Name: detection of antibodies that neutralize the cellular uptake of enzyme replacement therapies with a cell-based assay
Uploaded: 2018-09-10T13:00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Antibodies That Neutralize the Cellular Uptake of Enzyme Replacement Therapies with a Cell-based Assay at JoVE.com

المؤلفين قد لا إعلامات.

<ol>
	<li>CDER. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assay Development and Validation for Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products (Draft). , (2016).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+design,+optimization,+and+qualification+of+cell-based+assays+used+for+the+detection+of+neutralizing+antibody+responses+elicited+to+biological+therapeutics.">Recommendations for the design, optimization, and qualification of cell-based assays used for the detection of neutralizing antibody responses elicited to biological therapeutics.</a> Journal of Immunological Methods. 321, 1-18 (2007).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+validation+of+cell-based+assays+used+for+the+detection+of+neutralizing+antibody+immune+responses+elicited+against+biological+therapeutics.">Recommendations for the validation of cell-based assays used for the detection of neutralizing antibody immune responses elicited against biological therapeutics.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 55, 878-888 (2011).</li><li>Pedras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAb+me+well-+FDA+Regulatory+Perspectives+on+Neutralizing+Antibody+Assays.">NAb me well- FDA Regulatory Perspectives on Neutralizing Antibody Assays.</a> BEBPA Forum. , (2015).</li><li>Stovold, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAB+Assay+Development+and+Validation+Immunogencity+Workflow.">NAB Assay Development and Validation Immunogencity Workflow.</a> Annual BEBPA Bioassay Meeting. , (2013).</li><li>Kromminga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neutralizing anti-drug antibodies Emerging Trends and Clinical Impact. Symposium. , (2013).</li><li>Davis, R. S., Wang, Y. H., Kubagawa, H., Cooper, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+family+of+Fc+receptor+homologs+with+preferential+B+cell+expression.">Identification of a family of Fc receptor homologs with preferential B cell expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 9772-9777 (2001).</li><li>Melton, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+that+neutralize+cellular+uptake+of+elosulfase+alfa+are+not+associated+with+reduced+efficacy+or+pharmacodynamic+effect+in+individuals+with+Morquio+A+syndrome.">Antibodies that neutralize cellular uptake of elosulfase alfa are not associated with reduced efficacy or pharmacodynamic effect in individuals with Morquio A syndrome.</a> Journal of Immunological Methods. 440, 41-51 (2017).</li><li>U.S. Department of Health and Human Services. Food and Drug Administration. Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidance for Industry. S6 Addendum to Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals. , (2012).</li><li>Lee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biochemical+and+pharmacological+comparison+of+enzyme+replacement+therapies+for+the+glycolipid+storage+disorder+Fabry+disease.">A biochemical and pharmacological comparison of enzyme replacement therapies for the glycolipid storage disorder Fabry disease.</a> Glycobiology. 13, 305-313 (2003).</li><li>Kirkegaard, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapies+and+therapeutic+concepts+for+lysosomal+storage+diseases.">Emerging therapies and therapeutic concepts for lysosomal storage diseases.</a> Expert Opinion on Orphan Drugs. 1, 385-404 (2013).</li><li>Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories. Morbidity and Mortality Weekly Report Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/su6101a1.htm">https://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/su6101a1.htm</a> (2012)</li><li>Invitrogen by ThermoFisher Scientific. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> DynabeadsTM M-270 Streptavidin. , (2015).</li><li>European Medicines Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guideline on Immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins. , (2017).</li><li>ThermoFisher Scientific. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular ProbesTM Alexa FluorTM 647 Protein Labeling Kit (A20173). , (2004).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Introduction+to+Working+in+the+Hood.">An Introduction to Working in the Hood.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>Invitrogen and Gibco. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Culture Basics Handbook. , (2010).</li><li>Coecke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+on+Good+Cell+Culture+Practice.">Guidance on Good Cell Culture Practice.</a> Alternatives to Laboratory Animals. 33, 261-287 (2005).</li><li>. Introduction to Cell Culture Available from: <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/gibco-cell-culture-basics/introduction-to-cell-culture.html">https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/gibco-cell-culture-basics/introduction-to-cell-culture.html</a> (2018)</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Hemacytometer+to+Count+Cells.">Using a Hemacytometer to Count Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>. Counting Cells with Bio-Rad&#39;s TC20(TM) Automated Cell Counter Available from: <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=sDHOL7UEL1M">https://www.youtube.com/watch?v=sDHOL7UEL1M</a> (2012)</li><li>ThermoFisher Scientific. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> User Guide LIVE / DEADTM Fixable Dead Cell Stain Kits. , (2016).</li><li>Biosciences. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Getting Started with BD FACSDiva Software. , (2007).</li><li>Biosciences. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> BD FACS Canto II Instructions For Use. , (2007).</li><li>Quirke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+to+Flow+Cytometry:+A+Learning+Guide.">Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide.</a> Journal of Clinical Pathology. 45 (3), (2002).</li><li>. A guide to gating in flow cytometry Available from: <a target="_blank" href="https://www.bio-rad-antibodies.com/blog/a-guide-to-gating-in-flow-cytometry.html">https://www.bio-rad-antibodies.com/blog/a-guide-to-gating-in-flow-cytometry.html</a> (2016)</li><li>Minor, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Assay Development in Drug Discovery. , (2006).</li><li>Desilva, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Bioanalytical+Method+Validation+of+Ligand-binding+Assays+to+Support+Pharmacokinetic+Assessments+of+Macromolecules.">Recommendations for the Bioanalytical Method Validation of Ligand-binding Assays to Support Pharmacokinetic Assessments of Macromolecules.</a> Pharmaceutical Research. 20, (2003).</li><li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cell-based+and+non-cell-based+assay+platforms+for+the+detection+of+clinically+relevant+anti-drug+neutralizing+antibodies+for+immunogenicity+assessment+of+therapeutic+proteins.">Comparison of cell-based and non-cell-based assay platforms for the detection of clinically relevant anti-drug neutralizing antibodies for immunogenicity assessment of therapeutic proteins.</a> Journal of Immunological Methods. 419, 1-8 (2015).</li><li>Cai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+neutralizing+assay+for+antibodies+and+sera+against+hepatitis+E+virus.">A high-throughput neutralizing assay for antibodies and sera against hepatitis E virus.</a> Scientific Reports. 6, (2016).</li><li>Charles River. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Flow+Cytometric+Method+to+Assess+Neutralizing+Antibodies+to+AAV+Gene-Therapy+Vectors.">A Flow Cytometric Method to Assess Neutralizing Antibodies to AAV Gene-Therapy Vectors.</a> Charles River Researcher. , (2015).</li><li>Waritani, T., Chang, J., McKinney, B., Terato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ELISA+protocol+to+improve+the+accuracy+and+reliability+of+serological+antibody+assays.">An ELISA protocol to improve the accuracy and reliability of serological antibody assays.</a> MethodsX. 4, 153-165 (2017).</li><li>Iversen, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HTS+Assay+Validation.">HTS Assay Validation.</a> Assay Guidance Manual. , 1-30 (2004).</li><li>Thermo Fisher Scientific. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tech Tip #34. Binding characteristics of antibody-binding proteins: Protein A, Protein G, Protein A/G and Protein L. , (2013).</li><li>Long, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+Immunogenicity+of+Elosulfase+Alfa+in+the+Treatment+of+Morquio+A+Syndrome:+Results+From+MOR-005,+a+Phase+III+Extension+Study.">Long-term Immunogenicity of Elosulfase Alfa in the Treatment of Morquio A Syndrome: Results From MOR-005, a Phase III Extension Study.</a> Clinical Therapeutics. 39, (2017).</li><li>Schweighardt, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+of+Elosulfase+Alfa,+an+Enzyme+Replacement+Therapy+in+Patients+with+Morquio+A+Syndrome:+Results+from+MOR-004,+a+Phase+III+Trial.">Immunogenicity of Elosulfase Alfa, an Enzyme Replacement Therapy in Patients with Morquio A Syndrome: Results from MOR-004, a Phase III Trial.</a> Clinical Therapeutics. 37, (2015).</li><li>Mellman, I. R. A., Plutner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internalization+and+Degradation+of+Macrophage+Fc+Receptors+Bound+to+Polyvalent+Immune+Complexes.">Internalization and Degradation of Macrophage Fc Receptors Bound to Polyvalent Immune Complexes.</a> The Journal of Cell Biology. 98, 1170-1177 (1984).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+antibodies+to+the+therapeutic+enzymes:+considerations+for+testing,+prevention+and+treatment.">Neutralizing antibodies to the therapeutic enzymes: considerations for testing, prevention and treatment.</a> Nature Biotechnology. 26, 901-908 (2008).</li></ol>

