Name: characterization of thymus-dependent and thymus-independent immunoglobulin isotype responses in mice using enzyme-linked immunosorbent assay
Uploaded: 2018-09-07T14:30:00
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Diese Studie wurde unterstützt von den National Institutes of Health Zuschüsse R01 CA158402 (P. xxx) und R21 AI128264 (P. Xie), dem Department of Defense gewähren W81XWH-13-1-0242 (s. Xie), ein Pilot Award vom Cancer Institute of New Jersey durch Grant Nummer P30CA072720 vom National Cancer Institute (s. xxx), ein Busch biomedizinische Grant (s. xxx), Victor Stollar Stipendiat (A. Lalani) und Anne B. und James B. Leathem Fellowship (S. Zhu).

Dieses Protokoll folgt den Richtlinien des institutionellen Tierforschung Ethik-Kommission der Rutgers University. Alle Mäuse dienen nach NIH-Richtlinien und eine tierische Protokolls durch die institutionelle Animal Care and Use Committee genehmigt.
1. Vorbereitung von Mäusen und Sammlung von naiven Maus Sera
<ol><li>Halten Sie alle Mäuse für Immunisierung Experimente in einem bestimmten Pathogen-freies Tierhaus.</li>
	<li>Mäuse, die die gleichen Eltern und Käfige für Immunisierung S...

Hier beschreiben wir das Protokoll für die Charakterisierung von TD und TI Ig Isotype Reaktionen bei Mäusen mittels ELISA. Erfolgreiche Umsetzung dieses Protokolls erfordert die Verwendung von Materialien, die in Tabelle 1, einschließlich ELISA-Assay-Platten, Immunisierung Ags, Maus Ig Isotype-spezifische Antikörper und Normen angegeben. Darauf sollte geachtet werden, vermeiden die Verwendung von Gewebekultur behandelt Platten für ELISA. Verdünnungen der Standards und Serumproben sollten in separat...

