Name: purification and reconstitution of trpv1 for spectroscopic analysis
Uploaded: 2018-07-03T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis at JoVE.com

ونحن ممتنون جداً للدكتور مشورب H. لتوفير الوصول إلى مطيافات الجيش الشعبي الثوري والغزلان والدكتور ت. روزنباوم لتوفير بلازميد TRPV1 سيستين-أقل طول كامل.

1-TRPV1 الطفرات
ملاحظة: بنيت بناء TRPV1 الحد أدنى لتحليل spectroscopic26 من قناة سيستين-أقل طول TRPV127 استخدام الأسلوب بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (PCR) (الشكل 1). هذا البناء TRPV1 الحد الأدنى أقل سيستين (يشار إلى eTRPV1 الآخرة) يتكون من بقايا 110-603 و 627-764. تم ...

التكنولوجيات الحالية للتعبير وتنقية البروتينات الغشاء الثدييات جعلت من الممكن الحصول على كميات كافية من البروتين للدراسات الطيفية14،15،،من1642. هنا، نحن قد تكيفت هذه التكنولوجيات التعبير عن تنقية وإعادة تشكيل، وإجراء ت...

مع التطورات الحديثة في البرد الجسيمات أحادية الإلكترون مجهرية (cryo-م)، تم الحصول على هياكل قناة أيون الثدييات بمعدل غير عادي. وخاصة الدراسات الهيكلية لطالبات أيون قنوات، مثل فانيلويد المحتملة مستقبلات عابر 1 (TRPV1)، قد وفرت كذلك التفاهم على تفعيل آليات1،2،3، 4 , 5-المعلومات الحيوية حول قنوات أيون جزءا لا يتجزأ من بيئة غشاء غير المطلوبة لفهم آليات النابضة والمخدرات-ملزمة بها طالبات.
قدمت الإلكترون الرنين باراماجنيتيك (EPR) والكترون إلكترون مزدوجة الرنين (الغزلان) سبيكتروسكوبيس بعض النماذج آليا إلى نهائي آخر لايون قنوات6،7،،من89 , 10 , 11 , 12 , 13-هذه النهج اقتصرت أساسا على دراسة بدائية وأيون أرتشيال القنوات التي تسفر عن كمية كبيرة من المنظفات تنقية البروتينات عند أوفيريكسبريسيد في البكتيريا. مع تطور إنتاج البروتينات الغشاء حقيقية النواة في خلايا الثدييات للتوصيف الوظيفي والهيكلي14،،من1516والحشرات، من الممكن الآن الحصول على الكيمياء الحيوية كميات من المنظفات تنقية البروتينات للدراسات الطيفية.
تنشأ إشارات الجيش الشعبي الثوري والغزلان من تسمية باراماجنيتيكسبين (SL) (أي، ميثانيثيوسولفوناتي) يعلق على بقايا واحد-سيستين في البروتين. زيادة ونقصان-التسميات التقرير ثلاثة أنواع من المعلومات الهيكلية: الحركة، ووصول، والمسافات. تسمح هذه المعلومات في تحديد ما إذا كانت بقايا مدفونة داخل البروتين، أو يتعرضون للغشاء أو البيئة المائية في الاشتقاق والدول المتجهة يجند13،17،،من1819. في سياق بنية عالية الدقة (عند توفرها)، توفر بيانات الجيش الشعبي الثوري والغزلان مجموعة من القيود لاشتقاق نماذج ديناميكية في بيئتها الأصلية بينما رصد انتقال النابضة عكسها (أي، مغلقة ومفتوحة، توعية، والمتفجرات). وعلاوة على ذلك، يمكن الحصول على مرونة المناطق التي قد يكون من الصعب تحديد من البلورات بالأشعة السينية أو البرد-م باستخدام مجموعات البيانات البيئية هذه لتعيين الهياكل الثانوية، فضلا عن موقع داخل البروتين20. Cryo-م الهياكل التي تم الحصول عليها في دهن نانوديسكس توفر معلومات قيمة حول النابضة أيون القنوات3،،من2122،،من2324، 25؛ ومع ذلك، يمكن أن توفر النهج الطيفية المعلومات الحيوية من الدول كونفورماشونال (مثلاً، التغيرات الحرارية) التي قد يكون من الصعب تحديد استخدام cryo-م.
العديد من الصعوبات التي يجب التغلب عليها لتنفيذ الجيش الشعبي الثوري والغزلان، بما في ذلك عدم وجود وظيفة البروتين عند إزالة جميع مخلفات سيستين (خصوصا وفيرة في القنوات الثديية)، البروتين منخفضة الغلة، وعدم الاستقرار البروتين خلال تنقية وبعد وضع العلامات تدور ، وتجميع البروتين في المنظفات أو الدهنية. وهنا، لقد قمنا بتصميم بروتوكولات للتغلب على هذه الحواجز الهامة وحصلوا على معلومات الأطياف الغزلان والجيش الثوري الشعبي لمستقبلات حسية الثدييات. والغرض هنا وصف منهجيات للتعبير، وتنقية، وضع العلامات، وإعادة تشكيل فأر سيستين-أقل حد أدنى وظيفية TRPV1 (eTRPV1) بناء على تحليلات spectroscopic. هذه المنهجية تعتبر مناسبة لتلك البروتينات الغشاء أن الحفاظ على وظيفتها وعلى الرغم من إزالة بقايا السيستين أو التي تحتوي على سيستين تشكيل ثنائي كبريتيد-السندات. يمكن تكييف هذه مجموعة من البروتوكولات لتحليل spectroscopic قنوات أيون الثدييات الأخرى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1048px;" width="1047">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:339px;">QuikChange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit</td>
			<td style="width:292px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:251px;">210519-5</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2-Propanol (Isopropanol)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Albumin Bovine Serum (BSA)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>A-420-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Amylose resin</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E8021L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Aprotinin</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>A-655-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Asolectin from Soybean</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bac-to-Bac Baculovirus Expression System</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10359016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Biobeads SM-2 Adsorbents&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>152-3920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate glass pipettes (3.5&#39;&#39;) (oocyte inyection)</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-203 G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate glass pipettes (oocyte recordings)</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B150-110-10HP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2 2H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Carbenicillin (Disodium)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>C-103-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cellfectin Reagent</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10362-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cellSens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C606SK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagenase Type 1</td>
			<td>Worthington-Biochem</td>
			<td>LS004196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Critiseal</td>
			<td>VWR</td>
			<td>18000-299</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-(+)-Maltose Monohydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DDM (n-Docecyl-B-D-Maltopyranoside)</td>
			<td>Anatrace</td>
