Name: ovarian tissue culture to visualize phenomena in mouse ovary
Uploaded: 2018-06-19T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary at JoVE.com

Мы благодарим д-р Naojiro Minami (Университет Киото) за предоставление Oog1pro3.9 мышей. Это исследование было поддержано Nitto фонда и JSP-страницы (KAKENHI # JP15H06275).

Мышей были размещены в экологически контролируемой комнате в 23 ±1 ° C с 12 h свет/12 h темные циклом. Уход за животными протоколы и эксперименты были проведены в соответствии с руководящими принципами для экспериментов животных медицинского университета Айти и были одобрены действующий Ко...

<ol>
	<li>Myers, M., Britt, K. L., Wreford, N. G., Ebling, F. J., Kerr, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+quantifying+follicular+numbers+within+the+mouse+ovary.">Methods for quantifying follicular numbers within the mouse ovary.</a> Reproduction. 127 (5), 569-580 (2004).</li><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle.">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li><li>Palma, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+biotechnology+of+follicle+development.">Biology and biotechnology of follicle development.</a> Sci World J. , (2012).</li><li>Knight, P. G., Glister, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+superfamily+members+and+ovarian+follicle+development.">TGF-beta superfamily members and ovarian follicle development.</a> Reproduction. 132 (2), 191-206 (2006).</li><li>Picton, H. M., Harris, S. E., Muruvi, W., Chambers, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+growth+and+maturation+of+follicles.">The in vitro growth and maturation of follicles.</a> Reproduction. 136 (6), 703-715 (2008).</li><li>Spears, N., de Bruin, J. P., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+establishment+of+follicular+dominance+in+co-cultured+mouse+ovarian+follicles.">The establishment of follicular dominance in co-cultured mouse ovarian follicles.</a> J Reprod Fertil. 106 (1), 1-6 (1996).</li><li>Baker, S. J., Srsen, V., Lapping, R., Spears, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effect+of+follicle-follicle+interactions+and+declining+follicle-stimulating+hormone+on+murine+follicle+health+in+vitro.">Combined effect of follicle-follicle interactions and declining follicle-stimulating hormone on murine follicle health in vitro.</a> Biol Reprod. 65 (4), 1304-1310 (2001).</li><li>Komatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Effect+of+Leukemia+Inhibitory+Factor+on+Follicular+Growth+in+Cultured+Murine+Ovarian+Tissue.">Analysis of the Effect of Leukemia Inhibitory Factor on Follicular Growth in Cultured Murine Ovarian Tissue.</a> Biol Reprod. 93 (1), 18 (2015).</li><li>Komatsu, K., Masubuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+concentration-dependent+effect+of+progesterone+on+follicle+growth+in+the+mouse+ovary.">The concentration-dependent effect of progesterone on follicle growth in the mouse ovary.</a> J Reprod Dev. 63 (3), 271-277 (2017).</li><li>Murase, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+dynamics:+visualization+and+analysis+of+follicle+growth+and+maturation+using+murine+ovarian+tissue+culture.">Follicle dynamics: visualization and analysis of follicle growth and maturation using murine ovarian tissue culture.</a> J Assist Reprod Genet. , 1-5 (2017).</li><li>Ishida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+promoter+of+the+oocyte-specific+gene,+Oog1,+functions+in+both+male+and+female+meiotic+germ+cells+in+transgenic+mice.">The promoter of the oocyte-specific gene, Oog1, functions in both male and female meiotic germ cells in transgenic mice.</a> PLoS One. 8 (7), 68686 (2013).</li><li>Minami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesin+is+a+novel+mouse+protein+expressed+in+oocytes+and+early+cleavage-stage+embryos.">Oogenesin is a novel mouse protein expressed in oocytes and early cleavage-stage embryos.</a> Biol Reprod. 69 (5), 1736-1742 (2003).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+factor-9+stimulates+progression+of+early+primary+but+not+primordial+rat+ovarian+follicle+development.">Growth and differentiation factor-9 stimulates progression of early primary but not primordial rat ovarian follicle development.</a> Biol Reprod. 67 (3), 1018-1024 (2002).</li><li>Nilsson, E. E., Kezele, P., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia+inhibitory+factor+(LIF)+promotes+the+primordial+to+primary+follicle+transition+in+rat+ovaries.">Leukemia inhibitory factor (LIF) promotes the primordial to primary follicle transition in rat ovaries.</a> Mol Cell Endocrinol. 188 (1-2), 65-73 (2002).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-4+acts+as+an+ovarian+follicle+survival+factor+and+promotes+primordial+follicle+development.">Bone morphogenetic protein-4 acts as an ovarian follicle survival factor and promotes primordial follicle development.</a> Biol Reprod. 69 (4), 1265-1272 (2003).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kit+ligand+and+basic+fibroblast+growth+factor+interactions+in+the+induction+of+ovarian+primordial+to+primary+follicle+transition.">Kit ligand and basic fibroblast growth factor interactions in the induction of ovarian primordial to primary follicle transition.</a> Mol Cell Endocrinol. 214 (1-2), 19-25 (2004).</li><li>Abe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditional+reporter+mouse+lines+at+ROSA26+locus+for+live+cell+imaging.">Establishment of conditional reporter mouse lines at ROSA26 locus for live cell imaging.</a> Genesis. 49 (7), 579-590 (2011).</li><li>Lan, Z. J., Xu, X., Cooney, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+oocyte-specific+expression+of+Cre+recombinase+activity+in+GDF-9-iCre,+Zp3cre,+and+Msx2Cre+transgenic+mice.">Differential oocyte-specific expression of Cre recombinase activity in GDF-9-iCre, Zp3cre, and Msx2Cre transgenic mice.</a> Biol Reprod. 71 (5), 1469-1474 (2004).</li><li>Payer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+stella-GFP+transgenic+mice:+a+novel+tool+to+study+germ+cell+development.">Generation of stella-GFP transgenic mice: a novel tool to study germ cell development.</a> Genesis. 44 (2), 75-83 (2006).</li><li>Ohinata, Y., Sano, M., Shigeta, M., Yamanaka, K., Saitou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive,+non-invasive+visualization+of+primordial+germ+cell+development+in+mice+by+the+Prdm1-mVenus+and+Dppa3-ECFP+double+transgenic+reporter.">A comprehensive, non-invasive visualization of primordial germ cell development in mice by the Prdm1-mVenus and Dppa3-ECFP double transgenic reporter.</a> Reproduction. 136 (4), 503-514 (2008).</li></ol>

В этом исследовании мы разработали две новые методы для изучения развития фолликулов в яичниках мыши. Первый метод предполагает культуры тканей нарезанный яичников взрослых мышей, следуют анализ развития фолликула, а вторая включает в себя использование покадровой imaging для визуализа?...

Женщины мыши яичники содержат несколько тысяч фолликулов1, и периодические овуляции созревает примерно десять яйцеклеток на каждый цикл эструса. Фолликулов, подразделяются на несколько стадий развития: Братство пресвитериан, начальное, среднее, полостная и Graafian фолликулов, в зависимости от формы гранулезы сотовой слоя, окружающих каждый ооцитов. Большинство первичных фолликулов неактивны, и некоторые из них активизируются и превращаются в первичных фолликулов на каждый цикл эструса2. После этапа вторичных фолликулов развития фолликула регулируется главным образом гонадотропинов, фолликулярная стимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ). Однако изначальное и первичных фолликулов развития независимо от гонадотропина, и регулятивных механизмов, которые регулируют эти этапы остаются плохо inderstood3,4,5. Помимо факторов роста и гормонов изначальное и первичных фолликулов регулируется взаимодействием фолликулов6,7. Таким образом мы выступали анализ динамики фолликула в мыши тканей яичника и расследование связанных регулирующих механизмов, с помощью яичников культур тканей8,9,10.
Здесь мы представляем два методы модели яичников культуры ткани. Первый используется для анализа развития фолликула путем измерения фолликулярной областей, а вторая используется для изучения механизм регулирования во время раннего развития фолликула от изначального вторичных фолликулов сцену с трансгенных мышей. Для анализа развития фолликула мы главным образом используется яичников 4 - неделя старый самок мышей, потому что они позволяют легко визуализации фолликулов. Чтобы побудить периодических овуляции и модели в естественных условиях развития фолликула, мы воспроизводится LH всплеск и наблюдаемых овуляции, атрезии фолликулов и секрецию эстрадиола в условиях культуры ткани. Образы культивировали яичников были захвачены, и отслеживания изменений в области фолликулярной были проанализированы процессы развития фолликула. Однако в светлых местах микроскопии анализа, неясным различие между изначальным и начале первичных фолликулов. Таким образом, мы разработали метод для обнаружения малых фолликулов и различие между изначального, первичной, и вторичных фолликулов в культивированный яичников тканей с помощью Oogenesin1 (Oog1) pro3. 9 и яичников трансгенных мышей R26-H2B-mCherry дней 0 и 4 после рождения11. Oog1 выражение, обнаруживаемая в яйцеклеток после вступления в мейоз и постепенно увеличивается с развития фолликула, позволяя наблюдения за переход от изначального первичных фолликулов с помощью промежуток времени изображения культивировали завязи ткани11 ,12. Хотя Морфологические методы были использованы для изучения факторов, которые активируют изначальное спящих фолликулов13,14,,1516, является развитие физиологической фолликулов в яичниках трудно обнаружить, и воздействия различных факторов остаются uncharacterized. Нынешние методы культуры были разработаны для устранения этого недостатка в реальном времени анализ целевых факторов.
В настоящем исследовании мы отслеживаются фолликулярной развития методом покадровой изображений и охарактеризовал процесс развития фолликула. Наши новые методы предлагают беспрецедентный инструмент для изучения физиологии яичников.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1176px;" width="1175">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Follicle stimulating hormone from human pituitary</td>
			<td style="width:224px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">F4021</td>
			<td style="width:451px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lutenizing hormone from equine pituitary</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>L9773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-streptomycin solution</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td>168-23191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM a, GlutaMax, no nucleotides</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>32561037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-0-10-C</td>
			<td>35mm dish, No. 0 coverslip, 10mm glass diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millicell cell culture insert</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>Diameter: 315 mm, pore size: 0.4 mm, material: hydrophilic PTTE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">3.5cm cell culture dishes</td>
			<td style="width:224px;">greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">50ml / centrifuge tube with triple seal cap</td>
			<td style="width:224px;">IWAKI</td>
			<td style="width:119px;">2345-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Low-profile disposable blades 819</td>
			<td style="width:224px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14035838925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM 710</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellVoyager, CV1000</td>
			<td>Yokogawa Electric Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Time-lapse imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BZ-X700</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Time-lapse imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ovarian tissue culture to visualize phenomena in mouse ovary

