Name: a rapid image-based bacterial virulence assay using amoeba
Uploaded: 2018-06-27T15:00:00
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केपी और के रूप में लिखा और पांडुलिपि संशोधित । केपी ने प्रयोगों और विश्लेषण का प्रदर्शन किया. इस काम के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (NIH) कैरियर संक्रमण पुरस्कार (K22AI112816) के रूप में करने के लिए द्वारा समर्थित किया गया था ।

सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं कैलिफोर्निया, इरविन विश्वविद्यालय में किए गए ।
1. बफ़र्स और समाधान
<ol><li>डबल आसुत जल (ddH2ओ) के 1 एल में पौंड-मिलर मिश्रण के 25 ग्राम जोड़कर एक 1 एल ग्लास बोतल में Lysogeny शोरब...

<ol>
	<li>Rasko, D. A., Sperandio, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-virulence+strategies+to+combat+bacteria-mediated+disease.">Anti-virulence strategies to combat bacteria-mediated disease.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 9 (2), 117-128 (2010).</li><li>Coburn, B., Grassl, G. A., Finlay, B. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+type+III+secretion+system+of+Pseudomonas+aeruginosa:+infection+by+injection.">The type III secretion system of Pseudomonas aeruginosa: infection by injection.</a> Nature Reviews Microbiology. 7 (9), 654-665 (2009).</li><li>Moore, P. L., MacCoubrey, I. C., Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+pH+insensitive,+two+color+fluorescence+viability+(cytotoxicity)+assay.">A rapid pH insensitive, two color fluorescence viability (cytotoxicity) assay.</a> Journal of Cell Biology. 111, 58 (1990).</li><li>Kaneshiro, E. S., Wyder, M. A., Wu, Y. -. P., Cushion, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+calcein+acetoxy+methyl+ester+and+ethidium+homodimer+or+propidium+iodide+for+viability+assessment+of+microbes.">Reliability of calcein acetoxy methyl ester and ethidium homodimer or propidium iodide for viability assessment of microbes.</a> Journal of Microbiological Methods. 17 (1), 1-16 (1993).</li><li>Siryaporn, A., Kuchma, S. L., O'Toole, G. A., Gitai, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+attachment+induces+Pseudomonas+aeruginosa+virulence.">Surface attachment induces Pseudomonas aeruginosa virulence.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 111 (47), 16860-16865 (2014).</li><li>Decherchi, P., Cochard, P., Gauthier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+staining+assessment+of+Schwann+cell+viability+within+whole+peripheral+nerves+using+calcein-AM+and+ethidium+homodimer.">Dual staining assessment of Schwann cell viability within whole peripheral nerves using calcein-AM and ethidium homodimer.</a> Journal of Neuroscience Methods. 71 (2), 205-213 (1997).</li><li>Braut-Boucher, F., Pichon, J., Rat, P., Adolphe, M., Aubery, M., Font, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-isotopic,+highly+sensitive,+fluorimetric,+cell-cell+adhesion+microplate+assay+using+calcein+AM-labeled+lymphocytes.">A non-isotopic, highly sensitive, fluorimetric, cell-cell adhesion microplate assay using calcein AM-labeled lymphocytes.</a> Journal of Immunological Methods. 178 (1), 41-51 (1995).</li><li>Grieshaber, P., Lagr&#232;ze, W. A., Noack, C., Boehringer, D., Biermann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+of+fluorogold-prelabeled+retinal+ganglion+cells+with+calcein-AM:+A+new+method+for+assessing+cell+vitality.">Staining of fluorogold-prelabeled retinal ganglion cells with calcein-AM: A new method for assessing cell vitality.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (2), 233-239 (2010).</li><li>Witkin, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inherited+Differences+in+Sensitivity+to+Radiation+in+Escherichia+Coli.">Inherited Differences in Sensitivity to Radiation in Escherichia Coli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 32 (3), 59-68 (1946).</li><li>Loomis, W. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quorum-sensing+inhibitor+blocks+Pseudomonas+aeruginosa+virulence+and+biofilm+formation.">A quorum-sensing inhibitor blocks Pseudomonas aeruginosa virulence and biofilm formation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 110 (44), 17981-17986 (2013).</li></ol>

