Name: generating a murine orthotopic metastatic breast cancer model and performing murine radical mastectomy
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy at JoVE.com

עבודה זו נתמך על ידי מענק-NIH גרנט R01CA160688, סוזן ג קרן Komen החוקר יזמה מחקר (IIR12222224) K.T. לעכברים ביולומינסנציה תמונות נרכשו על-ידי המשאב המשותף Translational הדמיה משאב משותף בפארק רוזוול מקיף במרכז לחקר הסרטן, אשר נתמך על ידי סרטן מרכז תמיכה גרנט (P30CA01656) ועל מכשור משותפים גרנט (S10OD016450).

אישור מן רוזוול פארק מקיף סרטן מרכז מוסדי חיה אכפת לי להשתמש ועדת הושג עבור כל הניסויים.
הערה: תשע שנים עשר שבועות בת נקבה BALB/c לעכברים מתקבלים. תאים 4T1-luc2, העכבר החלב אדנוקרצינומה תא קו נגזר BALB/c עכברים תוכנן כדי לוציפראז אקספרס, משמשים. תאים אלה מתורבתים במדיום 1640 המכ...

<ol>
	<li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Schuh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trials,+tribulations,+and+trends+in+tumor+modeling+in+mice.">Trials, tribulations, and trends in tumor modeling in mice.</a> Toxicologic Pathology. 32, 53-66 (2004).</li><li>Katsuta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+breast+cancer+model+for+preclinical+immunotherapy+studies.">Modified breast cancer model for preclinical immunotherapy studies.</a> Journal of Surgical Research. 204 (2), 467-474 (2016).</li><li>Sidell, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+mandibulectomy:+a+novel+animal+model.">Composite mandibulectomy: a novel animal model.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 146 (6), 932-937 (2012).</li><li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma.">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Research. 25, 3905-3915 (2005).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+syngeneic+orthotopic+murine+model+of+human+breast+cancer+progression.">An improved syngeneic orthotopic murine model of human breast cancer progression.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 147 (3), 501-512 (2014).</li><li>Bertozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+risk+factors,+and+prognosis+of+peritoneal+metastasis+from+breast+cancer.">Prevalence, risk factors, and prognosis of peritoneal metastasis from breast cancer.</a> SpringerPlus. 4, 688 (2015).</li><li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes.">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li><li>Valero, M. G., Golshan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+the+Axilla+in+Early+Breast+Cancer.">Management of the Axilla in Early Breast Cancer.</a> Cancer Treatment and Research. 173, 39-52 (2018).</li><li>. Breast Cancer, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Available from: <a target="_blank" href="https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf">https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf</a> (2018)</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth.">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li><li>Katsuta, E., Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+breast+cancer+mastectomy+model+that+predicts+patient+outcomes+for+drug+development.">Murine breast cancer mastectomy model that predicts patient outcomes for drug development.</a> Journal of Surgical Research. 219, 310-318 (2017).</li><li>Veenhof, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+stress+response+and+postoperative+immune+function+after+laparoscopy+or+open+surgery+with+fast+track+or+standard+perioperative+care:+a+randomized+trial.">Surgical stress response and postoperative immune function after laparoscopy or open surgery with fast track or standard perioperative care: a randomized trial.</a> Annals of Surgery. 255 (2), 216-221 (2012).</li><li>Wei, S., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surviving+at+a+distant+site:+The+organotropism+of+metastatic+breast+cancer.">Surviving at a distant site: The organotropism of metastatic breast cancer.</a> Seminars in Diagnostic Pathology. 35 (2), 108-111 (2018).</li><li>Nagahashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+produced+by+sphingosine+kinase+1+promotes+breast+cancer+progression+by+stimulating+angiogenesis+and+lymphangiogenesis.">Sphingosine-1-phosphate produced by sphingosine kinase 1 promotes breast cancer progression by stimulating angiogenesis and lymphangiogenesis.</a> Cancer Research. 72 (3), 726-735 (2012).</li><li>Jones, C., Lancaster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Operative+Technique+for+Mastectomy.">Evolution of Operative Technique for Mastectomy.</a> Surgical Clinics of North America. 98 (4), 835-844 (2018).</li><li>Rashid, O. M., Maurente, D., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Systematic+Approach+to+Preclinical+Trials+in+Metastatic+Breast+Cancer.">A Systematic Approach to Preclinical Trials in Metastatic Breast Cancer.</a> Chemotherapy (Los Angeles). 5 (3), (2016).</li><li>Ramaswamy, S., Ross, K. N., Lander, E. S., Golub, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+signature+of+metastasis+in+primary+solid+tumors.">A molecular signature of metastasis in primary solid tumors.</a> Nature Genetics. 33 (1), 49-54 (2003).</li><li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+long-term+obstructive+jaundice.">Murine model of long-term obstructive jaundice.</a> Journal of Surgical Research. 206 (1), 118-125 (2016).</li><li>Terracina, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+metastatic+murine+colon+cancer+model.">Development of a metastatic murine colon cancer model.</a> Journal of Surgical Research. 199 (1), 106-114 (2015).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model?.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model?.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resection+of+the+primary+tumor+improves+survival+in+metastatic+breast+cancer+by+reducing+overall+tumor+burden.">Resection of the primary tumor improves survival in metastatic breast cancer by reducing overall tumor burden.</a> Surgery. 153 (6), 771-778 (2013).</li><li>Troy, T., Jekic-McMullen, D., Sambucetti, L., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+comparison+of+the+sensitivity+of+detection+of+fluorescent+and+bioluminescent+reporters+in+animal+models.">Quantitative comparison of the sensitivity of detection of fluorescent and bioluminescent reporters in animal models.</a> Molecular Imaging. 3 (1), 9-23 (2004).</li><li>Adams, S. T., Miller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+D-luciferin:+expanding+the+scope+of+bioluminescence+imaging+in+vivo.">Beyond D-luciferin: expanding the scope of bioluminescence imaging in vivo.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 21, 112-120 (2014).</li><li>Close, D. M., Xu, T., Sayler, G. S., Ripp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescent+imaging+(BLI):+noninvasive+visualization+and+interrogation+of+biological+processes+in+living+animals.">In vivo bioluminescent imaging (BLI): noninvasive visualization and interrogation of biological processes in living animals.</a> Sensors (Basel). 11 (1), 180-206 (2011).</li><li>Chen, H., Thorne, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+Methods+for+Molecular+In+Vivo+Optical+Imaging.">Practical Methods for Molecular In Vivo Optical Imaging.</a> Current Protocols in Cytometry. 59 (1224), (2012).</li><li>Wurdinger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+luciferase+for+ex+vivo+monitoring+of+in+vivo+processes.">A secreted luciferase for ex vivo monitoring of in vivo processes.</a> Nature Methods. 5 (2), 171-173 (2008).</li><li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+sphingosine+kinase+1+worsens+pancreatic+cancer+peritoneal+carcinomatosis.">Host sphingosine kinase 1 worsens pancreatic cancer peritoneal carcinomatosis.</a> Journal of Surgical Research. 205 (2), 510-517 (2016).</li></ol>

