Name: small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans
Uploaded: 2018-10-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans at JoVE.com

עבודה זו מבחינה כלכלית נתמך על ידי מענק מחקר מיוחד מאוניברסיטת Bunka Daito אל Sumino Yanase.

1. מסונכרנים תרבות של C. elegans
<ol><li>לפני זריעה, תרבות Escherichia coli (e. coli) זן OP50 בין לילה ב- 37 מעלות צלזיוס ב 300 מ ל מרק לוריא-Bertani (LB) בינוני נוזלי. לאחסן את OP50 בתרבית ב-4 ° c<ol>
<li>כדי להפוך את LB מרק נוזלי בינוני, השתמש 10 גר' טריפטון, 5 גר' תמצית שמרים, 10 גרם של NaCl ו 1.5 מ ל 1 N NaOH ולאחר להוסיף 1 ליטר ?...

<ol>
	<li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+cancer+cells.">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li><li>Matoba, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+regulates+mitochondrial+respiration.">p53 regulates mitochondrial respiration.</a> Science. 312, 1650-1653 (2006).</li><li>Yanase, S., Suda, H., Yasuda, K., Ishii, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+p53/CEP-1+is+associated+with+lifespan+extension+through+an+age-related+imbalance+in+the+energy+metabolism+of+C.+elegans.">Impaired p53/CEP-1 is associated with lifespan extension through an age-related imbalance in the energy metabolism of C. elegans.</a> Genes to Cells. 22 (12), 1004-1010 (2017).</li><li>Page, A. P., Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuticle.">The cuticle.</a> WormBook. , (2007).</li><li>Hulme, S. E., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+the+worm:+Caenorhabditis+elegans+as+a+platform+for+integrating+chemical+and+biological+research.">Chemistry and the worm: Caenorhabditis elegans as a platform for integrating chemical and biological research.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50, 4774-4807 (2011).</li><li>Lewis, J. A., Fleming, J. T., Epstein, H. F., Shakes, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+culture+methods.">Basic culture methods.</a> Methods in Cell Biology, Volume 48, Caenorhabditis elegans: Modern Biological Analysis of an Organism. , 3-29 (1995).</li><li>Senoo-Matsuda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+defect+in+the+cytochrome+b+large+subunit+in+complex+II+causes+both+superoxide+anion+overproduction+and+abnormal+energy+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">A defect in the cytochrome b large subunit in complex II causes both superoxide anion overproduction and abnormal energy metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (45), 41553-41558 (2001).</li><li>Butler, J. A., Mishur, R. J., Bhaskaran, S., Rea, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+metabolic+signature+for+long+life+in+the+Caenorhabditis+elegans+Mit+mutants.">A metabolic signature for long life in the Caenorhabditis elegans Mit mutants.</a> Aging Cell. 12, 130-138 (2013).</li><li>Marbach, E. P., Weil, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enzymatic+measurement+of+blood+lactate+and+pyruvate:+Use+and+significance+of+metaphosphoric+acid+as+a+common+precipitant.">Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate: Use and significance of metaphosphoric acid as a common precipitant.</a> Clinical Chemistry. 13 (4), 314-325 (1967).</li><li>Mishur, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+metabolites+extend+lifespan.">Mitochondrial metabolites extend lifespan.</a> Aging Cell. 15, 336-348 (2016).</li></ol>

כאשר ניצול ערכות אלה assay ערכי צבע מוחלטים, השלב הקריטי ביותר מדגם החילוץ כדי לזהות לקטט הסלולר ו פירובט במדויק ב- C. elegans הוא התהליך של חלבון המדידות המגון (איור 1). . זה לא הכרחי כדי להשתמש מהמגן טפלון, כמו אחרים לטקס (למשל., דאונס, צמצום מטחנות רקמות או חרוז מילס) מתאימ?...

