Name: methods for the discovery of novel compounds modulating a gamma-aminobutyric acid receptor type a neurotransmission
Uploaded: 2018-08-16T13:00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for the Discovery of Novel Compounds Modulating a Gamma-Aminobutyric Acid Receptor Type A Neurotransmission at JoVE.com

लेखकों जूडिथ Lengyel, मारिया कॅग, Grégoire Friz, राहेल Haab, और Pflimlin से मैरी क्लेयर Roche और Tifany Schaer और दबोरा Paolucci से HiQScreen उनके उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए धंयवाद ।

<ol>
	<li>Rudolph, U., Knoflach, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+classical+benzodiazepines:+novel+therapeutic+potential+of+GABAA+receptor+subtypes.">Beyond classical benzodiazepines: novel therapeutic potential of GABAA receptor subtypes.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10, 685-697 (2011).</li><li>Sieghart, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+pharmacology+of+g-aminobutyric+acidA+receptor+subtypes.">Structure and pharmacology of g-aminobutyric acidA receptor subtypes.</a> Pharmacological Reviews. 47, 181-234 (1995).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+functional+assay+for+characterization+of+g-aminobutyric+acidA+channel+modulators+using+cryopreserved+transiently+transfected+cells.">A high-throughput functional assay for characterization of g-aminobutyric acidA channel modulators using cryopreserved transiently transfected cells.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 6, 781-786 (2008).</li><li>Mennerick, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+voltage-sensitive+dyes+modulate+GABAA+receptor+function.">Diverse voltage-sensitive dyes modulate GABAA receptor function.</a> Journal of Neuroscience. 30, 2871-2879 (2010).</li><li>Hevers, W., Luddens, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diversity+of+GABAA+receptors.+Pharmacological+and+electrophysiological+properties+of+GABAA+channel+subtypes.">The diversity of GABAA receptors. Pharmacological and electrophysiological properties of GABAA channel subtypes.</a> Molecular Neurobiology. 18, 35-86 (1998).</li><li>Macdonald, R. L., Olsen, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAA+receptor+channels.">GABAA receptor channels.</a> Annual Review of Neuroscience. 17, 569-602 (1994).</li><li>Kemp, J. A., Marshall, G. R., Wong, E. H., Woodruff, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+affinities,+potencies+and+efficacies+of+some+benzodiazepine-receptor+agonists,+antagonists+and+inverse-agonists+at+rat+hippocampal+GABAA-receptors.">The affinities, potencies and efficacies of some benzodiazepine-receptor agonists, antagonists and inverse-agonists at rat hippocampal GABAA-receptors.</a> British Journal of Pharmacology. 91, 601-608 (1987).</li><li>Prenosil, G. 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लेखक Frédéric Knoflach और मारिया-Clemencia Hernandez एफ Hoffmann-ला Roche एजी, ४०७० बेसल, स्विट्जरलैंड, एक दवा कंपनी के कर्मचारी हैं । लेखक डैनियल बर्ट्रेंड HiQScreen Sàrl 6, rte de Compois, १२२२ Vésenaz जिनेवा, स्विट्जरलैंड, दवा कंपनियों को स्क्रीनिंग सुविधाएं प्रदान करने का एक कर्मचारी है ।