בעשור האחרון, אנו יש כבר הקמת מספר דגמים מאתר סרטן, כולל השד סרטן מודלים3,7,13,16,20,21. בעבר, הפגנו כי השד סרטן תא orthotopic חיסון לתוך הרקמה בלוטת חלב תחת חזון ישירה מיוצר גידול גדול יותר עם פ...

מודלים בעלי חיים לשחק תפקיד מפתח בחקר הסרטן. כאשר השערה זה הוכח במבחנה, זה צריך להיבדק ויוו להערכת הרלוונטיות הקלינית שלה. התקדמות סרטן, גרורות לעיתים קרובות יותר בשבי על ידי מודלים בעלי חיים לעומת מודלים במבחנה, זה חיוני כדי לבדוק תרופה חדשה במודל חיה כמו מחקר קליני סמים פיתוח1,2. עם זאת, הפרטים הטכניים של ניסויים בבעלי חיים מתוארים לעתים קרובות לא טוב המאמרים שפורסמו, שהופך אותו מאתגר לשחזר את המודל בהצלחה. אכן, המחברים שהקים חיסון ו כריתה מודלים אלה orthotopic עברה תהליכים ארוכים קפדני של ניסוי וטעייה. שיעור ההצלחה של tumorigenesis לאחר חיסון תאי סרטן הוא אחד הגורמים מפתח כדי לקבוע את ההצלחה ואת היעילות של חיים לומדים3. את שורת התאים את מספר התאים כדי לחסן חיסון באתר, את המתח של העכברים גורמים חשובים כל בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. זה ידוע כי ישנם וריאציות ענקי בתוצאות של ניסויים בבעלי חיים בשל הבדלים אישיים, לעומת טכניקות הפרייה. לכן, באמצעות מודל ומבוססת עם טכניקה סטנדרטית היא חשובה להשיג תוצאות יציב, כדי לשפר את היעילות של ניסויים בבעלי חיים, וכדי למנוע תוצאות מטעות.
מאמר זה מספק טכניקות ומבוססת4 להפקת השד סרטן orthotopic ו כריתה העכבר מודלים. המטרות של שיטות אלה הן 1) כדי לחקות התקדמות סרטן השד אנושי וקורסי טיפול ו- 2) כדי לערוך ניסויים ויוו עם שיעור הצלחה גבוה יותר לעומת אחרים חיסון סרטן השד או כריתת שד טכניקות ויעילות רבה יותר. Orthotopic סרטן תאי חיסון, כדי לחקות את התקדמות סרטן השד אנושי, אנחנו לבחור כרית שומן החלב #2 כאתר חיסון, אשר ממוקם באזור החזה. ברוב המחקרים, תאים סרטניים בשד מחוסנים subcutaneously5. טכניקה זו אינה דורשת ניתוח, לפיכך, הוא פשוט וברור. עם זאת, microenvironment תת עורית שונה לגמרי microenvironment בלוטת חלב, שתוצאתה התקדמות סרטן שונים ופרופילים אפילו מולקולרית6,7. מספר מחקרים להשתמש בלוטת החלב #4, הממוקמת בחלל הבטן, כמו האתר חיסון6. אולם, מאז #4 עטין נמצאים בחלל הבטן, הדפוס גרורתי השכיח ביותר הוא גרורות בחלל הצפק7, אשר מתרחשת עם פחות מ- 10% של סרטן שד גרורתי8. סרטן השד שנוצר על ידי הטכניקה המובאת כאן, בבלוטת החלב #2, מתפשט אל הריאות, אשר הוא אחד הנפוצים ביותר השד סרטן גרורתי אתרי9.
בטכניקה זו, המטרה היא גם להשיג שיעור גבוה יותר של tumorigenesis עם השתנות גודל הגידול מינימלי לעומת טכניקות חיסון אחרות סרטן השד. כדי לעשות זאת, תאים סרטניים מושעה בתערובת חלבון ז'לטין מחוסנים תחת חזון ישירה דרך חתך קיר החזה הקדמי החציוני. טכניקה זו מפיקה קצב tumorigenesis גבוהה עם פחות השתנות גידול בגודל וצורה לעומת הזרקה תת עורית או ניתוחי, כפי שדווחה בעבר3,7.
