Name: small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans
Uploaded: 2018-10-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch eine spezielle Research Grant Daito Bunka Universität zu Sumino Yanase finanziell unterstützt.

(1) synchronisierte Kultur von C. elegans
<ol><li>Vor der Aussaat, Kultur Escherichia coli (E. Coli) Stamm OP50 über Nacht bei 37 ° C in 300 mL Brühe Flüssigmedium Luria-Bertani (LB). Speichern der kultivierten OP50 bei-4 ° C.<ol>
<li>LB Brühe flüssiges Medium zu machen, verwenden Sie 10 g Tryptone, Hefeextrakt 5 g, 10 g NaCl und 1,5 mL 1 N NaOH und 1 L mit entionisiertem Wasser hinzufügen. Autoklaven. Hinweis: OP50 und C. Elegans Stämme sind aus dem Caenorhabditis Geneti...

<ol>
	<li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+cancer+cells.">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li><li>Matoba, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+regulates+mitochondrial+respiration.">p53 regulates mitochondrial respiration.</a> Science. 312, 1650-1653 (2006).</li><li>Yanase, S., Suda, H., Yasuda, K., Ishii, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+p53/CEP-1+is+associated+with+lifespan+extension+through+an+age-related+imbalance+in+the+energy+metabolism+of+C.+elegans.">Impaired p53/CEP-1 is associated with lifespan extension through an age-related imbalance in the energy metabolism of C. elegans.</a> Genes to Cells. 22 (12), 1004-1010 (2017).</li><li>Page, A. P., Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuticle.">The cuticle.</a> WormBook. , (2007).</li><li>Hulme, S. E., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+the+worm:+Caenorhabditis+elegans+as+a+platform+for+integrating+chemical+and+biological+research.">Chemistry and the worm: Caenorhabditis elegans as a platform for integrating chemical and biological research.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50, 4774-4807 (2011).</li><li>Lewis, J. A., Fleming, J. T., Epstein, H. F., Shakes, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+culture+methods.">Basic culture methods.</a> Methods in Cell Biology, Volume 48, Caenorhabditis elegans: Modern Biological Analysis of an Organism. , 3-29 (1995).</li><li>Senoo-Matsuda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+defect+in+the+cytochrome+b+large+subunit+in+complex+II+causes+both+superoxide+anion+overproduction+and+abnormal+energy+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">A defect in the cytochrome b large subunit in complex II causes both superoxide anion overproduction and abnormal energy metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (45), 41553-41558 (2001).</li><li>Butler, J. A., Mishur, R. J., Bhaskaran, S., Rea, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+metabolic+signature+for+long+life+in+the+Caenorhabditis+elegans+Mit+mutants.">A metabolic signature for long life in the Caenorhabditis elegans Mit mutants.</a> Aging Cell. 12, 130-138 (2013).</li><li>Marbach, E. P., Weil, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enzymatic+measurement+of+blood+lactate+and+pyruvate:+Use+and+significance+of+metaphosphoric+acid+as+a+common+precipitant.">Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate: Use and significance of metaphosphoric acid as a common precipitant.</a> Clinical Chemistry. 13 (4), 314-325 (1967).</li><li>Mishur, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+metabolites+extend+lifespan.">Mitochondrial metabolites extend lifespan.</a> Aging Cell. 15, 336-348 (2016).</li></ol>

Wenn Sie diese farbmetrischen Assay Kits verwenden, ist der wichtigste Schritt in der Probengewinnung zellulärer Laktat zu erkennen und Pyruvat genau in C. Elegans der Prozess der Proteinfällung während der Homogenisierung (Abbildung 1). Es ist nicht unbedingt notwendig, eine Teflon-Homogenisator als andere Homogenisatoren zu verwenden (zB., Dounce und konisch Gewebe Schleifmaschinen oder Wulst Mühlen) eignen sich auch für die kleinen Extraktion von Würmern. Wir nicht...