ריכוז ו לקטט פירובט נחשבים נרחב intermediates של חילוף החומרים האנרגיה, קשורים לארצות הברית גליקוליזה, חומצה tricarboxylic (TCA) מחזור ו תחבורה אלקטרונים בשרשרת בתאים של אורגניזמים אירוביים. סדרה של תגובות בגליקוליזה נישחק גלוקוז כדי פירובט, אשר שוכנת בצומת דרכים מטבולית, ניתן להמיר פחמימות באמצעות גלוקונאוגנזה, חומצות שומן, חילוף החומרים האנרגיה באמצעות אצטיל קואנזים a, את אלנין חומצה אמינית. מחזור TCA מתרחשת תחת הנוכחות של מספיק חמצן מומס, והוא היסוד עבור ההמרה של גלוקוז לאנרגיה. במיוחד, משינוי של חילוף חומרים משני הוא תופעה מעניינת שבה גליקוליזה משמשת בעיקר לייצור אנרגיה והוא אירובי נשימה מיטוכונדריאלי, אשר מערבת את מחזור TCA ושרשרת אלקטרון תחבורה, downregulated סרטן בתרבית של תאי1,2. הראנו לאחרונה את רמת חומצת החלב ואת היחס הסוגר לקטאט/פירובט (L/P) ירד במהלך ההזדקנות באורגניזם מודל Caenorhabditis elegans (C. elegans). כמו כן, מצאנו כי גידול בתרבית של משתיק קול p53 ortholog CEP-1 C . elegans יש תפקיד חשוב בהתיקונים הקשורות לגיל של חילוף החומרים האנרגיה דרך ההפעלה של מטרות תעתיק3.
במבחני ביולוגיים, כגון מדידת ריכוזים ו לקטט פירובט בתאים, הרגישות דיוק, גודל המדגם, זמן הדגירה של ערכי צבע מוחלטים/fluorimetric assay ערכות שופרו באופן דרמטי. בשל חידושים טכנולוגיים, עתה אנו מסוגלים לנתח מטבוליטים שונים של מטבוליטים ביניים ללא תרבות בקנה מידה גדול של C. elegans, אשר קשה בהתחשב גודלו הקטן. באופן כללי, הרגישות של וזמינותו ערכי צבע מוחלטים היא בסדר גודל קטן יותר מזה של וזמינותו fluorimetric; עם זאת, הגישה ערכי צבע מוחלטים מתאימה יותר בסביבה של מעבדות נפוצות. יתר על כן, שיטת החילוץ המכילה משקעים המגון וחלבון הוא קריטי עבור קביעת כמותית של ריכוזים ו לקטט פירובט בתאי C. elegans כי תחום זה תולעים נימיות שלד חיצוני קרא את הקוטיקולה, בניגוד בתרבית של תאים בתרבית קווים4,5. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול לנתח ריכוזים ו לקטט פירובט באמצעות ערכות assay ערכי צבע מוחלטים מסחרי הכולל טיפים להפקת מדגם של C. elegans.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:696px;" width="696">
	<tbody>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:247px;">Lactate Colorimetric/Fluorimetric Assay kit&#160;</td>
			<td style="width:100px;">BioVision</td>
			<td style="width:136px;">#K607-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/fluorimetric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">EnzyChrom Pyruvate 
			Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">BioAssay 
			Systems</td>
			<td style="width:136px;">#EPYR-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/ fluorometric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">#23225</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric assay; store at 
			&#160;room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Trichloroacetic Acid</td>
			<td style="width:100px;">Wako Pure Chemical</td>
			<td style="width:136px;">#207-04955</td>
			<td>store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Teflon homogenizer&#160;</td>
			<td style="width:100px;">Iwaki/Pyrex</td>
			<td style="width:136px;">#358034 (Wheaton)</td>
			<td style="width:213px;">Instead of Iwaki/Pyrex, 
			available by Wheaton</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans

לקטט פירובט intermediates מפתח של מסלולים מטבוליים אנרגיה תאיים בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. פיקוח על היחס לקטאט/פירובט בתאים מסייעת כדי לקבוע אם קיים חוסר איזון בחילוף החומרים האנרגיה הקשורות לגיל בין זרחון חמצוני מיטוכונדריאלי גליקוליזה אירובי. כאן, אנו מראים את הניצול של ערכות assay ערכי צבע מוחלטים מסחרי ו לקטט פירובט באורגניזם מודל C. elegans. לאחרונה, הרגישות והדיוק של ערכות ערכי צבע מוחלטים/fluorimetric assay שופרו במידה רבה על ידי מחקר ופיתוח בניצוחו של ריאגנט יצרנים. ריאגנטים משופרת אפשרו את השימוש מבחני בקנה מידה קטן עם צלחת 96-ובכן C. elegans. באופן כללי, וזמינותו fluorimetric עדיפה על רגישות וזמינותו ערכי צבע מוחלטים; עם זאת, הגישה ערכי צבע מוחלטים מתאים יותר לשימוש במעבדות נפוצות. בעיה חשובה נוספת ב אלה מבחני לקביעת כמותית היא חלבון משקעים של הומוגני C. elegans דגימות. בשיטה שלנו חלבון משקעים, precipitants משותף (למשל., חומצת חומץ טריכלור, חומצה על-כלורית, חומצה metaphosphoric) משמשים עבור הכנת הדוגמא. מדגם assay נטול חלבון מוגש על-ידי הוספת ישירות קר precipitant (ריכוז הסופי של 5%) במהלך המגון.

באמצעות מבחני את ערכי צבע מוחלטים לקביעת ריכוזים ו לקטט פירובט כמותית, הראנו את הדיוק של אלה מבחני לעומת דוחות הקודם ב- C. elegans7,8. כאן, התהליך של חלבון משקעים במהלך חילוץ מדגם היה השלב המכריע ביותר כדי להפיק ערכים מדויקים. עבור חלבון משקע...

Watch this Scientific Journal Video about Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

נתאר החילוץ בקנה מידה קטן שונה ואת מבחני ערכי צבע מוחלטים של ו לקטט פירובט ב תולעים נימיות C. elegans. כאשר ניצול מסחרי assay ערכות, פיתוח טכני של הרגישות והדיוק שלהם חשובה. חלבון משקעים החילוץ הוא השלב הקריטי ביותר של הקביעה כמותית של מטבוליטים תאיים.

ערכי צבע מוחלטים מבחני של תאיים לקטט בקנה מידה קטן ו פירובט ב נמטודות Caenorhabditis elegans