			<td>D310S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">High glucose medium (Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0572&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable PD-10 Desalting Columns</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EGTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O2783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10082-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fluo-4 AM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>F-14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GenCatch Plus Plasmid DNA Mini-Prep Kit</td>
			<td>Epoch Life Science, Inc</td>
			<td>2160250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GenCatch PCR Cleanup Kit</td>
			<td>Epoch Life Science, Inc</td>
			<td>2360050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gentamicin Sulfate</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass capillary (25 &#181;l)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53432-761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass Flask 2800 mL</td>
			<td>Pyrex USA</td>
			<td>4423-2XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glycerol</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HEK293S GnTl-</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HEPES</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IPTG (isopropyl-thio-B-galactoside)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>I2481C25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Kanamycin Sulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP906-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">KCl</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">LB Broth, Miller</td>
			<td style="width:292px;">Fisher bioReagents</td>
			<td>BP1426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leupeptin Hemisulfate</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>L-010-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>11668-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgCl2 6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgSO4 7H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">mMESSAGE mMACHINE T7 Kit</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM1344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MOPS</td>
			<td>Fisher bioReagents</td>
			<td>BP2936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MTSL (1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl) Methyl Methanethiosulfonate</td>
			<td>Toronto Research Chemicals, Inc</td>
			<td>O873900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaCl</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opti-MEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31985-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Pepstatin A</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>P-020-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Pluronic Acid F-127 (20%)</td>
			<td>PromoKine&#160;&#160;</td>
			<td>CA707-59004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PMSF</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>P4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Poly-L-lysine Solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Rneasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sealed capillary</td>
			<td>VitroCom</td>
			<td>special order</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">SF-900 II SFM (insect cell medium)</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>10902-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sf9 Cells (SFM Adapted)</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>11496-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Soybean Polar Lipid Extract</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc</td>
			<td>541602C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Superose 6 Increase 10/300 GL</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>29091596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TCEP HCl</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>TCEP1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tetracyclin Hydrochloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tris Base</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tryptone</td>
			<td>Difco</td>
			<td>0123-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X-gal</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>X4281C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Xenopus oocytes</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>LM00935M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">XL1 - Blue Competent Cells</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>200249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Yeast Extract</td>
			<td>Difco</td>
			<td>0127-01-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:339px;">Econo-Pack chromatography column</td>
			<td style="width:292px;">Bio-Rad</td>
			<td>7321010</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini-PROTEAN TGX Stain-Free Precast Gels</td>
			<td style="width:292px;">Bio-Rad</td>
			<td>17000436</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">pFastBac1 Expression Vector</td>
			<td style="width:292px;">Invitrogen Life Technologies</td>
			<td style="width:251px;">10360-014</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">DH10Bac Competent Cells</td>
			<td style="width:292px;">Invitrogen Life Technologies</td>
			<td style="width:251px;">10361-012</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Critiseal capillary tube sealant</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>02-676-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ABI Model 3130XL Genetic Analyzers</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4359571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipete</td>
			<td>Fishebrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanoject II</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification and reconstitution of trpv1 for spectroscopic analysis

