Name: small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans
Uploaded: 2018-10-15T14:00:00
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यह काम आर्थिक रूप से Daito Bunka विश्वविद्यालय से Sumino Yanase के लिए एक विशेष अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया ।

1. सी. एलिगेंस की सिंक्रनाइज़ संस्कृति
<ol><li>बोने से पहले, संस्कृति ई कोलाई (ई. कोलाई) तनाव OP50 पर रातोंरात ३७ ° c में ३०० मिलीलीटर Luria-Bertani (पौंड) शोरबा तरल मध्यम । -4 ° c पर कल्चर्ड OP50 की दुकान ।<ol>
<li>पौंड शोरबा ...

<ol>
	<li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+cancer+cells.">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li><li>Matoba, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+regulates+mitochondrial+respiration.">p53 regulates mitochondrial respiration.</a> Science. 312, 1650-1653 (2006).</li><li>Yanase, S., Suda, H., Yasuda, K., Ishii, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+p53/CEP-1+is+associated+with+lifespan+extension+through+an+age-related+imbalance+in+the+energy+metabolism+of+C.+elegans.">Impaired p53/CEP-1 is associated with lifespan extension through an age-related imbalance in the energy metabolism of C. elegans.</a> Genes to Cells. 22 (12), 1004-1010 (2017).</li><li>Page, A. P., Johnstone, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuticle.">The cuticle.</a> WormBook. , (2007).</li><li>Hulme, S. E., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+the+worm:+Caenorhabditis+elegans+as+a+platform+for+integrating+chemical+and+biological+research.">Chemistry and the worm: Caenorhabditis elegans as a platform for integrating chemical and biological research.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50, 4774-4807 (2011).</li><li>Lewis, J. A., Fleming, J. T., Epstein, H. F., Shakes, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+culture+methods.">Basic culture methods.</a> Methods in Cell Biology, Volume 48, Caenorhabditis elegans: Modern Biological Analysis of an Organism. , 3-29 (1995).</li><li>Senoo-Matsuda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+defect+in+the+cytochrome+b+large+subunit+in+complex+II+causes+both+superoxide+anion+overproduction+and+abnormal+energy+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">A defect in the cytochrome b large subunit in complex II causes both superoxide anion overproduction and abnormal energy metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (45), 41553-41558 (2001).</li><li>Butler, J. A., Mishur, R. J., Bhaskaran, S., Rea, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+metabolic+signature+for+long+life+in+the+Caenorhabditis+elegans+Mit+mutants.">A metabolic signature for long life in the Caenorhabditis elegans Mit mutants.</a> Aging Cell. 12, 130-138 (2013).</li><li>Marbach, E. P., Weil, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enzymatic+measurement+of+blood+lactate+and+pyruvate:+Use+and+significance+of+metaphosphoric+acid+as+a+common+precipitant.">Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate: Use and significance of metaphosphoric acid as a common precipitant.</a> Clinical Chemistry. 13 (4), 314-325 (1967).</li><li>Mishur, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+metabolites+extend+lifespan.">Mitochondrial metabolites extend lifespan.</a> Aging Cell. 15, 336-348 (2016).</li></ol>

जब इन वर्णमिति परख किट, नमूना निष्कर्षण में सबसे महत्वपूर्ण कदम के उपयोग के लिए सेलुलर स्तनपान और पाइरूवेट सही में सी. एलिगेंस में homogenization के दौरान प्रोटीन वर्षण की प्रक्रिया है (चित्रा 1) । ?...

