Name: determination of plasma membrane partitioning for peripherally-associated proteins
Uploaded: 2018-06-15T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins at JoVE.com

Dieses Projekt wurde unterstützt von NPU ich LO1417 (Ministerium für Bildung, Jugend und Sport der Tschechischen Republik).

1. Vorbereitung von biologischem Material
<ol><li>Bereiten Sie biologisches Material, mit dem Ausdruck des eindringmittel tagged Proteins von Interesse sowie eine cytoplasmatische Markierung vor. Folgen Sie den Anweisungen in der Einleitung erwähnt.</li>
</ol>(2) konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie
<ol><li>Das Material vorbereitet in Abschnitt 1 mit FM 4-64 Farbstoff7Fleck.<ol>
<li>Wenden Sie eine Färbung Protokoll, die für das untersuchte Material geeign...

<ol>
	<li>Barbosa, I. C. R., Shikata, H., Zourelidou, M., Heilmann, M., Heilmann, I., Schwechheimer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipid+composition+and+a+polybasic+motif+determine+D6+PROTEIN+KINASE+polar+association+with+the+plasma+membrane+and+tropic+responses.">Phospholipid composition and a polybasic motif determine D6 PROTEIN KINASE polar association with the plasma membrane and tropic responses.</a> Development. 143 (24), 4687-4700 (2016).</li><li>Kato, M., Aoyama, T., Maeshima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ca2+-binding+protein+PCaP2+located+on+the+plasma+membrane+is+involved+in+root+hair+development+as+a+possible+signal+transducer.">The Ca2+-binding protein PCaP2 located on the plasma membrane is involved in root hair development as a possible signal transducer.</a> Plant J. 74 (4), 690-700 (2013).</li><li>Kubitscheck, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fluorescence Microscopy: From Principles to Biological Applications. , (2013).</li><li>Janecki, A. J., Janecki, M., Akhter, S., Donowitz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+plasma+membrane+expression+of+a+fusion+protein+of+Na/H+exchanger+NHE3+and+green+fluorescence+protein+(GFP)+in+living+PS120+fibroblasts.">Quantitation of plasma membrane expression of a fusion protein of Na/H exchanger NHE3 and green fluorescence protein (GFP) in living PS120 fibroblasts.</a> J Histochem Cytochem. 48 (11), 1479-1492 (2000).</li><li>Peitzsch, R. M., McLaughlin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+acylated+peptides+and+fatty+acids+to+phospholipid+vesicles:+pertinence+to+myristoylated+proteins.">Binding of acylated peptides and fatty acids to phospholipid vesicles: pertinence to myristoylated proteins.</a> Biochemistry. 32 (39), 10436-10443 (1993).</li><li>Vosolsob&#283;, S., Petr&#225;&#353;ek, J., Schwarzerov&#225;, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+plasticity+of+plasma+membrane+interaction+in+DREPP+family+proteins.">Evolutionary plasticity of plasma membrane interaction in DREPP family proteins.</a> Biochim Biophys Acta - Biomembr. 1859 (5), 686-697 (2017).</li><li>Bolte, S., Talbot, C., Boutte, Y., Catrice, O., Read, N. D., Satiat-Jeunemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FM-dyes+as+experimental+probes+for+dissecting+vesicle+trafficking+in+living+plant+cells.">FM-dyes as experimental probes for dissecting vesicle trafficking in living plant cells.</a> J Microsc. 214 (2), 159-173 (2004).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>R Development Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A language and environment for statistical computing. , (2008).</li><li>Logan, D. C., Domergue, O., Teyssendier de la Serve, B., Rossignol, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+family+of+plasma+membrane+polypeptides+differentially+regulated+during+plant+development.">A new family of plasma membrane polypeptides differentially regulated during plant development.</a> Biochem Mol Biol Int. 43 (5), 1051-1062 (1997).</li><li>Ide, Y., Nagasaki, N., Tomioka, R., Suito, M., Kamiya, T., Maeshima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+properties+of+a+novel,+hydrophilic+cation-binding+protein+associated+with+the+plasma+membrane.">Molecular properties of a novel, hydrophilic cation-binding protein associated with the plasma membrane.</a> J Exp Bot. 58 (5), 1173-1183 (2007).</li><li>Nagasaki-Takeuchi, N., Miyano, M., Maeshima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+plasma+membrane-associated+protein+of+Arabidopsis+thaliana+AtPCaP1+binds+copper+ions+and+changes+its+higher+order+structure.">A plasma membrane-associated protein of Arabidopsis thaliana AtPCaP1 binds copper ions and changes its higher order structure.</a> J Biochem. 144 (4), 487-497 (2008).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MDP25,+A+Novel+Calcium+Regulatory+Protein,+Mediates+Hypocotyl+Cell+Elongation+by+Destabilizing+Cortical+Microtubules+in+Arabidopsis.">MDP25, A Novel Calcium Regulatory Protein, Mediates Hypocotyl Cell Elongation by Destabilizing Cortical Microtubules in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 23 (12), 4411-4427 (2011).</li><li>Qin, T., Liu, X., Li, J., Sun, J., Song, L., Mao, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+microtubule-destabilizing+protein+25+functions+in+pollen+tube+growth+by+severing+actin+filaments.">Arabidopsis microtubule-destabilizing protein 25 functions in pollen tube growth by severing actin filaments.</a> Plant Cell. 26 (1), 325-339 (2014).</li><li>Nagata, T., Nemoto, Y., Hasezawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tobacco+BY-2+Cell+Line+as+the+&amp;#34;HeLa&amp;#34;+Cell+in+the+Cell+Biology+of+Higher+Plants.">Tobacco BY-2 Cell Line as the &amp;#34;HeLa&amp;#34; Cell in the Cell Biology of Higher Plants.</a> Int Rev Cytol. 132, 1-30 (1992).</li><li>Hellens, R. P., Anne Edwards, E., Leyland, N. R., Bean, S., Mullineaux, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pGreen:+A+versatile+and+flexible+binary+Ti+vector+for+Agrobacterium-mediated+plant+transformation.">pGreen: A versatile and flexible binary Ti vector for Agrobacterium-mediated plant transformation.</a> Plant Mol Biol. 42 (6), 819-832 (2000).</li><li>Vermeer, J. E. M., Thole, J. M., Goedhart, J., Nielsen, E., Munnik, T., Gadella, T. W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+phosphatidylinositol+4-phosphate+dynamics+in+living+plant+cells.">Imaging phosphatidylinositol 4-phosphate dynamics in living plant cells.</a> Plant J. 57 (2), 356-372 (2009).</li><li>La&#328;kov&#225;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Dynamics+of+Plant+Plasma+Membrane+Proteins+with+Fluorescence+Recovery+and+Raster+Image+Correlation+Spectroscopy.">Determination of Dynamics of Plant Plasma Membrane Proteins with Fluorescence Recovery and Raster Image Correlation Spectroscopy.</a> Microsc Microanal. 22 (2), 290-299 (2016).</li></ol>