B-Lymphozyten sind der Hauptakteur in humorale Immunität und die einzige Zelltyp bei Säugetieren, die in der Lage, die Produktion von Antikörpern, auch als Immunglobuline (Ig)1,2bezeichnet sind. Abgesondert von B-Zellen Antikörper bieten eine gewaltige Verteidigung gegen eindringende Krankheitserreger über vielfältige Mechanismen, einschließlich Neutralisation, Opsonization und Komplementaktivierung führt zu schützende Immunität3. Sekretion von Antikörpern durch B-Zellen wird erst nach der vollständigen Aktivierung von bestimmten B-Zellen, die erfordert in der Regel zwei unterschiedliche Signale,3erreicht. Signal 1 wird durch die direkte Bindung des Antigens (Ag) an den B-Zell-Rezeptor (BCR) ausgedrückt auf der Oberfläche von bestimmten naive B Zellen3weitergeleitet. Abhängig von der Quelle des Signals 2 kann Thymus-abhängig (TD) oder Thymus-unabhängige (TI)3,4B-Zell-Aktivierung unterteilt werden. Ein TD-Antigen-Reaktion liefert Signal 2 aktivierten cognate CD4 T (TH)-Helferzellen, die CD154, die Liganden für den co-stimulatory-Rezeptor CD40 ausgedrückt auf B Zellen1,2,3zum Ausdruck bringen. Ein TI-Antigen-Reaktion, Signal 2 entstammt entweder Engagement von Toll-Like-Rezeptoren (TLRs bei Typ 1 TI-Ag) oder umfangreiche Vernetzung der BCR (bei Typ-2 TI Ag) auf der B-Zellen3,4. Typ 1 TI (TI-1) Antigene sind mikrobielle Liganden der TLRs, einschließlich der bakteriellen Lipopolysacchariden (LPS), virale RNA und mikrobielle CpG-DNA4,5. Typ 2 TI (TI-2) Antigene haben stark repetitiven Struktur und liefern längere und anhaltende Signalisierung zu B-Zellen durch mehrere Vernetzung der BCR4,6. Typische Beispiele für TI-2-Antigene sind Pneumokokken Polysaccharide und Hapten konjugierte Polysaccharid-6,-7. TD und TI Antigene können robuste Antigen-spezifische IgM Antworten entlocken und induzieren können auch die Produktion von Isotype geschalteten Antikörpern (IgG, IgA und IgE) mit der Hilfe von antigenpräsentierende Zellen (APCs) wie Dendritische Zellen (DCs)1 ,2,3. Darüber hinaus TD und TI Antigene sind in der Lage, Speicher-Reaktionen mit Hilfe von APCs induzieren, aber TD Antigene sind effizienter, induzierende Speicher B-Zell-Generation3,8.
In diesem Protokoll sind TD und TI Ig Antworten bei Mäusen durch intraperitoneale (i.p.) Immunisierung mit Hapten konjugiert Modell Antigene 2,4,6-Trinitrophenyl-Keyhole Limpet Hemocyanin (TNP-KLH) und TNP-Polysaccharid (Neutral, stark verzweigte ausgelöst. und hoher Masse), bzw.9,10,11. TD Antigene sind in der Regel mit Adjuvans zur die Produktion von Antikörpern12zu erhöhen. Hier in unserem Protokoll TNP-KLH mit Alaun, eine häufig verwendete adjuvante Impfung Studien12injiziert. Andere Beispiele für Hilfsstoffe, die verwendet werden können vollständig oder unvollständig Freund des Adjuvans (CFA oder IFA), Monophosphoryl-Lipid A / Trehalose Dicorynomycolate ("Ribi" adjuvante) und CpG oligodeoxynukleotiden, etc.13, 14. nach der Immunisierung, Maus Sera werden zu verschiedenen Zeitpunkten geerntet und TNP-spezifischen Antikörper im Serum quantifiziert mit Ig Isotype-spezifischen Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay (ELISA)9,10, 11.
ELISA ist ein Teller-basierte Assay, der weithin als Diagnosewerkzeug in der Medizin und auch als analytisches Werkzeug in der biomedizinischen Forschung15,16verwendet wird. Es dient zum erkennen und quantifizieren Analyten einschließlich Antikörper, Hormone, Zytokine, Chemokine, und verschiedene Antigene, etc.. ELISA kann in verschiedenen Formaten, einschließlich direkte, indirekte, Sandwich und wettbewerbsfähigen ELISA15,16durchgeführt werden. Im Allgemeinen geht es um die Immobilisierung des Antigens an einer festen Oberfläche, in der Regel einer 96-Well Mikrotiterplatte, die mit einem primären Antikörper inkubiert. Nach der Inkubation wird die ungebundene Antikörper abgewaschen. In eine direkte ELISA der primäre Antikörper direkt mit einem Enzym (in der Regel Meerrettich Peroxidase oder alkalische Phosphatase), die einem chromogenen Substrat um einen sichtbaren Farbumschlag erkannt durch ein Signal-Erkennung-Instrument wie Ausbeute Spalten kann konjugiert ist ein Spektralphotometer15,16. Im Gegensatz dazu, wenn ein Enzym-linked Sekundärantikörper verwendet wird, um den primären Antikörper binden, dann gilt dies als eine indirekte ELISA15,16. Direkte ELISA ist schneller während indirekte ELISA empfindlicher15,16. In einem Sandwich ELISA die Platten sind mit einem "einfangen" Antikörper verwendet, um das Antigen des Interesses an den Proben zu immobilisieren beschichtet, und dann das aufgenommene Antigen erkannt werden, von einem anderen "detektionsantikörper" in eine direkte oder indirekte Weise15, 16. Sandwich ELISA bietet hohen Spezifität, da das Antigen durch zwei verschiedene Antikörper an das Antigen erkannt wird. In einem wettbewerbsfähigen ELISA die Konkurrenz zwischen Probe Antigen und die Platte gebundene Antigen für die Bindung an den Primärantikörper ansässig ist, und dann die Antigenkonzentration in der Probe wird durch die Messung des Rückgang der Signal vom Substrat quantifiziert 15 , 16. wettbewerbsfähige ELISA durchgeführt werden kann, mit dem oben genannten direkten oder indirekten-Format und eignet sich für die Erkennung von kleinen Antigene mit nur ein Epitop15,16.
Alternative Verfahren zur Messung der Antikörper gehören Radio-Immunoassay (RIA), Electrochemiluminescence (ECL) Assay und Surface Plasmon Resonance (SPR) assay17. RIA war, dass die ersten Immunoassay entwickelt, dass die Maßnahmen die Anwesenheit eines Antigens (oder Antikörper) mit hoher Spezifität und Sensitivität mit radioaktiven Reagenzien18,19. Jedoch, aufgrund von Bedenken der radioaktiven Toxizität, Entsorgungskosten, Haltbarkeit und spezielle Lizenzen mit radioaktiven Stoffen zu arbeiten, ELISA ist eine bessere und bequemere Technik für gemeinsame nutzt20,21. ECL ist ein hochsensibler Assay in der Chemilumineszenz-Reaktionen werden initiiert, unter Verwendung der Elektrizität, um hoch reaktive Spezies aus stabilen Vorstufen auf der Oberfläche der Elektrode zu generieren, und können verwendet werden, um die Menge des Analyten zu messen (z. B. Antigene oder Antikörper)22. Allerdings erfordert ein spezielles Instrument ECL und somit nicht so breit als ELISA23eingesetzt. SPR ist ein direkter Assay, die verwendet werden kann, um die Bindung des Liganden zu messen (zB., Antikörper), immobilisiert Moleküle (zB., Antigene) auf einem Sensor chip-Oberfläche24. SPR erkennt die Interaktionen in Echtzeit sehr spezifisch und erfordert nicht die Verwendung von markierten Reagenzien wie ELISA. Allerdings erfordert eine spezielle Ausrüstung SPR auch und hat eine geringeren Empfindlichkeit als ELISA17. Angesichts der Einschränkungen der alternativen Methoden, ist ELISA die am besten geeignete und günstige Technik für unsere Zwecke in diesem Protokoll. Hier beschreiben wir die Verwendung von Sandwich ELISA für die Analyse der gesamten Ig Isotype Ebenen und das Verfahren der indirekten ELISA für die Analyse der Antigen-spezifische Ig Klassen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:577px;" width="576">
	<tbody>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">VersaMax Tunable Microplate Reader</td>
			<td style="width:111px;">MDS Analytical Technologies</td>
			<td style="width:109px;">VERSAMAX</td>
			<td style="width:201px;">Equipment to read the plates</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">SOFTmax PRO 5.3</td>
			<td style="width:111px;">MDS Analytical Technologies</td>
			<td style="width:109px;">SOFTmax PRO 5.3</td>
			<td style="width:201px;">Software for the plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">GraphPad Prism</td>
			<td style="width:111px;">GraphPad</td>
			<td style="width:109px;">Prism</td>
			<td style="width:201px;">Software for graphing and statistics</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">TNP-AECM-polysaccharide (FICOLL)</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">F-1300-10</td>
			<td style="width:201px;">A TI Ag for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">TNP-KLH</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5060-5</td>
			<td style="width:201px;">A TD Ag for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">TNP(38)-BSA</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5050-10 (conjugation ratio: 38)</td>
			<td style="width:201px;">Coating Ag for TNP-specific ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">TNP(3)-BSA</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5050-10 (conjugation ratio: 3)</td>
			<td style="width:201px;">Coating Ag for high affinity TNP-specific Ig</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Imject Alum</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">PI-77161</td>
			<td style="width:201px;">Alum adjuvant for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Falcon Polypropylene tubes</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-959-11A</td>
			<td style="width:201px;">For incubation of TNP-KLH/alum</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">BD Insulin Syringe</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-829-1B</td>
			<td style="width:201px;">For i.p. injection of mice</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Immuno 96-Well Plates, Flat-Bottom</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-245-61</td>
			<td style="width:201px;">For ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">Untreated 96-Well Microplates, Round-Bottom</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:109px;">82050-622</td>
			<td style="width:201px;">For serial dilutions of standards and samples</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Phosphatase substrate, 5 mg Tablets</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:109px;">S0942-200TAB</td>
			<td style="width:201px;">AP substrate</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Diethanolamine</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:109px;">IC15251690</td>
			<td style="width:201px;">A component of AP substrate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgM</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1020-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgM</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1070-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1080-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG2a</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1090-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG2b</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG3</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1100-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgA</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1040-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgA</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgE</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1110-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgE</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgM</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1020-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgM</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1070-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1080-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG2a</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1090-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG2b</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG3</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1100-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgA</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1040-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgA</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgE</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1110-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgE</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgM standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">553472</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgM, Clone&#160; G155-228</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG1 standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">554054</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG1, Clone&#160; 107.3</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Mouse IgG2a standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">556651</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG2a, Clone&#160; G155-178</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG2b standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">554055</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG2b, Clone&#160; 49.2</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG3 standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">553486</td>
			<td style="width:201px;">KLH-specific IgG3, Clone&#160; A112-3</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Mouse IgA standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">550924</td>
			<td style="width:201px;">Mineral oil-induced IgA, Clone&#160; MOPC-320</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgE standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">557079</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgE, Clone&#160; C38-2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of thymus-dependent and thymus-independent immunoglobulin isotype responses in mice using enzyme-linked immunosorbent assay

