Name: generating a murine orthotopic metastatic breast cancer model and performing murine radical mastectomy
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de NIH-subsidie R01CA160688 en Susan G. Komen Foundation onderzoeker geïnitieerd onderzoek subsidie (IIR12222224) met R.C. muizen bioluminescentie beelden werden verworven door gedeelde bron translationeel Imaging gedeelde Resource in Roswell Park Uitgebreide Cancer Center, dat werd gesteund door de kanker Center ondersteuning Grant (P30CA01656) en gedeelde Instrumentation grant (S10OD016450).

Goedkeuring van het Roswell Park uitgebreide kanker centrum institutionele Animal Care en gebruik Comité werd verkregen voor alle experimenten.
Opmerking: Negen tot twaalf weken oude vrouwelijke BALB/c muizen worden verkregen. 4T1-luc2 cellen, een muis borstklier adenocarcinoom cellijn afgeleid van BALB/c muizen die is ontworpen om uitdrukkelijke luciferase, worden gebruikt. Deze cellen worden gekweekt in Roswell Park Memorial Instituut (RPMI) 1640 medium met 10% foetale rund...

<ol>
	<li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Schuh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trials,+tribulations,+and+trends+in+tumor+modeling+in+mice.">Trials, tribulations, and trends in tumor modeling in mice.</a> Toxicologic Pathology. 32, 53-66 (2004).</li><li>Katsuta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+breast+cancer+model+for+preclinical+immunotherapy+studies.">Modified breast cancer model for preclinical immunotherapy studies.</a> Journal of Surgical Research. 204 (2), 467-474 (2016).</li><li>Sidell, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+mandibulectomy:+a+novel+animal+model.">Composite mandibulectomy: a novel animal model.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 146 (6), 932-937 (2012).</li><li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma.">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Research. 25, 3905-3915 (2005).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+syngeneic+orthotopic+murine+model+of+human+breast+cancer+progression.">An improved syngeneic orthotopic murine model of human breast cancer progression.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 147 (3), 501-512 (2014).</li><li>Bertozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+risk+factors,+and+prognosis+of+peritoneal+metastasis+from+breast+cancer.">Prevalence, risk factors, and prognosis of peritoneal metastasis from breast cancer.</a> SpringerPlus. 4, 688 (2015).</li><li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes.">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li><li>Valero, M. G., Golshan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+the+Axilla+in+Early+Breast+Cancer.">Management of the Axilla in Early Breast Cancer.</a> Cancer Treatment and Research. 173, 39-52 (2018).</li><li>. Breast Cancer, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Available from: <a target="_blank" href="https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf">https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf</a> (2018)</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth.">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li><li>Katsuta, E., Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+breast+cancer+mastectomy+model+that+predicts+patient+outcomes+for+drug+development.">Murine breast cancer mastectomy model that predicts patient outcomes for drug development.</a> Journal of Surgical Research. 219, 310-318 (2017).</li><li>Veenhof, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+stress+response+and+postoperative+immune+function+after+laparoscopy+or+open+surgery+with+fast+track+or+standard+perioperative+care:+a+randomized+trial.">Surgical stress response and postoperative immune function after laparoscopy or open surgery with fast track or standard perioperative care: a randomized trial.</a> Annals of Surgery. 255 (2), 216-221 (2012).