Die hier beschriebene Methode erzeugt eine genauere Schätzung der Plasmamembran Partitionierung für peripher verbunden Proteine, die im Vergleich zu anderen Ansätzen basiert auf der Messung der Fluoreszenz-Intensität-5. Die wesentliche Verbesserung dieser Methode ist, dass die Lichtbeugung und Überlagerung von der Plasmamembran und zytoplasmatischen Signale berücksichtigt. Obwohl diese Methodenergebnisse im Zusammenhang mit Ergebnissen einer einfachen Methode, basierend auf dem Vergleich der...

Peripher-assoziierten Plasmamembran Proteine sind die wichtigsten Komponenten der Zelle Signalwege. Eines ihrer grundlegenden Aufgaben ist ihre transiente Plasmamembran Assoziation und Dissoziation, die wichtig für die Signalübertragung zwischen Plasmamembran und Zytoplasma ist. Plasmamembran peripher-assoziierte Proteine auf Plasmamembran durch Lipid-Anker (N-myristylierung, S-Acylation oder Prenylation) oder durch Lipid-Bindung-Domänen (Interaktion mit Phosphatidylinositol Phosphate, phosphatidic Säure, anbaubar usw.).
Plasmamembran bindenden Eigenschaften dieser Proteine können sein untersucht in Vivo, z. B.wenn ein eindringmittel getaggt Protein durch eine Site-verwiesene Mutagenese der wichtigen Aminosäuren geändert wird, oder wenn es mit verschiedenen Inhibitoren beeinflussen behandelt wird Lipid signaling. Die Verteilungen der peripheren Membranproteine, Plasma werden meist qualitativ, besonders in Fällen geprüft wenn re PROTEINVERTEILUNG offensichtlich ist. Die vorgestellte Methode ist optimal für Situationen, wenn Protein Umverteilung nur teilweise ist und quantitative Bewertung notwendig ist. Ein häufig verwendeter Ansatz Wenn Plasmamembran Vereinigung von konfokalen geschätzt wird laser scanning Mikroskopie-Bildern, wie ein Verhältnis von Fluoreszenz-Intensität an der Plasmamembran und in das Zytoplasma1,2, ist aber nicht einfach, präzise. Fluoreszenz-Intensität in der Plasmamembran reflektieren eine Überlagerung der Plasmamembran und Zytoplasma Signal aufgrund der Lichtbeugung Merkmal für die besondere Fluoreszenz-Mikroskopie-Technik und optischen Elementen verwendet3. Infolgedessen ist der zytoplasmatischen Signal auch in der Membran-Region enthalten. Aus diesem Grund kann nicht FM 4-64 Färbung Muster für eine Membran Signal Auswahl4als Maske verwendet werden. Darüber hinaus einfache Messungen von Membran-Signal an der Position von FM 4-64 Färbung immer systematisch maximale definiert das echte Plasmamembran Signal des peripher-assoziierten Plasmamembran Protein durch die Überlagerung der überschätzen die Membran und zytoplasmatischen Compound. Das Maximum der beobachteten Signale für Gewebekulturen getaggt peripher-assoziierte Proteine auch nicht zusammen mit dem Maximum der Plasmamembran Marker (d.h. FM 4-64 Styryl Farbstoff) lokalisiert, aber ist das Zytoplasma verlagert. Eine weitere Einschränkung ist, dass der FM 4-64 Emission Höhepunkt im Vergleich zu den Emission Gipfeln für grüne fluoreszierende Proteine wie GFP aufgrund der Wellenlänge-Abhängigkeit von Lichtbeugung3breiter ist.
In die hier beschriebene Methode ist das tagged Protein-Signal durch zwei empirische Funktionen beschreiben einer hypothetischen Verteilung der Plasmamembran und Zytoplasma Signal bzw. ausgestattet. Dieses Signal Zersetzung ist auf lineare Fluoreszenz Profile angewendet, die an der Zelloberfläche senkrecht zur Plasmamembran in Quellbilder, gelten die regulären, Zweikanal-konfokale Abschnitte fluoreszent-markierte Protein zum Ausdruck zu bringen sind Zellen mit FM 4-64 Farbstoff gekennzeichnet.
Die erste Funktion, die für die Montage verwendet beschreibt eine Beugung eines Zytoplasma-Signals auf dem Zellenrand. Es wird von zuvor erworbenen Fluoreszenz Profile erhalten, die in den Zellen, die mit dem Ausdruck eines Zytoplasma Protein Markers markiert durch die gleichen Chromophor als Plasmamembran peripher-assoziierten Protein des Interesses gemessen wurden. Die zweite Funktion beschreibt eine Beugung der Plasmamembran Signal ist die Fluoreszenz von FM 4-64 abgeleitet. Dieses Signal wird zunächst von einer Gaußschen Funktion angenähert, der für eine ungefähre Modellierung von Lichtbeugung eine Punktquelle verwendet wird. Zweitens ist dieses Modell, gültig für rote FM 4-64 Emission mathematisch in der Form umgewandelt, die relevant für einer Emissionswellenlänge von den Chromophor verwendet für die Kennzeichnung von peripher-assoziierte Proteine auf der Plasmamembran von Interesse sind. Beide Funktionen werden durch die maximale Intensität und der Mittelwert von 10 % der höchsten Werte für FM 4-64 und zytoplasmatischen Proteinen Signal bzw. normalisiert. Durch dieses Signal Zersetzung (nicht-lineare mindestens