Name: decellularization and recellularization methodology for human saphenous veins
Uploaded: 2018-07-27T13:30:00
Duration: 11 min 35 s
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हम प्रयोग में प्रयुक्त रक्त वाहिकाओं प्रदान करने के साथ मदद के लिए प्रोफेसर ऐंडर्स Jeppsson शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । इस अध्ययन LUA ALF अनुदान द्वारा SSH को वित्त पोषित किया गया था ।

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	<li>Brockbank, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cryopreservation+upon+vein+function+in+vivo.">Effects of cryopreservation upon vein function in vivo.</a> Cryobiology. 31 (1), 71-81 (1994).</li><li>O'Donnell, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+operative+findings+with+angiographic+and+noninvasive+hemodynamic+factors+associated+with+failure+of+polytetrafluoroethylene+grafts.">Correlation of operative findings with angiographic and noninvasive hemodynamic factors associated with failure of polytetrafluoroethylene grafts.</a> Journal of Vascular Surgery. 1 (1), 136-148 (1984).</li><li>Atala, A., Bauer, S. B., Soker, S., Yoo, J. J., Retik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+bladders+for+patients+needing+cystoplasty.">Tissue-engineered autologous bladders for patients needing cystoplasty.</a> Lancet. 367 (9518), 1241-1246 (2006).</li><li>Raya-Rivera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+urethras+for+patients+who+need+reconstruction:+an+observational+study.">Tissue-engineered autologous urethras for patients who need reconstruction: an observational study.</a> Lancet. 377 (9772), 1175-1182 (2011).</li><li>Macchiarini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+transplantation+of+a+tissue-engineered+airway.">Clinical transplantation of a tissue-engineered airway.</a> Lancet. 372 (9655), 2023-2030 (2008).</li><li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+an+allogeneic+vein+bioengineered+with+autologous+stem+cells:+a+proof-of-concept+study.">Transplantation of an allogeneic vein bioengineered with autologous stem cells: a proof-of-concept study.</a> Lancet. 380 (9838), 230-237 (2012).</li><li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Application+of+Tissue-Engineered+Veins+Using+Autologous+Peripheral+Whole+Blood:+A+Proof+of+Concept+Study.">In Vivo Application of Tissue-Engineered Veins Using Autologous Peripheral Whole Blood: A Proof of Concept Study.</a> EBioMedicine. 1 (1), 72-79 (2014).</li><li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung.">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nature Medicine. 16 (8), 927-933 (2010).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nature Medicine. 16 (7), 814-820 (2010).</li><li>Conconi, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+matrices,+obtained+by+a+detergent-enzymatic+method,+support+in+vitro+the+adhesion+of+chondrocytes+and+tracheal+epithelial+cells.">Tracheal matrices, obtained by a detergent-enzymatic method, support in vitro the adhesion of chondrocytes and tracheal epithelial cells.</a> Transplant International. 18 (6), 727-734 (2005).</li><li>Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+of+tissues+and+organs.">Decellularization of tissues and organs.</a> Biomaterials. 27 (19), 3675-3683 (2006).</li><li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+human+fetal+mesenchymal+stem+cells+for+off-the-shelf+bone+tissue+engineering+application.">The potential of human fetal mesenchymal stem cells for off-the-shelf bone tissue engineering application.</a> Biomaterials. 33 (9), 2656-2672 (2012).</li><li>Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold-perfusion+decellularization+of+whole-organ+porcine+pancreas+supports+human+fetal+pancreatic+cell+attachment+and+expression+of+endocrine+and+exocrine+markers.">Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers.</a> Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration.">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Science Reports. 4, 6716 (2014).</li><li>Wiles, K., Fishman, J. M., De Coppi, P., Birchall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Host+Immune+Response+to+Tissue-Engineered+Organs:+Current+Problems+and+Future+Directions.">The Host Immune Response to Tissue-Engineered Organs: Current Problems and Future Directions.</a> Tissue Engineering Part B Reviews. 22 (3), 208-219 (2016).</li><li>Young, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+in+the+eyes+of+an+immunologist.">Endothelial cells in the eyes of an immunologist.</a> Cancer Immunology Immunotherapy. 61 (10), 1609-1616 (2012).</li><li>Graham, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+seeding+of+prosthetic+vascular+grafts:+early+experimental+studies+with+cultured+autologous+canine+endothelium.">Endothelial cell seeding of prosthetic vascular grafts: early experimental studies with cultured autologous canine endothelium.