</li><li>Wei, S., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surviving+at+a+distant+site:+The+organotropism+of+metastatic+breast+cancer.">Surviving at a distant site: The organotropism of metastatic breast cancer.</a> Seminars in Diagnostic Pathology. 35 (2), 108-111 (2018).</li><li>Nagahashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+produced+by+sphingosine+kinase+1+promotes+breast+cancer+progression+by+stimulating+angiogenesis+and+lymphangiogenesis.">Sphingosine-1-phosphate produced by sphingosine kinase 1 promotes breast cancer progression by stimulating angiogenesis and lymphangiogenesis.</a> Cancer Research. 72 (3), 726-735 (2012).</li><li>Jones, C., Lancaster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Operative+Technique+for+Mastectomy.">Evolution of Operative Technique for Mastectomy.</a> Surgical Clinics of North America. 98 (4), 835-844 (2018).</li><li>Rashid, O. M., Maurente, D., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Systematic+Approach+to+Preclinical+Trials+in+Metastatic+Breast+Cancer.">A Systematic Approach to Preclinical Trials in Metastatic Breast Cancer.</a> Chemotherapy (Los Angeles). 5 (3), (2016).</li><li>Ramaswamy, S., Ross, K. N., Lander, E. S., Golub, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+signature+of+metastasis+in+primary+solid+tumors.">A molecular signature of metastasis in primary solid tumors.</a> Nature Genetics. 33 (1), 49-54 (2003).</li><li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+long-term+obstructive+jaundice.">Murine model of long-term obstructive jaundice.</a> Journal of Surgical Research. 206 (1), 118-125 (2016).</li><li>Terracina, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+metastatic+murine+colon+cancer+model.">Development of a metastatic murine colon cancer model.</a> Journal of Surgical Research. 199 (1), 106-114 (2015).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model?.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model?.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resection+of+the+primary+tumor+improves+survival+in+metastatic+breast+cancer+by+reducing+overall+tumor+burden.">Resection of the primary tumor improves survival in metastatic breast cancer by reducing overall tumor burden.</a> Surgery. 153 (6), 771-778 (2013).</li><li>Troy, T., Jekic-McMullen, D., Sambucetti, L., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+comparison+of+the+sensitivity+of+detection+of+fluorescent+and+bioluminescent+reporters+in+animal+models.">Quantitative comparison of the sensitivity of detection of fluorescent and bioluminescent reporters in animal models.</a> Molecular Imaging. 3 (1), 9-23 (2004).</li><li>Adams, S. T., Miller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+D-luciferin:+expanding+the+scope+of+bioluminescence+imaging+in+vivo.">Beyond D-luciferin: expanding the scope of bioluminescence imaging in vivo.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 21, 112-120 (2014).</li><li>Close, D. M., Xu, T., Sayler, G. S., Ripp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescent+imaging+(BLI):+noninvasive+visualization+and+interrogation+of+biological+processes+in+living+animals.">In vivo bioluminescent imaging (BLI): noninvasive visualization and interrogation of biological processes in living animals.</a> Sensors (Basel). 11 (1), 180-206 (2011).</li><li>Chen, H., Thorne, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+Methods+for+Molecular+In+Vivo+Optical+Imaging.">Practical Methods for Molecular In Vivo Optical Imaging.</a> Current Protocols in Cytometry. 59 (1224), (2012).</li><li>Wurdinger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+luciferase+for+ex+vivo+monitoring+of+in+vivo+processes.">A secreted luciferase for ex vivo monitoring of in vivo processes.</a> Nature Methods. 5 (2), 171-173 (2008).</li><li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+sphingosine+kinase+1+worsens+pancreatic+cancer+peritoneal+carcinomatosis.">Host sphingosine kinase 1 worsens pancreatic cancer peritoneal carcinomatosis.</a> Journal of Surgical Research. 205 (2), 510-517 (2016).</li></ol>