Antikörper, auch bezeichnet als Immunglobuline (Ig), abgesondert von B-Lymphozyten, Plasmablasts/Plasmazellen im humorale Immunität unterschieden bieten eine gewaltige Verteidigung gegen eindringende Krankheitserreger über vielfältige Mechanismen. Ein wichtiges Ziel der Impfung ist, schützende Antigen-spezifische Antikörper, lebensbedrohliche Infektionen zu verhindern. Thymus-abhängig (TD) und Thymus-unabhängige (TI) Antigene robuste Antigen-spezifische IgM Antworten entlocken können und können auch induzieren die Produktion von Isotype geschalteten Antikörpern (IgG, IgA und IgE) sowie die Generierung von Speicherzellen B mit Hilfe durch antigenpräsentierende Zellen (APCs) bereitgestellt. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Charakterisierung von TD und TI Ig Isotype Reaktionen bei Mäusen mit Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay (ELISA). In diesem Protokoll sind TD und TI Ig Antworten durch intraperitoneale (i.p.) Immunisierung mit konjugierten Hapten Modell Antigene TNP-KLH (in Alaun) und TNP-Polysaccharid (mit PBS-Puffer), bzw. in den Mäusen ausgelöst. Um TD Speicher Reaktion hervorzurufen, ist eine Auffrischimpfung von TNP-KLH in Alaun 3 Wochen nach der ersten Impfung mit dem gleichen Antigen/adjuvante gegeben. Maus-Seren werden zu verschiedenen Zeitpunkten vor und nach der Immunisierung geerntet. Insgesamt Ig Serumspiegel und TNP-spezifische Antikörper sind anschließend quantifiziert mit Ig Isotype-spezifische Sandwich und indirekten ELISA, beziehungsweise. Um die Serumkonzentration von jedem Ig Isotype korrekt zu quantifizieren, müssen die Proben entsprechend verdünnt werden, um innerhalb des linearen Bereichs der standard Kurven passen. Unter Verwendung dieses Protokolls, haben wir konsequent zuverlässige Ergebnisse mit hoher Spezifität und Sensitivität erreicht. Bei Verwendung in Kombination mit anderen ergänzenden Methoden wie Durchflusszytometrie, in-vitro- Kultur der Milz B-Zellen und immunhistochemische können Färbung (IHC), dieses Protokoll Forscher, ein umfassendes Verständnis des Antikörpers zu gewinnen Antworten in einer bestimmten experimentellen Einstellung.