</a> Archives of Surgery. 115 (8), 929-933 (1980).</li><li>Onuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+endothelialization+model+for+the+study+of+Dacron+graft+healing.">Accelerated endothelialization model for the study of Dacron graft healing.</a> Annals of Vascular Surgery. 11 (2), 141-148 (1997).</li><li>Clowes, A. W., Kirkman, T. R., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+arterial+graft+healing.+Rapid+transmural+capillary+ingrowth+provides+a+source+of+intimal+endothelium+and+smooth+muscle+in+porous+PTFE+prostheses.">Mechanisms of arterial graft healing. Rapid transmural capillary ingrowth provides a source of intimal endothelium and smooth muscle in porous PTFE prostheses.</a> American Journal of Pathology. 123 (2), 220-230 (1986).</li><li>L'Heureux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue-engineered+blood+vessels+for+adult+arterial+revascularization.">Human tissue-engineered blood vessels for adult arterial revascularization.</a> Nature Medicine. 12 (3), 361-365 (2006).</li><li>Syedain, Z. H., Meier, L. A., Lahti, M. T., Johnson, S. L., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+completely+biological+engineered+grafts+following+decellularization+into+the+sheep+femoral+artery.">Implantation of completely biological engineered grafts following decellularization into the sheep femoral artery.</a> Tissue Engineering Part A. 20 (11-12), 1726-1734 (2014).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Pollack, A. A., Taylor, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+exercise+and+body+position+on+the+venous+pressure+at+the+ankle+in+patients+having+venous+valvular+defects.">The effect of exercise and body position on the venous pressure at the ankle in patients having venous valvular defects.</a> Journal of Clinical Investigation. 28 (3), 559-563 (1949).</li><li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-molecular-weight+peptides+derived+from+extracellular+matrix+as+chemoattractants+for+primary+endothelial+cells.">Low-molecular-weight peptides derived from extracellular matrix as chemoattractants for primary endothelial cells.</a> Endothelium. 11 (3-4), 199-206 (2004).</li><li>van Ark, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetes+mellitus+is+associated+with+an+imbalance+in+circulating+endothelial+and+smooth+muscle+progenitor+cell+numbers.">Type 2 diabetes mellitus is associated with an imbalance in circulating endothelial and smooth muscle progenitor cell numbers.</a> Diabetologia. 55 (9), 2501-2512 (2012).</li><li>Steen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+lungs+from+a+non-heart-beating+donor.">Transplantation of lungs from a non-heart-beating donor.</a> Lancet. 357 (9259), 825-829 (2001).</li><li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Cypel, M., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+lung+perfusion.">Ex-vivo lung perfusion.</a> Transplant International. 28 (6), 643-656 (2015).</li><li>Cross, M. J., Claesson-Welsh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF+and+VEGF+function+in+angiogenesis:+signalling+pathways,+biological+responses+and+therapeutic+inhibition.">FGF and VEGF function in angiogenesis: signalling pathways, biological responses and therapeutic inhibition.</a> Trends in Pharmacological Science. 22 (4), 201-207 (2001).</li><li>Peplow, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor-+and+cytokine-stimulated+endothelial+progenitor+cells+in+post-ischemic+cerebral+neovascularization.">Growth factor- and cytokine-stimulated endothelial progenitor cells in post-ischemic cerebral neovascularization.</a> Neural Regeneration Research. 9 (15), 1425-1429 (2014).</li><li>Xiao-Yun, X., Zhao-Hui, M., Ke, C., Hong-Hui, H., Yan-Hong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucagon-like+peptide-1+improves+proliferation+and+differentiation+of+endothelial+progenitor+cells+via+upregulating+VEGF+generation.">Glucagon-like peptide-1 improves proliferation and differentiation of endothelial progenitor cells via upregulating VEGF generation.</a> Medical Science Monitor. 17 (2), BR35-BR41 (2011).</li><li>Dragoni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+stimulates+endothelial+colony+forming+cells+proliferation+and+tubulogenesis+by+inducing+oscillations+in+intracellular+Ca2++concentration.">Vascular endothelial growth factor stimulates endothelial colony forming cells proliferation and tubulogenesis by inducing oscillations in intracellular Ca2+ concentration.</a> Stem Cells. 29 (11), 1898-1907 (2011).</li><li>Sai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+is+essential+to+maintain+endothelial+progenitor+cell+phenotype+in+TR-BME2+cells.">Basic fibroblast growth factor is essential to maintain endothelial progenitor cell phenotype in TR-BME2 cells.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 37 (4), 688-693 (2014).</li><li>Gallus, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+and+other+platelet-aggregation+inhibiting+drugs.">Aspirin and other platelet-aggregation inhibiting drugs.</a> Medical Journal of Asutralia. 142 (1), 41-47 (1985).</li></ol>

