Name: light-sheet fluorescence microscopy for the study of the murine heart
Uploaded: 2018-09-15T14:00:00
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Os autores gostaria de expressar gratidão ao Thao Nguyen e Atsushi Nakano da UCLA para o fornecimento da amostra de ratos a imagem. Este estudo foi suportado por estrelas de bolsas NIH HL118650 (para Tzung K. Hsiai), HL083015 (para Tzung K. Hsiai), HD069305 (para N. C. Chi e Tzung K. Hsiai.), HL111437 (para Tzung K. Hsiai e N. C. Chi), HL129727 (para Tzung K. Hsiai) e sistema de Universidade do Texas, financiamento (a Quélen Lee).

Todos os procedimentos que envolvem a utilização de animais foram aprovados por comitês de revisão institucional (IACUC) na Universidade da Califórnia, Los Angeles, Califórnia.
1. configuração do sistema imaging
Nota: Veja a Figura 1 e Figura 2.
<ol><li>Recuperar um onda contínua do laser (CW) com 3 comprimentos de onda: 405 nm, 473 nm e 532 nm. Coloque 2 espelhos (M1 e M2), além de 150 mm e ali...

<ol>
	<li>Richardson, D. S., Lichtman, J. 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(93), e52172 (2014).</li><li>National Heart, L., Blood Institute, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Standard Operating Procedures (SOP's) for Duchenne Animal Models. , (2015).</li><li>Sung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+three-dimensional+tissue+clearing+and+incorporation+of+colorimetric+phenotyping.">Simplified three-dimensional tissue clearing and incorporation of colorimetric phenotyping.</a> Scientific Reports. 6, 30736 (2016).</li><li>Yuan, Z., Qiao, C., Hu, P., Li, J., Xiao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+adeno-associated+virus+vector+producer+cell+line+method+for+scalable+vector+production+of+different+serotypes.">A versatile adeno-associated virus vector producer cell line method for scalable vector production of different serotypes.</a> Human Gene Therapy. 22 (5), 613-624 (2011).</li><li>FEI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Amira User's Guide. , 59-138 (2017).</li><li>Gao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+3D+dynamics+in+thickly+fluorescent+specimens+beyond+the+diffraction+limit.">Noninvasive imaging of 3D dynamics in thickly fluorescent specimens beyond the diffraction limit.</a> Cell. 151 (6), 1370-1385 (2012).</li><li>Truong, T. V., Supatto, W., Koos, D. S., Choi, J. M., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+and+fast+live+imaging+with+two-photon+scanned+light-sheet+microscopy.">Deep and fast live imaging with two-photon scanned light-sheet microscopy.</a> Nature Methods. 8 (9), 757-760 (2011).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+light-sheet+imaging+with+virtual+reality+to+recapitulate+developmental+cardiac+mechanics.">Integrating light-sheet imaging with virtual reality to recapitulate developmental cardiac mechanics.</a> JCI Insight. 2 (22), (2017).</li></ol>

O sistema LSFM e a técnica descrita aqui utiliza um feixe de iluminação dupla face combinado com uma clareira óptica a imagem do coração de rato em pós-natal e adultos fases do seu desenvolvimento. Um feixe de iluminação único tradicional sofre de espalhamento do fóton e absorção através de de1,de amostras de tecido mais grosso e maior3. As duas faces de vigas fornecem uma iluminação mais uniforme da amostra, minimizando assim o efeito de distribu...