quadratisch Anpassungsmethode) können das Verhältnis der Plasmamembran und Zytoplasma Bruchteil des untersuchten Proteins leicht und genau geschätzt werden. Die realen physische Dimension des berechneten Partitionierungs-Koeffizienten ist im Bereich von Mikrometer, weil zytoplasmatischen Volumenkonzentration mit oberflächenkonzentration auf der Plasmamembran verglichen wird. Es definiert den Abstand zwischen der Plasmamembran Cytoplasma, innerhalb derer die gleiche Menge an Proteinen im angrenzenden Bereich der Plasmamembran lokalisiert ist. Dieser Wert entspricht der Partitionierung Koeffizient K2 eingeführt, zuvor5. Die Methode ist sehr schnell, erfordert nur einzelne konfokale Abschnitte aufgenommen mit Routine konfokale Laser-scanning-Mikroskop, und es ist rechnerisch nicht anspruchsvoll. Der Kern der Analyse in einen tragbaren R-Paket implementiert wurde und eine zusätzliche ImageJ-Makro wurde geschrieben, um grafische Benutzeroberfläche zum Starten der Analysis über die intuitive Dialoge. Software und ausführliche Beschreibung der Methode (früher veröffentlichten6) finden Sie unter http://kfrserver.natur.cuni.cz/lide/vosolsob/Peripheral/.
Die Methode eignet sich für isolierte Zellen, Protoplasten und Geweben, wo die Plasmamembran der einzelnen Zellen deutlich unterscheidbar ist, mit dem Ausdruck ein eindringmittel getaggt Konstrukt der peripher-assoziierten Protein untersucht. Ein Chromophor kompatibel mit FM 4-64 Färbung verwendet werden muss. FM 4-64 gibt rote Fluoreszenz; Daher kann untersuchten Proteins durch ein Fluoreszenz-Protein mit blauen, grünen oder gelben Emission (z. B.GFP, GFP, YFP) markiert werden. Stabile Transformation von biologischem Material wird empfohlen, weil dadurch weniger künstliche und mehr reproduzierbare Beobachtungen der PROTEINVERTEILUNG. Es ist notwendig, dass die untersuchten Proteine eine relativ homogene zytoplasmatischen Verteilung hat. Die Lokalisation eines Proteins in das endoplasmatische Retikulum oder ein weiteres Fach der intrazellulären Membran kann künstliche Ergebnissen führen.
Darüber hinaus muss das gleiche biologische Material mit dem Ausdruck eines zytoplasmatischen Markers für den Vergleich verwendet werden. Zellen können durch eine kostenlose Chomophore (das gleiche wie für periphere Protein tagging, z. B.kostenlose GLP) oder tagged Proteins des Interesses mit abgeschafft Membran-Bindungskapazität umgewandelt werden. Membran-Bindungskapazität kann, z. B. durch Trimmen der Membran-bindende Domäne oder Site-verwiesene Mutagenese der wichtigen Aminosäure Essigreiniger (z.B. Websites für N-myristylierung, S-Acylation, oder Prenylation, etc.) abgeschafft werden.
Für die konfokale scanning-Mikroskopie müssen Zellen durch eine Membran-Marker wie FM 4-64 Farbstoff gekennzeichnet sein. Wenn FM 4-64 Färbung nicht für das untersuchte Material (wegen störenden Autofluoreszenz, schlechte Farbstoff eindringen, etc.) geeignet ist, können die Plasmamembran, z. B. durch integrale Plasmamembran Protein markiert, eine entsprechende Chomophore (beschriftet werden mCherry, RFP, etc.). Es ist wichtig, dass die Markierung vernachlässigbar Lokalisierung in die intrazellulären Membran Fächer (Endomembranes) hat.
Arbeiten mit festen Proben und Antikörper kann fixierbar analogen FM 4-64FX oder Plasmamembran Kennzeichnung durch Antikörper gegen ein geeignetes Ziel verwendet werden. In diesem Fall ist es wichtig, die Ergebnisse sehr sorgfältig ausgewertet werden, da Fixierung Verfahren zum selektiven Verlust von Proteinen aus dem Zytoplasma und der Plasmamembran führen können.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:944px;" width="944">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">FM 4-64</td>
			<td style="width:135px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:384px;">T13320</td>
			<td style="width:184px;">Plasma membrane dye</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:384px;">D4540 Sigma</td>
			<td style="width:184px;">Dye solvent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Ordinary equipment (microscopic slides, pipettes, tips, tubes)</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:184px;">Equipment for cell labelling and microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Confocal laser scanning microscope</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:384px;"></td>
			<td style="width:184px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:241px;">Ordinary computer</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:384px;"></td>
			<td style="width:184px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of plasma membrane partitioning for peripherally-associated proteins

