Name: where you cut matters: a dissection and analysis guide for the spatial orientation of the mouse retina from ocular landmarks
Uploaded: 2018-08-04T14:45:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks at JoVE.com

Wir möchte Bretagne Tag und Jessica Onyak für ihre technische Unterstützung und Dr. Liu für bitte lassen Sie uns seine Epifluorescent Mikroskop benutzen. Danksagung des Supports: NIH-R15EY026255-01 und Karl Kirchgessner Stiftung.

<ol>
	<li>Applebury, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+A+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: A single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27 (3), 513-523 (2000).</li><li>Hughes, S., Watson, T. S., Foster, R. G., Peirson, S. N., Hankins, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonuniform+distribution+and+spectral+tuning+of+photosensitive+retinal+ganglion+cells+of+the+mouse+retina.">Nonuniform distribution and spectral tuning of photosensitive retinal ganglion cells of the mouse retina.</a> Curr Biol. 23 (17), 1696-1701 (2013).</li><li>Sondereker, K. B., Onyak, J. R., Islam, S. W., Ross, C. L., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+ganglion+cell+outer+retinal+dendrites:+Morphologically+distinct+and+asymmetrically+distributed+in+the+mouse+retina.">Melanopsin ganglion cell outer retinal dendrites: Morphologically distinct and asymmetrically distributed in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 525 (17), 3653-3665 (2017).</li><li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types.">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Current Biology. 24 (3), 310-315 (2014).</li><li>Warwick, R. A., Kaushansky, N., Sarid, N., Golan, A., Rivlin-Etzion, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhomogeneous+Encoding+of+the+Visual+Field+in+the+Mouse+Retina.">Inhomogeneous Encoding of the Visual Field in the Mouse Retina.</a> Curr Biol. 28 (5), 655-665 (2018).</li><li>Valiente-Soriano, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+melanopsin+positive+neurons+in+pigmented+and+albino+mice:+evidence+for+melanopsin+interneurons+in+the+mouse+retina.">Distribution of melanopsin positive neurons in pigmented and albino mice: evidence for melanopsin interneurons in the mouse retina.</a> Front Neuroanat. 8, 131 (2014).</li><li>Sabbah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retinal+code+for+motion+along+the+gravitational+and+body+axes.">A retinal code for motion along the gravitational and body axes.</a> Nature. 546 (7659), 492-497 (2017).</li><li>Vaney, D. I., Sivyer, B., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction+selectivity+in+the+retina:+Symmetry+and+asymmetry+in+structure+and+function.">Direction selectivity in the retina: Symmetry and asymmetry in structure and function.</a> Nat Rev Neurosci. 13 (3), 194-208 (2012).</li><li>Huberman, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+identification+of+an+On-Off+direction-selective+retinal+ganglion+cell+subtype+reveals+a+layer-specific+subcortical+map+of+posterior+motion.">Genetic identification of an On-Off direction-selective retinal ganglion cell subtype reveals a layer-specific subcortical map of posterior motion.</a> Neuron. 62 (3), 327-334 (2009).</li><li>Ueki, Y., Ramirez, G., Salcedo, E., Stabio, M. E., Lefcort, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+Ikbkap+causes+slow,+progressive+retinal+degeneration+in+a+mouse+model+of+familial+dysautonomia.">Loss of Ikbkap causes slow, progressive retinal degeneration in a mouse model of familial dysautonomia.</a> eNeuro. 3 (5), (2016).</li><li>Maiorano, N. A., Hindges, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+perinatal+retinal+degeneration+induces+retina+reshaping+and+correlated+structural+rearrangement+of+the+retinotopic+map.">Restricted perinatal retinal degeneration induces retina reshaping and correlated structural rearrangement of the retinotopic map.</a> Nat Commun. 4, 1938 (2013).</li><li>Hadj-Said, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+topographical+analysis+of+the+losses+of+cone+photoreceptors+and+retinal+ganglion+cells+under+taurine+depletion.">Quantitative and topographical analysis of the losses of cone photoreceptors and retinal ganglion cells under taurine depletion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (11), 4692-4703 (2016).</li><li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+temporal+topography+of+the+N-Methyl-+N-nitrosourea+induced+photoreceptor+degeneration+in+mouse+retina.">The temporal topography of the N-Methyl- N-nitrosourea induced photoreceptor degeneration in mouse retina.</a> Sci Rep. 5, 18612 (2015).</li><li>Risner, M. L., Pasini, S., Cooper, M. L., Lambert, W. S., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axogenic+mechanism+enhances+retinal+ganglion+cell+excitability+during+early+progression+in+glaucoma.">Axogenic mechanism enhances retinal ganglion cell excitability during early progression in glaucoma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2018).</li><li>Estevez, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Form+and+function+of+the+M4+cell,+an+intrinsically+photosensitive+retinal+ganglion+cell+type+contributing+to+geniculocortical+vision.">Form and function of the M4 cell, an intrinsically photosensitive retinal ganglion cell type contributing to geniculocortical vision.</a> J Neurosci. 32 (39), 13608-13620 (2012).</li><li>Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transretinal+ERG+recordings+from+mouse+retina:+Rod+and+cone+photoresponses.">Transretinal ERG recordings from mouse retina: Rod and cone photoresponses.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li><li>Lin, B., Wang, S. W., Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ganglion+cell+type,+size,+and+spacing+can+be+specified+independent+of+homotypic+dendritic+contacts.">Retinal ganglion cell type, size, and spacing can be specified independent of homotypic dendritic contacts.</a> Neuron. 43 (4), 475-485 (2004).</li><li>Ortin-Martinez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+and+distribution+of+mouse+retinal+cone+photoreceptors:+differences+between+an+albino+(Swiss)+and+a+pigmented+(C57/BL6)+strain.">Number and distribution of mouse retinal cone photoreceptors: differences between an albino (Swiss) and a pigmented (C57/BL6) strain.</a> PLoS One. 9 (7), 102392 (2014).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+degeneration+and+apoptosis+patterns+of+cone+photoreceptors+in+rd11+Mice.">The degeneration and apoptosis patterns of cone photoreceptors in rd11 Mice.</a> J Ophthalmol. 2017, 9721362 (2017).</li><li>Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+targeted+recording+of+GFP-expressing+neurons+for+light+responses+and+live-cell+imaging+in+the+mouse+retina.">Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina.</a> Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+spatial+organization+of+Muller+glia+in+mouse+retina.">Anatomy and spatial organization of Muller glia in mouse retina.