यहां, हम गाबा पर सक्रिय यौगिकों की खोज के लिए प्रोटोकॉल मौजूदएक रिसेप्टर्स, फिजियोलॉजी और औषध विज्ञान के लिए बाध्यकारी से. उपंयास गाबा के लिए विशिष्ट अणुओं के लिए खोज मेंएक रिसेप्टर्स, यह परिभाषित करने के लिए महत्वपूर्ण है, के रूप में संभव के रूप में ठीक है, ब्याज की उपप्रकार और नव पहचान यौगिकों की विशिष्टता का आकलन (जैसे, एक समीक्षा के लिए, रूडोल्फ देखें और Knoflach१या Sieghart२). दवा की खोज में एक विशिष्ट पथ और कदम है कि प्राप्त करने की जरूरत है चित्रा 1में सचित्र हैं ।
बाध्यकारी परख गया है और अभी भी मोटे तौर पर दवा की खोज में पहला कदम के रूप में इस्तेमाल किया । गाबाएक रिसेप्टर्स के मामले में, वे यौगिकों की पहचान करने के लिए अनुकूलित कर रहे हैं कि बेंजोडाइजेपाइन रिसेप्टर के बंधन साइट के लिए बाध्य जहां चिकित्सकीय उपयोगी और सुरक्षित दवाओं बाँध. अंय तकनीकों, fluorometric इमेजिंग प्लेट रीडर (FLIPR) झिल्ली संभावित लाल डाई आधारित परख3का उपयोग, barbiturates जैसे यौगिकों कि अतिरिक्त साइटों है कि उनके अवांछित पक्ष प्रभाव प्रोफ़ाइल के कारण कम वांछनीय है करने के लिए बाध्य का पता लगाने । इसके अलावा, उपयोग रंजक सीधे गाबाएक रिसेप्टर्स सक्रिय कर सकते हैं, इस प्रकार दवा4खोज के लिए इन परख की उपयोगिता पर सवाल. बाध्यकारी परख केवल सबूत है कि एक दिया यौगिक एक विशिष्ट रिसेप्टर वर्ग के लिए बाध्य कर सकते है प्रदान कर सकते हैं। इन विट्रो में सेल झिल्ली के साथ परख चयनात्मक मानव गाबाएक α5β3γ2 रिसेप्टर लाइगैंडों की पहचान करने के लिए उपयोग किया जाता है. क्षणिक transfected HEK293 मानव गाबाएक α5β3γ2 व्यक्त कोशिकाओं, α1β3γ2, α2β3γ2, और α3β3γ2 रिसेप्टर्स इन परख के लिए झिल्ली तैयार करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं. लाइगैंडों के प्रभाव [3 एच] flumazenil झिल्ली रिसेप्टर्स ([3एच] flumazenil बंधन का एक निषेध) के लिए बाध्य की जुटान को मापने के द्वारा पता चला है । इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि ब्याज की रिसेप्टर पर यौगिक बाध्यकारी अपनत्व का एक तेजी से और कुशल दृढ़ संकल्प ब्याज की रिसेप्टर पर प्रदान की जाती है ।
कार्यात्मक अध्ययन यौगिकों के कार्यात्मक गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए और रिसेप्टर्स के लिए यौगिकों के बंधन की वजह से तंत्र के एक शारीरिक और औषधीय विवरण का प्रस्ताव करने के लिए आवश्यक हैं. आज, यह अच्छी तरह से मांयता प्राप्त है कि कार्यात्मक गाबाएक रिसेप्टर्स pseudosymmetry की एक धुरी ईओण ताकना और पांच समान उपइकाईयों के विधानसभा से परिणाम द्वारा गठित के आसपास के विधानसभा से परिणाम है । गाबाएक रिसेप्टर्स के अधिकांश दो या अधिक विभिन्न उपइकाईयों से बना रहे हैं. प्रमुख मस्तिष्क गाबाएक रिसेप्टर, उदाहरण के लिए, 2, 2, और 1 के एक stoichiometry में हैं1, β2, और γ2 उपइकाईयों से बना है क्रमशः5,6. Xenopus अंडाणुओं या HEK293 कोशिकाओं के रूप में एक मेजबान प्रणाली में एक पुनर्गठन तेजी से रिसेप्टर्स के औषधीय गुणों की खोज की संभावना प्रदान करता है ।
यौगिकों के औषधीय गुणों तो मस्तिष्क स्लाइस7में extracellular रिकॉर्डिंग के साथ पता लगाया है । इस विधि neurotransmission पर यौगिकों के प्रभाव की एक खोज की अनुमति देता है और समग्र में देशी रिसेप्टर्स के स्तर पर heterologous अभिव्यक्ति प्रणालियों में निर्धारित यौगिकों के कार्यात्मक प्रभाव की पुष्टि करने के लिए एक प्रभावी तरीका प्रदान करता है न्यूरॉन वातावरण. GABAergic neurotransmission निरोधात्मक postsynaptic स्वरुपात (IPSCs)८पर यौगिकों के प्रभाव को मापने के द्वारा आणविक स्तर पर भी मूल्यांकन किया जा सकता है. लेकिन यहां प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया और मस्तिष्क स्लाइस में पूरे सेल पैच दबाना रिकॉर्डिंग के आधार पर अधिक विस्तृत है और एक कम प्रवाह पैदावार ।
अंत में, शक्तियों और कमजोरियों में इन विट्रो स्क्रीनिंग α5β3γ2 की पहचान के लिए इस्तेमाल झरना-चयनात्मक लाइगैंडों विभिंन तकनीकों और उनके आंतरिक सीमाओं के परिप्रेक्ष्य में चर्चा कर रहे हैं । इस काम के विशेषज्ञों और गैर गाबा के क्षेत्र में विशेषज्ञएक रिसेप्टर्स इन विट्रो इन ligand-gated आयन चैनलों के नए मॉडुलन की खोज से निपटने के लिए इस्तेमाल किया दृष्टिकोण में अलग के संयोजन की एक उपयोगी समीक्षा प्रदान करना चाहिए.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:465px;">General equipment</td>
			<td style="width:169px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">96 well cell harvester -(Filtermate 196)&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Packard</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>To filter membranes with bound radioligand</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Microtiter plate liquid scintillation counter (Top Count NXT)</td>
			<td>Packard</td>
			<td></td>
			<td style="width:253px;">Microplate Scintillation and Luminescence counter</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Vial liquid scintillation counter (Beta-Couter 2500 TR)</td>
			<td>Packard</td>
			<td></td>
			<td style="width:253px;">Vial Scintillation and Luminescence counter</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Liquid&#160; handler (Biomek 2000)</td>
			<td style="width:169px;">Beckman coulter</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To prepare compound dilutions</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:465px;">Vortex (Vortex Genie 2)</td>
			<td>Scientific industries Inc.</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To mix compound stock solutions</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Tissue homogenizer (Polytron PT1200E)</td>
			<td>Kinematica AG</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To resuspend the membrane preparations</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">XLfit5 software</td>
			<td style="width:169px;">Microsoft Excel 
			&#160;add-on by IDBS</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">Curve fitting software</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Smart Pull</td>
			<td>UniPix</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td>Electrode Puller</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">RoboInject</td>
			<td>MultiChannel Systems</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td>Automated Injection (Xenopus Oocytes)</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">HiClamp</td>
			<td>MultiChannel Systems</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td>Automated Voltage Clamp (Xenopus Ooocytes)</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">DataMining</td>
			<td>MultiChannel Systems</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td>Data Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">DataMerger</td>
			<td>MultiChannel Systems</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td>Data Processing Software</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Digidata 1550</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Low noise data acquisition system</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">CyberAmp 380 or equivalent</td>
			<td style="width:169px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">Programmable Signal Conditioner</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">pClamp program suite</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">Software for data acquisition and analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Antivibraton table&#160;</td>