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

מחקר זה יכול לעזור לענות על כל שאלה בהם ספירת ביוכימיה ותחום המתודולוגיה כגון ניתוח של זכויות פיתוח nematode. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא משקעים בחלבון בהסגרה ושתייה והומוגניזציה של התולעים. התחל ניסוי זה על ידי גידול זן E.coli OP50 ב 300 מיליליטר של מדיום נוזלי מרק LB ב 37 מעלות צלזיוס לילה.אחסן OP50 מוצלח בארבע מעלות צלזיוס. פיפטה שני מיליליטר של OP50 מתורבת על מינימום שלושה NGM שהוכן בעבר, או Nematode צמיחה מדיה אגר צלחות להתפשט ביד מערבל את הצלחת. הדגירה את הצלחות בטמפרטורת החדר לילה כדי ליצור שכבה דקה של OP50.לאחר מכן, השתמש בקיסם סטרילי כדי לבחור חתיכת אגר מצלחת עם תולעים, כדי להוסיף לפחות 100 תולעים לכל צלחת OP50 NGM. תרבות לפחות שלוש צלחות עם התולעים ב 20 מעלות צלזיוס, עד התולעים להגיע לשלב למבוגרים, אשר אושר תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי. אתר הרמפרודיטים gravid מלא ביצים באמצעות מיקרוסקופ סטריאוסקופי.לאחר הוספת חמישה מיליליטר של S-buffer לצלחות, להשתמש פיפטה פסטר להעביר את התולעים מכל שלוש הצלחות לצינור חרוט 15 מיליליטר. לשטוף את התולעים שלוש פעמים על ידי הוספת 15 מיליליטר של S-buffer ולאחר מכן צנטריפוגה ב 300 פעמים G בטמפרטורת החדר במשך 30 שניות. אם אמצעי האחסון של S-buffer חורג מחמישה מיליליטר, הסר את המאגר העודף לאחר הצנטריפוגה.לזיכוי מוצלח ובידוד ביצים בתפזורת, ממיסים את התולעים ב-0.5 מיליליטר של תמיסת היפו כלורט אלקליין. מערבבים על ידי היפוך ודגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 עד 15 דקות. צנטריפוגה ב 1, 400 סל"ד במשך 30 שניות כדי להסיר את הפתרון.השתמש 15 מיליליטר של S-חיץ לשטוף את גלולת הביצה. לאחר צנטריפוגה זה להסיר את supernatant ולחזור על זה לשטוף לפחות שלוש פעמים. לאחר הכביסה האחרונה, אנו להשעות את גלולה בחמישה עד שישה מיליליטר של S-buffer, ללא E.coli ו דגירה הביצים לילה ב 20 מעלות צלזיוס לבקוע אותם ולהשיג תרבות סינכרונית H של זחלי שלב L1.פיפטה 10 מיקרוליטרים של S-buffer המכיל תולעי L1 על שלוש תלושי כיסוי. ספור את הזחלים תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי וחשב את הממוצע כדי לקבוע את המספר המשוער של זחלי שלב L1. לבסוף, להעביר את הזחלים שלב L1 לחמישה צלחות אגר NGM עם OP50 ולגדל אותם ב 20 מעלות צלזיוס עד השלב הצעיר למבוגרים, שבמהלכו הפריה עצמית מתרחשת וכמה ביצים מונחות.שימו לב לתולעים כל יום מתחת למיקרוסקופ ואז אספו את הצעירים, או תולעים בני חמישה ימים. כדי לבחור רק תולעים חיות, הוסף את התולעים התלויות בשלושה עד ארבעה מיליליטר של S-buffer לצינור חרוט 15 מיליליטר. לאחר מכן מוסיפים נפח שווה של 60% סוכרוז קר כקרח ומערבבים.צנטריפוגה הצינור ב 1, 500 פעמים G בארבע מעלות צלזיוס במשך 15 שניות. לאחר מכן השתמש פיפטה פסטר בזהירות להזיז את התולעים מקיר הצינור, ולאחר מכן להסיר את התולעים הצפות לתוך צינור טרי. ממלאים את הצינור ב- S-buffer כדי לשטוף את התולעים, וצנטריפוגה ב 1500 פעמים G בארבע מעלות צלזיוס במשך 30 שניות.הסר את המאגר וחזור על שטיפה פעמיים נוספות. לאחר הכביסה השלישית, הסר בזהירות את העל-טבעי, הקפד לא להסיר תולעים, ולהשתמש בקצה פיפטה של 1,000 מיקרוליטר כדי למדוד את הנפח הרטוב של התולעים השטופות. למשקעי חלבון, השתמשו בפיפיאט פסטר כדי להוסיף את התולעים השטופות לנפח שווה של חומצה קריכלורואצטית קרה כקרח של 10% בהומוגניזציה המונחת על קרח.הומוגניזציה באמצעות 40 משיכות פסאל עם סיבוב, עד 1, 300 סל"ד. השתמש homogenizer קולי עם 20% מחזור החובה כדי sonicate הומוגנית. השתמש פיפטה פסטר להעביר את הומוגנטי ל 1.5 צינור מיליליטר להציב על קרח.לאחר העברת homogenate לצינור מיקרו צנטריפוגה, צנטריפוגה ב 8, 000 זמן G בארבע מעלות צלזיוס במשך 10 דקות כדי להבהיר את זה. מעבירים את העל-טבעי לצינור טרי ומוסיפים ארבעה אשלגן כלורי טוחן ודגירה על קרח במשך 20 דקות כדי לנטרל אותו. ואז צנטריפוגה זה ב 8, 000 פעמים G בארבע מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.מעבירים את העל-טבעי לצינור טרי ומאחסנים ב-80 מעלות צלזיוס עד לצורך בבדיקות נוספות. כדי למדוד את ריכוז הלקטאט, השתמש בערכת בדיקה צבעונית כדי לבצע ניתוחים כפולים עבור דגימות הבדיקה. הוסיפו 10 מיקרוליטרים של דגימות הבדיקה לכל באר של צלחת של 96 בארות, ולאחר מכן הוסיפו מאגר בדיקת לקטט לכל דגימה כדי להתאים את עוצמת הקול ל-15 מיקרוליטרים.לדלל 100 מילימולר L + לקטט רגיל עם מאגר מיסי לקטט למילימולר אחד. לאחר מכן, לתוך סדרה של בארות, להוסיף אפס, שתיים, ארבע, שש, שמונה, ו 10 microliters של תקן L + לקטט מדולל. מוסיפים 50 מיקרוליטרים של תערובת תגובה לכל באר, ו דגירה בטמפרטורת החדר מוגנת מפני אור לפחות 30 דקות להתפתחות הצבע.לבסוף, השתמש בקורא מיקרופלסטיק כדי למדוד את הספיגה של כל באר ב 570 ננומטר. הפחת את הספיגה של תערובת בקרת הרקע מהספיגה של תערובת התגובה. לאחר מכן להתוות את העקומה הסטנדרטית לקטט, ולחשב את ריכוזי לקטט מן העקומה על ידי הכפלת כל ריכוז על ידי 2.25.השתמש בערכת בדיקה צבעונית כדי למדוד את ריכוז הפירובט בדגימות הבדיקה, ולבצע בדיקות דופלקס. הוסף 10 microliters של דגימות הבדיקה בארות שונות של צלחת 96 באר, ולהוסיף 90 microliters של reagent עובד לכל מדגם. הדגירה מכוסה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן מניחים את הצלחת אצל קורא המיקרופלסטיק כדי למדוד את הספיגה של כל באר ב-570 ננומטר. להתוות את העקומה הסטנדרטית פירובט, ולחשב את ריכוזי פירובט מן העקומה הסטנדרטית על ידי הכפלת כל ריכוז על ידי 2.25. ולבסוף, כדי למדוד את ריכוז החלבון בדגימות הבדיקה, השתמש בערכת בדיקה צבעונית כמתואר בפרוטוקול הטקסט.לאחר משקעים חלבון, בדיקות colorimetric יכול לשמש לקביעה כמותית של ריכוזי לקטט פירובט. ניסוי זה מראה את הדיוק של אסיונות צבעוניים בניגוד לדיווחים קודמים ב- C.Elegans. יתר על כן, אלה assays רגישים מספיק כדי למדוד ריכוזי לקטט פירובט אפילו בדגימות בקנה מידה קטן בתקופה קצרה של זמן.כדי לזהות במדויק לקטט ופירובט ב C.elegans, חיוני לבצע משקעים חלבון במהלך הומוגניזציה של התולעים. כמות הלקטאט והפירומט שזוהו גבוהה יותר כאשר דגימות הן חלבון זירז במהלך הומוגניזציה, לעומת שבר ציטוסולי שלם או לאחר הומוגניזציה כאשר לא זוהה לקטט או פירובט בכלל.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