</a> J Comp Neurol. 525 (8), 1759-1777 (2017).</li><li>Stabio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+map+of+the+mouse+eye+for+orienting+retinal+topography+in+anatomical+space.">A novel map of the mouse eye for orienting retinal topography in anatomical space.</a> J Comp Neurol. 526 (11), (2018).</li><li>Lamb, T. D., Collin, S. P., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+vertebrate+eye:+Opsins,+photoreceptors,+retina+and+eye+cup.">Evolution of the vertebrate eye: Opsins, photoreceptors, retina and eye cup.</a> Nat Rev Neurosci. 8 (12), 960-976 (2007).</li><li>Sterratt, D. C., Lyngholm, D., Willshaw, D. J., Thompson, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+anatomical+and+visual+space+for+the+mouse+retina:+Computational+reconstruction+and+transformation+of+flattened+retinae+with+the+Retistruct+package.">Standard anatomical and visual space for the mouse retina: Computational reconstruction and transformation of flattened retinae with the Retistruct package.</a> PLoS Comput Biol. 9 (2), 1002921 (2013).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Keine umfassende, standardisierte Protokoll für die Bestimmung und Kennzeichnung der Ausrichtung der isolierten Maus Netzhaut im anatomischen Raum stattgefunden hat. Das Protokoll detailliert hier versucht, diese Lücke durch die Standardisierung und Detaillierung tief anatomische Landmarken Verwendung als Referenz verweist auf zuverlässig identifizieren retinalen Orientierung. Es hat sich gezeigt, dass die tief anatomischen Landmarken in diesem Protokoll eine genauere und zuverlässigere Methode für die Orientierung der Maus Netzhaut als oberflächliche Sehenswürdigkeiten wie Hornhaut Verbrennungen22bieten. So können Studien, die auf die Hornhaut Verbrennungen zur Netzhaut Orientierung verlassen haben größere Fehler in der Ausrichtung als Studien gehabt haben, die auf Sehenswürdigkeiten wie dem Rectus Muskeln und choroid Fissur verlassen haben. Diese Diskrepanz unterstreicht die Notwendigkeit und Bedeutung dieses standardisierten Protokolls in Bezug auf die Interpretation der Ergebnisse und Vergleiche zwischen den Studien, die von genau retinalen Orientierung abhängen. Insgesamt wird ein standardisiertes Protokoll eine gängige Methode zur Vision Forscher zu folgen, bieten wodurch das Vorhandensein einer konfundierenden Variablen in der Datenerfassung, die auftreten können mit der Verwendung von nicht-standardisierten Methoden zur Identifizierung von retinalen Orientierung.
Die hier vorgestellten Methoden sind leicht wiederholbar und für viele Arten von experimentelle Protokolle. In der Tat ist einer der größten Vorteile dieses Protokolls seine Anpassungsfähigkeit. Weil die Aderhaut Fissur, s-Opsin Ausdruck und Rectus Muskeln Sehenswürdigkeiten alle gefunden wurden, um retinale Orientierung22 zuverlässig zu identifizieren ist das Wahrzeichen, die am besten die Versuchsparameter wählbar, Datenerfassung (Tabelle zu optimieren 1). Darüber hinaus können Methoden der Dissektion kombiniert werden, um die Ausrichtung der Netzhaut weiter zu klären. Beispielsweise können choroid Fissur Schnitten mit s-Opsin Immunohistochemistry kombiniert werden, um alle vier Stangen der Netzhaut zu orientieren: nasale und Temporale Hemisphären durch die Aderhaut Fissur Kürzungen identifiziert werden können, und s-Opsin Immunohistochemistry erkennen Ventrale und dorsale Halbkugeln. Jedoch kann die Anpassungsfähigkeit dieses Protokolls durch den zeitkritischen Charakter der Physiologie Experimente abhängig gemacht werden. Da die Zeit, die es braucht, um ein Wahrzeichen zu identifizieren, machen eine Hornhaut brennen und ausführen einen Linderung Schnitt erhebliche Gewebe Tod in ex Vivo Experimenten führen könnten, möglicherweise einige dieser Methoden Dissektion suboptimal. Zum Glück, sobald ein Sezierer mit der Aderhaut Fissur oder überlegener Rectus Muskeln Dissektion Methode vertraut geworden ist, erkennen die tiefen Wahrzeichen und die Linderung von Kürzungen schnell werden Sie ein Teil der Dissektion Routine und nicht deutlich hinzufügen auf die Länge der Dissektion. Obwohl wir anerkennen, dass die hier beschriebenen Schritte auf Zeit extrem zeitkritische Experimente hinzufügen können, empfehlen wir die Verwendung der s-Opsin-Gradient für post-Hoc retinalen Ausrichtung wird die Lebensfähigkeit des Gewebes nicht mehr ein Problem (Abbildung 3 ). Färbung der Netzhaut für s-Opsin ist ein wirksames Mittel die Netzhaut zu orientieren, wie es alle vier Pole identifizieren kann: s-Opsin Färbung teilt die Netzhaut in dorsalen und ventralen Pole und ermöglicht eine Identifikation der nasalen und temporalen je nachdem, ob Pole die Netzhaut wird von einem rechten oder linken Auge (Abbildung 3). Daher glauben wir, dass dieses Protokoll liefert einen zuverlässigen und wiederholbaren Satz von Methoden für die präzise Ausrichtung der Netzhaut, die experimentellen Parameter erfüllen kann.
Als mit jedem veränderten retinalen Dissektion, die Gültigkeit der Dissektion Methode begrenzt durch die Genauigkeit der Sezierer und die Qualität des Gewebes, die isoliert wurde. Wenn jedes Gewebe verloren bei Dissektion oder die Netzhaut ist auch für genaue Rekonstruktion verstümmelt, werden Retistruct und das MATLAB-Programm nicht in der Lage, zuverlässig zu rekonstruieren oder die Netzhaut zu orientieren. Es ist daher wichtig, die Dissektion Methode üben, bevor zum Sammeln von Daten mittels Experimenten. Während die Arten von Dissektionen hier sind nicht schwer erklärt, müssen sie geübt werden, um die Wiederholbarkeit der Identifizierung von retinalen Orientierung ein besonderes Wahrzeichen zu gewährleisten. Darüber hinaus ist es wichtig, dass die Sezierer Praxis optisch identifizieren die anatomischen Landmarken vor Beginn der Datenerhebung zu sicher, dass das richtige Wahrzeichen verwendet wird. Eine Möglichkeit zur Überprüfung der Richtigkeit einer bestimmten Sezierer ist entweder choroid Fissur zu machen schneidet oder überlegener Rectus Muskel schneidet und dann den Speicherort der die Kürzungen bei den s-Opsin Farbverlauf zu vergleichen, da es eine feste Markierung und somit nicht abhängig von der Genauigkeit der Dissectio ist n. potenzielle Dissectors können auch vergleichen ihre rekonstruierten Netzhaut zu den Beispielen der rekonstruierten Netzhaut mit genauen Wahrzeichen Kürzungen sind in Abbildung 1 dargestellte und Abbildung 2. Im Wesentlichen eine potenzielle Sezierer sollten die Schritte in diesem Protokoll für einen bestimmten Dissektion Typ durchführen, sei es überlegener Rectus Muskeln oder Aderhaut Rissbildung Methode, und vergleichen Sie die Ergebnisse auf den s-Opsin Farbverlauf herzustellen die Gültigkeit einer bestimmten Sezierer. Denn wenn der Sezierer unsicher über den Standort des Wahrzeichens ist, es eine ungenaue Ausrichtung der Netzhaut führen kann, dass wird standardmäßig beeinflussen Datenerhebung und Auswertung.