Laktat und Pyruvat-Konzentrationen gelten als Zwischenprodukte des Energiestoffwechsels, und beziehen sich auf die Staaten der Glykolyse, tricarboxylic Säure (TCA) Zyklus und Elektronentransport-Kette in den Zellen der aeroben Organismen. Eine Reihe von Reaktionen in Glykolyse oxidiert Glucose zu Pyruvat, das liegt am Scheideweg metabolische und Kohlenhydrate durch Glukoneogenese, Fettsäuren und Energiestoffwechsel durch Acetyl-CoA und die Aminosäure Alanin umgewandelt werden kann. Die TCA-Zyklus tritt unter das Vorhandensein von ausreichend gelöste Sauerstoff und ist von grundlegender Bedeutung für die Umwandlung von Glukose in Energie. Vor allem, die Veränderung des sekundärstoffwechsels ist ein interessantes Phänomen in dem Glykolyse überwiegend zur Energiegewinnung verwendet wird und mitochondriale Atmung, beinhaltet die TCA-Zyklus und Elektronentransport-Kette ist herunterreguliert in Säugetieren Krebs Zellen1,2. Wir zeigten kürzlich, dass die Laktatwerte und die konsequente Laktat/Pyruvat (L/P)-Verhältnis während der Alterung bei Modellorganismus Caenorhabditis Elegans (C. Elegans) abgenommen. Ebenso fanden wir, dass der Säugetier-Tumorsuppressor p53 Ortholog CEP-1 in C. Elegans eine wichtige Rolle in der altersbedingten Veränderungen des Energiestoffwechsels durch die Aktivierung von seinen transkriptionelle Ziele3hat.
In biologischen Tests, wie die Messung von Laktat und Pyruvat-Konzentrationen in den Zellen wurden die Empfindlichkeit, Genauigkeit, Stichprobenumfang und Inkubationszeit der kolorimetrischen/fluorimetrischen Assay Kits dramatisch verbessert. Dank technologischer Innovationen können wir analysieren verschiedene Metaboliten und Fortgeschrittene Metaboliten ohne groß angelegte Kultur von C. Elegans, was angesichts seiner geringen Größe schwierig ist. Im Allgemeinen ist die Empfindlichkeit eines farbmetrischen Assays eine Größenordnung kleiner als die eines fluorimetrischen Assays; Allerdings eignet sich der kolorimetrischen Ansatz mehr im Rahmen der gemeinsamen Labors. Außerdem ist ein Extraktiontechnik, Homogenisierung und Eiweiß Niederschlag enthält für die quantitative Bestimmung von Laktat und Pyruvat Konzentrationen in C. Elegans Zellen von entscheidender Bedeutung, da diese Nematoden in ein Exoskelett eingeschlossen ist die Kutikula, im Gegensatz zu kultivierten Säugetierzellen Linien4,5genannt. Hier beschreiben wir ein Protokoll zu analysieren, Laktat und Pyruvat Konzentrationen mit kommerziellen farbmetrischen Assay Kits inklusive Tipps für Probe-Extraktion von C. Elegans.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:696px;" width="696">
	<tbody>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:247px;">Lactate Colorimetric/Fluorimetric Assay kit&#160;</td>
			<td style="width:100px;">BioVision</td>
			<td style="width:136px;">#K607-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/fluorimetric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">EnzyChrom Pyruvate 
			Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">BioAssay 
			Systems</td>
			<td style="width:136px;">#EPYR-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/ fluorometric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">#23225</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric assay; store at 
			&#160;room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Trichloroacetic Acid</td>
			<td style="width:100px;">Wako Pure Chemical</td>
			<td style="width:136px;">#207-04955</td>
			<td>store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Teflon homogenizer&#160;</td>
			<td style="width:100px;">Iwaki/Pyrex</td>
			<td style="width:136px;">#358034 (Wheaton)</td>
			<td style="width:213px;">Instead of Iwaki/Pyrex, 
			available by Wheaton</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans

Laktat und Pyruvat sind wichtige Zwischenprodukte der intrazellulären Energie Stoffwechselwege. Überwachung der Laktat/Pyruvat-Verhältnis in den Zellen hilft, festzustellen, ob ein Ungleichgewicht im altersbedingten Energiestoffwechsel zwischen Mitochondrien Oxidative Phosphorylierung und aerobe Glykolyse. Hier zeigen wir die Nutzung von kommerziellen farbmetrischen Assay Kits für Laktat und Pyruvat bei Modellorganismus C. Elegans. Vor kurzem wurden durch die Forschung und Entwicklung von Reagenz Herstellern durchgeführt die Empfindlichkeit und Genauigkeit der kolorimetrischen/fluorimetrischen Assay Kits stark verbessert. Die verbesserte Reagenzien ermöglichten den Einsatz von kleinen Assays mit einer 96-Well-Platte in C. Elegans. Im Allgemeinen ist eine Antikörper-Test überlegen in der Empfindlichkeit einer kolorimetrischen Assay; Allerdings ist der kolorimetrischen Ansatz besser geeignet für den Einsatz im gemeinsamen Labors. Ein weiteres wichtiges Thema in diesen Tests zur quantitativen Bestimmung ist Eiweiß Niederschlag von homogenisierten C. Elegans Proben. In unserer Eiweiß Niederschlag Methode, gemeinsame Fällungsmitteln (zB., Trichloressigsäure Säure, Perchlorsäure und Metaphosphoric Säure) dienen zur Probenvorbereitung. Eine eiweißfreie Assay-Probe wird vorbereitet, indem man direkt kalt Fällungsmittel (Endkonzentration von 5 %) während der Homogenisierung.

Die farbmetrischen Assays zeigten für die quantitative Bestimmung von Laktat und Pyruvat-Konzentrationen wir die Genauigkeit dieser Tests im Vergleich zu früheren Berichten in C. Elegans7,8. Hier war der Prozess der Proteinfällung während der Probe Extraktion der wichtigste Schritt um exakte Werte zu generieren. Für Proteinfällung, gemeinsame Fällungsmitteln (zB., TCA, PCA, oder Metaphosphoric Säure) kann...

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Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Wir beschreiben eine modifizierte kleine Extraktion und Farbmetrische Assays von Laktat und Pyruvat in die Nematoden C. Elegans. Bei der Verwendung von kommerziellen Assay Kits ist die technische Entwicklung ihrer Empfindlichkeit und Genauigkeit wichtig. Proteinfällung Extraktion ist der wichtigste Schritt zur quantitativen Bestimmung von intrazellulären Metaboliten.

Kleinräumige farbmetrischen Assays der intrazellulären Laktat und Pyruvat in den Fadenwurm Caenorhabditis elegans