אנחנו מוסיפים גם טכניקה כריתה רדיקלית העכבר שבו הגידול השד orthotopic הוא resected עם הרקמות הסובבות ואת בלוטות הלימפה בבית השחי. בהגדרה קלינית, רמת הטיפול לחולי סרטן השד ללא גרורות רחוקות המחלה הוא כריתה10,11. לפני כריתת שד, לנתיחה הלימפה בבית השחי הצומת גרורות הוא שנסקרו על ידי הדמיה ו בלוטת הזקיף ביופסיה. אם אין עדות לנתיחה הלימפה בבית השחי הצומת גרורות, החולה ואז מטופל עם כריתה מוחלט או חלקי, שבו ההסרה לנתיחה הלימפה בבית השחי הצומת מושמט. סך כריתה היא טכניקה לכרות את סרטן השד עם רקמת השד כולו en bloc, בעוד כריתה חלקית היא לכרות את סרטן השד עם שוליים של סביב רקמת השד רגיל בלבד, ובכך שימור רקמת השד רגיל הנותר אצל החולה. עם זאת, חולים אשר לשמר שנותרו רקמת השד רגיל לאחר כריתה חלקית לדרוש הקרנות לאחר הניתוח כדי למנוע הישנות מקומית10. מטופלים עם לנתיחה הלימפה בבית השחי הצומת גרורות מתחייב כריתה רדיקלית אשר מסיר את סרטן השד עם נורמלי כל השד רקמות, בבית השחי הלימפה, פלש לרקמות en גוש10,11. במודל עכבר, מעקב לנתיחה הלימפה בבית השחי הצומת גרורות ו/או שלאחר קרינה אינה סבירה או ריאלי. לפיכך, אנו מנצלים את הטכניקה כריתה רדיקלית כדי למנוע גרורות הצומת לימפה מקומיות או בבית השחי.
חיסון תאי סרטן דרך הווריד הזנב של הוא הנפוץ ביותר ריאות גרורות העכבר מודל12, מה שנקרא "גרורות ניסיוני". מודל זה קל ליצור, ללא צורך בניתוח; עם זאת, זה לא לחקות התקדמות סרטן השד אנושי והתוצאה עשויה להיות התנהגות שונים במחלה גרורתית. כדי לחקות את הקורס לטיפול סרטן השד אנושי שבו גרורות מתרחש לעיתים קרובות לאחר כריתת שד, הגידול העיקרי הוא הוסר לאחר חיסון תאי סרטן orthotopic. טכניקה זו מייצרת פחות המקומיים הישנות לעומת כריתה הגידול פשוטה, כפי שדווחה בעבר13, והיא שימושית על הריפוי, מחקרים פרה, ועל מחקרים סרטן שד גרורתי. מהטכניקות שתוארו כאן חלים עבור רוב השד סרטן orthotopic דגם הניסויים. עם זאת, חשוב לקחת בחשבון כי התערובת חלבון כמו ג'לי יכול להשפיע על microenvironment, ניתוח יכול להשפיע על התגובה החיסוניתמתח/14. לכן, החוקרים ללמוד את microenvironment ו/או מתח/מערכת החיסון צריך להיות מודע של פוטנציאל משתנה מתערב גורמים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Micro Dissection Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5983</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5233</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7830</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6873</td>
			<td>For ex vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 silk sutures</td>
			<td>Look</td>
			<td>774B</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry sterilant (Germinator 500)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>GER 5287-120V</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9908-717</td>
			<td>For cancer cell inoculation and masstectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>For cancer cell inoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, potassium salt</td>
			<td>GOLD-Bio</td>
			<td>LUCK-1K</td>
			<td>For bioluminescence quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serub</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating a murine orthotopic metastatic breast cancer model and performing murine radical mastectomy