स्तनपान और पाइरूवेट सांद्रता व्यापक रूप से ऊर्जा चयापचय के मध्यवर्ती के रूप में माना जाता है, और glycolysis, tricarboxylic एसिड (टीसीए) चक्र, और एरोबिक जीवों की कोशिकाओं में इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के राज्यों से संबंधित हैं । पाइरूवेट के लिए glycolysis ऑक्सीकरण ग्लूकोज में प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला है, जो एक चयापचय चौराहे पर निहित है और gluconeogenesis के माध्यम से कार्बोहाइड्रेट के लिए परिवर्तित किया जा सकता, फैटी एसिड और ऊर्जा चयापचय के माध्यम से एसिटाइल-CoA, और एमिनो एसिड alanine के लिए. टीसीए चक्र पर्याप्त भंग ऑक्सीजन की उपस्थिति के तहत होता है और ग्लूकोज के लिए ऊर्जा के रूपांतरण के लिए मौलिक है. विशेष रूप से, माध्यमिक चयापचय के परिवर्तन एक दिलचस्प घटना है जिसमें glycolysis ऊर्जा उत्पादन और एरोबिक mitochondrial श्वसन, जो टीसीए चक्र और इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला शामिल है के लिए मुख्य रूप से इस्तेमाल किया जाता है, downregulated है स्तनधारी कैंसर कोशिकाओं में1,2. हम हाल ही में पता चला कि स्तनपान का स्तर और फलस्वरूप स्तनपान/पाइरूवेट (एल/पी) मॉडल जीव Caenorhabditis एलिगेंस (सी. एलिगेंस) में उंर बढ़ने के दौरान अनुपात में कमी आई । इसी तरह हमने पाया कि स्तनधारी ट्यूमर शमनकर्ता p53 ortholog वयक-१ में सी. एलिगेंस ने अपने transcriptional लक्ष्य३के सक्रियण के माध्यम से ऊर्जा चयापचय के आयु संबंधी बदलावों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है.
जैविक परख में, ऐसे स्तनपान और कोशिकाओं में पाइरूवेट सांद्रता की माप के रूप में, संवेदनशीलता, सटीकता, नमूना आकार, और वर्णमिति/fluorimetric परख किट की मशीन समय नाटकीय रूप से सुधार किया गया है । प्रौद्योगिकीय नवाचारों के कारण अब हम सी. एलिगेंसकी बड़े पैमाने पर संस्कृति के बिना विभिन्न चयापचयों और मध्यवर्ती चयापचयों का विश्लेषण करने में सक्षम हैं, जो अपने छोटे आकार दिया मुश्किल है । सामांय में, एक वर्णमिति परख की संवेदनशीलता एक fluorimetric परख की तुलना में छोटे परिमाण के एक आदेश है; हालांकि, वर्णमिति दृष्टिकोण आम प्रयोगशालाओं की सेटिंग में अधिक उपयुक्त है । इसके अलावा, एक निष्कर्षण homogenization और प्रोटीन वर्षा युक्त तकनीक सी. एलिगेंस कोशिकाओं में स्तनपान और पाइरूवेट सांद्रता के मात्रात्मक निर्धारण के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि यह निमेटोड एक exoskeleton में संलग्न है छल्ली बुलाया, स्तनधारी के विपरीत प्रसंस्कृत सेल लाइनों4,5। यहां, हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए स्तनपान और पाइरूवेट सी एलिगेंससे नमूना निष्कर्षण के लिए सुझावों सहित वाणिज्यिक वर्णमिति परख किट का उपयोग कर सांद्रता का विश्लेषण ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:696px;" width="696">
	<tbody>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:247px;">Lactate Colorimetric/Fluorimetric Assay kit&#160;</td>
			<td style="width:100px;">BioVision</td>
			<td style="width:136px;">#K607-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/fluorimetric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">EnzyChrom Pyruvate 
			Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">BioAssay 
			Systems</td>
			<td style="width:136px;">#EPYR-100</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric/ fluorometric 
			100 assays; Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:100px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">#23225</td>
			<td style="width:213px;">colorimetric assay; store at 
			&#160;room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Trichloroacetic Acid</td>
			<td style="width:100px;">Wako Pure Chemical</td>
			<td style="width:136px;">#207-04955</td>
			<td>store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:247px;">Teflon homogenizer&#160;</td>
			<td style="width:100px;">Iwaki/Pyrex</td>
			<td style="width:136px;">#358034 (Wheaton)</td>
			<td style="width:213px;">Instead of Iwaki/Pyrex, 
			available by Wheaton</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

small-scale colorimetric assays of intracellular lactate and pyruvate in the nematode caenorhabditis elegans