Microscopia de fluorescência de luz-folha foi uma técnica desenvolvida pela primeira vez em 1903 e é usada hoje como um método para estudar a expressão gênica e, também, para produzir modelos 3-d ou 4-D, de amostras de tecido a1,2,3. Este método de imagem usa uma folha fina de luz para iluminar um único avião de uma amostra para que só aquele avião é capturado pelo detector. A amostra então pode ser movida na direção axial para capturar cada camada, uma seção de cada vez e processar um modelo 3D após o pós-processamento das imagens adquiridas4. No entanto, devido à absorção e espalhamento de fótons, LSFM tem sido limitada a amostras ou alguns microns de espessura ou são opticamente transparente1.
As limitações do LSFM têm levado a estudos extensivos de organismos que têm tecidos que são opticamente transparentes, como o peixe-zebra. Estudos envolvendo a diferenciação e desenvolvimento cardíaco são frequentemente realizados em zebrafish desde que existem genes conservados entre humanos e zebrafish5,6. Embora estes estudos conduziram a avanços na investigação cardíaca relacionada com cardiomiopatias6,7, ainda há uma necessidade de realizar pesquisas semelhantes em organismos de nível mais alto como mamíferos.
Mamíferos tecido cardíaco apresenta um desafio devido à espessura e opacidade do tecido, a absorção devido à hemoglobina nos glóbulos vermelhos e a distribuição que ocorre devido a iluminação em um lado da amostra sob tradicionais métodos LSFM1 , 8. para compensar estas limitações, propusemo-na usar uma versão simplificada da clareza técnica9 combinado com um índice de refração correspondente solução (aros) e iluminação de duas faces. Portanto, este sistema permite a imagem de uma amostra que é maior que 10 x 10 x 10 mm3 enquanto manter uma boa qualidade resolução axial e lateral aviões8.
Este sistema foi primeiro calibrado usando grânulos fluorescentes dispostos em diferentes configurações dentro do tubo de vidro. Em seguida, o sistema foi usado a imagem corações murino pós-natal e adultas. Primeiro, o coração de rato pós-natal foi fotografado em 7 dias (P7) para revelar a cavidade ventricular, a espessura da parede ventricular, as estruturas de válvula e a presença de trabeculação. Em segundo lugar, foi realizado um estudo para identificar as células que se diferenciam em cardiomyocytes usando um coração de rato pós-natal no dia 1 (P1) com Cre-rotulado cardiomyocytes e proteína fluorescente amarela (YFP). Finalmente, foram imagens de ratos adultos em 7,5 meses para observar a presença de potássio medular externa renal canais (ROMK) após a terapia de gene8.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:967px;" width="967">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">CW Laser</td>
			<td style="width:136px;">Laserglow Technologies</td>
			<td style="width:393px;">LMM-GBV1-PF3-00300-05</td>
			<td style="width:191px;">Excitation of fluorophores</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Neutral density filter</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">NDC-50C-4M</td>
			<td style="width:191px;">Controls amount of light entering system</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Achromatic beam expander</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">GBE05-A</td>
			<td style="width:191px;">Expands the beam of light</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Mechanical slit</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">VA100C</td>
			<td style="width:191px;">Controls width of beam</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Beam splitter</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">BS013</td>
			<td style="width:191px;">Forms dual-illumination beam</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Stereo microscope with 1X objective lense</td>
			<td style="width:136px;">Olympus</td>
			<td style="width:393px;">MVX10</td>
			<td style="width:191px;">Used for observation of sample</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">ORCA-Flash4.0 LT sCMOS camera</td>
			<td style="width:136px;">Hamamatsu Photonics</td>
			<td style="width:393px;">C11440-42U</td>
			<td style="width:191px;">Used to capture Images</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Acrylonitrile butadiene styrene (ABS)</td>
			<td style="width:136px;">Stratasys</td>
			<td style="width:393px;">uPrint</td>
			<td style="width:191px;">Material used to 3-D print a sample holder</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Fluorescent polystyrene beads</td>
			<td style="width:136px;">Spherotech Inc</td>
			<td style="width:393px;">PP-05-10</td>
			<td style="width:191px;">Used for imaging system calibration</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Borosilicate glass tubing</td>
			<td style="width:136px;">Corning</td>
			<td style="width:393px;">Pyrex 7740</td>
			<td style="width:191px;">Tubing for sample embedding</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Glycerol</td>
			<td style="width:136px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:393px;">BP229-4</td>
			<td style="width:191px;">Fill for sample chamber</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Phosphate-buffered saline</td>
			<td style="width:136px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:393px;">BP39920</td>
			<td style="width:191px;">Rinse solution for mouse hearts</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:136px;">Electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:393px;">RT-15700</td>
			<td style="width:191px;">First incubation solution</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:247px;">Acrylamide</td>
			<td style="width:136px;">Wako Chemicals</td>
			<td style="width:393px;">AAL-107</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with 2,2&#39;-Azobis dihydrochloride for second incubation solution for mouse hearts</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">2,2&#39;-Azobis dihydrochloride</td>
			<td style="width:136px;">Wako Chemicals</td>
			<td style="width:393px;">VA-044</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with Acrylamide for second incubation solution for mouse hearts</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">Sodium dodecyl sulfate&#160;</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:393px;">71725</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with Boric acid for third incubtion solution for mouse hearts</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">Boric acid</td>
			<td style="width:136px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:393px;">A74-1</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with Sodium dodecyl sulfate for third incubtion solution for mouse hearts</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:247px;">Sigma D2158</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:393px;">D2158</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with PB, Tween-20, and Sodium azide as a refractive index matching solution</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:247px;">Tween-20</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>11332465001</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with Sigma D2158, PB, and Sodium azide as a refractive index matching solution</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">Sodium azide</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td style="width:191px;">Mixed with Sigma D2158, PB, and Tween-20 as a refractive index matching solution</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">Adeno-associated virus vector 9 with a cardiac-specific Troponin T promoter tagged with GFP</td>
			<td style="width:136px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:393px;">VB2045</td>
			<td style="width:191px;">Expresses GFP when bound to ROMK</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">DC Servo Motor Actuator</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">Z825B</td>
			<td style="width:191px;">Used for movement of sample in axial direction within light sheet</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">K-Cube Brushed DC Servo Motor Controller</td>
			<td style="width:136px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:393px;">KDC101</td>
			<td style="width:191px;">Connects to motor actuator and controls movement of the actuator</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:247px;">Amira</td>
			<td style="width:136px;">FEI Software</td>
			<td style="width:393px;">N/A</td>
			<td style="width:191px;">Visualization software for producing 2-D and 3-D images</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-sheet fluorescence microscopy for the study of the murine heart