الكتاب هي الموظفين والمساهمين في شركة الأدوية بيومارين

تحييد الأجسام المضادة أو غيرها من العوامل التي تحول دون استيعاب فريق خبراء الاستعراض من خلال CI M6PR لديها القدرة على التأثير على السلامة أو فعالية الحلقات1. ولذلك، من المهم تقييم ريسوليوت في موضوع العينات باستخدام نموذج قوية ذات صلة بالمخدرات إليه العمل. نحن وآخرون وجدوا أن أداء بعض تنسيقات الحشري (مثلاً، ثنائي مستقبلات، التعبير لوسيفراس، إلخ) لا تتماشى مع توصيات السلطة الصحية لدقة الفحص وإمكانية تكرار نتائج حساسية 29-في أسلوب العينة الموضحة هنا، يعمل خلايا جوركات التي تعبر عن M6PR CI الذاتية لرصد رعايتها محددة لاستيعاب الحلقات الليزوزومية. جنبا إلى جنب مع قراءات تدفق الخلوي، هذا التحليل يستخدم نموذج خلية فيزيولوجية مع دقة التحليل مناسبة وحساسية وإمكانية تكرار نتائج وعينه عالية الإنتاجية. احصل على كشف مع تدفق طبق قراءات الخلوي أيضا إلى دلائل أخرى. على سبيل المثال، قد وضعت أساليب للكشف عن الأجسام المضادة موجودة مسبقاً ضد التهاب الكبد الوبائي ه والفيروسات المرتبطة بالغدة (إف)30،31.
وتشمل الخطوات الحاسمة في البروتوكول تحديد فلوروفوري مناسبة، تتضمن لقك أن مراقبي الاعتداء حساسية، ضمان مستوى كاف من بقاء الخلية، والحفاظ على الالتزام الصارم بأوقات الاحتضان. في المثال المعروض هنا، مترافق fluorophores (مثلأليكسا فلور 488، 647 فلور أليكسا و 5e سايفر)، إلى فريق خبراء الاستعراض الليزوزومية، تباينا في أدائها. واختير أليكسا فلور 647، الذي كان أيضا fluorophore اختبار ألمع32، لمزيد من التحليل في التنمية. نوصي بأن تقييم عدة فلوروفوريس في وقت مبكر في تطوير التحليل لتوفير أفضل حساسية والنطاق الديناميكي. ينبغي رصد حساسية الفحص أثناء اختبار عينة من بينهم لقك التي قريبة من الحد الأقصى حساسية التي ستفشل في % 1 ل تشغيل اختبار1. جنبا إلى جنب مع هقك، لقك أيضا بمثابة ملاءمة نظام مراقبة الجودة لرصد الانجراف المقايسة مع مرور الوقت3. ويتحقق بقاء الخلية الأمثل والأداء بإعداد بنك خلية مختبرين تستخدم مرة واحدة والمؤهلة في المصارف الخلية الجديدة استناداً إلى نتائج مراقبة الجودة قابلة للمقارنة3،18. الخلية وأوقات الاحتضان مترافق fluorophore المخدرات أيضا المركزية لأداء تحليل يتفق نظراً للإقبال على المخدرات يزيد بمقدار الوقت المحتضنة المخدرات مع الخلايا. لتقليل التقلبات اليومية في الإقبال على المخدرات، قد طبعت نموذج البيانات لعينات مراقبة مصفوفة المجمعة في كل لوحة (مثلاً، نقطة قطع عينات التحكم في الأسلوب أعلاه). عامل مهم آخر في إنتاج بيانات متسقة مع هذا الأسلوب هو رصد لوحة التوحيد والتقليل إلى أدنى حد ممكن تأثيرات الحافة. تجربة أولية قد تشمل إجراء الفحص استخدام QC واحدة عبر لوحة كاملة، في حين يجوز إجراء تجارب أكثر قوة خلال فحص التحقق من الصحة (مثلاً، والضبط والدقة)1. وهذا يوضح أهمية تخطيط خريطة لوحة33. كما هو موضح في المثال خريطة لوحة، وضعت عينات مراقبة الجودة على جانبي الشاشة لوحة تماثل التي يمكن تتبعها على مر الزمن مع ليفي--جينينغز المخططات34.
بينما ترصد هذه المقايسة رعايتها وغيرها من العوامل التي قد تعوق امتصاص ERT الليزوزومية، يمكن إجراء المزيد من التجارب لتأكيد تثبيط امتصاص بسبب الأجسام المضادة. خيار واحد هو التعامل مع عينات مع البروتين A/غرام/لتر، الذي يربط الغلوبولين المناعي35غير على وجه التحديد. إذا تواصل عينات اختبار إيجابية بعد البروتين استنفاد A/G/L، قد تكون عوامل مثبطة جسم غير مسؤولة عن إعاقة امتصاص المخدرات. الأسلوب الموصوفة هنا صمم لقياس تثبيط امتصاص جسم بوساطة، ومراقبة إيجابية ومقايسة أخرى المعلمات ينبغي أن يعاد النظر في حالة العثور على نسبة مئوية عالية من عينات هذا الموضوع مع العوامل المثبطة غير جسم.