Voor het laatste decennium, hebben wij meerdere lymfkliertest kanker-modellen, met inbegrip van borst kanker modellen3,7,13,16,20,21oprichten. Eerder, we toonden aan dat borst kanker cel orthotopic inoculatie in het weefsel van de melkklier onder direct zicht een grotere tumor geproduceerd met minder variabiliteit van de groo...

Dierlijke modellen spelen een belangrijke rol in kankeronderzoek. Wanneer een hypothese is bewezen in vitro, moet deze in vivo te evalueren van de klinische relevantie worden getest. Progressie van kanker en metastase zijn vaak beter gevangen door dierlijke modellen ten opzichte van in vitro modellen, en het is essentieel voor het testen van een nieuwe drug in een dierlijk model als een preklinische studie voor1,2van de ontwikkeling van de drug. De technische details van dierproeven zijn echter vaak niet goed beschreven in gepubliceerde artikelen, maken het uitdagend om te reproduceren het model met succes. Inderdaad, de auteurs die deze orthotopic inoculatie en mastectomie modellen gevestigd ging door lange en strenge processen van trial and error. Het slagingspercentage van tumorvorming na kanker cel inoculatie is een van de belangrijkste factoren om te bepalen het succes en de efficiëntie van een dier studie3. De cellijn en het aantal cellen om te enten, de inoculatie-site en de stam van de muizen zijn allemaal belangrijke factoren. Het is algemeen bekend dat er enorme variaties in de resultaten van dierproeven als gevolg van individuele verschillen, ten opzichte van in vitro technieken zijn. Daarom is het belangrijk om stabiele resultaten, ter verbetering van de efficiëntie van dierproeven, en om te voorkomen dat misleidende resultaten te verkrijgen met behulp van een reeds lang gevestigde model met een standaard techniek.
Dit witboek biedt gevestigde technieken4 voor het genereren van borst-kanker orthotopic en mastectomie Muismodellen. De doelstellingen van deze methoden zijn 1) na te bootsen menselijke borst kanker progressie en behandeling cursussen, en 2) bij de uitvoering van in vivo experimenten met meer efficiëntie en hogere slagingspercentages in vergelijking met andere borst kanker inoculatie of mastectomie technieken. In orthotopic kanker cel inoculatie, om na te bootsen menselijke borst kanker progressie, kiezen we de #2 borstklier vet pad als een inenting site, die is gelegen in de borst. In de meeste van de studies, de borstkankercellen subcutaan worden geïnoculeerd5. Deze techniek vereist geen chirurgie en, dus, het is eenvoudig en ongecompliceerd. De subcutane communicatie is echter heel anders dan de melkklier communicatie, wat in verschillende kanker progressie en zelfs Moleculaire profielen6,7 resulteert. Sommige studies de melkklier #4, die zich in de buik bevindt, als een inenting site6gebruiken. Echter, aangezien #4 borstklieren bevinden zich in de buik, de meest voorkomende metastatische patroon is peritoneale carcinomatosis7, die met minder dan 10% van uitgezaaide borst kanker8 plaatsvindt. Kanker van de borst gegenereerd door de techniek hier, gepresenteerd in de melkklier #2 metastasizes aan de Long, die tot de meest voorkomende borst kanker metastatische sites9 behoort.
Met deze techniek is het doel ook om het bereiken van een hoger tarief van tumorvorming met minimale tumor grootte variabiliteit in vergelijking met andere borst kanker inoculatie technieken. Om dit te doen, worden de kankercellen opgeschort in een mengsel van de gelatine-achtige eiwitten onder direct zicht via een mediane voorste borst muur incisies geïnoculeerd. Deze techniek produceert een hoge tumorvorming tarief met minder variabiliteit in de tumor grootte en vorm ten opzichte van subcutane of niet-chirurgische injectie, zoals eerder gemeld3,7.
Ook introduceren we een muis radicale mastectomie techniek waarin de orthotopic borst tumor met de omringende weefsels en de oksellymfeklieren is gereseceerd. De standaard van zorg voor borstkankerpatiënten zonder verre metastase ziekte is in de klinische setting, mastectomie10,11. Voordat een borstamputatie, is axillaire lymfeklieren metastase gepolst door beeldvorming en sentinel biopsie van de lymfeklier. Als er geen bewijs van axillaire lymfeklieren metastase is, wordt de patiënt vervolgens behandeld met een totale of gedeeltelijke mastectomie, waarbij de axillaire lymfeklieren resectie is weggelaten. Totale mastectomie is een techniek om de resect van borstkanker met het hele borstweefsel en bloc, overwegende dat gedeeltelijke mastectomie resect kanker van de borst met een marge van omringende normale borstweefsel alleen, dus het behoud van het resterende normale borstweefsel in de patiënt. Patiënten die behouden normaal borstweefsel overblijft na een gedeeltelijke mastectomie echter postoperatieve radiotherapie om te voorkomen dat lokale herhaling10. Patiënten die axillaire lymfeklieren metastase ondernemen radicale mastectomie die de borstkanker met alle normale verwijdert weefsel en axillaire lymfeklieren borstkanker en vielen weefsels nl blok10,11. In het muismodel is toezicht voor axillaire lymfeklieren metastase en/of postoperatieve straling niet redelijk of haalbaar. Dus, we gebruik maken van de radicale mastectomie techniek om te voorkomen dat lokale of axillaire lymfeklieren metastase.
Kanker cel inoculatie via de ader van de staart is de meest voorkomende Long metastase muis model12, de zogenaamde "experimentele metastase". Dit model is eenvoudig te genereren en vereist geen chirurgie; echter is het niet na te bootsen menselijke borst kanker progressie die in andere gemetastaseerde ziekte gedrag resulteren kan. Om te bootsen de menselijke borst kanker behandeling cursus waar metastase treedt vaak op na borstamputatie, is de primaire tumor verwijderd na orthotopic kanker cel inoculatie. Deze techniek produceert minder lokale herhaling in vergelijking met eenvoudige tumor resectie, als eerder gemeld13, en is nuttig voor roman therapeutiek, preklinische studies, en voor uitgezaaide borst kanker onderzoeken. De technieken die hier worden beschreven zijn van toepassing voor de meeste borst kanker orthotopic model experimenten. Het is echter belangrijk om te bedenken dat het mengsel van de gelatine-achtige eiwitten kan invloed hebben op de communicatie en chirurgie kan invloed hebben op de stress/immuun reactie14. Onderzoekers bestuderen de communicatie en/of de stress/immuunrespons moet daarom rekening houden met potentieel verstorende factoren zijn.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Micro Dissection Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5983</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5233</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7830</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6873</td>
			<td>For ex vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 silk sutures</td>
			<td>Look</td>
			<td>774B</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry sterilant (Germinator 500)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>GER 5287-120V</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9908-717</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>For cancer cell inoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, potassium salt</td>
			<td>GOLD-Bio</td>
			<td>LUCK-1K</td>
			<td>For bioluminescence quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serub</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating a murine orthotopic metastatic breast cancer model and performing murine radical mastectomy