			<td style="width:169px;">TMC</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To avoid microelectrode vibrations&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Patchstar Micromanipulators</td>
			<td style="width:169px;">Scientifica</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To accurately position microelectrodes in brain slices</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Faraday Cage&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;">To isolate recordings from noise</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">McIlwain Tissue Chopper</td>
			<td style="width:169px;">Campden Instruments LTD&#160;</td>
			<td></td>
			<td>To prepare brain slices</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Borosilicate glass micropipette&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-10</td>
			<td style="width:253px;">To record extracellular potentials in brain slices</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Twisted pair, platinum iridium wires stimulation electrode</td>
			<td style="width:169px;">World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td style="width:253px;">To stimulate the brain slices with current</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Stimulus generator for current and voltage driven stimulation</td>
			<td>MultiChannel Systems</td>
			<td>STG4000</td>
			<td style="width:253px;">Delivers the current to the stimulation electrode</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Plasticware</td>
			<td style="width:169px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Microtiter plate round bottom</td>
			<td style="width:169px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">#3365</td>
			<td>Used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">GF/C glassfibre filter-bottom 96-well microplate with 1.2&#181;m poresize, for cell harvesting assays using a vacuum manifoldwell filter&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Packard&#160;</td>
			<td>#6005174</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">50 mL Tubes</td>
			<td style="width:169px;">Falcon&#160;</td>
			<td>#352070</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Safe-lock tubes 1.5 mL</td>
			<td style="width:169px;">Eppendorf</td>
			<td>#0030 120086</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Safe-lock tubes 2 mL</td>
			<td style="width:169px;">Eppendorf</td>
			<td>#0030 120094</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Shipping tubes 180ml&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Semadeni Europe AG&#160;</td>
			<td>#3722</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Pony vial Polyethylene 6ml&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Perkin Elmer&#160;</td>
			<td>#6013329</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Top Seal&#160;</td>
			<td>Perkin Elmer&#160;</td>
			<td>#60051859</td>
			<td style="width:253px;">used for the binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Spinner Flask</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>BELLCO # 1965-00100</td>
			<td>Spinner Flask</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">96&#160; Well Plate (Conical)</td>
			<td style="width:169px;">Thermo Scientific Milian</td>
			<td>56368</td>
			<td style="width:253px;">Injection plate for the oocytes</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">96&#160; Well Plate (Flat bottom)</td>
			<td style="width:169px;">Corning (Vitaris Switzerland)</td>
			<td>3364-cor</td>
			<td style="width:253px;">Compound Plate for the HiClamp</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Glass capillary&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Hilgenberg (Germany)</td>
			<td style="width:136px;">-</td>
			<td style="width:253px;">borosilicate glass 1.2 O.D. 0.76 I.D. with filament</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">RNA preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Ambion mMessage mMachine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>for the in vitro synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Assay buffer: KCl 5 mM; CaCl2 1.25 mM; MgCl2 1.25 mM; NaCl 120 mM; Tris 15 mM pH adjust with HCl to 7.4; store up to 3 months at 4&#176;C.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Washing buffer: Tris 50mM -HCl pH 7.4; store at 4&#176;C.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Stock solution of test compounds 10mM in DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Flumazenil (RO0151788) 10mM in DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Diazepam 4mM in DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">[3H]-Flumazenil 60-85 Ci/mmol in Ethanol; store at -20&#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Microscint 40&#160;</td>
			<td>Packard&#160;</td>
			<td>#6013641</td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Ultima Gold&#160;</td>
			<td style="width:169px;">Perkin Elmer&#160;</td>
			<td style="width:136px;">#6013329</td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">MS-222</td>
			<td style="width:169px;">Sigma</td>
			<td>Sigma # A5040</td>
			<td>MS-222</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">AB/AM</td>
			<td style="width:169px;">Sigma</td>
			<td>Sigma # A5955</td>
			<td>antibiotics / antimycotics</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Collagenase</td>
			<td style="width:169px;">Sigma</td>
			<td>Sigma # C1030</td>
			<td>Collagenase Type I</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Rnase</td>
			<td style="width:169px;">Sigma</td>
			<td>Sigma # R2020-250 mL</td>
			<td>RNaseZAP</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">EndoFree Plasmid maxi Kit</td>
			<td style="width:169px;">Qiagen</td>
			<td>Qiagen # 12362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Salts for artificial cerebrospinal fluid (NaCl, KCl, etc.)</td>
			<td style="width:169px;">Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Membranes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="89">
			<td height="89" style="height:89px;">Frozen membrane preparations from transient or stably transfected HEK293 overexpressing different human GABAA receptor subtypes: &#945;1&#946;3&#947;2, &#945;2&#946;3&#947;2, &#945;3&#946;3&#947;2, &#945;5&#946;3&#947;2. See Ballard et al 2009 for detailed methods.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for binding assay</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for the discovery of novel compounds modulating a gamma-aminobutyric acid receptor type a neurotransmission