ترانسدوسي قنوات أيون طالبات المحفزات المتعددة بمختلف أنواعها في التغييرات في اللوستيريك؛ والتشكلات دينامية هذه تشكل تحديا لتحديد ولا تزال غير معروفة إلى حد كبير. مع التطورات الحديثة في واحد-الجسيمات cryo-إلكترون ذرف مجهرية (cryo-م) الضوء على السمات الهيكلية لمواقع ربط مؤثر وتفعيل إليه من عدة قنوات أيون، المسرح معداً لتحليل دينامية متعمقة بهم النابضة آليات استخدام النهج الطيفية. التقنيات الطيفية مثل الإلكترون الرنين باراماجنيتيك (EPR) والرنين إلكترون إلكترون مزدوجة (الغزلان) اقتصرت أساسا على دراسة أيون بدائية القنوات التي يمكن تنقيته بكميات كبيرة. الحاجة إلى كميات كبيرة من البروتينات الوظيفية ومستقرة الغشاء أعاق دراسة قنوات أيون الثدييات باستخدام هذه النهج. تقدم الجيش الشعبي الثوري والغزلان العديد من المزايا، بما في ذلك تصميم الهيكل والتغيرات الدينامية لمناطق البروتين المتنقلة، أن كان ذلك بدقة منخفضة، التي قد يكون من الصعب الحصول على البلورات بالأشعة السينية أو البرد-م، ورصد النابضة عكسها مرحلة انتقالية (أي، مغلقة ومفتوحة، توعية، والمتفجرات). هنا، يمكننا توفير بروتوكولات للحصول على ملليغرام من مستقبلات عابر الوظيفية solubilized المنظفات الموجبة قناة الفصيلية الخامس العضو المحتمل 1 (TRPV1) التي يمكن أن يكون المسمى للتحليل الطيفي الجيش الشعبي الثوري والغزلان.