यह प्रोटोकॉल aeruginosaमें डाह परख करने के लिए एक तेजी से और मात्रात्मक विधि का वर्णन । इस प्रोटोकॉल अंय बैक्टीरिया के साथ परीक्षण किया जा सकता है । तथापि, यह ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है कि विकास के माध्य?...

बैक्टीरियल संक्रमण मानव और पशुओं में मृत्यु के प्रमुख कारणों में से एक है1,2. संस्कृतियों या फिल्मों में बैक्टीरिया के डाह को मापने की क्षमता स्वास्थ्य और अनुसंधान सेटिंग्स में महत्वपूर्ण है । यहां, हम एक बहुमुखी, तेजी से वर्णन है, और अपेक्षाकृत सरल बैक्टीरियल डाह यों तो विधि । eukaryotic जीव Dictyostelium discoideum (अमीबा) मॉडल मेजबान जीव के रूप में प्रयोग किया जाता है । D. discoideum एक मेजबान के रूप में इस्तेमाल किया गया है Pseudomonas aeruginosa में डाह कारकों की पहचान (पी. aeruginosa)3,4,5 और अंय बैक्टीरिया6,7 ,8 और काफी हद तक एक ही डाह कारक है कि प्रकार III स्राव9,10सहित स्तनधारी कोशिकाओं को मारने के लिए अतिसंवेदनशील है । पिछले डाह discoideum का उपयोग कर परख घंटे3,4,5के पाठ्यक्रम पर डी. discoideum कोशिकाओं के साथ बैक्टीरिया के लंबे समय तक जोखिम शामिल है । प्रोटोकॉल, यहां, इस अमीबा का उपयोग कर डाह निर्धारित करने का एक तेजी से विधि प्रस्तुत करता है । इस प्रोटोकॉल (चित्रा 1) का वर्णन कैसे करने के लिए: (1) amoebae axenically (बैक्टीरिया के अभाव में) बढ़ने, (2) परख के लिए बैक्टीरिया बढ़ने, (3) बैक्टीरिया और माइक्रोस्कोप के लिए मेजबान कोशिकाओं को तैयार, (4) epifluorescence माइक्रोस्कोपी प्रदर्शन, और (5) का विश्लेषण अमीबा प्रतिदीप्ति.
Amoebae शुरू में जमे हुए शेयरों से बाहर निकल रहे है और ई कोलाई (ई. कोलाई), जहां Amoebae बीजाणु का उत्पादन के एक लॉन पर हो गया । इन बीजाणुओं को axenic वृद्धि के लिए समृद्ध माध्यम में चुना और inoculated जाता है । amoebae पोषक तत्वों से भरपूर परिस्थितियों में axenic वृद्धि के माध्यम से बनाए रखा जाता है जब तक वे बैक्टीरियल डाह के आकलन के लिए बैक्टीरिया के साथ मिश्रित होने के लिए तैयार हैं । अस्तित्व या amoebae की मृत्यु calcein-acetoxymethyl (calcein-AM) के प्रतिदीप्ति को मापने से quantified है, जो intracellular esterases से सट जाता है और, जिससे प्रतिदीप्ति11,12के लिए सक्रिय हो जाता है । लाइव amoebae प्रदर्शन कम या कोई प्रतिदीप्ति जबकि जोर दिया और मर कोशिकाओं fluoresce तीव्रता से । यह परिणाम calcein के एक छोटे या कोई निगमन के कारण है-स्वस्थ amoebae और शामिल करने और तनाव में सब्सट्रेट के दरार में हूं13amoebae । यह व्यवहार विशेष रूप से अलग है calcein-AM प्रतिदीप्ति स्तनधारी कक्षों में11,14,15,16।
बैक्टीरिया है कि डाह के लिए मूल्यांकन किया जाएगा अलग से उगाया जाता है । यहां, हम बताते है कि कैसे अवसरवादी रोगज़नक़ पी aeruginosa और विस्तार के डाह को मापने के लिए कैसे planktonic (तैराकी) और सतह से जुड़ी उप आबादी डाह की मात्रा बढ़ाता है । इस प्रोटोकॉल के लिए अंय बैक्टीरिया की डाह परीक्षण अनुकूलित किया जा सकता है । प्रतिनिधि परिणाम अनुभाग में, हम बताते है कि डाह सतह संलग्न कोशिकाओं में सक्रिय है और planktonic कोशिकाओं में कम है, जो पहले13बताया गया था । डाह-आपन सतह से जुड़ी पी. aeruginosa मारती amoebae जबकि गैर विषमय planktonic कोशिकाओं का सेवन amoebae द्वारा किया जाता है. यदि planktonic बैक्टीरिया की डाह पूरी तरह से परख की जा रही है, बैक्टीरिया साधारण संस्कृति ट्यूबों में बजाय पेट्री व्यंजन का उपयोग कर के रूप में प्रोटोकॉल में वर्णित किया जा सकता है ।
amoebae और aeruginosa संस्कृतियों की वृद्धि का समंवय किया जाना चाहिए ऐसी है कि पी aeruginosa संस्कृतियों का इरादा विकास के दौर तक पहुंचने जबकि amoebae पोषक तत्वों से भरपूर परिस्थितियों में स्थिर राज्य में बढ़ रहे हैं । इस हालत में आम तौर पर amoebae संस्कृतियों की आवश्यकता है जब वे जीवाणुओं के साथ मिश्रित कर रहे हैं करने से पहले से कम 1 दिन पतला हो । Amoebae और बैक्टीरिया के मैटीरियल पैड का उपयोग कर रहे हैं, सह रहे है 1 के लिए मशीन, और एक कम संकल्प (10x, संख्यात्मक एपर्चर ०.३) उद्देश्य, हरी प्रतिदीप्ति प्रोटीन (GFP) फिल्टर, और एक इमेजिंग कैमरा का उपयोग कर imaged । विश्लेषण स्वतंत्र रूप से उपलब्ध ImageJ सॉफ्टवेयर या अनुकूलित छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है । हमारे विश्लेषण एक वैज्ञानिक विश्लेषण13पैकेज का उपयोग कर लिखा हमारे अपने सॉफ्टवेयर का उपयोग किया गया था । सॉफ्टवेयर एक मुखौटा चरण कंट्रास्ट छवि का उपयोग कर बनाने और प्रतिदीप्ति छवि में नकाबपोश क्षेत्रों से प्रतिदीप्ति मूल्यों को निकालने चाहिए । प्रतिदीप्ति मूल्यों पर औसत से कम १०० कोशिकाओं, एक संख्यात्मक मेजबान हत्या सूचकांक में जिसके परिणामस्वरूप हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:716px;" width="715">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Reagents</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Bacto agar, dehydrated</td>