Microscopia de fluorescência de luz-folha tem sido amplamente utilizada para aquisição de imagem rápida com uma alta resolução axial de micrômetro milímetro escala. Técnicas tradicionais de luz-folha envolvem o uso de um feixe único de iluminação direcionado ortogonalmente no tecido da amostra. Imagens de grandes amostras que são produzidas usando um feixe de iluminação único contêm listras ou artefatos e sofrem uma resolução reduzida devido à dispersão e absorção da luz pelo tecido. Este estudo utiliza um feixe de iluminação dupla face e uma clareza simplificada óptica técnica para o coração de murino de compensação. Estas técnicas permitem mais profunda de imagem removendo lipídios do coração e produzem um grande campo de imagem, maior que 10 x 10 x 10 mm3. Como resultado, esta estratégia permite-nos quantificar as dimensões ventriculares, a linhagem cardíaca de rastrear e localizar a distribuição espacial de proteínas específicas do cardíaco e canais iônicos do pós-natal para corações de rato adulto com contraste suficiente e resolução.

A técnica descrita aqui usado um feixe de iluminação dupla face combinado com uma compensação óptica de amostras de tecido de coração de rato para atingir uma profundidade de imagem mais profunda e um maior volume de imagens com resolução de imagem suficiente (Figura 1). Para calibrar o sistema, grânulos fluorescentes foram colocados dentro de tubos de vidro e dentro do sistema da imagem latente. Os grânulos foram então fotografados e visualizado...

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Light-sheet Fluorescence Microscopy for the Study of the Murine Heart

Este estudo utiliza uma técnica de microscopia (LSFM) de fluorescência de luz-folha de iluminação dupla face combinada com compensação óptica para estudar o coração murino.

Microscopia de fluorescência de luz-folha para o estudo do coração murino

Light-sheet fluorescence microscopy has been widely used for rapid image acquisition with a high axial resolution from micrometer to millimeter scale. ...

A principal vantagem desta tecnologia é que ela permite imagens rápidas do coração do rato. E pode ser usado para observar a presença de canais de ar após a terapia genética. Embora este método possa fornecer insights sobre a cardiologia do desenvolvimento, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como neurologia e pneumologia.Geralmente, os indivíduos vão lutar com essa técnica porque montar uma imagem do coração do rato adulto pode ser difícil, e é diferente de outras técnicas tradicionais, como a microscopia confocal e invertida. Coloque um laser de onda contínuo com três comprimentos de onda de 405 nanômetros, 473 nanômetros e 532 nanômetros. Em seguida, afixe o espelho um e alinhe-o com o plano espelho a 45 graus ao feixe.Isso direcionará o laser para o divisor de raios, que forma a configuração de iluminação de dois lados. Em seguida, passe o feixe através de um filtro de densidade neutra de 50 milímetros de diâmetro, um expansão de feixe, e um furo de pino de 25 milímetros de diâmetro, todos posicionados 150 milímetros um do outro. Passe o feixe através de um divisor de vigas de 50-50, colocado a 150 milímetros do orifício.Em seguida, coloque o espelho de dois 150 milímetros do divisor de feixe, a 90 graus até o feixe dianteiro, e alinhe-o de modo que seu plano espelho esteja em um ângulo de 45 graus para o feixe. Em seguida, coloque o espelho três 100 milímetros do espelho dois, e alinhe-o de modo que seu plano espelho esteja em um ângulo de 45 graus para o feixe refletido a partir do espelho dois. Use este feixe refletido para formar um lado da folha de luz de iluminação dupla.No lado distante do divisor de raios, coloque o espelho cinco para que seu plano espelho esteja a 45 graus do feixe que é emitido em uma direção para a frente. Use o feixe emitido a partir do espelho cinco para formar o segundo lado da folha de luz de iluminação dupla. Em seguida, configure o sistema de iluminação de dois lados de forma sistêmica.Coloque a lente cilíndrica a duas 150 milímetros de distância do espelho três, e outra lente cilíndrica idêntica a 150 milímetros de distância do espelho cinco, do outro lado da configuração de iluminação dupla. Em seguida, coloque dois espelhos, cada um em linha com as lentes cilíndricas, a distâncias de 50 milímetros para refletir o feixe a 90 graus. Em ambos os lados da folha de luz, forme um duplo acrático de um par de lentes, com a primeira lente sendo colocada a 100 milímetros do espelho anterior, e tendo um diâmetro de uma polegada e uma distância focal de 100 milímetros.A segunda lente deve ser colocada a 160 milímetros da lente um, com diâmetro de uma polegada, e uma distância focal de 60 milímetros. Em seguida, coloque os objetivos de iluminação um e dois 150 milímetros dos duplos acromáticos anteriores, de modo que estejam alinhados com a viga. O feixe emitido a partir dos objetivos forma a folha de luz para a imagem das amostras.Primeiro, prepare a amostra de contas fluorescentes diluindo uma solução de contas de 0,53 micrômetros, de um a 150.000, em uma solução de correspondência de índice refrativo pré-aquecido, com uma porcentagem de baixa agarose apontando derretimento. Em seguida, use um pedaço de tubo de vidro borossilicato com um diâmetro interno de 12 milímetros, e um diâmetro externo de 18 milímetros, a um comprimento de 30 milímetros. Pipeta a solução de agarose de contas na tubulação de borossilicato e permite que a agarose solidifique à temperatura ambiente.Agora, encha uma câmara ABS impressa em 3D com uma solução de gylcerol de 99,5%. Coloque a tubulação de vidro borossilicato, contendo as contas, dentro da câmara. Conecte um estágio translacional motorizado 3D à tubulação de vidro borossilicato para controlar o movimento e a orientação da amostra dentro da câmara ABS.Em seguida, use software personalizado projetado para adquirir imagens usando a câmera sCMOS, a uma taxa de 30 quadros por segundo. Usando o controlador do motor, mova a amostra um milímetro na direção lateral e adquira imagens em cada incremento de um milímetro, até que toda a amostra tenha sido imageda. Empilhe as imagens adquiridas usando um software de visualização e meça a função de propagação de pontos do sistema usando essas imagens de contas.Use uma solução de correspondência de índice refrativo, com um pH de 7,5, e dissolva uma por cento da solução correspondente. Coloque uma amostra de coração de rato adulto limpa na solução de correspondência de índices de refração, com uma por cento de agarose dissolvida. Em seguida, insira a amostra em tubos de vidro borossilicato, e permita que a agarose solidifique à temperatura ambiente.Conecte um estágio translacional motorizado em 3D à tubulação de vidro borossilicato para controlar o movimento e a orientação da amostra dentro de uma câmara ABS impressa em 3D. Posicione a amostra de modo que ela esteja no centro do feixe gaussiano, criado pelo sistema de iluminação dupla. Em seguida, defina a taxa de aquisição da câmera sCMOS para 30 quadros por segundo.Agora, usando o controlador do motor, mova a amostra um milímetro na direção axial e adquira imagens a cada incremento de um milímetro. Continue até que toda a amostra tenha sido imagen. Empilhe as imagens adquiridas usando um software de visualização.Desenvolva as imagens 3D usando essas pilhas de imagens. Para isso, desconvolve a função de spread de ponto determinada anteriormente e utilize-a para as pilhas de imagens adquiridas. Finalmente, defina um valor de intensidade limiar de pixel para observar os contornos do coração e adicionar pseudo-cor às imagens, com base nesta intensidade em escala cinza.No primeiro dia pós-natal, pode-se visualizar as válvulas, átrio, ventrículo, músculo pectinado e trabeculação, entre outras características. No sétimo dia pós-natal, as características são ainda mais definidas. O átrio, ventrículo, dimensões da cavidade ventricular e a espessura da parede do ventrículo são todos evidentes.Para estudar a diferenciação de cardiomiócitos dentro do coração, os camundongos heterozigos foram rotulados para mostrar cardiomiócitos. As células rotuladas são mostradas aqui, em cada direção de plano. Os três aviões foram fundidos para criar uma renderização 3D do coração.A região red circulada dentro do inset mostra dois corações de rato translúcidos depois de passar pela técnica de clareza e ser inserido na tubulação de vidro borossilicato. Além de estudar camundongos pós-natal, o sistema de imagem também pode ser usado para estudar o coração do rato adulto. Aqui, os canais ROMK marcados por GFP são mostrados em 7,5 meses.Estes foram encontrados principalmente na parede ventricular. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em um a dois minutos. Ao tentar este procedimento, é importante remover todas as bolhas ao redor da amostra no tubo.Outros métodos, como a auto-segmentação das pilhas de imagens, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais relacionadas a lesões cardiovasculares e regeneração. Após seu desenvolvimento, essa técnica foi utilizada por pesquisadores para estudar a arquitetura cardíaca em estágios de desenvolvimento pós-natal e adultos em camundongos.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Projeto de um biorreator de pressão cíclica para o Ex Vivo Estudo de válvulas cardíacas Aórtica