توصيف وظيفي الحد الأدنى أقل سيستين TRPV1 بناء (eTRPV1) وطفرات واحدة-سيستين
هو الخطوة الأولى نحو الدراسات الطيفية مهندس وتوصيف نيات بروتين سيستئين-أقل (الشكل 2A) التي هي وظيفية وتسفر عن البيوكيميائية كميات من البروتينات. eTRPV1 وظيفي?...

Watch this Scientific Journal Video about Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis at JoVE.com

Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis

تنقية وإعادة تشكيل TRPV1 لتحليل سبيكتروسكوبيك

توضح هذه المقالة طرق محددة للحصول على كميات البيوكيميائية من المنظفات solubilized TRPV1 لتحليل سبيكتروسكوبيك. بروتوكولات مجتمعة توفر أدوات البيوكيميائية والفيزيائية الحيوية التي يمكن تكييفها لتيسير الدراسات الهيكلية والوظيفية لقنوات أيون الثدييات في بيئة تسيطر عليها غشاء.

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

الأسلوب كفاءة ريفولدينج وتنقية ليجند تشيموريسيبتور ملزمة المجال

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 في 1: انجذاب تطهير لتحليل مواز للبروتين-بروتين والبروتين-المستقلب المجمعات من خطوة واحدة

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

Benchtop Immobilized Metal Affinity Chromatography, Reconstitution and Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme for the Undergraduate Laboratory

Benchtop المعطل تداولها تقارب معدنية اللوني، إعادة تشكيل ومقايسة من بوليهيستيديني معلم متالونزيمي للمختبرات الجامعية

Benchtop immobilized metal affinity chromatography (IMAC), of polyhistidine tagged proteins is easily mastered by undergraduate students and has become ...

In Vitro Reconstitution of Self-Organizing Protein Patterns on Supported Lipid Bilayers

In Vitro Reconstitution of Self-Organizing Protein Patterns on Supported Lipid Bilayers

في المختبر إعادة تشكيل التنظيم الذاتي أنماط البروتين في بليرس الدهن المعتمدة

Many aspects of the fundamental spatiotemporal organization of cells are governed by reaction-diffusion type systems. In vitro reconstitution of such ...

Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition

تنقية البروتين اللاهوائية وتحليل الحركية عبر مسرى الأوكسجين لدراسة النشاط ديوكسيجيناسي دسب وتثبيط

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

التعبير، تنقية، تبلور، واختبارات إنزيم من البروتينات التي تحتوي على مجال الهيدرولاز اتاتس

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

إعادة تشكيل المستحضرات المؤتلفة Drosophila Atlastin في Liposomes لفحوصات خلط الدهون

Membrane fusion is a crucial process in the eukaryotic cell. Specialized proteins are necessary to catalyze fusion. Atlastins are endoplasmic reticulum ...

Isolation of Active Caenorhabditis elegans Nuclear Extract and Reconstitution for In Vitro Transcription

Isolation of Active Caenorhabditis elegans Nuclear Extract and Reconstitution for In Vitro Transcription

عزل نشط Caenorhabditis elegans استخراج النووية وإعادة تشكيل للنسخ في المختبر

Caenorhabditis elegans has been an important model system for biological research since it was introduced in 1963. However, C. elegans has not been fully ...

Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components

إعادة تشكيل نشاط استخراج Msp1 مع مكونات منقى بالكامل

As the center for oxidative phosphorylation and apoptotic regulation, mitochondria play a vital role in human health. Proper mitochondrial function ...

Purification of Endogenous Drosophila Transient Receptor Potential Channels

Purification of Endogenous Drosophila Transient Receptor Potential Channels

تنقية القنوات المحتملة لمستقبلات ذبابة الفاكهة العابرة الذاتية المنشأ

Drosophila phototransduction is one of the fastest known G protein-coupled signaling pathways. To ensure the specificity and efficiency of this cascade, ...