In vivo Muismodellen te beoordelen borst kanker progressie zijn essentieel voor kankeronderzoek, met inbegrip van preklinische drug ontwikkelingen. De meerderheid van de praktische en technische details worden echter vaak weggelaten in gepubliceerde manuscripten die daarom maakt het uitdagend om te reproduceren van de modellen, met name als het gaat om chirurgische technieken. Bioluminescentie technologie maakt het mogelijk voor de evaluatie van kleine hoeveelheden van kankercellen zelfs wanneer een tumor niet voelbaar is. Gebruik makend van kankercellen luciferase-uitdrukken, stellen wij een borst kanker orthotopic inoculatie techniek met een hoge tumorvorming tarief. Long metastase wordt beoordeeld met behulp van een ex vivo -techniek. Wij stellen vervolgens een mastectomie model met een lage lokale herhaling tarief voor het beoordelen van de last van uitgezaaide tumor. Hierin, beschrijven wij, in detail, de chirurgische technieken van orthotopic implantatie en mastectomie voor borstkanker met een hoge tumorigenesis rente en lage lokale herhaling tarieven, respectievelijk om borst kanker model efficiëntie te verbeteren.

Het doel van het orthotopic-model is om na te bootsen menselijke kanker progressie (dat wil zeggen, de groei van de primaire tumor gevolgd door lymfeklier metastase en vervolgens verre Long metastase)15. Na kanker cel inoculatie, de Bioluminescentie regelmatig wordt gekwantificeerd (twee tot drie keer / week) (figuur 1A). De bioluminescentie in de longen is dieper en kleiner dan de primaire laesie. De Bioluminescentie weerspie...

Watch this Scientific Journal Video about Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy at JoVE.com

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

Het genereren van een lymfkliertest Orthotopic uitgezaaide borst kanker Model en het uitvoeren van lymfkliertest radicale mastectomie

Wij introduceren een lymfkliertest orthotopic borst kanker en radicale mastectomie model met bioluminescentie technologie te kwantificeren van de last van de tumor om na te bootsen menselijke borst kanker progressie.

