Name: purification and reconstitution of trpv1 for spectroscopic analysis
Uploaded: 2018-07-03T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis at JoVE.com

Vi er svært takknemlig til Dr. H. Mchaourab for å gi tilgang til EPR og HJORT spektrometre og Dr. T. Rosenbaum for å gi den full lengde cystein mindre TRPV1 plasmider.

1. TRPV1 mutagenese
Merk: En minimal TRPV1 konstruksjon for spectroscopic analyse26 ble bygget fra full lengde cystein mindre kanal TRPV127 med metoden for polymerase kjedereaksjon (PCR) (figur 1). Denne cystein mindre minimal TRPV1 konstruksjonen (referert til som eTRPV1 heretter) består av rester 110-603 og 627-764. eTRPV1 ble klonet pMO (en pcDNA3.1-baserte vektor) for funksjonsanalyse og en rekombinant donor vekto...

Dagens teknologi for uttrykk og rensing av pattedyr membran proteiner har gjort det mulig å skaffe tilstrekkelige mengder protein for spektroskopiske studier14,15,16,42. Her har vi tilpasset disse teknologiene for å uttrykke, rense, Rekonstituer og utføre spectroscopic analyser i TRPV1.
Blant de viktige trinnene i protokollen, nedenfor er de som vi har utført fei...

Med nylige fremskritt innen enkelt-partikkel cryo-elektronmikroskop (cryo-EM), er pattedyr ion kanal strukturer anskaffet på en ekstraordinær. Spesielt har strukturelle studier av polymodal ionekanaler, for eksempel forbigående reseptor potensielle vanilloid 1 (TRPV1), gitt videre forståelse dens aktivisering mekanismer1,2,3, 4 , 5. men dynamisk informasjon om ionekanaler i en membran miljø er nødvendig for å forstå deres polymodal gating og narkotika-bindende mekanismer.
Elektron spinn resonans (EPR) og doble elektron-elektron resonans (DEER) spectroscopies har gitt noen av de mest endelige mekanistisk modellene for ion kanaler6,7,8,9 , 10 , 11 , 12 , 13. disse metodene har vært hovedsakelig begrenset til undersøkelse av prokaryote og archeal ion kanaler som gir mye vaskemiddel-renset proteiner når overexpressed i bakterier. Med utviklingen av eukaryote membran proteiner produksjon i insekt og pattedyrceller funksjonelle og strukturelle karakterisering14,15,16er det nå mulig å få biokjemiske mengder vaskemiddel-renset proteiner for spektroskopiske studier.
EPR og HJORT signaler oppstår fra en paramagneticspin etikett (SL) (dvs., methanethiosulfonate) knyttet til en enkelt-cystein rester i protein. Spin-etikettene rapportere tre typer strukturinformasjon: bevegelse, accessibilities og avstander. Denne informasjonen kan avgjøre om rester er gravlagt i protein eller utsettes for membran eller vandig miljø i apo og ligand binding stater13,17,18,19. I forbindelse med en kodebasert struktur (når tilgjengelig), gir EPR og HJORT dataene en samling av betingelser for deriving dynamiske modeller i sitt eget miljø mens overvåking reversibel gating overgang (dvs., lukket, åpen oppmerksomme og ufølsomme). Videre kan fleksibel områder som kan være vanskelig å fastslå Røntgenkrystallografi eller cryo-EM oppnås ved hjelp av disse miljømessige datasett tilordne sekundære strukturer samt plassering i protein20. Cryo-EM strukturer innhentet i lipid nanodiscs gitt verdifull informasjon om gating av ion kanaler3,21,22,23,24, 25; men kan spektroskopiske tilnærminger gi dynamisk informasjon fra conformational stater (f.eks, termisk endringer) som kan være vanskelig å fastslå bruker cryo-EM.
Mange vanskeligheter må overvinnes for å implementere EPR og HJORT, inkludert mangel på protein-funksjonen når du fjerner alle cystein rester (spesielt rikelig i pattedyr kanaler), lav protein avkastning, protein ustabilitet under rensing og etter spinn merking , protein kontonumre i vaskemiddel eller liposomer. Her har vi utviklet protokoller for å overvinne disse kritiske barrierer og har fått HJORT og EPR spectra informasjon for et pattedyr sensoriske reseptorene. Formålet her er å beskrive metoder for uttrykket, rensing, merking og rekonstituering av en funksjonell minimal cystein mindre rotte TRPV1 (eTRPV1) konstruere for spectroscopic analyser. Denne metoden er egnet for de membran proteinene som holder sin funksjon til tross for fjerning av cystein rester eller inneholder cystein danner disulfide obligasjoner. Denne samlingen av protokoller kan tilpasses for spectroscopic analyse av andre pattedyr ionekanaler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1048px;" width="1047">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:339px;">QuikChange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit</td>
			<td style="width:292px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:251px;">210519-5</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2-Propanol (Isopropanol)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Albumin Bovine Serum (BSA)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>A-420-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Amylose resin</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E8021L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Aprotinin</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>A-655-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Asolectin from Soybean</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bac-to-Bac Baculovirus Expression System</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10359016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Biobeads SM-2 Adsorbents&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>152-3920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate glass pipettes (3.5&#39;&#39;) (oocyte inyection)</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-203 G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate glass pipettes (oocyte recordings)</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B150-110-10HP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2 2H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Carbenicillin (Disodium)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>C-103-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cellfectin Reagent</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10362-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cellSens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C606SK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagenase Type 1</td>
			<td>Worthington-Biochem</td>
			<td>LS004196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Critiseal</td>
			<td>VWR</td>
			<td>18000-299</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-(+)-Maltose Monohydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DDM (n-Docecyl-B-D-Maltopyranoside)</td>
			<td>Anatrace</td>
			<td>D310S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">High glucose medium (Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0572&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable PD-10 Desalting Columns</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EGTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O2783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>10082-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fluo-4 AM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>F-14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GenCatch Plus Plasmid DNA Mini-Prep Kit</td>
			<td>Epoch Life Science, Inc</td>
			<td>2160250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GenCatch PCR Cleanup Kit</td>
			<td>Epoch Life Science, Inc</td>
			<td>2360050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gentamicin Sulfate</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass capillary (25 &#181;l)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53432-761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass Flask 2800 mL</td>
			<td>Pyrex USA</td>
			<td>4423-2XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glycerol</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HEK293S GnTl-</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HEPES</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IPTG (isopropyl-thio-B-galactoside)</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>I2481C25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Kanamycin Sulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP906-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">KCl</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">LB Broth, Miller</td>
			<td style="width:292px;">Fisher bioReagents</td>
			<td>BP1426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leupeptin Hemisulfate</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>L-010-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>11668-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgCl2 6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgSO4 7H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">mMESSAGE mMACHINE T7 Kit</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM1344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MOPS</td>
			<td>Fisher bioReagents</td>
			<td>BP2936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MTSL (1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl) Methyl Methanethiosulfonate</td>
			<td>Toronto Research Chemicals, Inc</td>
			<td>O873900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaCl</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opti-MEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31985-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Pepstatin A</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>P-020-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Pluronic Acid F-127 (20%)</td>
			<td>PromoKine&#160;&#160;</td>
			<td>CA707-59004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PMSF</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>P4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Poly-L-lysine Solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Rneasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sealed capillary</td>
			<td>VitroCom</td>
			<td>special order</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">SF-900 II SFM (insect cell medium)</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>10902-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sf9 Cells (SFM Adapted)</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies</td>
			<td>11496-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Soybean Polar Lipid Extract</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc</td>
			<td>541602C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Superose 6 Increase 10/300 GL</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>29091596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TCEP HCl</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>TCEP1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tetracyclin Hydrochloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tris Base</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tryptone</td>
			<td>Difco</td>
			<td>0123-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X-gal</td>
			<td>GoldBio.com</td>
			<td>X4281C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Xenopus oocytes</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>LM00935M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">XL1 - Blue Competent Cells</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>200249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Yeast Extract</td>
			<td>Difco</td>
			<td>0127-01-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:339px;">Econo-Pack chromatography column</td>
			<td style="width:292px;">Bio-Rad</td>
			<td>7321010</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini-PROTEAN TGX Stain-Free Precast Gels</td>
			<td style="width:292px;">Bio-Rad</td>
			<td>17000436</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">pFastBac1 Expression Vector</td>
			<td style="width:292px;">Invitrogen Life Technologies</td>
			<td style="width:251px;">10360-014</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">DH10Bac Competent Cells</td>
			<td style="width:292px;">Invitrogen Life Technologies</td>
			<td style="width:251px;">10361-012</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Critiseal capillary tube sealant</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>02-676-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ABI Model 3130XL Genetic Analyzers</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4359571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipete</td>
			<td>Fishebrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanoject II</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification and reconstitution of trpv1 for spectroscopic analysis

Polymodal ionekanaler transduce flere stimuli av forskjellige naturer allosteric endringer; disse dynamiske konformasjonen er utfordrende å finne og forblir hovedsakelig ukjent. Med nylige fremskritt innen enkelt-partikkel cryo-elektron mikroskopi (cryo-EM) belyse strukturfunksjonene av Agonistiske bindende områder og aktivisering mekanisme flere ionekanaler, er scenen satt for en dynamisk dybdeanalyse av deres gating mekanismer bruke spektroskopiske tilnærminger. Spektroskopiske teknikker som elektron spinn resonans (EPR) og doble elektron-elektron resonans (DEER) har vært hovedsakelig begrenset til studiet av prokaryote ionekanaler som kan bli renset ved store mengder. Kravet for store mengder funksjonelle og stabil membran proteiner har hemmet studiet av pattedyr ion kanalene benytter disse tilnærmingene. EPR og HJORT tilby mange fordeler, inkludert fastsettelse av strukturen og dynamiske endringer av mobile protein regioner, om enn på lav oppløsning, som kan være vanskelig å få Røntgenkrystallografi eller cryo-EM, og overvåking reversibel gating Overgang (dvs., lukket, åpen, oppmerksomme og ufølsomme). Her gir vi protokoller for å få milligram funksjonelle vaskemiddel-solubilized forbigående reseptor potensielle kasjon kanal gruppe V medlem 1 (TRPV1) som kan merkes for EPR og HJORT spektroskopi.

Funksjonell karakteristikk av Minimal cystein mindre TRPV1 konstruere (eTRPV1) og Single-cystein mutanter
Første skritt mot spektroskopiske studier er å ingeniør og karakterisere cystein mindre protein konstruksjoner (figur 2A) som er funksjonelle og gi biokjemiske mengder proteiner. eTRPV1 fungerer som bestemmes av Ca2 + bildebehandling og TEVC (figur 2B<str...

Watch this Scientific Journal Video about Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis at JoVE.com

Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis

Rensing og rekonstituering av TRPV1 for Spectroscopic analyse

Denne artikkelen beskriver bestemte metoder for å få biokjemiske mengder vaskemiddel-solubilized TRPV1 for spectroscopic analyse. Kombinert protokollene gir biokjemiske og Biofysiske verktøy som kan tilpasses for å lette strukturelle og funksjonelle studier for pattedyr ionekanaler i en membran-kontrollert miljø.

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

Metode for effektiv Refolding og rensing av Chemoreceptor Ligand bindende domene

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 i 1: trinns affinitet rensing for parallell analyse av Protein-Protein og Protein-metabolitten komplekser

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

Benchtop Immobilized Metal Affinity Chromatography, Reconstitution and Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme for the Undergraduate Laboratory

Borstemmaskin immobilisert metall affinitet Ture, rekonstituering og analysen av en Polyhistidine merket Metalloenzyme for Undergraduate laboratoriet

Benchtop immobilized metal affinity chromatography (IMAC), of polyhistidine tagged proteins is easily mastered by undergraduate students and has become ...

In Vitro Reconstitution of Self-Organizing Protein Patterns on Supported Lipid Bilayers

In Vitro Reconstitution of Self-Organizing Protein Patterns on Supported Lipid Bilayers

In Vitro Rekonstituering selv organisere Protein mønstre på støttede Lipid Bilayers

Many aspects of the fundamental spatiotemporal organization of cells are governed by reaction-diffusion type systems. In vitro reconstitution of such ...

Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition

Anaerob Protein rensing og kinetisk analyse via oksygen elektrode for å studere DesB Dioxygenase aktivitet og hemming

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Uttrykk, rensing, krystallisering, og enzym analyser av Fumarylacetoacetate Hydrolase domene-inneholdende proteiner

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

Vaskemiddel-assistert rekonstituering av rekombinant Drosophila Atlastin til liposomer for lipid-miksing analyser

Membrane fusion is a crucial process in the eukaryotic cell. Specialized proteins are necessary to catalyze fusion. Atlastins are endoplasmic reticulum ...

Isolation of Active Caenorhabditis elegans Nuclear Extract and Reconstitution for In Vitro Transcription

Isolation of Active Caenorhabditis elegans Nuclear Extract and Reconstitution for In Vitro Transcription

Isolering av aktiv caenorhabditt elegans kjernefysisk ekstrakt og rekonstituering for in vitro transkripsjon

Caenorhabditis elegans has been an important model system for biological research since it was introduced in 1963. However, C. elegans has not been fully ...

Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components

Rekonstituering av msp1-ekstraksjonsaktivitet med fullstendig rensede komponenter

As the center for oxidative phosphorylation and apoptotic regulation, mitochondria play a vital role in human health. Proper mitochondrial function ...

Purification of Endogenous Drosophila Transient Receptor Potential Channels

Purification of Endogenous Drosophila Transient Receptor Potential Channels

Rensing av endogene Drosophila transiente reseptorpotensialkanaler

Drosophila phototransduction is one of the fastest known G protein-coupled signaling pathways. To ensure the specificity and efficiency of this cascade, ...