Diese Methode bietet einen schnellen Ansatz für die Ermittlung der Plasmamembran Partitionierung von jedem eindringmittel getaggt peripher-assoziierten Protein mit den Profilen der Fluoreszenzintensität über die Plasmamembran. Gemessenen Fluoreszenz Profile sind durch ein Modell für die Membran und Zytoplasma Fluoreszenz Verteilung entlang einer Linie, die senkrecht auf der Peripherie der Zelle angewendet ausgestattet. Dieses Modell ist aus der Fluoreszenz Intensitätswerte in Referenzzellen auszudrücken eindringmittel getaggt Marker für Zytoplasma und mit FM 4-64-mit der Bezeichnung Plasmamembran gebaut. Die Methode kann auf verschiedene Arten von Zellen und Organismen angewendet werden; Allerdings können nur die Plasmamembranen von nicht benachbarten Zellen ausgewertet werden. Diese schnelle Mikroskopie-basierte Methode eignet sich für Experimente, wo dynamische Veränderungen der Plasmamembran-assoziierten Marker erwartet werden und müssen quantifiziert werden, z.B.bei der Analyse der mutierten Versionen von Proteinen, Inhibitor Behandlungen, und signal-Transduktion Beobachtungen. Die Methode ist eine Multi-Plattform-R-Paket implementiert, die mit einem Makro ImageJ gekoppelt ist, die als eine benutzerfreundliche Oberfläche dient.