كما يمكن وصف المقايسة كذلك تثبت يهرب المخدرات المسمى فلوروفوري إلى حجرة الخلوية المناسبة استناداً إلى إليه عمل هذا الدواء. في المثال المعروض هنا، يتوقع فريق خبراء الاستعراض ربط CI-M6PR على سطح الخلية والحركة إلى يحلول. أننا سبق الإبلاغ عن نتائج تجارب عديدة تشير إلى أن ما يقرب من كل إشارة الفلورسنت لوحظت في النتائج الأسلوب من الحلقات المسمى فلوروفوري في يحلول8. ووجدنا أن إشارة المكون المسمى fluorophore ألغى بعد علاج للخلايا مع سيتوتشالاسين ب، الذي يعطل الاستيعاب الداخلي عن طريق تثبيط إعادة التنظيم أكتين. أيضا، التجارب أن تطفئ fluorophore الخارجية مع تريبان الأزرق، أو استيعاب تباطأ بوضع الخلايا في 4 درجات مئوية، تشير إلى أن المكون المسمى fluorophore متغللة بسرعة، والأسفار القليل جداً يرجع إلى فريق خبراء الاستعراض الالتزام على سطح الخلية. وأكد استهداف الليزوزومية تصور التعريب المشارك لصبغ ليسوتراكير حساسة لدرجة الحموضة مع المخدرات مترافق fluorophore استخدام الفحص المجهري [كنفوكل]. تحديد للامتصاص من خلال CI M6PR أيضا من الممكن التحقق من استخدام M6P خارجية للتنافس مع العقاقير المسماة لربط مستقبلات. ينبغي القيام بتجارب مماثلة التحقق من حركية امتصاص والتعريب الخلوية مترافق fluorophore المخدرات في فحوصات أخرى.
وقد استخدمت منصة هذا التحليل يستند إلى الخلية لدراسة رعايتها للعقاقير العلاجية التي تستخدم الالتقام بوساطة مستقبلات CI-M6PR. ونحن مؤخرا أفادت النتائج باستخدام هذه المنصة المقايسة التي أظهرت أي ارتباط بين تنمية كفاءة المخدرات وقبض على الوسولفاسي ألفا36،37. للتحقق من صحة الفحص السريري عينة الاختبار، والمعلمات، بما في ذلك تحليل الحساسية، الدقة، الانتقائية، وخصوصية، التسامح المخدرات، ومتانة، وخفض نقطة، ينبغي تقييم وفقا البصرية الثابتة3، 4-كما تجدر، لتعويض أفرقة خبراء الاستعراض، أنه قد وضع رعايتها التي يمكن أن تتداخل مع نشاط المخدرات من خلال الربط قرب موقع حفاز إنزيم. بشكل عام، ونحن نعتبر رصد هذا النوع من قبض تكون ذات أولوية أدنى نظراً للبيئة الحمضية و proteolytic القاسية يحلول ليست مواتية للمكون من جسم التفاعلات2،،من3940. ومع ذلك، من الممكن أن ريسوليوت proteolytic مقاومة موجودة، وقد تحول دون الجزء الحفاز ل المخدرات40. هذه المقايسة شاشات المسمى فلوروفوري المكون من امتصاص يحلول، ووجود قيود التحليل هو عدم القدرة على رصد proteolytic مقاومة لرعايتها. في حالة الاشتباه في هذا النوع من قبض على أساس السلامة أو فعالية البيانات، ينبغي وضع مقايسة التي تراقب نشاط فريق خبراء الاستعراض والمستخدمة لاختبار عينات.
من المهم تقييم الاستمناع في فهم آثار ريسوليوت على المخدرات سلامة وفعالية. تحديد ريسوليوت قادرة على إعاقة في المختبر المخدرات امتصاص عن طريق CI M6PR يوفر فرصة لفهم النشاط قبض في فيفو. الطريقة المعروضة هنا يستخدم خط خلية بشرية التي تعرب عن CI-M6PR لقياس تدخل مترافق fluorophore الليزوزومية ERT الخلوية الإقبال. وقد استخدمت هذا الأسلوب فعلا لرصد رعايتها لأفرقة خبراء الاستعراض عدة تهدف إلى علاج أمراض التخزين الليزوزومية. قد تنطبق هذه منصة الفحص إلى أساليب أخرى لدراسة آثار رعايتها على العلاجات البيولوجية التي تتطلب من استيعاب خلوية لوظيفتها الصحيحة.