यह पांडुलिपि गामा-aminobutyric एसिड प्रकार एक (गाबाएक) रिसेप्टर्स और उपंयास से नैदानिक परख में सक्रिय अणुओं की पहचान की दिशा में इसके उपयोग में एक इन विट्रो रिकॉमबिनेंट स्क्रीनिंग यौगिकों के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है मूषक मस्तिष्क स्लाइस में देशी रिसेप्टर्स पर उनके औषधीय प्रभाव को रिसेप्टर. रिसेप्टर्स के बेंजोडाइजेपाइन साइट पर बाध्यकारी यौगिकों के लिए, पहला कदम प्रमुख गाबाएक उपप्रकार व्यक्त कोशिका झिल्ली पर radioligand बाध्यकारी परख के विकास के होते हैं कि एक प्राथमिक स्क्रीन स्थापित करने के लिए है. फिर, Xenopus अंडाणुओं या HEK २९३ कोशिकाओं में कुतर और मानव गाबाएक रिसेप्टर्स की heterologous अभिव्यक्ति का लाभ लेने, यह electrophysiological परख में, पता लगाने के लिए संभव है, अलग रिसेप्टर के शारीरिक गुण उपप्रकारों और औषधीय गुणों की पहचान की यौगिकों । Xenopus oocyte प्रणाली यहां प्रस्तुत किया जाएगा, अंडाणुओं के अलगाव और उनके microinjection अलग mRNAs के साथ शुरू, औषधीय लक्षण वर्णन दो इलेक्ट्रोड वोल्टेज clamps का उपयोग करने के लिए ऊपर । अंत में, एक अच्छी तरह से परिभाषित ंयूरॉन सर्किट में उनके मूल रिसेप्टर्स पर अणुओं की गतिविधि का आकलन करने के लिए एक माध्यमिक शारीरिक परीक्षण के रूप में इस्तेमाल किया जाता है कि कुतर मस्तिष्क स्लाइस में किए गए रिकॉर्डिंग वर्णित किया जाएगा । एकाधिक न्यूरॉन्स की जनसंख्या प्रतिक्रियाओं का उपयोग Extracellular रिकॉर्डिंग दवा आवेदन के साथ एक साथ प्रदर्शन कर रहे हैं.

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Methods for the Discovery of Novel Compounds Modulating a Gamma-Aminobutyric Acid Receptor Type A Neurotransmission

एक गामा-Aminobutyric एसिड रिसेप्टर प्रकार एक Neurotransmission का नियमन उपंयास यौगिकों की खोज के लिए तरीके

यहां, हम वर्तमान प्रोटोकॉल गाबा पर सक्रिय यौगिकों की खोज करने के लिएएक रिसेप्टर्स, फिजियोलॉजी और औषध विज्ञान के लिए बाध्यकारी से.

This manuscript presents a step-by-step protocol for screening compounds at gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptors and its use towards the ...

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