SSH Verigraft, एक कंपनी है कि ऊतक इंजीनियरिंग रक्त वाहिकाओं की तकनीक लाइसेंस प्राप्त में शेयर रखती है । दूसरे लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

तकनीक saphenous नसों के decellularization के लिए यहां प्रस्तुत एक आसान, सरल और लागत प्रभावी तरीका है कि भी नाल और स्तन नसों की तरह सभी छोटे व्यास नसों के लिए लागू किया जा सकता है । decellularization समाधान और उनके इस पद्धति में इस्तेमाल किया सांद्रता हमारे पिछले परिणाम6,7से कर रहे हैं । भले ही हम decellularization के 5 चक्र की सिफारिश, कुछ नसों में हम भी 3 चक्र में पूरा decellularization देखा । हालांकि, reproducible परिणाम 5 चक्र का उपयोग करके प्राप्त किए गए थे । इस प्रोटोकॉल को लागू करने, हम अलग लंबाई की नसों में विस्थापित 30 सेमी सफलतापूर्वक (अप्रकाशित परिणाम) । ४५ cm द्वारा decellularization सॉल्यूशन के आउटलेट को उठाने से नस के अंदर ३३ mmHg का दबाव पैदा होगा । हमारे अनुभव में, हम पूरी नस समान रूप से decellularizing और 5 चक्रों में reproducibly में एक महत्वपूर्ण कदम के रूप में इस पर ध्यान दिया । चुना दबाव सामान्य saphenous नस दबाव (5-10 mmHg) की तुलना में 3 गुना अधिक है, लेकिन अक्षम नसों (वैरिकाज़ नसों)23के रूप में एक ही है । इसके अलावा, हम सोचते है कि इस उच्च दबाव नस दीवारों पर एक महत्वपूर्ण शक्ति पैदा करेगा और हो सकता है, इसलिए कुशल और तेजी से सेल हटाने में सहायता ।
चूंकि TnBP एक कार्बनिक विलायक और पानी में अघुलनशील है, डिटर्जेंट क्रियाशीलता जब तक यह बादल बन जाता है महत्वपूर्ण है; अंयथा, डिटर्जेंट फ्लोट जाएगा । एक ही कारण के लिए, समाधान में मिश्रित TnBP रखने के लिए, है डिटर्जेंट आउटलेट ट्यूब नली आउटलेट के साथ ग्लास जार के शीर्ष पर रखा गया था । हर चक्र में इसके उपयोग के बाद नस से TnBP के कुशल हटाने धोया पानी में तैरते TnBP बूंदों के अभाव से देखा जा सकता है । हमने यह भी देखा है कि DNase कदम लंघन भी एक सेलुलर ऊतक का उत्पादन किया, लेकिन कुछ मामलों में, एक अपेक्षाकृत उच्च डीएनए सामग्री में सेलुलर ऊतक देखा गया था । के रूप में उच्च दबाव और उच्च प्रवाह दर कुशल DNase गतिविधि के लिए आवश्यक नहीं हैं, एक कम छिड़काव दर (10 मिलीलीटर/ एक अलग सिकुड़नेवाला पंप अपने छोटे आकार के रूप में इस्तेमाल किया गया था सेटअप के आसान हैंडलिंग में मदद करता है । जब से हम चक्र 2 में decellularization परिणामों के दौरान सबसे कोशिकाओं की है कि नुकसान देखा, हम 1 चक्र और 3 (अप्रकाशित परिणाम) के दौरान DNase उपचार लंघन सुझाव देते हैं । हालांकि लक्षण वर्णन और extracellular मैट्रिक्स प्रोटीन के ठहराव इस पांडुलिपि में प्रदर्शन नहीं किया गया, हमारे समान decellularization प्रोटोकॉल के साथ पिछले अनुभव के यांत्रिक गुणों के संरक्षण दिखाया, extracellular मैट्रिक्स संरचना और प्रोटीन7. हालांकि इन नसों के साथ हमारे प्रारंभिक ठहराव प्रयोगों एक समान परिणाम (अप्रकाशित) का उत्पादन किया, हमारे पहले से ही प्रकाशित परिणाम इस विश्वास को मजबूत करेगा ।
Recellularization रक्त का उपयोग कर अस्थि मज्जा विस्तारित कोशिकाओं पर एक सुविधाजनक और आसान प्रक्रिया है के रूप में एक लंबे सेल विस्तार बार, विस्तारित कोशिकाओं में सहज उत्परिवर्तनों, शल्य चिकित्सा आक्रमण, और रोगी के लिए बेचैनी से बचने कर सकते हैं । चूंकि यह ज्ञात है कि endothelialization भी परिसंचारी ईपीसी से हो सकता है, हम परिकल्पना की है कि endothelial माध्यम से छिड़काव द्वारा पीछा रक्त के साथ छिड़काव recellularization के लिए पर्याप्त होगा । नस ऊतकों की सुरक्षा एक ऐसी ही विधि का उपयोग कर प्रत्यारोपण के सफल परिणामों से देखा जाता है जब दो ऐसी नसों अतिरिक्त यकृत पोर्टल नस रुकावट7के साथ बच्चों में प्रत्यारोपित किया गया । हम अटकलें है कि सेलुलर extracellular मैट्रिक्स में वृद्धि कारकों24रक्त से ईपीसी परिसंचारी के लगाव की अनुमति होगी । एक समान प्रोटोकॉल के बाद नसों के Recellularization वीईजीएफ़ रिसेप्टर के लिए सकारात्मक कोशिकाओं को दिखाया-2 और (सीडी) 14 लुमेन पर क्लस्टर जबकि CD45 एक्सप्रेस कोशिकाओं adventitia7में देखा गया था । हम यह भी कल्पना है कि एक सतत endothelial परत सभी मामलों में नहीं देखा जा सकता है खासकर जब पुराने और रोगग्रस्त रोगियों से रक्त का उपयोग कर के रूप में यह ज्ञात है कि ऐसे व्यक्तियों जनक कोशिकाओं के परिचालित25की संख्या में कमी आई है । हालांकि, हम मांगना है कि छिड़काव प्राप्तकर्ता के अपने रक्त के साथ decellularization की वजह से उजागर कर रहे हैं प्रतिजनों के कई मुखौटा हो सकता है और इस प्रकार के रूप में प्रत्यारोपण के लिए विरोध किया जब प्रत्यारोपण के प्रतिकूल भड़काऊ प्रतिक्रियाओं की संभावना कम हो सकती है सेलुलर रक्त वाहिकाओं । इसके अलावा, रक्त छिड़काव लुमेन और adventitia पर वृद्धि कारकों के स्तर में वृद्धि जमा कर सकते हैं जो बारी में recellularization की एक तेजी से प्रक्रिया में आने के परिणामस्वरूप जनक कोशिकाओं घूम की बढ़ी हुई संख्या भर्ती कर सकते हैं vivo.