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Bioengenharia

Patient-specific Modeling of the Heart: Estimation of Ventricular Fiber Orientations

Paciente específico Modelagem do Coração: Estimativa de Orientações de fibra ventriculares

Patient-specific  simulations of heart (dys)function aimed at personalizing cardiac therapy are hampered  by the absence of in vivo imaging technology for ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

Criando Gradientes adesivas e solúvel para a migração celular Imaging com Microscopia de Fluorescência

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Rastreamento em um microscópio de dois fotões Modificação: Uma Aplicação para o rastreamento de vesículas intracelulares

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart

Microscopia de fluorescência de luz-folha para capturar imagens 4-Dimensional dos efeitos de modulação de tensão de cisalhamento sobre o coração em desenvolvimento de Zebrafish

The hemodynamic forces experienced by the heart influence cardiac development, especially trabeculation, which forms a network of branching outgrowths ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Visualizando a formação de adesão em células por meio de avançados girando a reflexão interna Total disco microscopia de fluorescência

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Intra-cardiac Side-Firing Light Catheter for Monitoring Cellular Metabolism using Transmural Absorbance Spectroscopy of Perfused Mammalian Hearts

Cateter de luz de queima lateral intra-cardíaco para monitoramento do metabolismo celular usando espectroscopia de absorvência transmural de corações de mamíferos perfused

Absorbance spectroscopy of cardiac muscle provides non-destructive assessment of cytosolic and mitochondrial oxygenation via myoglobin and cytochrome ...

Biaxial Mechanical Characterizations of Atrioventricular Heart Valves

Biaxial caracterizações mecânicas das válvulas cardíacas Atrioventricular

Extensive biaxial mechanical testing of the atrioventricular heart valve leaflets can be utilized to derive&#160;optimal parameters used in constitutive ...

A Quantitative Fluorescence Microscopy-based Single Liposome Assay for Detecting the Compositional Inhomogeneity Between Individual Liposomes

Um ensaio de liposcopia única baseado em microscopia quantitativa para detectar a inhomogeneidade composicional entre lipossomos individuais

Most research employing liposomes as membrane model systems or drug delivery carriers relies on bulk read-out techniques and thus intrinsically assumes ...

Transplantation of a 3D Bioprinted Patch in a Murine Model of Myocardial Infarction

Transplante de um Patch Bioimpresso 3D em um modelo murino de infarto do miocárdio

Testing regenerative properties of 3D bioprinted cardiac patches in vivo using murine models of heart failure via permanent left anterior descending (LAD) ...