स्तनपान और पाइरूवेट intracellular ऊर्जा चयापचय रास्ते के प्रमुख मध्यवर्ती हैं । कोशिकाओं में स्तनपान/पाइरूवेट अनुपात की निगरानी यह निर्धारित करने में मदद करता है कि क्या mitochondrial ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण और एरोबिक glycolysis के बीच उम्र-संबंधित ऊर्जा चयापचय में असंतुलन है । यहां, हम मॉडल जीव सी एलिगेंसमें स्तनपान और पाइरूवेट के लिए वाणिज्यिक वर्णमिति परख किट का उपयोग दिखा । हाल ही में, संवेदनशीलता और वर्णमिति/fluorimetric परख किट की सटीकता बहुत अनुसंधान और एजेंट निर्माताओं द्वारा किए गए विकास द्वारा सुधार किया गया है । सुधार रिएजेंट एक ९६- सी एलिगेंसमें अच्छी तरह से प्लेट के साथ छोटे पैमाने पर परख के उपयोग सक्षम है । सामांय में, एक fluorimetric परख एक वर्णमिति परख के लिए संवेदनशीलता में बेहतर है; तथापि, वर्णमिति दृष्टिकोण आम प्रयोगशालाओं में उपयोग के लिए अधिक उपयुक्त है । मात्रात्मक निर्धारण के लिए इन परख में एक अंय महत्वपूर्ण मुद्दा homogenized सी एलिगेंस नमूनों की प्रोटीन वर्षण है । हमारे प्रोटीन वर्षण विधि में, आम precipitants (जैसे, trichloroacetic एसिड, perchloric एसिड और metaphosphoric एसिड) नमूना तैयारी के लिए उपयोग किया जाता है । एक प्रोटीन मुक्त परख नमूना सीधे शीत precipitant (5%) के homogenization के दौरान अंतिम एकाग्रता जोड़ने के द्वारा तैयार किया जाता है ।

स्तनपान और पाइरूवेट सांद्रता के मात्रात्मक निर्धारण के लिए वर्णमिति परख का प्रयोग, हम इन परख की सटीकता सी. एलिगेंस7,8में पिछले रिपोर्ट के साथ तुलना में दिखाया । यह?...

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Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

हम एक संशोधित छोटे पैमाने पर निष्कर्षण और निमेटोड सी एलिगेंस में स्तनपान और पाइरूवेट की वर्णमिति परख का वर्णन । जब वाणिज्यिक परख किट, उनकी संवेदनशीलता और सटीकता के तकनीकी विकास का उपयोग महत्वपूर्ण है । निष्कर्षण में प्रोटीन वर्षा intracellular चयापचयों के मात्रात्मक निर्धारण के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम है ।

छोटे पैमाने पर वर्णमिति की परख Intracellular स्तनपान और पाइरूवेट में निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस

Lactate and pyruvate are key intermediates of intracellular energy metabolic pathways. Monitoring the lactate/pyruvate ratio in cells helps to determine ...