इस अध्ययन में प्रयोग किया जाता है कि प्रतिक्रिया के लिए डिजाइन का लाभ पूरा autoclaving, आसान विधानसभा, लागत प्रभावशीलता, आसान हैंडलिंग और नुकसान की संभावना कम कर रहे हैं । हमारे अनुभव में, वर्तमान डिजाइन का उपयोग कर, लंबाई में 10 सेमी तक नसों recellular थे । भले ही लंबाई में 25 सेमी तक नसों भी "यू" आकार में प्रतिपुष्टि के अंदर नस रखने से recellular जा सकता है, यह मांय किया जाना चाहिए । इस प्रतिक्रिया के डिजाइन से पता चलता है कि नस में प्रवाह की दिशा गुरुत्वाकर्षण के खिलाफ है और इस तरह के रूप में बनाया गया है क्योंकि यह मानव में इन नसों के लिए प्रवाह की सामान्य दिशा है । endothelial मीडियम स्टेप के 12 ज छिड़काव से नस को कंडीशनिंग करनी होती है और आने वाली ईपीसी के अटैचमेंट के लिए अपनत्व को बढ़ाना होता है । अतिरिक्त हेपरिन और 1 एच के लिए छिड़काव के अलावा रक्त छिड़काव के दौरान ट्यूबों में रक्त के थक्के बनाने के जोखिम को कम करेगा ।
आवश्यक रक्त की मात्रा नस की लंबाई पर निर्भर है । मूल सिद्धांत हम रक्त की मात्रा के लिए का पालन करें कि नस खून में जलमग्न होना चाहिए । हालांकि रक्त मात्रा ४५ मिलीलीटर से बड़ा हैंडलिंग, सामयिक मिश्रण के लिए प्रतिक्रिया के तल में सेल संचय को रोकने के लिए आवश्यक हो सकता है । हम रक्त के लिए है Steen समाधान जोड़ा क्योंकि यह प्रोटीन और अंग प्रत्यारोपण26,27के दौरान स्वस्थ ऊतकों को बनाए रखने के लिए आवश्यक घटकों की एक उच्च राशि शामिल है । वीईजीएफ़ और बी-FGF के अलावा लाभकारी है के रूप में वे शक्तिशाली angiogenic वृद्धि कारक हैं28 और उनकी उपस्थिति प्रेरित प्रवास, प्रसार, और ईपीसी के भेदभाव29,30,31,३२ . वीईजीएफ़ की राशि हमारे पिछले अप्रकाशित परिणामों पर आधारित है जहां ईपीसी के प्रसार ८० एनजी/एमएल में देखा गया था । एस्पिरिन के अलावा प्लेटलेट्स के सक्रियण को रोकता है३३ जिससे endothelial परत के लिए उनके लगाव की संभावना कम । निरंतर निगरानी और ग्लूकोज के अलावा सेल प्रसार और लाल रक्त कोशिकाओं के hemolysis को रोकने के लिए भी फायदेमंद होगा ।
केवल एक साधारण रक्त का नमूना प्राप्तकर्ता से आवश्यक है के बाद से, यह कम तकनीकी विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है एक आसान और संभव प्रक्रिया के रूप में माना जा सकता है । हालांकि, पूरे प्रक्रिया शुरू से ही यहां दिखाया खत्म करने के लिए 20 दिन लगते हैं, एक शेल्फ उत्पाद के रूप में प्रतिसेलुलर नसों भंडारण के रोगियों के लिए 8 दिनों के लिए प्रक्रिया को कम करेगा । हालांकि सेलुलर नसों का भंडारण तकनीकी रूप से recellularization क्षमता को प्रभावित नहीं करना चाहिए, यह मूल्यांकन किया जाना चाहिए । ऊतक इंजीनियर नसों इस प्रक्रिया के बाद उत्पंन बाईपास सर्जरी के लिए क्लिनिक में इस्तेमाल किया जा सकता है, बाधित नसों की जगह, शिरापरक कमी प्रतिरक्षा दमन के लिए की आवश्यकता के बिना वैरिकाज़ नसों के लिए अग्रणी है और इस तरह की एक बेहतर गुणवत्ता प्रदान रोगी के लिए जीवन ।