الاستمناع التقييم جزء مهم من سلامة وفعالية رصد البرنامج لأي منتج بيولوجي العلاجية، بما في ذلك أفرقة خبراء الاستعراض. وقد وضع المرضى استجابة مناعية يمكن أن تؤثر تأثيراً مباشرا المخدرات سلامة وفعالية، وملامح الحرائك الدوائية/ميكروبيولوجية. مجموعة فرعية من هذه أدا، يسمى ريسوليوت، قد تحد من فعالية فريق خبراء الاستعراض بطريقتين: عن طريق تثبيط امتصاص الحلقات إلى الخلية المستهدفة، أو عن طريق تثبيط نشاط الحفاز الحلقات. الطريقة المعروضة هنا يهدف إلى قياس رعايتها التي تتداخل مع امتصاص الحلقات في الخلايا. للرصد الكامل لسلامة وكفاءة الفريق العلاجي، الرصد المستمر لرعايتها أمرا حاسما في توضيح أي الارتباطات المحتملة مع النتائج السريرية أو تأثيرات ميكروبيولوجية1.
وتشمل مناهج تقييم رعايتها ضد البروتين المداواة النشاط الأنزيمي، يستند إلى الخلية وفحوصات ملزم يجند1. تحديد منصة الفحص الأمثل استناداً إلى مجموعة متنوعة من المعايير: إليه العمل المنتج العلاجي، وحساسية منصة الفحص، والانتقائية والدقة، والأهم من ذلك، قدرته على تقليد عمل المثبطة يعتقل في فيفو . فحوصات ملزم يجند قد يكون مناسباً في حالات معينة (مثلاً، عندما لا يمكن تحديد خط خلية ذات صلة أو إذا كانت حساسية مناسبة لا يمكن تحقيقه تحليل يستند إلى الخلية). ومع ذلك، تعكس قبض يستند إلى الخلية فحوصات ينصح نظراً لأنها ربما أفضل في 2016 مشروع "توجيهات إدارة الأغذية والعقاقير" للوثيقة الصناعة وأخرى قبلت صناعة أوراق بيضاء، الآلية البيولوجية من المخدرات في فيفو1،2 , 3.
وتشمل المكونات الحاسمة لوضع مقايسة قبض يستند إلى الخلية تدفق الخلوي خط خلية ملائمة التي تستجيب لتحفيز المخدرات، إيجابية-تحكم مركب قبض تحييد فريق خبراء الاستعراض، وفريق خبراء الاستعراض مترافق فلوروفوري، واختبار الأنواع البيولوجية مصفوفة4،،من56. تحديد خط الخلية يعتمد على إليه عمل فريق خبراء الاستعراض وينبغي تقييم خطوط الخلايا متعددة خلال التنمية المقايسة3. في الأسلوب الموصوفة هنا، اختير الخلايا T جوركات البشرية للتعبير عنها CI-M6PR الذاتية على سطح الخلية وعدم وجود جسم يفتت مستقبلات (فكرس) التي تربط دون تمييز منطقة Fc لمعظم الأجسام المضادة7،8 . أثناء تطوير التحليل، من المهم إنشاء عنصر تحكم سلبية لدراسات التحقق من الصحة والمريض عينة الاختبار، مثل المصل التجميعي من الأفراد التي لم تعالج باختبار المادة1. يجب أن نقبل خطوط الخلايا أيضا المصفوفات ذات الصلة من مختلف الأنواع للاستمرارية عبر مراحل التنمية المخدرات1nonclinical والسريرية، ومرحلة ما بعد التسويق. عنصر آخر هو تحديد عنصر تحكم الإيجابية للفحص. تم اختيار عنصر التحكم الإيجابي مقايسة الامتصاص خلية الحلقات استناداً إلى قدرتها على الربط العلاج وتحييد امتصاص عن طريق CI-M6PR9،1. غالباً ما يصعب الحصول على كميات مفيدة أو المستدامة لتحييد أنتيسيرا من البشر لاستخدامه كعنصر تحكم مقايسة، ولا سيما في الأمراض النادرة السكان المريض2. وتشمل البدائل أنتيسيرا من فرط تحصين الحيوانات، أو أجسام [بولكلونل] أو [مونوكلونل] تنقية تقارب ارتفعت إلى المصفوفة ذات الصلة المقايسة1. أثناء استخدام مصفوفة إبلاغها، فمن الممكن أن العوامل المثبطة خلاف الأجسام المضادة الموجودة في المصفوفة قد تحول دون استيعاب فريق خبراء الاستعراض. هو عنصر حاسم آخر في الفحص فريق خبراء الاستعراض مترافق فلوروفوري. وينبغي تقييم اختيار فلوروفوري لتصريف فريق خبراء الاستعراض لكل فريق خبراء الاستعراض، على أساس الحاجة للفحص للسطوع واستقرار الأس الهيدروجيني والتداخل الطيفي المحتملة إلى قنوات أخرى في سيتوميتير تدفق.
الفحص الموصوفة هنا هو مثال لقياس قبض لبروتين علاجي، مثل الحلقات، أن يدخل الخلية عبر كاريتاس الدولية-M6PR. عدة أفرقة خبراء الاستعراض، تهدف إلى علاج أمراض التخزين الليزوزومية (النساء)، واستخدام هذا المسار لامتصاص الخلية واستهداف الليزوزومية، بما في ذلك ألفا الوسولفاسي لمتلازمة A موركويو، ألفا سيرليبوناسي لمرض باتن CLN2، ألفا أجالسيداسي لمرض فابري، و ألفا الجلوكوسيداسي لمرض بومبي10،11. والغرض من هذا الأسلوب هو لقياس المستويات النسبية لرعايتها التي تتداخل مع المخدرات ملزمة واستيعاب عبر كاريتاس الدولية-M6PR. وهذا يتم في الفرز، توكيدي المتدرجة، وعيار الخطوات3. عينات الفحص الأولى لقبض الإيجابية وثم أكدت إيجابية في الخطوة المؤكدة. أخيرا، قد تضعف عينات الشاشة وتأكيد إيجابية متسلسل لتوليد عيار الأجسام المضادة1. ويوفر هذا يستند إلى الخلية التدفق الخلوي المخدرات امتصاص المقايسة طريقة حساسة وذات الصلة ميتشانيستيكالي في المختبر لقياس رعايتها الخاصة بالمخدرات التي قد تؤثر على الشخصية العقاقير الدوائية. نحن قبل التحقق من صحة الأسلوب واختبار العينات السريرية باستخدام هذه المنصة للمخدرات الوسولفاسي ألفا8. هنا يمكننا وصف البروتوكول مفصلة خطوة بخطوة التي يمكن تطبيقها على البروتينات العلاجية الأخرى أو أفرقة خبراء الاستعراض.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter unit, 500 mL vacuum filter flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Bottom 96-well culture plates</td>
			<td>Thermo-Nunclon</td>
			<td>163320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile reagent reservoirs</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>3054-1004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well white round bottom polystyrene microplate plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Polypropylene Tubes, 8-Tube Strips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bead separator tube rack</td>
			<td>V&#38;P Scientific, Inc</td>
			<td>VP 772F2M-1, VP 772F2R-2, VP 772F2R-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DynaMag -2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DynaMag -96 Side Skirted Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD High Throughput Sampler (HTS)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioRad TC20 Automated Cell Counter</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1450103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate Shaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12620-928</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galaxy MiniStar Microcentrifuge</td>
			<td>VWR</td>
			<td>C1413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue culture CO2 incubator</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-4750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>Labcono</td>
			<td>Purifier Cell Logic +</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jurkat Cell Line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>TIB152&#8482;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Protein Labeling Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A20173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads M270 Streptavidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>65306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-Link NHS-LC-LC-Biotin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 1X Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A10491-01-500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-Strep (100X) liquid formulation</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X DPBS without calcium and magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Para-formaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>15735-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1379-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled human matrix (e.g. human serum or cerebrospinal fluid)</td>
			<td>Bioreclamation IVT</td>
			<td>request a quote from website</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Polyester Plate Film</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seal &#38; Sample Aluminum Foil</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>538619</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of antibodies that neutralize the cellular uptake of enzyme replacement therapies with a cell-based assay

