Name: characterization of thymus-dependent and thymus-independent immunoglobulin isotype responses in mice using enzyme-linked immunosorbent assay
Uploaded: 2018-09-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay at JoVE.com

Este estudo foi suportado pelos institutos nacionais de subsídios saúde R01 CA158402 (P. Xie) e R21 AI128264 (P. Xie), o departamento de defesa conceder W81XWH-13-1-0242 (P. Xie), um prêmio de piloto o Cancer Institute de New Jersey através do Grant número P30CA072720 do Instituto Nacional de câncer (P. Xie), uma concessão biomédica Busch (P. Xie), uma bolsa de Victor Stollar (a. leite) e um B. Anne e James B. Leathem Fellowship (S. Zhu).

Este protocolo segue as diretrizes do Comitê de ética institucional pesquisa animal da Universidade de Rutgers. Todos os mouses são utilizados em conformidade com as diretrizes do NIH e sob um animal protocolo aprovado pelo Comitê de uso e cuidado institucional do Animal.
1. preparação dos ratos e coleção de ingênuo Mouse Sera
<ol><li>Manter todos os ratos para experimentos de imunização em uma determinada instalação livre de patógeno animal.</li>
	<li>Nocaute de gênero de cor...

Aqui, descrevemos o protocolo para a caracterização de TD e TI Ig isotipo respostas nos ratos usando ELISA. Sucesso da implementação do presente protocolo requer o uso de materiais especificados na tabela 1, incluindo placas de ensaio de ELISA, imunização Ags, anticorpos de isotipo específico do Ig e padrões. Deve ter cuidado para evitar o uso de placas de cultura de tecidos tratada por ELISA. Diluições dos padrões e amostras de soro devem ser feitas em chapas separadas não tratadas (fundo re...