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het gebied van borstkanker over hoe de menselijke borstkanker progressie en behandeling na te bootsen in een muis model. Het belangrijkste voordeel van dit muis borstkanker model is dat het een hoge tumorigenese tarief na orthotopische implantatie en een lage lokale recidief tarief na mastectomie. Begin met het bevestigen van een gebrek aan reactie op teen knijpen in een verdoofde vrouwelijke muis en het opnemen van het dier ledematen op een chirurgische raad.Met behulp van steriele wattenstaafjes steriliseren het chirurgische gebied met chloorhexidine, jodium en 75%ethanol. En maak een vijf millimeter huidincisie in het midden van de voorste borstwand. Til vervolgens de rechterkant van de huid naast de incisie en gebruik steriele microdissection schaar om de huid los te maken van de borstwand.Draai de huid om om de juiste nummer twee borstvetpad bloot te leggen en gebruik een insulinespuit van één milliliter die is uitgerust met een naald van 28,5 meter om zorgvuldig 20 microliters van kankercelsuspensie door de wond in het vetkussen te injecteren. Houd de naald in het vetpad gedurende vijf seconden om de gelatineachtige kanker cel eiwit mengsel te stollen voordat het verwijderen van de naald, en het sluiten van de incisie met steriele 5-0 niet-bevattende hechtingen. Plaats het dier vervolgens in een schone kooi met controle tot volledige recumbency.Om de borstamputatie acht dagen na kanker inenting de muis voor te bereiden op een operatie zoals net aangetoond, en maak een vijf-millimeter huid incisie twee millimeter aan de linkerkant van de chirurgische litteken van de kankercel inenting. Breid de incisie naar de wortel van de voorpoot om de tumor te verwijderen, en de huid, met inbegrip van de chirurgische litteken, en de laesie in contact met de tumor, en de okillaire lymfeklier bekken waarin meestal geen zichtbare lymfeklieren aanwezig zijn op het moment van de mastectomie. Sluit vervolgens de huidafwijkingen met steriele 5-0 niet-onabsorbare hechtingen in de vorm van een Y.And breng het dier terug naar zijn kooi met controle tot volledige incumbency.Voor longmetastase kwantificering 21 dagen na inenting injecteren 150 milligram per kilogram D-Luciferin IP 15 minuten voor euthanasie. En gebruik gebogen Mayo schaar om de huid en buikvlies te openen op de mid-buik. Druk op de lever totdat het middenrif kan worden gevisualiseerd, en snijd het middenrif en de bilaterale ribben van caudad tot cephalad.Draai de voorste thoraxwand om de longen bloot te leggen en til de longen op om de thoracale slokdarm te identificeren, die eruit ziet als een koord dat de longen verbindt met de wervelkolom. Snijd de slokdarm met microdissection schaar en gebruik tangen om de bilaterale longen en het hart te trekken naar de caudad. Snijd vervolgens de luchtpijp en de belangrijkste bloedvaten naar de longen top op de kop en plaats de longen in een 10-centimeter petrischaal voor bioluminescente beeldvorming.Gebruik de schaar om het hart te verwijderen uit het longweefsel. Beginnend bij ongeveer acht dagen na borstvetstootkussenkankercelinenting is de bioluminescentie in de longen dieper en kleiner dan in de primaire laesie die de primaire tumorlast in levende muizen weerspiegelt. Meting van de tumorgrootte met remklauwen maakt schatting van het tumorvolume in situ mogelijk.Dit mastectomiemodel maakt ook seriële gemetastaseerde tumorbelastingscontrole mogelijk zonder de dieren te euthanaseren. De tumorlast van de longmetastasen kan ook worden gekwantificeerd door ex vivo beeldvorming, maar de beperking is dat de muizen moeten worden geëuthanaseerd. Muis overleving na chirurgische behandeling kan ook worden gecontroleerd als een vertaalbare klinische eindpunt.Na de ontwikkeling van deze techniek maakte de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van borstkanker om niet alleen nieuwe geneesmiddelenontwikkeling te onderzoeken, maar ook borstkankeronderzoek in het algemeen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Murine Bioluminescent Lever Tumor Model

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Een orthotope Model van Murine Blaaskanker

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Ontwikkeling van Bronchiolitis obliterans in een muizenmodel van orthotope longtransplantatie

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Bioluminescent Orthotope Model van pancreaskanker Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Een muizenmodel van subarachnoïdale bloeding

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Een orthotope muizenmodel van menselijke prostaatkankercellen Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Initiatie van gemetastaseerd borstcarcinoom door Targeting van de Ductaal Epitheel met adenovirus-Cre: A Novel transgeen muismodel van de Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Een preklinisch muizenmodel van levermetastasen

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In vivo en ex vivo benaderingen van eierstokkanker uitgezaaide Kolonisatie van Milky Spot Structuren Bestudeer in peritoneale Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...