संवहनी नाली aneurysms की तरह कई नैदानिक स्थितियों के लिए आवश्यक हैं, मन्या धमनी का रोग और गंभीर संवहनी समस्याओं के लिए अग्रणी atherosclerosis. सर्जन कार्यात्मक रक्त की आपूर्ति को बहाल करने के लिए ऑटोलॉगस, allogeneic या सिंथेटिक संवहनी नाली का उपयोग करें । हालांकि ऑटोलॉगस रक्त वाहिकाओं के उपयोग अभी भी आदर्श दृष्टिकोण माना जाता है, रोगियों में उपलब्धता प्रमुख रूप से सीमित है । ऐसे allogeneic या सिंथेटिक भ्रष्टाचार के रूप में विकल्प immunosuppressive उपचार और गरीब प्रत्यक्षता के लिए1,2, प्रमुख स्वास्थ्य देशों को आर्थिक बोझ में जिसके परिणामस्वरूप के लिए अग्रणी के साथ गहन समस्याओं है । रक्त वाहिकाओं के टिशू इंजीनियरिंग एक प्राकृतिक समरूपता और ऑटोलॉगस कोशिकाओं के साथ भ्रष्टाचारियों प्रदान करना है । इस प्रकार, प्राप्तकर्ता प्रतिरक्षा प्रणाली को स्वयं के रूप में प्रत्यारोपण भ्रष्टाचार पहचानता है और इस तरह के एक भ्रष्टाचार के बाद से प्राकृतिक प्रोटीन और कोशिकाओं मूल विंयास में शामिल है, यह वर्तमान विकल्प की तुलना में बेहतर कार्य हो सकता है । ऊतक इंजीनियर अंगों, जैसे मूत्राशय3, मूत्रमार्ग4, श्वासनली5, और नसों6,7, सफलतापूर्वक क्लिनिक में इस्तेमाल किया गया है ।
ऊतक इंजीनियरिंग व्यक्तिगत भ्रष्टाचार का उत्पादन करने के लिए एक decellularization और recellularization द्वारा पीछा दाता से एक भ्रष्टाचार की आवश्यकता है । Decellularization ऊतकों और अंगों से कोशिकाओं को हटाने के लिए एक होनहार तकनीक है8,9,10. Decellularization विशिष्ट भौतिक, रासायनिक और एंजाइमी तरीकों11 या उंहें संयोजन द्वारा किया जा सकता है । इन तरीकों के इष्टतम उपयोग पर, एक extracellular मैट्रिक्स में समान संरचनात्मक और कार्यात्मक प्रोटीन हो सकता है मूल ऊतकों के समान । इस तरह के अंगों को आंतरिक क्षमता लगाव, प्रवास, प्रसार, और आने वाली स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव को बढ़ाने के अधिकारी ।
Recellularization भ्रष्टाचार में कोशिकाओं बोने की एक गतिशील प्रक्रिया है, और प्राप्तकर्ता स्टेम कोशिकाओं नैदानिक प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । वर्तमान में इस तरह के प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल स्टेम कोशिकाओं अस्थि मज्जा, mesenchymal और अंग निवासियों3,5,6शामिल हैं । पशु और अनुसंधान उंमुख अध्ययन mesenchymal मूल है कि भ्रूण और प्रेरित pluripotent12,13,14से स्टेम कोशिकाओं का इस्तेमाल किया है । इस प्रक्रिया में एक मध्यस्थ (एक कक्ष है कि नस रखती है और तापमान, गैसों, पीएच, और दबाव की तरह आवश्यक शर्तों प्रदान करता है), कोशिकाओं और संस्कृति मीडिया की आवश्यकता है । recellularization में चुनौती एक विशेष प्रकार के कोशिकाओं की अपेक्षित संख्या और एक बोने की रणनीति है जिसके द्वारा कोशिकाओं को पूरे ऊतक या अंग तक पहुँच सकते हैं प्राप्त करने के लिए है । भले ही कोई पूरा ऊतक या संरचनात्मक रूप से अंग और कार्यात्मक और उत्पंन किया गया है अब तक मूल्यांकन, क्षेत्र में कई प्रगति और प्रारंभिक परिणाम भविष्य की संभावना दिखा15। नस का प्रमुख कार्य चमकदार endothelium में निहित है जो ऊतकों में भड़काऊ कोशिकाओं की घुसपैठ को नियंत्रित करता है और मध्य चिकनी मांसपेशी परत जो कसना में मदद करता है और रक्त दाब16को धारण करने की शक्ति भी प्रदान करती है । अध्ययनों से यह दर्शाया है कि क्षति के दौरान, endothelialization या तो सम्मिलन से या परिचालित endothelial जनक कोशिकाओं (ईपीसी) से रक्त17,18,19में होता है । शिराओं के recellularization के लिए हमारी कार्यनीति परिचालित रक्त में मौजूद ईपीसी पर निर्भर करती है.