إدارة العلاج البديلة إنزيم (أفرقة خبراء الاستعراض)، والعلاجات البيولوجية الأخرى للمرضى الذين قد تثير استجابة مناعية لمكافحة المخدرات. توصيف هذه الأجسام المضادة لمكافحة المخدرات (ADA)، لا سيما تلك التي يمكن تحييد النشاط البيولوجي للمخدرات، ووصف تحييد الأجسام المضادة (رعايتها)، أمر حاسم في فهم آثار هذه الأجسام المضادة على الدواء الشخصية الدوائي. هذا البروتوكول وصف أسلوب يستند إلى الخلية تدفق الخلوي للكشف عن العوامل التي تحييد استيعاب الخلوية لفريق خبراء الاستعراض الليزوزومية ممثلة في مصفوفة البشرية. البروتوكول يتكون من ثلاثة إجراءات: الفرز، خطوة توكيدي، وعيار فحوصات للكشف عن، تحديد، وإنشاء المستوى النسبي لتحييد عيار الأجسام المضادة في موضوع العينات.
في هذا الأسلوب، عينات أولاً مختلطة مع المنتج الحلقات مترافق فلوروفوري، ثم المحتضنة مع خلايا [مثلاً، الإنسان تي اللمفاويات (الخلايا جوركات)] التي تعبر عن مستقبلات سطح الخلية المستقلة الموجبة يطلق 6-فوسفات (CI-M6PR)، و وأخيراً، حلل مع سيتوميتير تدفق. سيؤدي إلى عينة دون رعايتها على الإقبال مترافق fluorophore المكون من المنتج عن طريق CI-M6PR، في حين وجود رعايتها سوف ربط إلى المخدرات وتتداخل مع ربط CI-M6PR وامتصاص. مقدار استيعاب خلايا جوركات فريق خبراء الاستعراض مترافق fluorophore يقاس بالتدفق الخلوي وتقييمها كاستجابة الحصول على حضور مصفوفة السذاجة المخدرات ممثل بالمقارنة مع تثبيط إشارة النسبة المئوية (%). في الخطوة المؤكدة، العينات المحتضنة مسبقاً مع الخرز المغناطيسي مترافق فريق خبراء الاستعراض أن تستنفد العوامل الخاصة بالمخدرات التي تربط بالمخدرات (مثل ريسوليوت) قبل حضانة مع الخلايا. ثم هي تضعف عينات الشاشة وتأكيد الإيجابية لرعايتها الخاصة بالمخدرات في المقايسة متسلسل لتوليد عيار الأجسام المضادة. قد يرتبط التتر جسم شبه كمي بقياسات للمخدرات سلامة وفعالية.