Ein wichtiger und manchmal übersehener Aspekt der Netzhaut Neurowissenschaften ist die korrekte Ausrichtung und Analyse der isolierten ganze-Mount Netzhaut, sei es die Ausrichtung der Netzhaut in einer Elektrophysiologie Aufnahme Kammer oder auf einer histologischen Folie. Dies ist besonders wichtig für Studien mit der Maus Netzhaut, die derzeit das am weitesten verbreitete Modell für Untersuchungen des Säugetier-visuellen Systems. Die jüngsten Entdeckungen zeigen, dass die Maus Netzhaut nicht räumlich einheitlich ist sondern Dichte und Größe Gradienten der Netzhaut funktionell unterschiedliche Zelltypen, wie Ganglienzellen Melanopsin, transiente OFF-Alpha Ganglienzellen und Kegel Opsins1,2 hat ,3,4,5. Infolgedessen die Methode zur Ermittlung die Ausrichtung der Netzhaut beeinträchtigen die experimentellen Ergebnisse mit Zelle Typ oder Opsin Distributionen2,3,6, Richtung der Richtung-selektiven tuning Ganglion Zellen7,8,9und topografische Muster von Netzhautdegeneration10,11,12,13,14 . In der Tat kann nicht Berichterstattung wie Netzhaut Orientierung gemeldet wird Abweichungen in der Literatur und Verwirrung verursachen beim Versuch, Daten zwischen den Studien zu vergleichen. Es ist daher wichtig, dass Forscher berichten die Methode für die Ausrichtung der Netzhaut zu identifizieren, so dass die Ergebnisse solcher Studien genau interpretiert werden können.
Netzhaut Orientierung wird häufig durch scoring die dorsale, ventrale, nasale oder zeitliche Hornhaut vor dem Okular Enukleation1,3,12,15,16,17 identifiziert ,18,19 oder der Aderhaut Rissbildung durch Schneiden oder färben tief anatomische Auge Sehenswürdigkeiten wie die extraokularen Muskeln6,7,20,21, oder die s-Opsin gradient2,3. Rectus Muskeln können verwendet werden, um die dorsale, ventrale, Nasal und temporal Netzhaut indem man einem tief entspannenden Schnitt, der die Anlage die entweder halbiert überlegene Rectus, minderwertige Rectus, mediale Rectus oder seitlichen Rectus Muskeln, bzw. zu identifizieren. Jedoch ist für die meisten Experimente mit Rectus Muskeln ausreichend für die Orientierung der Netzhaut22. Die Aderhaut Fissur, die ein Überrest der Augenentwicklung ist, kann als eine schwache horizontale Linie auf der Rückseite des Auges betrachtet. Beiden Enden dieser Linie endet an der Nasal oder der zeitlichen Pole der Erde23. Zu guter Letzt s-Opsin Ausdruck ist asymmetrisch verteilt an der ventralen Netzhaut in Mäusen und s-Opsin Antikörper können verwendet werden, um die ventralen Netzhaut in immunhistochemischen Experimente1zeigen.
Neuere Arbeiten von Stabio, Et al. 22 gezeigt, dass oberflächliche okuläre Wahrzeichen wie Hornhaut Verbrennungen eine weniger zuverlässige Methode sind für die Orientierung der Netzhaut im anatomischen Raum, sehr wahrscheinlich durch menschliches Versagen und Variabilität bei der Herstellung der Hornhaut brennen bei der Verwendung der zeitlichen und medialen Augenwinkel als Referenzpunkte. Im Gegensatz dazu haben tiefe Sehenswürdigkeiten wie überlegener Rectus Muskeln, choroid Riss und dem s-Opsin-Gefälle erwiesen zuverlässig und präzise Wahrzeichen für die Orientierung der Netzhaut-22. Allerdings erfordert die Ermittlung von diesen anatomischen Landmarken einzigartige Dissektion Schritte, die nicht in der Literatur ausführlich beschrieben werden. Ziel dieses Protokolls ist es daher, eine umfassende Anleitung, wie die überlegene Rectus Muskeln, choroid Fissur und s-Opsin Farbverlauf verwenden, um die räumliche Orientierung der Netzhaut Maus genau zu identifizieren können. Darüber hinaus haben wir einen Vergleich der Wirksamkeit von zwei s-Opsin-Antikörper, sowie ein Protokoll für s-Opsin Immunohistochemistry aufgenommen.
Eine weitere Herausforderung Studien unter Berufung auf genaue Ausrichtung der Netzhaut ist die große Linderung Kürzungen erforderlich, um Wholemount Netzhaut auf einer Aufnahme Kammer, Schale oder Folie zu glätten. Dies kann führen, Herausforderungen für die Analyse dessen, was natürlich eine dreidimensionale Struktur ist, wenn es als eine flache zweidimensionale Struktur abgebildet wird. Ein Programm namens Retistruct24 lässt sich eine flache Wholemount Netzhaut seiner dreidimensionalen Struktur zurück, bevor die von ihm gesammelten Daten analysiert werden. So widmet ein Abschnitt dieses Protokolls Hervorhebung der Schritte, die notwendig sind für die Verwendung der Retistruct-Software s-Opsin Immunostained Maus Netzhaut zu rekonstruieren. Wir haben ebenfalls einen Abschnitt des Protokolls für die Verwendung unserer benutzerdefinierte MATLAB-Skript, das, um präzise drehen und orient Maus Netzhaut mit s-Opsin befleckt entwickelt wurde.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1499px;" width="1498">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">0.1 M Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:243px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:125px;">P5244</td>
			<td style="width:751px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Axioplan2 Epifluorescent Microscope</td>
			<td style="width:243px;">Zeiss</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:751px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Clear Nailpolish</td>
			<td style="width:243px;">N/A</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Corning LSE Low Speed Orbital Shaker</td>
			<td style="width:243px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">CLS6780FP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Costar TC-Treated 24-well Plates</td>
			<td style="width:243px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Dissection Microscope</td>
			<td style="width:243px;">Olympus</td>
			<td style="width:125px;">SZ51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Donkey anti-Goat Alexa 594</td>
			<td style="width:243px;">Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:125px;">A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Donkey anti-Rabbit Alexa 594</td>
			<td style="width:243px;">Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:125px;">A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Donkey Normal Serum</td>
			<td style="width:243px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">566460</td>
			<td>Use at 5.2% (52 &#956;L with 86 &#956;L of 20% Triton X-100 and 863 &#956;L of 0.1M PBS for 1 mL of blocking solution)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td style="width:243px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:125px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Goat anti-s-opsin</td>
			<td style="width:243px;">Santa Cruz Biotechnologies&#160;</td>
			<td style="width:125px;">sc-14363</td>
			<td>Not commerically available as of 2017</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Graefe Curved Forceps</td>
			<td style="width:243px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:125px;">11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">ImageJ or FIJI</td>
			<td style="width:243px;">National Institute of Health</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:751px;">Freely available software</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Low Temperature Cautery Ophthalmic Fine Tip Cauterizer</td>
			<td style="width:243px;">Bovie Medical Corporation</td>
			<td style="width:125px;">AA00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">MATLAB</td>
			<td style="width:243px;">MathWorks</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:751px;">At least version 2007b or later</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Micro Cover Glasses&#160;</td>
			<td style="width:243px;">VWR International</td>
			<td style="width:125px;">48393-241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Micro Slide Trays</td>
			<td style="width:243px;">VWR International</td>
			<td style="width:125px;">82020-913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Moira Ultra Fine Forceps</td>
			<td style="width:243px;">Fine Science Tools&#160;</td>
			<td style="width:125px;">11370-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Nitrocellulose membrane</td>
			<td style="width:243px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">HAWP04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:243px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:125px;">15714-S</td>
			<td>Use at 4% (25 &#956;L and 875 &#956;L of 0.1 M PBS for 1 mL of fixative)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">PrecisionGlide Needle 20G (0.90mm x 25mm)&#160;</td>
			<td style="width:243px;">BD PrecisionGlide</td>
			<td style="width:125px;">305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Pyrex Glass Petri Dish</td>
			<td style="width:243px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">CLS3160152</td>
			<td style="width:751px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">R</td>
			<td style="width:243px;">The R Project for Statistical Computing</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:751px;">Freely available software; version 3.4.3 or later</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Rabbit anti-s-opsin</td>
			<td style="width:243px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">ABN1660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Retiga R3 Microscope Camera</td>
			<td style="width:243px;">Qimaging</td>
			<td style="width:125px;">01-RET-R3-R-CLR-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Retistruct</td>
			<td style="width:243px;">N/A</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:751px;">Freely available software&#160; compatiable with Windows 7 or Windows 10</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Shandon Aqua-Mount Slide Mounting Media</td>
			<td style="width:243px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:125px;">14-390-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:243px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">T8787</td>
			<td>Use 1.7% (86 &#956;L of 20% Triton-X with 52 &#956;L of Donkey Normal Serum and 863 &#956;L of 0.1 M PBS for 1 mL of blocking solution)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">Vannas Spring Dissection Scissors&#160;</td>
			<td style="width:243px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:125px;">15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">5MP USB Microscope Digital Camera</td>
			<td style="width:243px;">AmScope</td>
			<td style="width:125px;">MU500</td>
			<td>To be used with the Olympus Dissection Microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

where you cut matters: a dissection and analysis guide for the spatial orientation of the mouse retina from ocular landmarks

Präzise und zuverlässig identifizieren räumlichen Orientierung der isolierten Maus Netzhaut ist wichtig für viele Studien in den visuellen Neurowissenschaften, einschließlich der Analyse von Dichte und Größe Steigungen von retinalen Zelltypen, die Richtung Stimmung der Richtung-selektive Ganglienzellen, und die Prüfung der topographischen Degeneration Muster in einigen Netzhauterkrankungen. Allerdings gibt es viele verschiedene augenfällige Dissektion-Methoden in der Literatur beschrieben, die verwendet werden, zu identifizieren und kennzeichnen retinalen Orientierung in der Netzhaut Maus. Während die Methode der Ausrichtung verwendet in solchen Studien oft übersehen wird, kann keine Berichterstattung wie Netzhaut Ausrichtung bestimmt ist Abweichungen in der Literatur und Verwirrung verursachen beim Versuch, Daten zwischen den Studien zu vergleichen. Oberflächliche okuläre Sehenswürdigkeiten wie Hornhaut Verbrennungen werden häufig verwendet, aber haben vor kurzem gezeigt, dass weniger zuverlässig als tiefer Sehenswürdigkeiten wie die Rectus Muskeln, der Aderhaut Fissur oder der s-Opsin-Gradient. Hier bieten wir einen umfassenden Leitfaden für die Verwendung von tief okuläre Sehenswürdigkeiten genau untersuchen und dokumentieren die räumliche Orientierung der Netzhaut eine isolierte Maus. Wir haben auch verglichen die Wirksamkeit von zwei s-Opsin-Antikörpern und enthalten ein Protokoll für s-Opsin Immunohistochemistry. Da Orientierung der Netzhaut nach der s-Opsin-Gradient retinalen Rekonstruktion mit Retistruct Software und Rotation mit benutzerdefiniertem Code erforderlich ist, haben wir die wichtigen Schritte erforderlich, um beide Programme verwenden vorgestellt. Insgesamt ist das Ziel dieses Protokolls einen zuverlässigen und wiederholbaren Satz von Methoden für die präzise Ausrichtung der Netzhaut zu liefern, die an die experimentelle Protokolle anpassbar ist. Ein übergeordnetes Ziel dieser Arbeit ist es, retinale Ausrichtung Methoden für zukünftige Studien zu standardisieren.

Ein einziger Linderung Schnitt, der die überlegene Rectus Muskel genau und zuverlässig halbiert identifiziert die dorsale Netzhaut (Abbildung 1). Die Aderhaut Spalt identifiziert genau und zuverlässig die nasale und Temporale Retina mit Tiefe Linderung Einschnitte entlang der zeitliche und nasale choroid Fissur (Abbildung 2). In diesem Beispiel worden ein Linderung Schnitt auch in der dorsalen Netzhaut erzielt um die dorsale/ventrale Achse der Netzhaut (Abbildung 2D, vertikale Pfeil) zu erkennen. Die Schritte dieser Prozesse werden zum Zweck der Replikation durch zukünftige Dissectors gezeigt. Eine Kombination aus s-Opsin Immunohistochemistry (Abbildung 3A und 3D), Rekonstruktion mit Retistruct Software (3 b, 3E) und genaue Drehung mit einem benutzerdefinierten MATLAB-Code (3 C, 3F) ermöglicht die Kennung der ventralen und dorsalen Hälften der Netzhaut sowie die nasalen und temporalen Pole wenn es bekannt ist, ob die Netzhaut von einem rechten oder linken Auge (Abbildung 3 ist). Wir haben auch zwei häufig verwendete s-Opsin Primärantikörper für Effizienz in der Kennzeichnung s-Opsin Kegel (Abbildung 4A-D) verglichen: beide die Ziege Anti-s-Opsin Primärantikörper und die Kaninchen Anti-s-Opsin Primärantikörper effektiv zu beschriften s-Opsin Kegel (Abbildung 4E) in der gleichen Maus.
Linderung Kürzungen auf s-Opsin Immunostained rekonstruiert Netzhaut identifiziert wurden und ihre Standorte wurden im Vergleich zu der Orientierung durch die s-Opsin Steigung bestimmt. Mit unseren kundenspezifischen MATLAB-code (siehe Zusatzmaterialien), Netzhaut waren genau so gedreht, dass die höchste Konzentration von s-Opsin Färbung setzt damit wahre ventral, liegt dorsal bei 90° (für überlegene Rectus), wahre Nasal bei 0° (für Nasal Choroid Fissur) und bei 180 ° (für zeitliche choroid Fissur) zeitliche wahr. Der Wert jedes einzelnen Linderung Schnittwinkel war bestimmt mit dem Winkel-Tool in ImageJ, nachdem die Netzhaut nach der s-Opsin-Gradient gedreht wurden. Ein durchschnittlichen Winkel wurde für jede Linderung Schnitt Art berechnet und der Mittelwert der einzelnen Linderung einschnittart wurde dann auf einem polaren Grundstück (Abbildung 6) aufgetragen. Im Durchschnitt überlegener Rectus Muskeln Schnitten identifiziert den dorsalen Pol auf 96,3 ± 4,3 ° (n = 11) (Abbildung 6). Die nasale choroide Fissur die nasale Pol bei 6,7 ± 5,8 ° und zeitliche choroide Fissur gekennzeichnet der temporalen Pole bei 172.0 ± 4,4 ° (n = 9; ( Abbildung 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig1.jpg"> Abbildung 1: mit der überlegenen Rectus-Muskel, um die dorsale Netzhaut des rechten Auges genau zu identifizieren. (A) ein Beispiel für eine dorsale Hornhaut brennen nahe der Hornhaut skleralen Grenze mit einem Filzstift Cautery (weißer Pfeil) gemacht. Die überlegene Rectus Muskel ist auch in dieser Ansicht (weißer Pfeil) angezeigt. (B) ein Beispiel eines ganzen montierten Netzhaut mit einer Entlastung schneiden in der dorsalen Netzhaut durch halbiert überlegene Rectus Muskeln gemacht. Pfeil zeigt die tiefen Schnitt in der dorsalen Netzhaut durch halbiert überlegene Rectus Muskeln entlasten. Die Netzhaut ist gefärbt mit Primärantikörper Ziege Anti-s-Opsin (siehe Tabelle der Materialien) und Sekundärantikörper Esel anti-Ziege Alexa 594 (siehe Tabelle der Materialien; Erregung: 590 nm, Emission: 620 nm) (Cyan). Netzhaut wurde mit einem Epifluorescent-Mikroskop mit einem Texas Red Filter abgebildet (595 nm). (C) eine Netzhaut in Retistruct rekonstruiert und mit einem benutzerdefinierten MATLAB-Code gedreht (siehe Zusatzmaterialien) mit der überlegenen Rectus Muskel entlasten schneiden sichtbar (weißen Pfeils). D: dorsal, V: ventralen, T: temporal, N: Nasal. Skalieren von Balken = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig2.jpg"> Abbildung 2: Verwendung der Aderhaut Fissur, um die nasalen und temporalen Pole der Netzhaut des rechten Auges genau zu identifizieren. (A) ein Beispiel für eine dorsale Hornhaut brennen nahe der Hornhaut skleralen Grenze mit einem Filzstift Cautery gemacht. (B) der Aderhaut Spalt sichtbar auf der Rückseite des Auges auf der Sklera (weißer Pfeil). Die dorsale Hornhaut brennen ist auch in dieser Ansicht befindet sich etwa 90° aus der zeitlichen Aderhaut Spalt sichtbar. (C) der Aderhaut Spalt sichtbar auf der Rückseite des Auges auf die Lederhaut, von des Sehnervs bis zur Hornhaut skleralen Grenze Reisen. (D) eine Netzhaut gebeizt mit Ziege Anti-s-Opsin (siehe Tabelle der Materialien) und sekundäre Antikörper Esel anti-Ziege Alexa 594 (siehe Tabelle der Materialien; Erregung: 590 nm, Emission: 620 nm) (Cyan) mit choroid Fissur Schnitten (Horizontal Pfeile) und die dorsale Entlastung (vertikale Pfeil) schneiden. Netzhaut wurde mit einem Epifluorescent-Mikroskop mit einem Texas Red Filter abgebildet (595 nm). (E) die Netzhaut im Retistruct rekonstruiert und mit einem benutzerdefinierten MATLAB-Code (siehe Zusatzmaterialien) mit der dorsalen Linderung Schnitt und den nasalen und temporalen choroid Fissur Schnitten sichtbar (weisse Pfeile) gedreht. D: dorsal, V: ventralen, T: temporal, N: Nasal. Skalieren von Balken = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig3.jpg"> Abbildung 3: mit der s-Opsin-Farbverlauf, um alle vier Stangen der Netzhaut zu identifizieren. (A) ein Beispiel für eine Netzhaut seziert aus einer rechten Auge, die mit einem Epifluorescent-Mikroskop mit einem Texas Red Filter abgebildet und wurde Immunostained s-Opsin beschriften (595 nm). Die Kürzungen in diesem Netzhaut sind willkürlich, da die topographische Orientierung durch die s-Opsin-Verlauf bestimmt wird. (B) die Ergebnisse der Rekonstruktion der Netzhaut in A mit Retistruct. Beachten Sie, dass die s-Opsin-Gradienten nicht richtig ausgerichtet ist, weil die Netzhaut durch die benutzerdefinierte MATLAB-Code (siehe Zusatzmaterialien) nicht ausgeführt wurde. (C) die Ergebnisse der Drehung der Netzhaut in A mit den benutzerdefinierten Code. Die Netzhaut wurde gedreht, so dass die höchste Konzentration von s-Opsin Färbung an der Unterseite befindet und als die ventralen Retinal identifiziert. Weil die Netzhaut aus einer rechten Auge ist, der zeitliche Pol ist befindet sich 90° gegen den Uhrzeigersinn vom dorsalen Pol und der nasale Pol ist befindet sich 90° im Uhrzeigersinn von der dorsalen Pol. (D) ein Beispiel für eine Netzhaut seziert von einem linken Auge, die mit einem Texas Red Filter abgebildet und wurde Immunostained s-Opsin beschriften (595 nm). Die Kürzungen in diesem Netzhaut sind willkürlich, da die topographische Orientierung durch die s-Opsin-Verlauf bestimmt wird. (E) die Ergebnisse die Netzhaut in D mit Retistruct Digital zu rekonstruieren. Beachten Sie, dass die s-Opsin-Gradienten nicht richtig ausgerichtet ist, weil die Netzhaut nicht durch den benutzerdefinierten Code gedreht wurde. (F) die Ergebnisse der Drehung der Netzhaut in D mit den benutzerdefinierten Code. Die Netzhaut wurde gedreht, so dass die höchste Konzentration von s-Opsin Färbung an der Unterseite befindet und als die ventralen Retinal identifiziert. Da die Netzhaut von einem linken Auge ist, der nasale Pol ist befindet sich 90° gegen den Uhrzeigersinn vom dorsalen Pol und die Temporale Pole ist befindet sich 90° im Uhrzeigersinn von der dorsalen Pol. D: dorsal, V: ventralen, T: temporal, N: Nasal. Skalieren von Balken = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig4.jpg"> Abbildung 4: Vergleich von zwei primäre s-Opsin-Antikörper in der Kennzeichnung s-Opsin Zapfen. (A) A Netzhaut mit der Ziege Anti-s-Opsin Primärantikörper befleckt (siehe Tabelle der Materialien). (B) die anderen Netzhaut der gleichen Maus gebeizt mit Kaninchen Anti-s-Opsin Primärantikörper (siehe Tabelle der Materialien). (C) eine repräsentative Region (0,1 x 0,1 mm2) von der Netzhaut mit der Ziege Anti-s-Opsin Primärantikörper befleckt. Aufnahme auf ein Epifluorescent Mikroskop bei 40 X Vergrößerung. (D) eine repräsentative Region (0,1 x 0,1 mm2) von der Netzhaut mit Kaninchen Anti-s-Opsin befleckt (siehe Tabelle der Materialien), eine Primärantikörper Alternative. Bild wurde auf ein Epifluorescent Mikroskop bei 40 X Vergrößerung aufgenommen. (E) beide Antikörper kennzeichnen die gleiche Anzahl von s-Kegel außensegmenten, da gibt es keinen signifikanten Unterschied in der Anzahl der Immunopositive s-Zapfen, die Ziege Anti-s-Opsin und Kaninchen Anti-s-Opsin jederzeit von den getesteten Retinal gefärbt sind Exzentrizitäten (n = 2; ANOVA mit post Hoc Bonferroni-Test; p > 0.05). Skalieren von Balken = 1 mm (A-B); 25 µm (C-D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig5.jpg"> Abbildung 5: eine visuelle Anleitung zur Verwendung der Retistruct-Software, Netzhaut-Immunostained mit s-Opsin rekonstruieren. (A) A Netzhaut in Retistruct mit den Umriss sichtbar geöffnet und ein "reißen" hinzugefügt. Punkte von der "Träne" sind mit übereinander liegenden weißen Pfeile gekennzeichnet. Alle Kürzungen in diesem Netzhaut sind willkürlich, da kein besonderes Wahrzeichen verwendet wurde, um die Netzhaut Orientierung während der Präparation zu markieren. Wichtige Tasten sind rot hervorgehoben. (B) ein Netzhaut mit allen "Tears" hinzugefügt und der dorsalen Netzhaut identifizierte sich mit "D" am Rande der Netzhaut. Beachten Sie, dass die "Rekonstruieren Retina" Schaltfläche jetzt sichtbar ist. Wichtige Tasten sind rot hervorgehoben. (C) den Prozess des Wiederaufbaus der Netzhaut. Die polar Handlung der rekonstruierten Netzhaut erscheint auf der rechten Seite, zeigt, dass die Entlastung in Cyan (blaue Pfeile zur Klärung Schnitt Standorte überlagert) schneidet. (D) das endgültige Ergebnis der Netzhaut durch Retistruct laufen. Die ursprüngliche Wholemount Netzhaut bleibt auf der linken Seite und die rekonstruierte Netzhaut erscheint auf der rechten Seite. Die Linderung Kürzungen sind sichtbar in Cyan (weisse Pfeile zur Klärung Schnitt Standorte überlagert). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57861/57861fig6.jpg"> Abbildung 6: überlegener Rectus Muskeln und Aderhaut Fissur kann verwendet werden, um genau die Maus Netzhaut orientieren. Ein polar Plot der Winkel von entweder überlegener Rectus Muskeln entlasten Kürzungen oder Aderhaut Riss schneidet in der Netzhaut, die mit Retistruct rekonstruiert worden. Linderung Kürzungen auf s-Opsin Immunostained rekonstruiert Netzhaut identifiziert wurden und ihre Standorte wurden an die Stelle des s-Opsin Gradienten verglichen. Bei Verwendung des benutzerdefinierten MATLAB Codes genau die Netzhaut zu drehen, so dass die höchste Konzentration der s-Opsin Färbung ventral gelegen, wahre dorsal (90° für überlegene Rectus) ist true Nasal (0° für nasale choroid Fissur) und zeitliche (180° für zeitliche Aderhaut wahr Fissur) wurden für jede Netzhaut bestimmt. Der Wert jedes einzelnen entlasten Schnittwinkel ImageJ und einem durchschnittlichen Winkel festgestellt wurde war für jede Linderung Schnitt Art berechnet. Überlegener Rectus Muskeln Schnitten identifiziert den dorsalen Pol auf 96,3 ± 4,3 ° (n = 11). Die nasale choroide Fissur die nasale Pol bei 6,7 ± 5,8 ° und zeitliche choroide Fissur gekennzeichnet der temporalen Pole bei 172.0 ± 4,5 ° (n = 9). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57861/57861fig6large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Tiefen Wahrzeichen</td>
			<td>Hornhaut brennen Lage</td>
			<td>Pol der Netzhaut identifizierte</td>
			<td>Experimentelle Anwendung</td>
		</tr>
<tr>
<td>Überlegener Rectus</td>
			<td>Dorsal</td>
			<td>Dorsal</td>
			<td>Live- oder feste</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nasale Choroid Fissur</td>
			<td>Dorsal</td>
			<td>Nasal</td>
			<td>Live- oder feste</td>
		</tr>
<tr>
<td>Zeitliche Choroid Fissur</td>
			<td>Dorsal</td>
			<td>Zeitliche</td>
			<td>Live- oder feste</td>
		</tr>
<tr>
<td>S-Opsin Farbverlauf</td>
			<td>Keine</td>
			<td>Dorsal, Ventral, Nasal, zeitliche</td>
			<td>Behoben</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 1: Tiefe Wahrzeichen, die Pole der Netzhaut erkennen sie und ob sie für Live- oder festen Gewebe Anwendung verwendet werden können.