नसों और धमनियों के ऊतक इंजीनियरिंग अलग decellularization और recellularization रणनीतियों20,21के बाद कई समूहों द्वारा किया गया था । हमारे समूह भी प्रदर्शन किया है और श्रोणि और स्तन नसों6,7के लिए decellularization और recellularization रणनीति विकसित की है । Decellularization ट्राइटन एक्स-१००, त्रि-n-butyl फॉस्फेट (TnBP), और एंजाइम deoxyribonuclease (DNase) में नस के आंदोलन द्वारा किया गया था । recellularization या तो अस्थि मज्जा व्युत्पंन endothelial और चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं6 या परिधीय रक्त7का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया था । या तो प्रोटोकॉल द्वारा recellular नसों अतिरिक्त यकृत पोर्टल नस रुकावट6,7के साथ बाल चिकित्सा रोगियों के प्रत्यारोपण में कार्यात्मक रक्त की आपूर्ति प्रदान करने में नैदानिक वादा दिखाया ।
हम वर्तमान में decellularization, recellularization और छोटे व्यास नसों की हैंडलिंग प्रतिक्रिया के सुधार और आसान प्रदर्शन के लिए एक ही प्रोटोकॉल का एक संशोधित संस्करण विकसित किया है । वर्तमान decellularization प्रोटोकॉल की जरूरत है डिटर्जेंट के साथ आंदोलन के बजाय दबाव का उपयोग कर नस के माध्यम से डिटर्जेंट की छिड़काव । recellularization प्रोटोकॉल सेल आसंजन में सुधार और कोशिका आसंजन, अस्तित्व और प्रसार में सुधार के लिए रक्त परिचालित में वृद्धि कारकों के अलावा के लिए कंडीशनिंग का एक अतिरिक्त कदम शामिल है । हम भी वाणिज्यिक उपलब्ध उत्पादों का उपयोग कर प्रतिक्रिया के डिजाइन में सुधार हुआ है । इस पत्र में, हम decellularization और मानव saphenous नसों के recellularization प्रदर्शन के लिए संशोधित प्रोटोकॉल का विस्तृत विवरण प्रस्तुत करते हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1159px;" width="1158">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">4-Port Cap</td>
			<td style="width:208px;">CPLabSafety</td>
			<td style="width:119px;">WF-GL45-4Kit</td>
			<td style="width:499px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Acetyl salicylic acid</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A5376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Anti-Anti</td>
			<td style="width:208px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">B-FGF</td>
			<td style="width:208px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">cc-4113B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:333px;">Blood Glucose monitoring system - Free style Lite</td>
			<td style="width:208px;">Abbott</td>
			<td style="width:119px;">70808-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">DNase-I</td>
			<td style="width:208px;">Worthington</td>
			<td style="width:119px;">LS0020007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">Dulbecco&#39;s PBS with CaCl2 and MgCl2</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EDTA disodium salt dihydrate</td>
			<td style="width:208px;">AlfaAesar</td>
			<td style="width:119px;">A15161.OB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EGM-2 Growth Factors Kit</td>
			<td style="width:208px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">CC-4176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">EG-VEGF</td>
			<td style="width:208px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">100-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">Glass bottle 250ml</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2151593</td>
			<td>Any bottle with GL45 cap can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Glass bottle 1L</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2151595</td>
			<td>Any bottle with GL45 cap can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Glass jar 500ml with bottom hose outlet</td>
			<td style="width:208px;">Kimble Chase Life Science</td>
			<td style="width:119px;">14607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Heparin</td>
			<td style="width:208px;">Leo</td>
			<td style="width:119px;">387107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Heparin Coated Vacutainer Tubes</td>
			<td style="width:208px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">368480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Human AB Serum</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H3667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:208px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Luer Female with 1/8&#34; ID Barb</td>
			<td style="width:208px;">Oina</td>
			<td style="width:119px;">LF-2PP-QC</td>
			<td>For 3X5mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Luer Female with 3/32&#34; ID Barb</td>
			<td style="width:208px;">Oina</td>
			<td style="width:119px;">LF-1.5PP-QC</td>
			<td>For 2X4mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Luer Male with 3/32&#34; ID Barb</td>
			<td style="width:208px;">Oina</td>
			<td style="width:119px;">LM-1.5PP-QC</td>
			<td>For 2X4mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Luer Male with 1/8&#34; ID Barb</td>
			<td style="width:208px;">Oina</td>
			<td style="width:119px;">LM-2PP-QC</td>
			<td>For 3X5mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Luer Male with 5/32&#34; ID Barb</td>