Периодически млекопитающих женщины овуляция почти постоянное количество яйцеклеток во время каждого цикла эструса. Для поддержания таких регулярность и периодичности, регулирование происходит на уровне гипоталамо гипофизарно гонадной оси и на развитии фолликулов в яичниках. Несмотря на активные исследования механизмы развития фолликула не ясны из-за нескольких этапов от активации неактивных первичных фолликулов к овуляции и из-за сложности правил, который отличается на каждом этапе фолликулярной. Для изучения механизмов развития фолликула и динамика фолликулов на протяжении всего цикла эструса, мы разработали модель яичника культуры ткани мыши, который может быть использован для наблюдения развития фолликула с помощью микроскопа. Разработки систематической фолликула, периодических овуляции и атрезии фолликулов могут быть воспроизведены в модели искусственного яичника, и в условиях культуры можно модулировать экспериментально. Здесь мы продемонстрировать полезность этого метода в изучении механизмов регулирования развития фолликула и других явлений, яичников.

Рисунок 1 показывает протокол о внесении изменений в средствах массовой информации во время яичников культуры ткани. После этой программы, ICR 4 week-old мышей яичники были культивировали и образы интервалы 24-h, с помощью конфокальной микроскопии (<strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary at JoVE.com

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Яичников культуры ткани для визуализации явлений в яичнике мыши

Яичников культур тканей могут использоваться в качестве модели развития, овуляции и фолликул атрезии фолликулов и указать механизмы регулирования динамических процессов, яичников.

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Культура и Co-Культура мыши яичников и фолликулов в яичниках

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Экс Utero электропорации и Органотипической фрагмент Культура мыши ткани гиппокампа

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Убыт- и Gain-оф-функции подход к расследованию Early Cell Судьба определителям предимплантационной эмбрионов мыши

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Новая методика трансплантации молочной жировой ткани для визуализации образования сосудов сосудистых эндотелиальных стволовых клеток

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Живая визуализация мышей

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Методы визуализации внутриклеточного рН линии фолликула стволовых клеток в живых тканей яичника дрозофилы

Changes in intracellular pH (pHi) play important roles in the regulation of many cellular functions, including metabolism, proliferation, and ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

На основе RANKL остеокластов культуры Assay из мыши костного расследовать роль mTORC1 в формировании остеокластов

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Ортотопическая яичников трансплантации процедуры расследования продолжительность жизни и здоровья влияние яичников старение в самок мышей

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenic мыши модель для изучения синдром поликистозных яичников

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Оценка окислительного повреждения в первичной мыши глазной поверхностных клеток / стволовых клеток в ответ на ультрафиолет-C (UV-C) Ущерб

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...