קשר הקוולנטי של נוגדני דיסקי נייר תאיים ואת היישומים שלהם ב Immunoassays מדד-צבע Naked-עין

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

אקוסטית אוטומטית מחלק עבור דילול סדרה של אגוניסטים פפטיד ב מבחני קביעת און

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

שיטה פשוטה להקרנה כימי תפוקה גבוהה ב Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

שיטה ערכי צבע מוחלטים למדידת תכולת ברזל צמחים

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

מיפוי החומרים: פיקוח על פעילות לקטט דהידרוגנאז ישירות בתוך הרקמה

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

קביעת spectrophotometric תוכן Phycobiliprotein Cyanobacterium Synechocystis

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

Plate-based Large-scale Cultivation of Caenorhabditis elegans: Sample Preparation for the Study of Metabolic Alterations in Diabetes

מבוסס על צלחת Large-scale טיפוח Caenorhabditis elegans: הכנת הדוגמא על המחקר של שינויים מטבוליים בחולי סוכרת

Culturing Caenorhabditis elegans (C. elegans) in a large-scale manner on agar plates can be time-consuming and difficult. This protocol describes a simple ...

In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones

בתחומי החוץ והאי של האבנים הנוזומטיות

Ubiquitination is a post-translational modification that plays important roles in various signaling pathways and is notably involved in the coordination ...