			<td style="width:208px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:119px;">EW-45518-06</td>
			<td>For 5X8mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">MCDB 131</td>
			<td style="width:208px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10372-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Per acetic acid</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">433241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Peristaltic pump I</td>
			<td style="width:208px;">Masterflex</td>
			<td style="width:119px;">7524-45</td>
			<td>For Decellularization setup 1 and 2. The cassette used is 7519-75</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Peristaltic pump II</td>
			<td style="width:208px;">Ismatec</td>
			<td style="width:119px;">ISM941</td>
			<td>For Decellularization setup 3 and Recellularization bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium hydrogen phosphate</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Reducing Connector 1.5mmX2.5mm</td>
			<td style="width:208px;">Biotech</td>
			<td style="width:119px;">ISM569A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Shaker</td>
			<td style="width:208px;">Ika</td>
			<td style="width:119px;">KS4000 i&#160; control</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sodium Azide</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">71290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:208px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">13423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sodium hydrogen phosphate</td>
			<td style="width:208px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">71640-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Steen solution</td>
			<td style="width:208px;">Xvivo</td>
			<td style="width:119px;">19004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Suture</td>
			<td style="width:208px;">Agnthos</td>
			<td style="width:119px;">14817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Tri-n-butyl Phosphate</td>
			<td style="width:208px;">AlfaAesar</td>
			<td style="width:119px;">A16084.AU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Triton-X-100</td>
			<td style="width:208px;">AlfaAesar</td>
			<td style="width:119px;">A16046.OF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Tube 60ml with flat base</td>
			<td style="width:208px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">60596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube A</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280706</td>
			<td>Cut 3 pieces, each of 25 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube B</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280706</td>
			<td>Cut 1 piece of 35 cm length for decellularization perfusion steup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube C</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280706</td>
			<td>Cut 5 pieces, each of 75 cm length for decellularization perfusion steups 1-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube D</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280706</td>
			<td>Cut 1 piece of 90 cm length for decellularization perfusion steup 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube E</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280706</td>
			<td>Cut 1 piece of 20 cm length for recellularization perfusion steup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube F</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280713</td>
			<td>Cut 2 pieces, each of 15 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube G</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280713</td>
			<td>Cut 2 pieces, each of 15 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube H</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280703</td>
			<td>Cut 1 piece of 15 cm length for recellularization perfusion steup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube I</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280703</td>
			<td>Cut 1 piece of 20 cm length for recellularization perfusion steup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube J</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280703</td>
			<td>Cut 1 piece of 25 cm length for recellularization perfusion steup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube K</td>
			<td style="width:208px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">2280703</td>
			<td>Cut 2 pieces, each of 35 cm length for recellularization perfusion steup</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

decellularization and recellularization methodology for human saphenous veins