Os linfócitos B são o principal jogador na imunidade humoral e o único tipo de célula em mamíferos que são capazes de produzir anticorpos, também denominados como imunoglobulinas (Ig)1,2. Anticorpos secretados pelas células B fornecem uma formidável defesa contra patógenos através de diversos mecanismos, incluindo a neutralização, opsonização e ativação do complemento, levando a imunidade protetora3a invadir. Secreção de anticorpos pelas células B só é alcançada após a ativação completa das células B específicas, que normalmente requer que duas distintas sinaliza3. Sinal 1 é retransmitido por ligação directa do antígeno (Ag) para o receptor de células B (BCR) expressado na superfície de de células específicas ingênua B3. Dependendo da fonte de sinal 2, ativação de células B pode ser dividida em Timo-dependentes (TD) ou Timo-independente (TI)3,4. Em uma resposta de antígeno de TD, sinal 2 é fornecida pelo cognato CD4 células T ativadas auxiliar (T,H), que expressam CD154, o ligante para o receptor co-estimulatória CD40 expressado em células de B a1,2,3. Em uma resposta de antígeno de TI, sinal 2 vem de qualquer envolvimento de receptores Toll-like (TLRs no caso tipo 1 TI Ag) ou cross-linking extensa dos BCRs (no caso do tipo 2 TI Ag) no B células3,4. Os antígenos de TI (TI-1) do tipo 1 são ligantes microbianas de TLRs, incluindo bacterianos lipopolissacarídeos (LPS), RNAs virais e microbiana CpG DNA4,5. Antígenos de TI (TI-2) do tipo 2 têm estrutura altamente repetitiva e são capazes de entregar prolongada e persistente sinalização à célula B por múltiplos do cross-linking dos BCRs4,6. Exemplos típicos de TI-2 antígenos incluem pneumocócica polissacarídeos e polissacarídeo conjugados hapteno6,7. Antígenos tanto TD e TI podem eliciar respostas de IgM robustas antígeno-específicas e também podem induzir a produção de anticorpos de comutação de isotipo (IgG, IgA e IgE) com a ajuda fornecida por apresentadoras de antígenos (APCs) de células como as células dendríticas (DCs)1 ,2,3. Além disso, ambos TD e TI antígenos são capazes de induzir respostas de memória com a ajuda de APCs, mas TD os antígenos são mais eficientes na indução de memória B célula geração3,8.
Neste protocolo, TD e TI Ig respostas são eliciadas em camundongos intraperitoneal (i.p.) imunização com hemocianina de Lapa 2.4.6-trinitrophenyl-fechadura de antígenos conjugados hapteno modelo (TNP-KLH) e TNP-polissacarídeo (neutro, altamente ramificado e alta massa), respectivamente,10,9,11. Antígenos de TD são geralmente usados com um adjuvante para aumentar a produção de anticorpos12. Aqui em nosso protocolo, TNP-KLH é injetado com alume, um adjuvante comumente utilizado em estudos de imunização12. Outros exemplos de adjuvantes que podem ser usados incluem completa ou incompleta adjutor de Freund (CFA ou IFA), A monofosforil lipídio / dicorynomycolate trealose ("Ribi" adjuvante) e CpG oligodeoxynucleotides, etc.13, 14. após a imunização, soros de rato são colhidos nos pontos de tempo diferentes e anticorpos específicos TNP em soros são quantificados usando o Ig isotipo específico enzima-lig da imunoabsorção ensaio (ELISA)9,10, 11.
ELISA é um ensaio baseado na placa que é amplamente utilizado como uma ferramenta de diagnóstico na medicina e também como uma ferramenta analítica em investigação biomédica15,16. É usado para detectar e quantificar analitos incluindo anticorpos, hormônios, citocinas, quimiocinas e vários antígenos, etc. ELISA pode ser executada em vários formatos diferentes, incluindo directo, indirecto, sanduíche e competitiva ELISA15,16. Em geral, envolve a imobilização do antígeno para uma superfície sólida, geralmente uma placa de microtitulação 96 poços, que é incubada com anticorpo primário. Após a incubação, o anticorpo não acoplado é lavado. Em um ELISA direto, o anticorpo primário diretamente é conjugado a uma enzima (peroxidase de rábano normalmente ou fosfatase alcalina), que pode decompor um substrato cromogénico para produzir uma mudança de cor visível detectada por um instrumento de detecção do sinal tais como uma Espectrofotómetro de15,16. Em contraste, se um anticorpo secundário enzima-lig é usado para ligar o anticorpo primário, então este é considerado um de15,de ELISA indireto16. ELISA direta é mais rápido enquanto ELISA indireta é mais sensível,15,16. Em um sanduíche ELISA, as placas são revestidas com anticorpo "captura" usado para imobilizar o antígeno de interesse nas amostras, e em seguida o antígeno capturado pode ser detectado por outro anticorpo "detecção" de uma forma directa ou indirecta15, 16. ELISA sanduíche oferece alta especificidade, uma vez que o antígeno é detectado por dois diferentes anticorpos do antígeno. Em um ELISA competitivo, a competição é estabelecida entre o antígeno da amostra e o antígeno de placa-limite para a ligação com o anticorpo primário, e em seguida a concentração de antígeno na amostra é quantificada através da medição da redução no sinal do substrato 15 , 16. ELISA competitivo pode ser executada usando o formato acima mencionado direto ou indireto e é útil para a detecção de antígenos pequenos com apenas um epítopo15,16.
Técnicas alternativas para a medição de anticorpos incluem radio-imunoensaio (RIA), ensaio de eletroquimioluminescência (ECL) ensaio e superfície ressonância de plasmon (SPR)17. RIA foi o primeiro imunoensaio desenvolvido que as medidas da presença de um antígeno (ou anticorpos) com alta especificidade e sensibilidade, usando reagentes radiolabeled18,19. No entanto, devido as preocupações de toxicidade radioativa, custos de eliminação, validade e licenças especiais para trabalhar com materiais radioactivos, ELISA é um melhor e mais conveniente técnica comum usa20,21. ECL é um ensaio altamente sensível no qual quimioluminescente reações são iniciadas usando eletricidade para gerar espécies altamente reativas de precursores estáveis na superfície de um eletrodo, em podem ser usadas para medir a quantidade de analitos (tais como antígenos ou anticorpos)22. No entanto, ECL requer um instrumento especial e, portanto, não é tão amplamente usado como ELISA23. SPR é um ensaio direto que pode ser usado para medir a vinculação dos ligantes (EG., anticorpos) para moléculas de imobilizado (EG., antígenos) em um sensor chip superfície24. SPR detecta as interações em tempo real, muito especificamente e não requer a utilização de reagentes rotulados como ELISA. No entanto, SPR também requer um equipamento especial e tem uma sensibilidade mais baixa do que ELISA17. Tendo em conta as limitações dos métodos alternativos, ELISA é a técnica mais adequada e conveniente para o nosso propósito no presente protocolo. Aqui, descrevemos o uso de sanduíche ELISA para a análise dos níveis totais do isotipo Ig e os procedimentos de ELISA indireto para a análise do antígeno-específicas isotipos de Ig.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:577px;" width="576">
	<tbody>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">VersaMax Tunable Microplate Reader</td>
			<td style="width:111px;">MDS Analytical Technologies</td>
			<td style="width:109px;">VERSAMAX</td>
			<td style="width:201px;">Equipment to read the plates</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">SOFTmax PRO 5.3</td>
			<td style="width:111px;">MDS Analytical Technologies</td>
			<td style="width:109px;">SOFTmax PRO 5.3</td>
			<td style="width:201px;">Software for the plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">GraphPad Prism</td>
			<td style="width:111px;">GraphPad</td>
			<td style="width:109px;">Prism</td>
			<td style="width:201px;">Software for graphing and statistics</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">TNP-AECM-polysaccharide (FICOLL)</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">F-1300-10</td>
			<td style="width:201px;">A TI Ag for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">TNP-KLH</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5060-5</td>
			<td style="width:201px;">A TD Ag for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">TNP(38)-BSA</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5050-10 (conjugation ratio: 38)</td>
			<td style="width:201px;">Coating Ag for TNP-specific ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">TNP(3)-BSA</td>
			<td style="width:111px;">Biosearch Technologies</td>
			<td style="width:109px;">T-5050-10 (conjugation ratio: 3)</td>
			<td style="width:201px;">Coating Ag for high affinity TNP-specific Ig</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Imject Alum</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">PI-77161</td>
			<td style="width:201px;">Alum adjuvant for immunization</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Falcon Polypropylene tubes</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-959-11A</td>
			<td style="width:201px;">For incubation of TNP-KLH/alum</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">BD Insulin Syringe</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-829-1B</td>
			<td style="width:201px;">For i.p. injection of mice</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Immuno 96-Well Plates, Flat-Bottom</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:109px;">14-245-61</td>
			<td style="width:201px;">For ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:156px;">Untreated 96-Well Microplates, Round-Bottom</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:109px;">82050-622</td>
			<td style="width:201px;">For serial dilutions of standards and samples</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Phosphatase substrate, 5 mg Tablets</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:109px;">S0942-200TAB</td>
			<td style="width:201px;">AP substrate</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Diethanolamine</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:109px;">IC15251690</td>
			<td style="width:201px;">A component of AP substrate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgM</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1020-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgM</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1070-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1080-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG2a</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1090-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG2b</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgG3</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1100-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgG3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgA</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1040-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgA</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Goat anti-mouse IgE</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1110-01</td>
			<td style="width:201px;">Capture Ab for mouse IgE</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgM</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1020-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgM</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1070-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1080-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG2a</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1090-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG2b</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgG3</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1100-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgG3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgA</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1040-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgA</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">AP-Goat anti-mouse IgE</td>
			<td style="width:111px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:109px;">1110-04</td>
			<td style="width:201px;">Detection Ab for mouse IgE</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgM standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">553472</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgM, Clone&#160; G155-228</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG1 standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">554054</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG1, Clone&#160; 107.3</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Mouse IgG2a standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">556651</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG2a, Clone&#160; G155-178</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG2b standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">554055</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgG2b, Clone&#160; 49.2</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgG3 standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">553486</td>
			<td style="width:201px;">KLH-specific IgG3, Clone&#160; A112-3</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:156px;">Mouse IgA standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">550924</td>
			<td style="width:201px;">Mineral oil-induced IgA, Clone&#160; MOPC-320</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:156px;">Mouse IgE standard</td>
			<td style="width:111px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:109px;">557079</td>
			<td style="width:201px;">TNP-specific IgE, Clone&#160; C38-2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of thymus-dependent and thymus-independent immunoglobulin isotype responses in mice using enzyme-linked immunosorbent assay