Wir haben dieses Protokoll verwendet, um die Rollen von einem kritischen Regler des immunen Systems, TRAF3, TI und TD Ig Isotype Antworten9,10,11zu untersuchen. TRAF3 direkt oder indirekt regelt die Signaltransduktion eine Reihe von angeborenen und der adaptiven Immunsystems Rezeptoren, einschließlich der TNF-Rezeptor-Superfamilie, Toll-Like-Rezeptoren und T-Zell-Rezeptor/CD28, unter anderem<sup...

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Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll zur Charakterisierung von T-abhängigen und T-unabhängige Immunglobulin (Ig) Isotype Antworten bei Mäusen mittels ELISA. Diese Methode verwendet, allein oder in Kombination mit Flow Cytometry wird erlauben Forschern, Unterschiede in der B-Zell-vermittelten Ig Isotype Antworten bei Mäusen nach T-abhängigen und T-unabhängige Antigen-Immunisierung zu identifizieren.

Charakterisierung der Thymus-abhängig und Thymus-unabhängige Immunglobulin Isotype Antworten bei Mäusen mit Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): Quantifizierung von Th-1 zelluläre Immunantworten gegen mikrobielle Antigene

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Mess-bakterielle Belastung und Immunreaktionen in Mäuse Infizierte mit Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Use of Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Verwendung von Interferon-γ enzyme-linked immunospot Assay zur Novel T-Zell-Epitope des humanen Papillomvirus Charakterisieren

A protocol has been developed to overcome the difficulties of isolating and characterizing rare T cells specific for pathogens, such as human ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Charakterisierung von Entzündungsreaktionen während der intranasalen Kolonisation mit Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation von Haut-Schwanz zu allogene CD4-T-Zellantworten in Mäusen untersucht

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Anwendung von Langzeit kultiviert Interferon-γ Enzyme-linked Immunospot Assay zur Beurteilung Effektor und Gedächtnis-T-Zell-Antworten in Cattle

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

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Bakterielle Blatt Infiltration Assay für Bildende Charakterisierung pflanzlicher Abwehrreaktionen mit Hilfe der<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Messung von Influenza-Neuraminidase Inhibition Antikörpertiter durch Enzyme-Linked-Lectin-Assay

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

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Isolierung von Salmonella Typhimurium-mit Phagosom von Makrophagen

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±

Entwicklung und Validierung eines empfindsamen Einzelmolekül Array digitale Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay für menschliche Interferon-α

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...