DREPP10 ist ein anlagenspezifischen peripher-assoziierten Plasmamembran-Protein, das einhergeht mit der Plasmamembran über eine N-myristylierung und eine elektrostatische Wechselwirkung mit Phosphatidylinositol Phosphate11, 12. DREPP wurde als Bestandteil des Kalzium-Signalisierung Maschinen in der Pflanzenzelle beschrieben und auch interagiert mit dem Zytoskelett13,<sup...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins at JoVE.com

Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um eine Quantitative Analyse des Niveaus der Plasmamembran Verein für Gewebekulturen getaggt peripher-assoziierten Protein durchführen. Die Methode basiert auf die rechnerische Zersetzung der Membran und zytoplasmatischen Komponente des Signals beobachtet in Zellen mit Plasmamembran fluoreszierenden Marker gekennzeichnet.

Bestimmung der Plasmamembran Partitionierung für peripher-assoziierte Proteine

This method provides a fast approach for the determination of plasma membrane partitioning of any fluorescently-tagged peripherally-associated protein ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Plasma Membrane Protein Endocytic Rates by Reversible Biotinylation

Mess-Plasmamembranprotein endocytischen Preise von Reversible Biotinylierung

Plasma membrane proteins are a large, diverse group of proteins comprised of receptors, ion channels, transporters and pumps.  Activity of these proteins ...

Forschung

Biologie

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

Crystallizing Membranproteinen zur Strukturaufklärung mittels Lipidische Mesophasen

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Die Kristallisation von Membranproteinen in Lipidische Mesophasen

Membrane proteins perform critical functions in living cells related to signal transduction, transport and energy transformations, and, as such, are ...

Quantification of Proteins Using Peptide Immunoaffinity Enrichment Coupled with Mass Spectrometry

Quantifizierung von Proteinen über ein Peptid Immunoaffinity Enrichment gekoppelt mit der Massenspektrometrie

There is a great need for quantitative assays in measuring proteins. Traditional sandwich immunoassays, largely considered the gold standard in ...

High-throughput Crystallization of Membrane Proteins Using the Lipidic Bicelle Method

High-Throughput-Kristallisation von Membranproteinen mit dem Lipidische Bicellen Methode

Membrane proteins (MPs) play a critical role in many physiological processes such as pumping specific molecules across the otherwise impermeable membrane ...

Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS)

Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy FCS

Bestimmung der Lipid Raft Partitionieren von Fluoreszenz-markierten Sonden in lebenden Zellen mittels Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie (FCS)

In the past fifteen years the notion that cell membranes are not homogenous and rely on microdomains to exert their functions has become widely accepted. ...

Use of a Robot for High-throughput Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Einsatz eines Roboters für High-Throughput-Kristallisation von Membranproteinen in Lipidische Mesophasen

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through ...

Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

Ernte-und Cryo-Kühlung Kristalle von Membranproteinen in Lipidische Mesophasen zur Strukturaufklärung von Makromolekulare Kristallographie Grown

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Intravitalmikroskopie zur Imaging subzellulärer Strukturen in lebenden Mäusen Ausdruck Fluoreszierende Proteine

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

The Cell-based L-Glutathione Protection Assays to Study Endocytosis and Recycling of Plasma Membrane Proteins

Die Cell-basierten L-Glutathion Schutz Assays zur Endozytose und Recycling von Plasmamembranproteinen Studieren

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes ...