokta doz tahlil ve (B) doz yanıt tahlil.
<img alt="Table 2" src="/files/ftp_upload/57768/57768tbl2.jpg"> Tablo 2. Kayıt verileri sivrisinek larva doz yanıt tahlil kullanılan örnek skor levha. Denetimi, sadece su veya su % 1 DMSO veya sadece diğer solvent ile. Küçük molekül antagonisti kimyaları amitriptilin gibi sınamak için kullanılan normal dozlarda 25 µM, 50 µM, 100 µM, 200 µM ve 400 µM vardır.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="7">Sivrisinek yetişkin (3-5 gün eski) topikal tahlil</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Başlatılan tarihi:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Araştırmacı:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Türler/yük:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">
Tahlil türü: Tek noktadan doz/doz yanıt</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">A. mortalite (No. ölü sivrisinek)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Süresi (saat)</td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
			<td>Denetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>0,5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>1.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>2.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">B. yüzde mortalite</td>
		</tr>
<tr>
<td>Süresi (saat)</td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
			<td>Denetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>0,5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>1.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>2.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 3. Kayıt verileri yetişkin topikal doz yanıt tahlil kullanılan örnek skor levha.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="7">Sivrisinek yetişkin (3-5 gün eski) sindirim tahlil</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Başlatılan tarihi:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Araştırmacı:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">Türler/yük:</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">
Tahlil türü: Tek noktadan doz/doz yanıt</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">A. sayı sivrisinekler beslenen</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
			<td>Denetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>Beslenen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Değil Fed</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Toplam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>% Fed</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>% Değil Fed</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">D. ölüm (No. ölü sivrisinek)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Süresi (saat)</td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
			<td>Denetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>24</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>48</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>72</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">C. yüzde mortalite</td>
		</tr>
<tr>
<td>Süresi (saat)</td>
			<td>Doz 1</td>
			<td>Doz 2</td>
			<td>Doz 3</td>
			<td>Doz 4</td>
			<td>Doz 5</td>
			<td>Denetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>24</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>48</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>72</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 4. Kayıt verileri kan besleme yetişkin tahlil kullanılan örnek skor levha. Küçük molekül antagonisti kimyaları amitriptilin gibi sınamak için kullanılan tipik doz 50 µM, 100 µM, 200 µM ve 400 µM vardır.

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes at JoVE.com

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

Protokoller geliştirme yeni sınıflar, larvicides, adulticides ve endectocides olarak olgunlaşmamış ve yetişkin sivrisinekler için kimyaları toksisitesi değerlendirmek için açıklanmıştır. Tek-noktaya doz ve sonraki değerlendirme toksisite temas belirlemek için doz yanıt tahlil veya sindirim yoluyla birden fazla kimyaları yüksek üretilen iş test iletişim kurallarını etkinleştir.

Sivrisinekler için roman böcek kimyaları toksisite testleri için iletişim kuralları

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Bu yöntem, böcek bulma ve vektör kontrol alanlarında ki anahtar soruların yanıtlatına yardımcı olabilir. Sivrisinek larvaları veya yetişkinler için formüle edilmemiş bir kimya ne kadar zehirlidir? Kimya bir larvicide veya yetişkin öldürücü olarak gelişme potansiyeli var mı?Ve, en etkili teslimat yolu ne olabilir? Bu tekniğin başlıca avantajları, formüle edilmemiş kimyaların toksisitesini değerlendirmek için kullanılabilmeve bir kimyanın toksisitesini birden fazla vektör sivrisinek türüne karşı değerlendirmek ve yüksek iş yapma kapasitesinde yüzlerce bileşiğin evalute'ye kadar ölçeklendirilebilir. Prosedürü gösteren Jasleen Kaur, benim laboratuvar bir bilim teknisyeni olacaktır.Başlamak için, 24 kuyulu doku kültürü plakasının kuyularını etiketlayın. Test bileşiğini tartmak için analitik bir denge kullanın. Daha sonra, 1.5mL tüp steril çift distile su bileşik çözmek, 80mM stok çözeltisi ile sonuçlanan.Daha sonra, istenilen konsantrasyonlarda çalışan stok çözeltileri hazırlamak için çift distile su kullanarak stok çözeltisini seri olarak seyreltin. Larvaların kuyulara eklenmesine özen ilmesi gerektiğini unutmayın, fazla suyun uzaklaştırılması sırasında ve larvaların fiziksel zarar görmesini önlemek için test kimyası eklendiğinde. Yaralanma mortaliteyi artırabilir ve böylece yanlış pozitif sonuçlar üretebilir veya tahtı geçersiz kılabilir.Plakanın her kuyuya beş üçüncü instar larvası aktarmak için geniş delikli plastik transfer pipetkullanın. Daha sonra, suyu nazikçe çıkarmak için tek bir mL pipet kullanın ve istenilen çift distile su hacmiyle değiştirin. Larvaların kurumaması için su işini hızlı bir şekilde çıkarırken larvalara dokunmamaya dikkat edin ve plastik kuyunun karşı tarafına boru larvası atarak test kimyasını nazikçe ekleyin.Her kuyuya uygun miktarda test çözümü ekleyin ve düzgün karıştırmayı sağlamak için plakayı hafifçe döndürün. Plakayı, yüzde 75-85 bağıl nem oranıyla 25 santigrat derecede 12 saatlik açık/koyu döngüyü koruyan bir büyüme odasına yerleştirin. Larva hareketini kontrol etmek için, yavaşça plakadokunun.Hareket gözlenmezse, larvaya steril kürdanla hafifçe dokunun. Yanıt fark edilmezse larvayı ölü olarak puanlayın ve metin protokolünde açıklanan zaman noktalarında her kuyudaki toplam ölü larva sayısını kaydetmek için bir puan tablosu kullanın. Kültür 20 litrelik plastik kafeste 3-5 günlük yetişkin dişi sivrisinekler.Etiket dokuz ons kağıt bardak adı ve test bileşik konsantrasyonu ile. Daha sonra, 20mL cam şişe de aseton test bileşik 10mg / mL stok çözüm hazırlamak. Daha sonra, istenilen çalışma konsantrasyonları elde etmek için seri stok çözeltisi seyreltmek.Bir mL cam şırıngayı asetonile temizleyin. Daha sonra uygun konsantrasyonda test solüsyonu ile doldurun. Şırıngayı 0,25uL hacim sağlayacak şekilde ayarlanmış bir mikro aplikatöre sabitle.Sonra, kafesten 10, üç ila beş günlük yetişkin dişi sivrisinek kaldırmak için bir aspiratör kullanın. Onları dört santigrat derecede beş dakika anestezi edin. Sonra sivrisinekleri petri kabına aktarın.10 dakika buz üzerine çanak yerleştirin. Ölümlülüğe katkıda bulunabilecek yetişkin sivrisineğin zarar görmemesi için buzdolabında beş dakikadan fazla anestezi alınmamasını veya 10 dakikadan fazla buzüzerinde hareketsiz kalmamasını sağlayın ve sivrisineklerin kullanımını en aza indirin. Eğer soğuk bir plaka erişimi niz varsa, ve hareketli bir sahne ile bir mikromanipülatör, daha fazla sivrisinek işleme en aza indirebilirsiniz.Çanak her sivrisinek kaldırmak için ince cımbız kullanın. Şırınga mikro-aplikatör ile dorsal toraks için test çözeltisi 0.25uL uygulayın, bir diseksiyon mikroskop altında Sonraki, buz üzerinde etiketli bir kağıt fincan sivrisinek aktarın. Mühür fincan 10 tarafından 10cm örgü kare ve bir lastik bant Sonra, büyüme odasına aktarın ve daha önce açıklandığı gibi ölü sivrisinek sayısını kaydedin.Yaklaşık 150 dört ila beş günlük yetişkin dişi sivrisinek bir aspiratör ile toplamak ve ayrı bir kafese aktarın. Besleme tsay'ından 1 ila 24 saat önce şeker kaynağını çıkarın. Sudaki test bileşiğinin 80 mM'lik stok çözeltisini hazırlayın.Daha sonra, seri su ile seyreltmek, istenilen konsantrasyonlarda çalışma stok çözümleri elde etmek için. İstenilen test konsantrasyonları elde etmek için, 1.5mL tüp içinde defibrinated tavşan kanı 960uL her seyreltme 40uL ekleyin ve pipetleme ile karıştırın. Bir besleme ünitesine üye filtre yerleştirin ve kauçuk bir halka ile kapatın.Daha sonra, besleme ünitesinin ters tarafında bulunan dağıtım portu üzerinden test solüsyonu ile kan bir mL aktarmak için bir pipet kullanın. Besleme ünitesini Bir ısıtma ünitesine takın. Daha sonra, membran yüzeyini taze hazırlanmış yüzde 10 laktik asit çözeltisi ile hafifçe temizler.Besleme ünitesini kafese yerleştirin. Kafesi koyu bir bezle örtün ve sivrisineklerin bir saat boyunca beslenmesini bekleyin. Sivrisinekler besledikten sonra, sivrisinekleri canlandırmak için kafesi dört derece buzdolabında beş dakika bekletin.Daha sonra kafesteki toplam sivrisinek sayısını sayın ve kaydedin. Karın inceleyerek, saymak ve tam ve kısmen beslenen dişi sivrisinek toplam sayısını kaydedin. Doz başına en az 50 kanla beslenen sivrisinek elde edilmelidir.Beslenen olmayan sivrisinekleri çıkarın. Daha sonra kafesi bir büyüme odasına aktarın ve uygun zaman noktalarındaki ölü sivrisinek sayısını kaydetmek için bir puan tablosu kullanın. Kan sonrası beslenmenin üçüncü gününde, kafese 72 saat boyunca bir yumurta fincanı koyun.Tedavi başına üretilen toplam yumurta sayısını saymak için bir kesme mikroskobu kullanın. Dopamin reseptör antagonisti olan amitriptinin zaman içinde larva mortalitesi üzerindeki etkisini değerlendirmek için larva kontrayı araştırması yapıldı. Veriler, LC 50 değerinin deney boyunca zaman içinde azaldığını ortaya koymuştur.Amitriptiline'nin erişkin dişi sivrisineklerin mortalitesi üzerindeki etkisi bifenthrin ve iki negatif kontrol ile karşılaştırıldı. Aseton ile tedavi edilen ve tedavi edilmeyen negatif kontrollere kıyasla, her deneysel zaman noktasında hem amitriptirin hem de bifenthrin önemli mortaliteye neden oldu. Erişkin dişi sivrisineklerin fecundity ve yüzde mortalitesi üzerine üç farklı dozda amitriptinin etkisini değerlendirmek için kantitatif beslenme tetkikçisi yapıldı.Veriler, sadece kanla beslenen kontrollere kıyasla en yüksek dozda amitriptirin lebeslenen sivrisineklerin dışkısında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamadır. Bir kez hakim, burada açıklanan tahliller herhangi biri, düzgün yapılırsa, tek bir birey tarafından yaklaşık iki saat içinde tamamlanabilir. Bu yordamı çalışırken, organizmayı nazikçe idare etmeyi unutmamak önemlidir ve topikal uygulamalar sırasında ve larva veya yetişkin testi puanlama sırasında tutarlılık olmalıdır.Bu prosedürü takiben, biyo-tahliller gibi diğer yöntemler emme yoluyla toksisite değerlendirmek için, sivrisinek tarsi yoluyla, CDC şişe tahlil, ve WHO tüp tahlil formüle edilmemiş kimya etkinliği ile ilgili ek soruları cevaplamak için yapılabilir, ya da formüle edilmiş bir ürün, ve bir temas böcek ilacı veya uzay spreyi olarak geliştirme potansiyeli.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Kertenkeleler Hareket Hız ve Yön Visual Hassasiyet Test

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

Göz hayali Disk Görselleştirme Yardım Roman RFP Reporter Drosophila</em

The Drosophila eye is a powerful model system for studying areas such as neurogenesis, signal transduction and neurodegeneration. Many of the discoveries ...

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Lignocellulosic Malzemeler için Yüksek verim Saccharification Testi

Polysaccharides that make up plant lignocellulosic biomass can be broken down to produce a range of sugars that subsequently can be 
used in establishing ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

Sıtma Sivrisinekler Gelişimi, doğurganlık ve Kalma bir Epigenetik İlaç Test Etkileri Toksikolojik Tahliller

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Metazoan Model Organizma kullanma Serim ve toksisitesi prion-benzeri Proteinler incelenmesi<em&gt; ° C. elegans</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Salya vektör yetkinlik sivrisinek analiz etmek için bir yöntem olarak zorla

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...

An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing

Toksisite Testi için Havadaki Parçacıklara Gerçekçi, Tekrarlanan Soluma Maruziyeti için Hava Sıvısı Arayüzü Bronşiyal Epitel Modeli

For toxicity testing of airborne particles, air-liquid interface (ALI) exposure systems have been developed for in vitro tests in order to mimic realistic ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 Kullanarak Boş Mutasyonlar Oluşturmak için Culex Sivrisineklerinin Embriyolarının Hazırlanması ve EnjekteSi

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...