इस शोध में उन में किसी भी सवाल का जवाब देने में मदद कर सकते हैं बायोकेम काउंट और कार्यप्रणाली क्षेत्र जैसे नेमाटोड में विकास अधिकारों का विश्लेषण। इस तकनीक का मुख्य लाभ अतिरिक्त उत्पादन और पेय और कीड़े के समरूपता में प्रोटीन वर्षा है। एलबी शोरबा तरल माध्यम के ३०० मिलीलीटर में ई कोलाई OP50 तनाव को ३७ डिग्री सेल्सियस रात ोंरात बढ़ाकर इस प्रयोग की शुरुआत करें ।चार डिग्री सेल्सियस पर सफल OP50 स्टोर करें । पिपेट न्यूनतम तीन पहले तैयार एनजीएम, या नेमाटोड ग्रोथ मीडिया एगर प्लेट्स पर सुसंस्कृत OP50 के दो मिलीलीटर और प्लेट को घूमता हुआ हाथ से फैलता है। OP50 की एक पतली परत बनाने के लिए रात भर कमरे के तापमान पर प्लेटों को इनक्यूबेट करें।इसके बाद, प्रत्येक OP50 एनजीएम प्लेट में कम से कम 100 कीड़े जोड़ने के लिए, कीड़े के साथ एक प्लेट से आगर का एक टुकड़ा लेने के लिए एक बाँझ टूथपिक का उपयोग करें। संस्कृति 20 डिग्री सेल्सियस पर कीड़े के साथ कम से कम तीन प्लेटें, जब तक कीड़े वयस्क चरण तक पहुंचने, जो स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप के तहत पुष्टि की है। स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके अंडों से भरे ग्रेविड हर्मेफ्रोडाइट्स का पता लगाएं।प्लेटों में एस-बफर के पांच मिलीलीटर जोड़ने के बाद, तीनों प्लेटों से कीड़े को 15 मिलीलीटर शंकु नली में स्थानांतरित करने के लिए पाश्चुर पिपेट का उपयोग करें। एस-बफर के 15 मिलीलीटर जोड़कर तीन बार कीड़े धोएं और फिर 30 सेकंड के लिए कमरे के तापमान पर 300 बार जी पर अपकेंद्रित्र करें। यदि एस-बफर की मात्रा पांच मिलीलीटर से अधिक है, तो अपकेंद्रित्र के बाद अतिरिक्त बफर को हटा दें।सफल एक्सोनाइजेशन और थोक अंडे के अलगाव के लिए, क्षारीय हाइपो क्लोरेट समाधान के 0.5 मिलीलीटर में कीड़े को भंग करें। 10 से 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर उलटा और इनक्यूबेट करके मिलाएं। समाधान को हटाने के लिए 30 सेकंड के लिए 1, 400 आरपीएम पर सेंट्रलाइज करें।अंडे की गोली धोने के लिए 15 मिलीलीटर एस-बफर का प्रयोग करें। सेंट्रलाइज करने के बाद यह सुपरनेट को हटा दें और इस वॉश को कम से कम तीन बार दोहराएं। अंतिम धोने के बाद, हम एस-बफर के पांच से छह मिलीलीटर में गोली को निलंबित करते हैं, ई.कोलाई के बिना और उन्हें हैच करने और एल1 चरण लार्वा की एच सिंक्रोनस संस्कृति प्राप्त करने के लिए 20 डिग्री सेल्सियस पर रात भर अंडे को इनक्यूबेट करते हैं।तीन कवर स्लिप पर एल1 कीड़े युक्त एस-बफर के पिपेट 10 माइक्रोलीटर। लार्वा को स्टीरियोस्कोप के नीचे गिनें और एल1 चरण लार्वा की अनुमानित संख्या निर्धारित करने के लिए औसत की गणना करें। अंत में, एल 1 चरण लार्वा को OP50 के साथ पांच एनजीएम एगर प्लेट्स में स्थानांतरित करें और उन्हें युवा वयस्क चरण तक 20 डिग्री सेल्सियस पर बढ़ाएं, जिसके दौरान आत्म-निषेचन होता है और कुछ अंडे रखे जाते हैं।माइक्रोस्कोप के नीचे हर दिन कीड़े का निरीक्षण करें और फिर युवा वयस्क, या पांच दिन पुराने कीड़े इकट्ठा करें। केवल जीवित कीड़े का चयन करने के लिए, एस-बफर के तीन से चार मिलीलीटर में निलंबित कीड़े को 15 मिलीलीटर शंकु नली में जोड़ें। फिर बर्फ की एक समान मात्रा में ठंड 60% सुक्रोज और मिश्रण जोड़ें।15 सेकंड के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 1, ५०० बार जी पर ट्यूब अपकेंद्रित्र । फिर ट्यूब की दीवार से कीड़े को सावधानीपूर्वक स्थानांतरित करने के लिए एक पाश्चर पिपेट का उपयोग करें, और फिर फ्लोटिंग कीड़े को एक ताजा ट्यूब में हटा दें। कीड़े धोने के लिए एस-बफर के साथ ट्यूब भरें, और 30 सेकंड के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर १५०० बार जी पर अपकेंद्रित्र ।बफर निकालें और दो बार और धो दोहराएं। तीसरे धोने के बाद, सुपरनैंट को ध्यान से हटा दें, यह सुनिश्चित करें कि किसी भी कीड़े को हटाना न हो, और धुले हुए कीड़े की गीली मात्रा को मापने के लिए 1, 000 माइक्रोलीटर पिपेट टिप का उपयोग करें। प्रोटीन वर्षा के लिए, बर्फ पर रखे एक समरूप में बर्फ-ठंड 10% ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड की बराबर मात्रा में धोए गए कीड़े को जोड़ने के लिए एक पाश्चान्भ पिपेट का उपयोग करें।