संवहनी सबसे संवहनी सर्जरी के दौरान इस्तेमाल नाली allogeneic या सिंथेटिक भ्रष्टाचार है कि अक्सर प्रतिरक्षादमन और गरीब प्रत्यक्षता की वजह से जटिलताओं के लिए नेतृत्व कर रहे हैं । टिशू इंजीनियरिंग एक उपंयास समाधान प्रदान करता है एक प्राकृतिक extracellular प्राप्तकर्ता के decellularization और recellularization की विधि का उपयोग कर कोशिकाओं युक्त मैट्रिक्स के साथ व्यक्तिगत भ्रष्टाचार उत्पंन करते हैं । हम परिधीय रक्त के छिड़काव द्वारा मानव saphenous नस और recellularization के decellularization प्रदर्शन के लिए एक विस्तृत विधि दिखाते हैं । नस perfusing 1% ट्राइटन एक्स-१००, 1% त्रि-n-butyl-फॉस्फेट (TnBP) और Kunitz (deoxyribonuclease) की २,००० DNase इकाइयों द्वारा किया गया । ट्राइटन X-१०० और TnBP 4 ज के लिए ३५ एमएल/मिनट पर perfused थे जबकि DNase 4 एच के लिए ३७ ° c पर 10 मिलीलीटर/ नस ultrapure पानी और पंजाब में धोया और फिर ०.१% peracetic एसिड में निष्फल था । इसे फिर से पंजाबियों में धोया गया और endothelial मीडियम में इसकी कंडीशनिंग की गई. नस एक प्रतिperfused से जुड़ा था और endothelial मध्यम के साथ ५० IU/एमएल हेपरिन के लिए 1 ज. Recellularization ताजा रक्त, Steen समाधान में पतला 1:1 के साथ प्रतिक्रिया को भरने के द्वारा किया गया था, और अंत में स्रावी ग्रंथि-व्युत्पन्न संवहनी जोड़ने endothelial वृद्धि कारकों (८० एनजी/एमएल), बुनियादी fibroblast वृद्धि कारकों (4 µ एल/एमएल), और एसिटाइल चिरायता एसिड (5 µ g/एमएल) । इस प्रतिक्रिया के बाद एक मशीन में ले जाया गया था और perfused के लिए ४८ एच में 2 मिलीलीटर/मिनट 3-9 mmol के बीच ग्लूकोज को बनाए रखने/ बाद में, नस पंजाबियों के साथ धोया, endothelial मध्यम और perfused के लिए मशीन में ९६ ज के लिए भर गया था । ट्राइटन एक्स-१००, TnBP और DNase के साथ उपचार 5 चक्रों में saphenous नस को विसेलुलर । सेल् फी को सामां य और सेल् फी नसों (हल् का लाल) के विपरीत सफेद देखा गया । hematoxylin और eosin (एच एंड ई) धुंधला नाभिक की उपस्थिति केवल सामांय में नहीं बल्कि सेलुलर नसों में दिखाया । recellular नस, एच और ई में दाग-नस की चमकदार सतह पर कोशिकाओं की उपस्थिति दिखाई दिया ।

एक सामांय नस की सकल आकृति विज्ञान प्रकाश लाल (3ए) है । लाल रंग प्रगतिशील decellularization चक्र में खो दिया है (चक्र 2, चित्र 3 बी, चक्र ३ , चित्र3 सी) और 5वें चक्र से, यह पीला और सफेद (चित्रा 3 डी) लग रहा है. ब्लड छिड़काव (फिगर 3E) और endothelial मीडिया छिड़काव (फिगर 3F) के बाद रिसेल् नस रंग में चमकीला लाल दिखता है । decellularization उपचार के 5 चक्र सफलतापूर्वक नस से कोशिकाओं को हटा दिया के रूप में कोई नीली नाभिक में एच एंड ई धुंधला (चित्रा 4B) देखा गया । इसके विपरीत, कई नाभिक सामांय नस (चित्रा 4a) में देखा गया । चमकदार ओर संलग्न कोशिकाओं की उपस्थिति में देखा जाता है एच और ई ४८ ज (चित्रा 4c, काले तीर) के लिए रक्त के साथ recellular नस में धुंधला और ९६ एच के लिए endothelial माध्यम के साथ छिड़काव के बाद (चित्रा 3 डी, काले तीर) ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig1.jpg"> चित्रा 1 : decellularization के लिए छिड़काव setups के कोडांतरण । क) ट्राइटन एक्स के लिए इकट्ठे decellularization सेटअप 1 दिखा तस्वीर-१०० और धुलाई । सफेद तीर समाधान के लिए प्रवाह पथ दिखाने के लिए और लाल तीर की सुविधा देता है और नस और समाधान के लिए आउटलेट संकेत मिलता है । ख) TnBP छिड़काव के लिए इकट्ठे decellularization सेटअप 2 दिखा तस्वीर । इसी तरह, decellularization सेटअप 1 में के रूप में, सफेद तीर समाधान के लिए प्रवाह पथ और लाल तीर संकेत देता है और नस और समाधान के लिए दुकानों का संकेत । ग) deoxyribonuclease छिड़काव के लिए इकट्ठे decellularization सेटअप 3 दिखा चित्र । सफ़ेद तीर समाधानों के लिए प्रवाह पथ दिखाते है और लाल तीर नस और समाधानों के लिए अनुमतियां इंगित करता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a> 
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig2.jpg"> चित्रा 2 : तैयारी और recellularization के लिए प्रतिक्रियाकर्ता के कोडांतरण । एक) प्रतिक्रिया के संयोजन के लिए आवश्यक सामग्री दिखा चित्र । ख) 4 के अंदर के चित्र-पोर्ट के लिए connectors को कम करने के स्थान दिखा टोपी (लाल तीर), अंक नस प्रवेश और आउटलेट (सफेद तीर) और ट्यूबों की व्यवस्था एच, मैं और जे कनेक्ट करने के लिए । ट्यूब एच के नि: शुल्क अंत मीडिया वापस करने के लिए प्रतिक्रियाकर्ता में रखा गया है । ग) संबंधित ट्यूबों में और बाहर जा रहा है 4 बंदरगाह टोपी के ऊपर की ओर से देखा जा सकता है । घ) इकट्ठे प्रतिक्रिया दिखा चित्र । ई) सिकुड़नेवाला पंप के साथ पूरे प्रतिक्रिया सेटअप दिखा तस्वीर । ट्यूबों K सिकुड़नेवाला पंप के लिए प्रतिक्रिया से कनेक्शन का विस्तार । F) पूरी प्रतिक्रियाकर्ता छिड़काव प्रणाली का योजनाबद्ध प्रस्तुतिकरण । नारंगी तीर प्रवाह की दिशा को इंगित करते हैं । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig3.jpg"> चित्रा 3 : decellularization और recellularization के दौरान नसों की सकल आकृति विज्ञान । क) सामांय नस की सकल आकृति विज्ञान रंग में चमकदार लाल दिखता है । रंग decellularization चक्र की बढ़ती संख्या के साथ खो दिया है ख) चक्र 2 और सी) 3 चक्र । घ) 5 चक्र द्वारा, नस पीला और सफेद लग रहा है । ई के साथ perfusing के बाद नस) ४८ एच और एफ के लिए रक्त) ९६ एच के लिए endothelial माध्यम के साथ एक बार फिर रंग में चमकदार लाल लग रहा है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig3large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig4.jpg"> चित्र 4 : सेलुलर और recellular नसों का लक्षण वर्णन । hematoxylin और eosin एक की छवि धुंधला ) सामान्य नस कई नीले नाभिक शामिल हैं, लेकिन वे ख में अनुपस्थित रहे हैं ) विसेलुलर नस. नस में सी के साथ recellular ) ४८ के लिए एच और डी के साथ ) ९६ एच के लिए endothelial मध्यम, लुमेन पर कोशिकाओं (काले तीर) के लगाव देखा गया था । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig4large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

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