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

Diese Forschung kann helfen, alle Fragen in ihnen biochem Zählung und Methodik Bereich wie eine Analyse der Entwicklungsrechte in Nematode zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Proteinfällung in Deruktion und Trinken und Homogenisierung der Würmer. Starten Sie dieses Experiment, indem Sie Den E.coli OP50-Stamm in 300 Millilitern LB-Brühe flüssiges Medium bei 37 Grad Celsius über Nacht anbauen.Bewahren Sie erfolgreiche OP50 bei vier Grad Celsius auf. Pipette zwei Milliliter der kultivierten OP50 auf mindestens drei zuvor vorbereiteten NGM, oder Nematode Growth Media Agar Platten und von Hand wirbeln die Platte verteilt. Inkubieren Sie die Platten bei Raumtemperatur über Nacht, um eine dünne Schicht OP50 zu schaffen.Als nächstes verwenden Sie einen sterilen Zahnstocher, um ein Stück Agar von einer Platte mit Würmern zu pflücken, um mindestens 100 Würmer zu jeder OP50 NGM Platte hinzuzufügen. Kultur mindestens drei Platten mit den Würmern bei 20 Grad Celsius, bis die Würmer Erwachsenenstadium erreichen, was unter stereoskopischem Mikroskop bestätigt wird. Suchen Sie gravid Hermaphrodite mit Eiern gefüllt mit einem stereoskopischen Mikroskop.Nachdem Sie fünf Milliliter S-Puffer zu Platten hinzugefügt haben, verwenden Sie Pasteur Pipette, um die Würmer von allen drei Platten auf ein 15 Milliliter konisches Rohr zu übertragen. Waschen Sie die Würmer dreimal, indem Sie 15 Milliliter S-Puffer hinzufügen und dann bei 30 Sekunden bei Raumtemperatur 30 Mal G zentrifugieren. Wenn das Volumen des S-Puffers fünf Milliliter überschreitet, entfernen Sie den überschüssigen Puffer nach dem Zentrifugieren.Für eine erfolgreiche Exonisierung und Masseneiisolierung lösen Sie die Würmer in 0,5 Milliliter alkalischer Hypo-Chloratlösung auf. Mischen Sie durch Invertieren und inkubieren bei Raumtemperatur für 10 bis 15 Minuten. Zentrifuge bei 1, 400 U/min für 30 Sekunden, um die Lösung zu entfernen.Verwenden Sie 15 Milliliter S-Puffer, um das Eipellet zu waschen. Nach dem Zentrifugieren entfernen Sie den Überstand und wiederholen Sie diese Wäsche mindestens dreimal. Nach der letzten Wäsche setzen wir das Pellet in fünf bis sechs Milliliter S-Puffer aus, ohne E.coli und bebrüten die Eier über Nacht bei 20 Grad Celsius, um sie zu schlüpfen und die H-Synchronkultur der L1-Bühnenlarven zu erreichen.Pipette 10 Mikroliter S-Puffer mit L1-Würmern auf drei Deckschscheinen. Zählen Sie die Larven unter einem stereoskopischen Mikroskop und berechnen Sie den Durchschnitt, um die ungefähre Anzahl der L1-Bühnenlarven zu bestimmen. Schließlich übertragen Sie die L1-Bühnenlarven auf fünf NGM Agar-Platten mit OP50 und wachsen sie bei 20 Grad Celsius bis zum jungen Erwachsenenstadium, in dem die Selbstbefruchtung stattfindet und ein paar Eier gelegt werden.Beobachten Sie die Würmer jeden Tag unter dem Mikroskop und sammeln Sie dann den jungen Erwachsenen oder fünf Tage alte Würmer. Um nur lebende Würmer auszuwählen, fügen Sie die in drei bis vier Milliliter S-Puffer aufgehängten Würmer zu einem 15 Milliliter konischen Rohr hinzu. Dann fügen Sie ein gleiches Volumen von eiskalten 60%Saccharose und mischen.Zentrifugieren Sie das Rohr bei 1,500 mal G bei vier Grad Celsius für 15 Sekunden. Verwenden Sie dann eine Pasteur Pipette, um die Würmer vorsichtig von der Wand des Rohres zu bewegen, und entfernen Sie dann die schwimmenden Würmer in ein frisches Rohr. Füllen Sie das Rohr mit S-Puffer, um die Würmer zu waschen, und Zentrifuge bei 1500 mal G bei vier Grad Celsius für 30 Sekunden.Entfernen Sie den Puffer und wiederholen Sie die Wäsche zwei weitere Male. Nach dem dritten Waschen, entfernen Sie vorsichtig den Überstand, stellen Sie sicher, keine Würmer zu entfernen, und verwenden Sie eine 1.000 Mikroliter Pipettenspitze, um das nasse Volumen der gewaschenen Würmer zu messen. Für die Proteinfällung verwenden Sie eine Pasteur Pipette, um die gewaschenen Würmer zu einem gleichen Volumen von eiskalten 10% Trichloressigsäure in einem homogenisator auf Eis gelegten Homogenisator hinzuzufügen.Homogenisieren Sie mit 40 Hüben Passel mit Rotation, bis zu 1, 300 RPM. Verwenden Sie einen Ultraschallhomogenisator mit 20% Zollzyklus, um das Homogenat zu beschallen. Verwenden Sie eine Pasteur Pipette, um das Homogenat auf 1,5 Milliliter Rohr auf Eis gelegt zu übertragen.Nach der Übertragung des Homogenats auf ein Mikrozentrifugenrohr zentrifugieren Sie bei 8.000 Zeit G bei vier Grad Celsius für 10 Minuten, um es zu klären. Den Überstand in ein frisches Rohr geben und vier Molkaliumchlorid hinzufügen und 20 Minuten auf Eis brüten, um ihn zu neutralisieren. Dann zentrifugieren Sie es bei 8 000 mal G bei vier Grad Celsius für 10 Minuten.