في اليوم الأول من الأسلوب، مذاب قاسمة مجمدة من الخلايا جوركات ومطلي، وتم إعداد عينات الاختبار. ويبين الشكل 1 مخطط لوحة مثال. اليوم الثاني، كانت مختلطة مع الخلايا جوركات العينات والمحتضنة في 37 درجة مئوية لحوالي 3 ساعات و 15 دقيقة. الخلايا ثم غسلها، والثابتة مع منهاج عمل بيجين، وحلل في سيتوميتير تدفق. ويبين الشكل 2 مثالاً تدفق إعدادات سيتوميتير.
التدفق الخلوي النابضة استراتيجية صممت لقياس كمية المخدرات مترافق fluorophore في العيش وحيد جوركات الخلايا24 (الشكل 3). تم فصل الخلايا من بين الأنقاض عن طريق رسم بوابة التي تستثني الحطام الخلوية [منخفضة عادة، إلى الأمام مبعثر (FSC)] والخلايا الميتة [عادة، الجانب عالية مبعثر (SSC)]، ترك الخلايا الحية فقط لتحليل25. ثم تم فصل الخلايا المفردة من مجموعات الخلايا عن طريق رسم بوابة التي تستثني منطقة منتدى التعاون الأمني عالية ومنخفضة الارتفاع، منتدى التعاون الأمني26. الخلايا تعامل مع وصمة عار جدوى التي وصفت أي خلايا ميتة أو غير صحية دون غشاء سليمة، وتم إنشاء بوابة إضافية لاستبعاد الخلايا الميتة22. مؤسسة مونتانيار للخلايا الحية واحدة استخدمت للتحليل لاستيعاب الحلقات مترافق فلوروفوري. كمثال على إمكانية فحص نتائج الفحص، أعاق المصفوفة ارتفعت بنسبة عالية من مركب الأجسام المضادة لمكافحة المخدرات إيجابية تحكم [مثلمراقبة جودة عالية (هقك)] امتصاص الحلقات مترافق فلوروفوري، أدى مؤسسة مونتانيار منخفضة من حوالي 300 (الشكل 3). على النقيض من ذلك، ينبغي أن يكون للخلايا المحتضنة مع المصفوفة في غياب جسم التحكم الإيجابي مؤسسة مونتانيار أعلى (مؤسسة مونتانيار = 37,830 في الشكل 3)، مما يدل على الإقبال على فريق خبراء الاستعراض مترافق فلوروفوري.
تحييد جسم السيطرة الإيجابية على سبيل المثال هنا اختيرت استناداً إليه العمل من المخدرات (أي، استيعاب فريق خبراء الاستعراض من خلال كاريتاس الدولية-M6PR). كان فريق فلوروفوريس أيضا اختبار ومقارنة لحساسية الفحص الأمثل والنطاق الديناميكي1. تم اختبار 5e سايفر سبب به الأسفار زيادة في درجة حموضة حمضية، التي قد تكون ذات صلة ببعض أفرقة خبراء الاستعراض كتدبير إضافي لاستهداف الليزوزومية من المخدرات27. ودرست أيضا صبغة فلورسنت خضراء (مثل أليكسا فلور 488)، وصبغة فلورسنت استعملنا (مثلاً، أليكسا فلور 647). مثال على فلوروفوريس كيف مختلفة قد تؤدي ويرد في الشكل 4a و 4b. في المثال، كان "الفريق 647 فلور أليكسا" أداء أفضل نظراً لحساسية فائقة (مثلاً، % أعلى SI في أدنى تركيز PC) ودينامية واسعة النطاق (~ 3 من حيث الحجم).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57777/57777fig4v2.jpg"> الشكل 4: مثال ينتج من يصرف الحلقات فلوروفوري مختلفة- (أ) أثناء تطوير التحليل، ينبغي تقييم منحنى تخفيف الرقابة إيجابية (PC) باستخدام مختلف أفرقة خبراء الاستعراض مترافق fluorophore. في المثال الموضح هنا، أفرقة مترافق fluorophore اثنين (5e أليكسا فلور 488 وسايفر) في 6.25 ميكروغرام/مل وأكثر إشراقا الحلقات fluorophore مترافق (أليكسا فلور 647) في 1.56 ميكروغرام/مل تم اختبار حضور التركيزات المتزايدة لرعايتها مراقبة إيجابية. (ب) هذا الفريق يظهر المنحنيات من الفريق رسوم بيانية، استخدام مؤسسة مونتانيار لإظهار الزيادة الكبيرة في النطاق الديناميكي باستخدام فريق خبراء الاستعراض مترافق 647 فلور أليكسا. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57777/57777fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
الأسلوب الموصوفة نهج متسلسل لاكتشاف وتأكيد، والتحريف على مستوى شبه كمي لقبض عيار3. إنشاء المقايسة على استعداد للتحقق من المعلمات بما في ذلك تحليل الحساسية، الدقة، الانتقائية، وخصوصية، التسامح المخدرات، ومتانة، وينبغي أن تقيم نقاط قطع وفقا للمنشأة البصرية1،3 .