Anticorpos, também denominados como diferenciados de imunoglobulinas (Ig), secretadas por linfócitos B, células plasmablasts/plasma, na imunidade humoral fornecem uma formidável defesa contra a invasão de agentes patogénicos através de diversos mecanismos. Um dos principal objetivos da vacinação é induzir proteção anticorpos antígeno-específicos para prevenir infecções fatais. Timo-dependentes (TD) e antígenos de Timo-independente (TI) podem eliciar respostas de IgM robustas antígeno-específicas e também podem induzir a produção de anticorpos de comutação de isotipo (IgG, IgA e IgE) bem como a geração de células B de memória com a ajuda fornecido por apresentadoras de antígenos (APCs) de células. Aqui, descrevemos um protocolo para caracterizar TD e TI Ig isotipo respostas em ratos utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Neste protocolo, TD e TI Ig respostas são eliciadas em camundongos intraperitoneal (i.p.) imunização com antígenos conjugados hapteno modelo TNP-KLH (em alum) e TNP-polissacarídeo (em PBS), respectivamente. Para induzir resposta de memória TD, uma imunização de reforço do TNP-KLH em alum é dado em 3 semanas após a primeira imunização com o mesmo antígeno/adjuvante. Soros de mouse são colhidos em pontos diferentes de tempo, antes e após a imunização. Total de níveis de Ig de soro e anticorpos específicos TNP são posteriormente quantificados usando o Ig isotipo específico sanduíche e ELISA indireta, respectivamente. Para corretamente quantificar a concentração de soro de cada isotipo Ig, as amostras devem ser apropriadamente diluído para caber dentro da escala linear das curvas padrão. Usando este protocolo, consistentemente obtivemos resultados confiáveis com sensibilidade e alta especificidade. Quando usado em combinação com outros métodos complementares tais como citometria de fluxo, em vitro cultura de esplênica de células B e imuno-histoquímica coloração (IHC), este protocolo permitirá aos pesquisadores uma compreensão abrangente do anticorpo respostas em um determinado ambiente experimental.