			<td style="width:108px;">BD Difco</td>
			<td style="width:91px;">214010</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td style="width:108px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:91px;">15240062</td>
			<td style="width:297px;">Aliquot &#60; 1 mL and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Calcein-acetoxymethyl ester (calcein-AM)</td>
			<td style="width:108px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:91px;">C34852</td>
			<td style="width:297px;">Calcein Acetoxymethyl (AM)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Calcium chloride, anhydrous</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">C1016</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:108px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:91px;">D16500</td>
			<td style="width:297px;">Dextrose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">D5879</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Folic acid</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">F8758</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">LB-Miller</td>
			<td style="width:108px;">BD Difco</td>
			<td style="width:91px;">244620</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Magnesium chloride</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">M8266</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:108px;">Oxoid</td>
			<td style="width:91px;">LP0021</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Special peptone</td>
			<td style="width:108px;">Oxoid</td>
			<td style="width:91px;">LP0072</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Potassium hyroxide</td>
			<td style="width:108px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:91px;">P250</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Potassium phosphate monobasic&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">P0662</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Sodium phosphate dibasic heptahydrate</td>
			<td style="width:108px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:91px;">S373</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Vitamin B12</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:91px;">V2876</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Strains</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Dictyostelium discoideum</td>
			<td style="width:108px;">Siryaporn lab</td>
			<td style="width:91px;">Strain AX318</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:220px;">Escherichia coli</td>
			<td style="width:108px;">Siryaporn lab</td>
			<td style="width:91px;">Strain B/r17</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:220px;">Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td style="width:108px;">Siryaporn lab</td>
			<td style="width:91px;">PA14</td>
			<td style="width:297px;">PA14 strain19</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Pseudomonas aeruginosa &#916;lasR</td>
			<td style="width:108px;">Siryaporn lab</td>
			<td style="width:91px;">AFS20.1</td>
			<td style="width:297px;">PA14-derived strain20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Supplies</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">0.22 &#181;m filter&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:91px;">SCGPT01RE</td>
			<td style="width:297px;">For filter sterilization</td>
		</tr>
		<tr height="65">
			<td height="65" style="height:65px;width:220px;">Conical tube, 15 mL</td>
			<td style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:91px;">352097</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Glass storage bottles</td>