1, 300 आरपीएम तक, रोटेशन के साथ पासल के 40 स्ट्रोक का उपयोग करके समरूप। समरूप को सोनेट करने के लिए 20% शुल्क चक्र के साथ अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजर का उपयोग करें। बर्फ पर रखे 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में समरूप स्थानांतरित करने के लिए एक पाश्चर पिपेट का उपयोग करें।एक माइक्रो सेंट्रलाइज ट्यूब के लिए समरूप स्थानांतरित करने के बाद, 10 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 8, 000 समय जी पर अपकेंद्रित्र इसे स्पष्ट करने के लिए । सुपरनेट को एक ताजा ट्यूब में स्थानांतरित करें और इसे बेअसर करने के लिए 20 मिनट के लिए चार मोलर पोटेशियम क्लोराइड और बर्फ पर इनक्यूबेट जोड़ें। फिर इसे 10 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 8, 000 बार जी पर अपकेंद्रित्र करें।एक ताजा ट्यूब के लिए सुपरनैंट स्थानांतरित करें और आगे की परख के लिए आवश्यक होने तक 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। लैक्टेट की एकाग्रता को मापने के लिए, परीक्षण नमूनों के लिए डुप्लिकेट विश्लेषण करने के लिए एक कोलोरिमेट्रिक परख किट का उपयोग करें। एक ९६-अच्छी तरह से थाली के प्रत्येक कुएं में परीक्षण के नमूनों के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें, और फिर 15 माइक्रोलीटर के लिए मात्रा को समायोजित करने के लिए प्रत्येक नमूने के लिए लैक्टेट परख बफर जोड़ें ।एक मिलीमोलर के लिए लैक्टेट परख बफर के साथ पतला 100 मिलीमोलर एल + लैक्टेट मानक। फिर, कुओं की एक श्रृंखला में, शून्य, दो, चार, छह, आठ, और पतला एल + लैक्टेट मानक के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें। प्रत्येक अच्छी तरह से प्रतिक्रिया मिश्रण के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें, और रंग को विकसित करने के लिए कम से कम 30 मिनट के लिए प्रकाश से संरक्षित कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें।अंत में, 570 नैनोमीटर पर प्रत्येक कुएं के अवशोषण को मापने के लिए एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करें। प्रतिक्रिया मिश्रण के अवशोषण से पृष्ठभूमि नियंत्रण मिश्रण के अवशोषण घटाना। फिर लैक्टेट मानक वक्र को प्लॉट करें, और प्रत्येक एकाग्रता को 2.25 से गुणा करके वक्र से लैक्टेट सांद्रता की गणना करें।परीक्षण नमूनों में पाइरुवेट की एकाग्रता को मापने के लिए एक कोलोरिमेट्रिक परख किट का उपयोग करें, और डुप्लेक्स परीक्षाएं करें। एक ९६-अच्छी थाली के विभिन्न कुओं के लिए परीक्षण नमूनों के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें, और प्रत्येक नमूने के लिए काम कर रहे अभिकर्षक के ९० माइक्रोलीटर जोड़ें । कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए कवर किया गया इनक्यूबेट।फिर 570 नैनोमीटर पर प्रत्येक कुएं की अवशोषण को मापने के लिए प्लेट को माइक्रोप्लेट रीडर में रखें। पाइरुवेट मानक वक्र को प्लॉट करें, और प्रत्येक एकाग्रता को 2.25 से गुणा करके मानक वक्र से पाइरुवेट सांद्रता की गणना करें। और अंत में, परीक्षण के नमूनों में प्रोटीन एकाग्रता को मापने के लिए, पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित एक कोलोरिमेट्रिक परख किट का उपयोग करें।प्रोटीन वर्षा के बाद, लैक्टेट और पाइरुवेट सांद्रता के मात्रात्मक निर्धारण के लिए कोलोरिमेट्रिक परख का उपयोग किया जा सकता है। यह प्रयोग सी. एलिगेंस में पिछली रिपोर्टों के विपरीत कोलोरिमेट्रिक परख की सटीकता दिखाता है। इसके अलावा, ये परख कम समय में छोटे पैमाने के नमूनों में भी लैक्टेट और पाइरुवेट सांद्रता को मापने के लिए पर्याप्त रूप से संवेदनशील हैं।सी एलिगेंस में लैक्टेट और पाइरुवेट का सही पता लगाने के लिए, कीड़े के समरूपीकरण के दौरान प्रोटीन वर्षा करना महत्वपूर्ण है। लैक्टेट और पाइरुवेट का पता लगाने की मात्रा तब अधिक होती है जब नमूने होमोजेनाइजेशन के दौरान प्रोटीन उपजी होते हैं, बरकरार साइटोसोलिक अंश की तुलना में या समरूपता के बाद जब कोई लैक्टेट या पाइरुवेट का पता नहीं चला था।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans

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