Watch this Scientific Journal Video about Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks at JoVE.com

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Dieses Protokoll bietet einen umfassenden Präparation und Analyse-Leitfaden für die Verwendung von tief okuläre Sehenswürdigkeiten, s-Opsin Immunohistochemistry, Retistruct und benutzerdefinierten Code, präzise und zuverlässig isoliert Maus Netzhaut im anatomischen Raum zu orientieren.

Wo schneiden Sie Angelegenheiten: Eine Dissektion und Analyse-Leitfaden für die räumliche Orientierung der Netzhaut Maus von okulären Sehenswürdigkeiten

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Präparation einer Maus Eye für einen ganzen Berg von retinalen Pigmentepithel

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Forschung

Neurowissenschaften

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Die Quantifizierung der Aktivität von Cis-Regulatorische Elemente in der Maus Retina durch Explantation Elektroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualisierung und genetische Manipulation von Dendriten und Dornen in der Maus Hirnrinde und im Hippocampus mit<em&gt; In utero</em&gt; Die Elektroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Ein Visual Beschreibung der Dissektion der Hirnoberfläche Gefäßsystem und assoziierten Hirnhäute und der Aderhaut Plexus aus Rattenhirn

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Beurteilung der Gefäß Regeneration im ZNS Verwenden der Maus Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

The Swimmeret System of Crayfish: A Practical Guide for the Dissection of the Nerve Cord and Extracellular Recordings of the Motor Pattern

Die swimmeret System der Crayfish: Ein praktischer Leitfaden für die Dissektion der Nervenstrang und extrazellulären Recordings der Motor Pattern

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Eine einfache Ein-Schritt-Dissection-Protokoll für Whole-mount Vorbereitung von Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Identifying Transcription Factor Olig2 Genomic Binding Sites in Acutely Purified PDGFR&#945;+ Cells by Low-cell Chromatin Immunoprecipitation Sequencing Analysis

Identifying Transcription Factor Olig2 Genomic Binding Sites in Acutely Purified PDGFRÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±+ Cells by Low-cell Chromatin Immunoprecipitation Sequencing Analysis

Identifizierung von Transkription Faktor Olig2 genomische Bindungsstellen in akut PDGFRα + Zellen durch Low-Zelle Chromatin Immunopräzipitation Sequenzierung Analyse gereinigt

In mammalian cells, gene transcription is regulated in a cell type specific manner by the interactions of transcriptional factors with genomic DNA. ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

Two Peeling Methods for the Isolation of Photoreceptor Cell Compartments in the Mouse Retina for Protein Analysis

Zwei Peeling-Methoden zur Isolierung von Photorezeptor-Zellkompartimenten in der Netzhaut der Maus zur Proteinanalyse

Rod photoreceptors are highly polarized sensory neurons with distinct compartments. Mouse rods are long (~80 &#181;m) and thin (~2 &#181;m) and are ...