واعتبرت عينات إيجابية محتملة في هذا التحليل عندما تم الحصول على قيم % SI أكبر من العرض قطع نقطة (SCP). حددت اللجنة الدائمة كان إحصائيا باختبار عينات المخدرات-ساذجة من سكان تمثيلاً وقياس انخفاض نسبي في إشارة كثافة (SI)3. التوجيه (على سبيل المثال من إدارة الأغذية والعقاقير) توصي بأن يتم تأسيس اللجنة الدائمة المئويال 95 لمجموعة البيانات الموزعة عادة، وأساليب لحساب اللجنة الدائمة منذ1ووصف بالتفصيل في مكان آخر. أي عينة أن تناقص إشارة المقايسة (تقاس كزيادة في النسبة المئوية SI) عند أو فوق اللجنة الدائمة أنها عاقدة العزم على أن تكون إيجابية محتملة، وعينات مع نتائج أعلى من اللجنة الدائمة (بدون تغيير أو نقصان في % SI) تعتبر سلبية.
تم اختبار العينات التي فحصها إيجابية (% SI أعلاه اللجنة الدائمة) في مقايسة المؤكدة لتحديد الطابع الخاص لرعايتها لفريق خبراء الاستعراض. وكان يؤديها المقايسة توكيدي قبل حضانة العينات مع الحلقات مترافق الخرز المغناطيسي لإزالة الأجسام المضادة الخاصة بالمخدرات أو العوامل المثبطة. تم تقييم الاختطار النسبي (نسبة لمؤسسة مونتانيار المؤكدة لفحص مؤسسة مونتانيار) لتحديد عدد ريسوليوت إزالة من العينة. RR أعلى من عتبة المحسوبة الإيجابية [أينقطة قطع توكيدي (CCP)] يدل على وجود رعايتها لمكافحة المخدرات. كما هو الحال في الفحص الفحص، ينبغي إنشاء الحزب الشيوعي الصيني أولاً بتقييم المعاملة السذاجة عينات من سكان ممثلة في مقايسة توكيدي. الحزب الشيوعي الصيني كان استناداً إلى معدل إيجابية كاذبة 1% تصميماً إحصائيا وتم تعيين العتبة مؤكدة إيجابية عينة (الشكل 5)3.
عينات فحص وأكد إيجابية متسلسل المخفف واختبارها في مقايسة عيار لتحديد المستوى النسبي أو عيار لرعايتها في كل عينة. هو إضعاف أعلى الذي عينة اختبارات إيجابية عندما اجتازت عتبة معينة [مثلاً عيار قطع نقطة (TCP)]1،عيار (الشكل 5) عينة3.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57777/57777fig5.jpg"> الشكل 5: مثال على نموذج اختبار النتائج. هذه اللوحات إظهار أمثلة العينات التي اختبرت إيجابية أو سلبية بالفرز أما أعلى أو أسفل الاستهلاك والإنتاج المستدامين من 17.51% SI. ثم اختبار عينات في مقايسة توكيدي استخدام المخدرات مترافق الخرز المغناطيسي إلى استنزاف الأضداد الخاصة بالمخدرات من العينات قبل الاختبار في مقايسة إيجابية. عينات بمعدل استرداد (RR) أكبر من نقطة قطع توكيدي (أي، اختطار نسبي = 1.315) اعتبرت أن يتم تأكيد إيجابية. كانت تضعف العينات التي أكدت إيجابية حتى الإشارة عبرت عيار قطع نقطة (TCP) لإنشاء قطع عيار (عامل إضعاف) الذي يساوي نتيجة عينة عيار نقطة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57777/57777fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
تم اختبار التكرار المقايسة وتقلبه على مدى عدة أيام، ومع محلل واحد أو أكثر. وكانت جمعية قطر الخيرية استعداد في دفعة واحدة في البداية والكوتيد في لاستخدام 1 x. على مدى 3 (د)، يقوم المحللون اثنين المقايسة مع عدة مجموعات من جمعية قطر الخيرية لإثبات دقة التحليل. في المثال البيانات المبينة، % السيرة الذاتية لدقة المقايسة بين وداخل جمعية قطر الخيرية أقل من التوصية بتوجيه إدارة الأغذية والعقاقير % السيرة الذاتية < 20% (الشكل 6)1.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57777/57777fig6.jpg"> رقم 6: مثال لمراقبة الجودة دقة البيانات التي تم إنشاؤها على مدى ثلاثة أيام مع اثنين من محللي. حسبت دقة البيانات بتحليل تباين (ANOVA) باستخدام الصيغة المعروضة في ديسيلفا et al. 28-ترد دفعة داخل (داخل يعمل) وإحصاءات دفعة بين الوكالات (بين تشغيلات) ك % عام <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57777/57777fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Antibodies That Neutralize the Cellular Uptake of Enzyme Replacement Therapies with a Cell-based Assay at JoVE.com