מודלים העכבר in vivo כדי להעריך את התקדמות סרטן השד חיוניים לחקר הסרטן, כולל פיתוחים סמים פרה. עם זאת, הרוב המכריע של פרטים טכניים מעשיים מושמטים נפוץ ב לאור כתבי יד מה, לכן, שהופך את זה מאתגר לשחזר את הדגמים, במיוחד כשזה כרוך טכניקות ניתוחיות. ביולומינסנציה הטכנולוגיה מאפשרת על ההערכה של כמויות קטנות של תאים סרטניים גם כאשר הגידול הוא לא מוחשי. ניצול לבטא לוציפראז תאים סרטניים, אנחנו לבסס טכניקה חיסון orthotopic של סרטן השד, בקצב גבוה tumorigenesis. גרורות בריאה שקובעת ניצול של שמחוץ טכניקה. ואז, להקים מודל כריתה עם שיעור הישנות מקומית נמוכה כדי להעריך את נטל גידול גרורתי. במסמך זה, אנו מתארים, בפירוט, טכניקות כירורגיות של orthotopic-השרשה ו כריתה לסרטן השד עם שיעור גבוה tumorigenesis ו שיעורי הישנות מקומית נמוכה, בהתאמה, כדי לשפר את יעילות מודל של סרטן השד.

מטרת המודל orthotopic היא לחקות את התקדמות סרטן אנושי (קרי, את צמיחת הגידול העיקרי ואחריו גרורות הצומת לימפה, גרורות ריאה אז רחוקים)15. לאחר חיסון תאי סרטן, ביולומינסנציה לכמת באופן קבוע (שתיים עד שלוש פעמים / שבוע) (איור 1 א'). ביולומינסנציה הריאו...

Watch this Scientific Journal Video about Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy at JoVE.com

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

יצירת מודל של סרטן שד גרורתי Orthotopic מאתר וביצוע מאתר כריתה רדיקלית

אנחנו מציגים את orthotopic מאתר השד סרטן ומודל כריתה רדיקלית בטכנולוגיה ביולומינסנציה לכמת את נטל הגידול לחקות התקדמות סרטן השד אנושי.

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן השד על איך לחקות את התקדמות סרטן השד האנושי וטיפול במודל העכבר. היתרון העיקרי של מודל זה של סרטן השד העכבר הוא שיש לו שיעור גידול גבוה לאחר השתלה אורתוטופית שיעור הישנות מקומי נמוך לאחר כריתת שד. התחל על ידי אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר נקבה הרדמה והדבקת איברי החיה ללוח כירורגי.שימוש במטליות כותנה סטריליות מעקרות את האזור הכירורגי עם כלורהקסידין, יוד ו-75% אתנול. ולעשות חתך בעור חמישה מילימטר באמצע קיר החזה האחורי. לאחר מכן להרים את הצד הימני של העור הסמוך החתך ולהשתמש מספריים מיקרודיסקציה סטרילית כדי לנתק את העור מקיר החזה.להפוך את העור כדי לחשוף את כרית שומן חלבי מספר 2 הנכון ולהשתמש מזרק אינסולין מיליליטר אחד מצויד מחט 28.5-מד להזריק בזהירות 20 microliters של השעיה תא סרטן דרך הפצע לתוך כרית השומן. החזק את המחט בתוך כרית השומן במשך חמש שניות כדי לאפשר את תערובת חלבון התא הסרטני gelatinous להתחזק לפני הסרת המחט, וסגירת החתך עם תפרים סטריליים 5-0 nonabsorbable. לאחר מכן מניחים את החיה בכלוב נקי עם ניטור עד חקירה מלאה.כדי לבצע את כריתת השד שמונה ימים לאחר חיסון סרטן להכין את העכבר לניתוח כפי שהוכח רק, ולעשות חתך בעור חמישה מילימטר שני מילימטרים משמאל הצלקת הכירורגית מחיסון התא הסרטני. הרחב את החתך לכיוון השורש של ההמשך כדי להסיר את הגידול, ואת העור, כולל הצלקת הכירורגית, ואת הנגע במגע עם הגידול, ואת אגן בלוטות הלימפה בבית הזרע שבו בדרך כלל אין בלוטות הלימפה גלויים נמצאים בזמן כריתת השד. ואז לסגור את פגמי העור עם תפרים סטריליים 5-0 nonabsorbable בצורה של Y.And להחזיר את החיה לכלוב שלה עם ניטור עד כה מלאה.לכמית גרורות ריאות 21 ימים לאחר החיסון להזריק 150 מיליגרם לקילוגרם של D-לוציפרין IP 15 דקות לפני המתת חסד. ולהשתמש מספריים מאיו מעוקל כדי לפתוח את העור ואת צדת באמצע הבטן. לחץ על הכבד עד הסרעפת ניתן לדמיין, לחתוך את הסרעפת ואת הצלעות הדו צדדיות מן caudad כדי צפלד.הפוך את קיר בית החזה הקדמי כדי לחשוף את הריאות ולהרים את הריאות כדי לזהות את הוושט החזי, שנראה כמו כבל המחבר את הריאות לעמוד השדרה. חותכים את הוושט עם מספריים microdissection ולהשתמש מדפים כדי למשוך את הריאות הדו-צדדיות ואת הלב לכיוון caudad. לאחר מכן חותכים את קנה הנשימה ואת כלי הדם העיקריים לשיא הריאה ב cephalad וממקמים את הריאות לתוך צלחת פטרי 10 ס"מ עבור הדמיה bioluminescent.השתמש במספריים כדי להסיר את הלב מרמת הריאה. החל משמונה ימים לאחר כרית שומן חלב סרטן חיסון התא הביולומינציה בריאות הוא עמוק יותר וקטן יותר מאשר ההיתוך העיקרי המשקף את נטל הגידול העיקרי בעכברים חיים. מדידת גודל הגידול עם calipers מאפשר הערכה של נפח הגידול במקום.מודל זה של כריתת שד מאפשר גם ניטור נטל גידול גרורתי סדרתי מבלי להמתת חום לבעלי החיים. את נטל הגידול של גרורות הריאה ניתן לכמת גם על ידי הדמיה לשעבר vivo, אבל המגבלה היא כי העכברים חייבים להיות המתת דם. הישרדות עכבר לאחר טיפול כירורגי יכול גם להיות במעקב כנקודת קצה קלינית לתרגום.לאחר התפתחותה טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום סרטן השד לחקור לא רק פיתוח תרופות חדשות, אלא גם מחקר סרטן השד בכלל.

Research

JoVE Journal

Medicine

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

פיתוח Bronchiolitis סותם במודל Murine של השתלת ריאות Orthotopic

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

מודל Murine orthotopic של אדם סרטן ערמונית גרורה

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

חניכה של סרטן השד גרורתי על ידי מיקוד של האפיתל ductal עם Adenovirus-Cre: דגם רומן מהונדס עכבר של סרטן השד

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

דגם Murine פרה של גרורות כבדית

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...