Übertragen Sie den Überstand in ein frisches Rohr und lagern Sie bei 80 Grad Celsius, bis er für weitere Tests benötigt wird. Um die Laktatkonzentration zu messen, verwenden Sie ein kolorimetrisches Assay-Kit, um doppelte Analysen für die Testproben durchzuführen. Fügen Sie 10 Mikroliter der Testproben zu jedem Brunnen einer 96-Well-Platte hinzu, und fügen Sie dann laktat-Assay-Puffer zu jeder Probe hinzu, um das Volumen auf 15 Mikroliter einzustellen.100 Millimolar L+Laktat Standard mit Laktat-Assay-Puffer auf einen Millimolar verdünnen. Dann, in eine Reihe von Brunnen, fügen Sie Null, zwei, vier, sechs, acht und 10 Mikroliter von verdünnten L + Laktat Standard. Fügen Sie 50 Mikroliter Reaktionsmischung zu jedem Brunnen hinzu und inkubieren Sie bei Raumtemperatur, die für mindestens 30 Minuten vor Licht geschützt ist, damit sich die Farbe entwickelt.Schließlich verwenden Sie einen Mikroplattenleser, um die Absorption jedes Brunnens bei 570 Nanometern zu messen. Subtrahieren Sie die Absorption des Hintergrundsteuerungsmixes von der Absorption des Reaktionsmixes. Zeichnen Sie dann die Laktat-Standardkurve auf, und berechnen Sie die Laktatkonzentrationen aus der Kurve, indem Sie jede Konzentration mit 2,25 multiplizieren.Verwenden Sie ein kolorimetrisches Assay-Kit, um die Pyruvatkonzentration in den Testproben zu messen und Duplexuntersuchungen durchzuführen. Fügen Sie 10 Mikroliter der Testproben zu verschiedenen Brunnen einer 96-Well-Platte hinzu und fügen Sie jeder Probe 90 Mikroliter Arbeitsreagenz hinzu. Inkubieren Sie für 30 Minuten bei Raumtemperatur bedeckt.Legen Sie dann die Platte in den Mikroplattenleser, um die Saugfähigkeit jedes Brunnens bei 570 Nanometern zu messen. Zeichnen Sie die Pyruvat-Standardkurve und berechnen Sie die Pyruvatkonzentrationen aus der Standardkurve, indem Sie jede Konzentration mit 2,25 multiplizieren. Und schließlich, um die Proteinkonzentration in den Testproben zu messen, verwenden Sie ein kolorimetrisches Assay-Kit, wie im Textprotokoll beschrieben.Nach der Proteinfällung können farbmetrische Assays zur quantitativen Bestimmung von Laktat- und Pyruvatkonzentrationen verwendet werden. Dieses Experiment zeigt die Genauigkeit von kolorimetrischen Assays im Gegensatz zu früheren Berichten in C.Elegans. Darüber hinaus sind diese Assays ausreichend empfindlich, um Laktat- und Pyruvatkonzentrationen auch in kleinen Proben in kurzer Zeit zu messen.Um Laktat und Pyruvat in C.elegans genau zu erkennen, ist es wichtig, proteinfällend während der Homogenisierung der Würmer durchzuführen. Die Menge an Laktat und Pyruvat ist höher, wenn Proben während der Homogenisierung proteinvergefällt werden, verglichen mit intakter zytosolischer Fraktion oder nach der Homogenisierung, wenn überhaupt kein Laktat oder Pyruvat nachgewiesen wurde.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

Kovalente Bindung von Antikörpern an Cellulose Papierscheiben und ihre Anwendungen in der Naked-Augen Kolorimetrische Immunoassays

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

Forschung

Biochemie

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

Automatische Acoustic Verzicht für die serielle Verdünnung von Peptid-Agonisten im Potency Bestimmung Assays

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Eine einfache Methode zur chemischen Hochdurchsatz-Screening in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Ein kolorimetrischen Verfahren zur Messung der Eisengehalt in Pflanzen

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Mapping-Stoffwechsel: Laktat-Dehydrogenase Überwachungstätigkeit direkt im Gewebe

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Photometrische Bestimmung des Cyanobakteriums Synechocystis Phycobiliprotein Inhalt

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

Platte-basierte Large-Scale Anbau von Caenorhabditis Elegans: Probenvorbereitung für die Studie von Stoffwechselveränderungen bei Diabetes

Culturing Caenorhabditis elegans (C. elegans) in a large-scale manner on agar plates can be time-consuming and difficult. This protocol describes a simple ...

In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones

In Vitro Ubiquitination und Deubiquitination Assays von Nucleleosomalhistones

Ubiquitination is a post-translational modification that plays important roles in various signaling pathways and is notably involved in the coordination ...