			<td style="width:108px;">Pyrex</td>
			<td style="width:91px;">13951L</td>
			<td style="width:297px;">250 mL, 500 mL, 1000 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Petri dish, 6 cm diameter</td>
			<td style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:91px;">351007</td>
			<td style="width:297px;">60 x 15 mm polystyrene plates</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:220px;">Petri dish, 10 cm diameter</td>
			<td style="width:108px;">Fisher</td>
			<td style="width:91px;">FB0875712</td>
			<td style="width:297px;">100 x 15 mm polystyrene plates</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:220px;">Plastic containers with lid</td>
			<td style="width:108px;">Ziploc</td>
			<td style="width:91px;">2.57E+09</td>
			<td style="width:297px;">Square 3-cup containers</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:220px;">Glass plates</td>
			<td style="width:108px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:91px;">1653308</td>
			<td style="width:297px;">For preparing agar pads. Other glass plates may be used with similar dimensions.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:220px;">Wooden sticks</td>
			<td style="width:108px;">Fisher</td>
			<td style="width:91px;">23-400-102&#160;</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Equipment</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Eclipse Ti-E microscope&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Nikon</td>
			<td style="width:91px;">MEA53100</td>
			<td style="width:297px;">Microscope setup</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">10X Plan Fluor Ph1 objective&#160; 0.3 NA</td>
			<td style="width:108px;">Nikon</td>
			<td style="width:91px;">MRH20101</td>
			<td style="width:297px;">Microscope setup</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Fluorescence excitation source</td>
			<td style="width:108px;">Lumencor</td>
			<td style="width:91px;">Sola light engine</td>
			<td style="width:297px;">Microscope setup</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:220px;">Fluorescence filter set</td>
			<td style="width:108px;">Semrock</td>
			<td style="width:91px;">LED-DA/FI/TX-3X3M-A-000&#160;</td>
			<td style="width:297px;">Microscope setup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Orca Flash 4.0 V2 Camera</td>
			<td style="width:108px;">Hamamatsu</td>
			<td style="width:91px;">77054098</td>
			<td style="width:297px;">Microscope setup</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">ImageJ</td>
			<td style="width:108px;">NIH</td>
			<td style="width:91px;">v. 1.49</td>
			<td style="width:297px;">Software for image analysis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">MATLAB</td>
			<td style="width:108px;">Mathworks</td>
			<td style="width:91px;">R2013</td>
			<td style="width:297px;">Software for image analysis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Orbital shaker incubator</td>
			<td style="width:108px;">VWR</td>
			<td style="width:91px;">89032-092</td>
			<td style="width:297px;">For growth of bacteria at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Platform shaker</td>
			<td style="width:108px;">Fisher</td>
			<td style="width:91px;">13-687-700</td>
			<td style="width:297px;">For growth of amoebae at 22 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:108px;">Biochrom</td>
			<td style="width:91px;">Ultrospec 10</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Undercounter refrigerated incubator</td>
			<td style="width:108px;">Fisher</td>
			<td style="width:91px;">97990E</td>
			<td style="width:297px;">For growth of amoebae at 22 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Isotemp waterbath&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Fisher</td>
			<td style="width:91px;">15-462-21Q</td>
			<td style="width:297px;">For cooling media to 55 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid image-based bacterial virulence assay using amoeba