Detection of Antibodies That Neutralize the Cellular Uptake of Enzyme Replacement Therapies with a Cell-based Assay

نقدم هنا أسلوب يستند إلى الخلية تدفق الخلوي للكشف عن الأجسام المضادة لتحييد أو غيرها من العوامل التي تتداخل مع امتصاص الخلوية لأنزيم استبدال العلاجات في مصفوفة بشرية، مثل السائل الدماغي النخاعي (CSF) أو مصل الدم البشري.

الكشف عن الأجسام المضادة التي تحييد استيعاب الخلوية لأنزيم استبدال العلاجات مع تحليل يستند إلى الخلية

The administration of enzyme replacement therapies (ERTs) and other biologic therapies to patients may elicit an anti-drug immune response. The ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

انزيم مرتبط Immunospot الفحص (ELISPOT) : القياس الكمي للردود TH - 1 المناعة الخلوية ضد مولدات المضادات الجرثومية

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) Enzyme

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 Ehmeth Enzyme

الفحص في المختبر مثلأيشن الحمض الريبي النووي النقال مع الحمض النووي للنسج المتحولة والحمض الريبي النووي النقال Dnmt2 Methyltransferase (Ehmeth) انزيم

Protozoan parasites are among the most devastating infectious agents of humans responsible for a variety of diseases including amebiasis, which is one of ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

نوع التحاليل الكمية للجميع الأنفلونزا من Hemagglutinins الفيروسية وNeuraminidases باستخدام الاجسام المضادة العالمي في فتحة بسيطة فحوصات لطخة

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assays for the Species-specific Detection of Eimeria that Infect Chickens

Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assays for the Species-specific Detection of Eimeria that Infect Chickens

متساوي التضخيم (LAMP) فحوصات بوساطة حلقة للكشف عن أنواع محددة من<em&gt; الأيمرية</em&gt; التي تصيب الدجاج

Eimeria species parasites, protozoa which cause the enteric disease coccidiosis, pose a serious threat to the production and welfare of chickens. In the ...

Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus

المناعي لمراقبة الخلوية امتصاص اللاكتوفيرين الإنسان ولها نشاط مضاد للفيروسات أسوشيتد ضد فيروس التهاب الكبد الوبائي C

Immunofluorescence is a laboratory technique commonly used to study many aspects of biology. It is typically used to visualize the distribution and/or ...

Purification of Viral DNA for the Identification of Associated Viral and Cellular Proteins

تنقية الحمض النووي الفيروسي للتعرف على البروتينات الفيروسية والخلوية المرتبطة بها

The goal of this protocol is to isolate herpes simplex virus type 1 (HSV-1) DNA from infected cells for the identification of associated viral and ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

تصوير بكتريا السل في الفئران مع "مراسل إنزيم الأسفار"

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

وصف الاستجابات ايستب الغلوبولين المناعي تعتمد على الغدة الصعترية، والغدة الصعترية مستقلة في الفئران باستخدام مقايسة الممتز المرتبط بالانزيم

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

منصة الفائق لفحص السالمونيلا spp./دوسنتاريا spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Dynamic Adhesion Assay for the Functional Analysis of Anti-adhesion Therapies in Inflammatory Bowel Disease

والرزن التصاق الديناميكي للتحليل الوظيفي من العلاجات المضادة الالتصاق في مرض التهاب الأمعاء

Gut homing of immune cells is important for the pathogenesis of inflammatory bowel diseases (IBD). Integrin-dependent cell adhesion to addressins is a ...