Nós usamos este protocolo para investigar as funções de um regulador crítico do sistema imunológico, TRAF3, em TI e TD Ig isotipo respostas9,10,11. TRAF3, directa ou indirectamente regula a transdução de sinal de um número de receptores imunes inatos e adaptativos, incluindo a superfamília de receptores TNF, receptores Toll-like e T celular receptor/CD28, entre outros27...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay at JoVE.com

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Neste trabalho, descrevemos um protocolo para caracterizar T-dependentes e T-independentes respostas do isotipo de imunoglobulina (Ig) em camundongos usando ELISA. Este método usado sozinho ou em combinação com fluxo cytometry permitirá que os investigadores a identificar diferenças nas respostas de isotipo Ig mediada por células B em camundongos após imunização de antígenos T-dependentes e T-independentes.

Caracterização das respostas de isotipo de imunoglobulina Timo-dependentes e Timo-independente nos ratos usando ensaio enzima-lig da imunoabsorção

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT): Quantificação de Th-1 respostas imunes celulares contra antígenos microbianos

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Imunologia e Infecção

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Medir a carga bacteriana e resposta imune em camundongos infectados com Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Use of Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

O uso de interferão-γ Enzyme-linked Assay immunospot Caracterizar Novel epitopos de células T de papilomavírus humano

A protocol has been developed to overcome the difficulties of isolating and characterizing rare T cells specific for pathogens, such as human ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

O transplante de pele da cauda para estudar as respostas das células T CD4 alogênico em camundongos

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Aplicação de longo prazo cultivadas Interferon-γ Enzyme-linked Immunospot Ensaio para a Avaliação e efetoras de memória T respostas de células em gado

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Patossistema

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Medição de Inibição da Neuraminidase Influenza títulos de anticorpos por Enzyme-linked Lectina Ensaio

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolamento de Salmonella typhimurium-contendo Phagosomes de macrófagos

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±

Desenvolvimento e validação de uma única molécula ultra-sensível de matriz Digital ensaio imunossorvente ligado à enzima para humana Interferon-α

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...