पारंपरिक बैक्टीरियल डाह परख कई घंटे के पाठ्यक्रम पर बैक्टीरिया की लंबे समय तक जोखिम मेजबान कोशिकाओं को शामिल । इस समय के दौरान, बैक्टीरिया विकास पर्यावरण और मेजबान कोशिकाओं की उपस्थिति की मेजबानी के लिए जोखिम के कारण शरीर क्रिया विज्ञान में परिवर्तन से गुजरना कर सकते हैं । हम एक परख के लिए तेजी से बैक्टीरिया की डाह राज्य उपाय है कि किस हद तक बैक्टीरिया मेजबान कोशिकाओं की उपस्थिति में वृद्धि को कम करने के लिए विकसित की है । बैक्टीरिया और amoebae एक साथ मिश्रित कर रहे हैं और एक एकल इमेजिंग विमान पर एक आगर पैड का उपयोग कर मैटीरियल. प्रक्रिया एकल-कक्ष प्रतिदीप्ति इमेजिंग calcein-acetoxymethyl एस्टर (calcein-AM) के साथ होस्ट सेल स्वास्थ्य के एक संकेतक के रूप में उपयोग करता है । मेजबान कोशिकाओं के प्रतिदीप्ति epifluorescence माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर बैक्टीरिया को मेजबान कोशिकाओं के प्रदर्शन के 1 ज के बाद विश्लेषण किया जाता है । छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर के लिए एक मेजबान हत्या सूचकांक गणना किया जाता है । इस पद्धति में planktonic और सतह से जुड़ी Pseudomonas aeruginosa उप-आबादी के भीतर डाह को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया है और फिल्म के गठन के प्रारंभिक चरण के दौरान अंय बैक्टीरिया और अंय फिल्म विकास के चरणों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है । यह प्रोटोकॉल डाह को मापने की एक तेजी से और मजबूत विधि प्रदान करता है और स्तनधारी सेल लाइनों के विकास और रखरखाव के साथ जुड़े कई जटिलताओं से बचा जाता है । डाह phenotypes मापा यहां का उपयोग amoebae भी किया गया है मांय माउस मैक्रोफेज का उपयोग कर । विशेष रूप से, इस परख के लिए उपयोग किया गया था कि सतह लगाव aeruginosaमें डाह को विनियमित स्थापित ।

हम जंगली-प्रकार पी aeruginosa तनाव PA1419 या एक ΔlasR तनाव20 में ही PA14 पृष्ठभूमि में 6 सेमी-व्यास पेट्री व्यंजन में वृद्धि हुई और डाह और सतह से जुड़ी कोशिकाओं के planktonic की परख की । संस्क...

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A Rapid Image-based Bacterial Virulence Assay Using Amoeba

एक तेजी से छवि आधारित बैक्टीरियल डाह परख अमीबा का उपयोग

यहां, हम एक मेजबान के रूप में डी discoideum (अमीबा) का उपयोग कर planktonic या सतह से जुड़े बैक्टीरिया के डाह को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । डाह 1 एच की अवधि में मापा जाता है और मेजबान की हत्या प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और छवि विश्लेषण का उपयोग कर quantified है । हम इस जीवाणु पी aeruginosaका उपयोग कर प्रोटोकॉल का प्रदर्शन ।

Traditional bacterial virulence assays involve prolonged exposure of bacteria over the course of several hours to host cells. During this time, bacteria ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Characterizing Bacterial Volatiles using Secondary Electrospray Ionization Mass Spectrometry (SESI-MS)

Characterizing Bacterial Volatiles using Secondary Electrospray Ionization Mass Spectrometry SESI-MS

निस्र्पक बैक्टीरियल माध्यमिक Electrospray Ionization मास स्पेक्ट्रोमेट्री (SESI एमएस) का उपयोग वाष्पशील

Secondary electrospray ionization mass spectrometry (SESI-MS) is a method developed for the rapid detection of volatile compounds, without the need for ...

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

विद्युत सेंसर का उपयोग बैक्टीरिया का पता लगाने और पहचान

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Rapid and Low-cost Prototyping of Medical Devices Using 3D Printed Molds for Liquid Injection Molding

तरल इंजेक्शन मोल्डिंग के लिए 3 डी मुद्रित का उपयोग कर molds मेडिकल उपकरणों के तेजी से और कम लागत प्रोटोटाइप

Biologically inert elastomers such as silicone are favorable materials for medical device fabrication, but forming and curing these elastomers using ...

Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

एक microfluidic जांच के साथ लाइव सेल परतों की रैपिड Subtractive patterning के

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

A Rapid and Chemical-free Hemoglobin Assay with Photothermal Angular Light Scattering

Photothermal कोणीय प्रकाश बिखरने के साथ एक तेजी से और रसायन मुक्त हीमोग्लोबिन परख

Photo-thermal angular light scattering (PT-AS) is a novel optical method for measuring the hemoglobin concentration ([Hb]) of blood samples. On the basis ...

Rapid Mix Preparation of Bioinspired Nanoscale Hydroxyapatite for Biomedical Applications

बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए Bioinspired नेनो Hydroxyapatite की रैपिड मिक्स तैयारी

Hydroxyapatite (HA) has been widely used as a medical ceramic due to its good biocompatibility and osteoconductivity. Recently there has been interest ...

An Automated Method to Perform The In Vitro Micronucleus Assay using Multispectral Imaging Flow Cytometry

मल्टीस्पेक्ट्रल इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके इन विट्रो माइक्रोन्यूक्लियस परख करने के लिए एक स्वचालित विधि

The in vitro micronucleus (MN) assay is often used to evaluate cytotoxicity and genotoxicity but scoring the assay via manual microscopy is laborious and ...

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

स्यूडोमोनास सिरिंग पीवी के प्रतिरोध की उच्च-थ्रूपुट पहचान। टमाटर में टमाटर अंकुर बाढ़ परख का उपयोग

Tomato is an agronomically important crop that can be infected by Pseudomonas syringae, a Gram-negative bacterium, resulting in bacterial speck disease. ...

Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning

मॉड्यूलर गोल्डन गेट क्लोनिंग का उपयोग करके मल्टी-जीन निर्माण की रैपिड असेंबली

The Golden Gate cloning method enables the rapid assembly of multiple genes in any user-defined arrangement. It utilizes type IIS restriction enzymes that ...

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

3D Printing of In Vitro Hydrogel Microcarriers by Alternating Viscous-Inertial Force Jetting

इन विट्रो हाइड्रोजेल माइक्रोकैरियर्स की 3 डी प्रिंटिंग बारी-बारी से चिपचिपा-जड़त्वीय बल जेटिंग द्वारा

Microcarriers are beads with a diameter of 60-250 &#181;m and a large specific surface area, which are commonly used as carriers for large-scale cell ...