Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

أيد هذا العمل '' معونات "البحث العلمي" في "مجالات مبتكرة" (بروتين الدماغ الشيخوخة والخرف Control)(15H01552) من يأمرون ومعونات للعلماء الشباب (ب) (20969 ك 16). شكرا مقدم البلاغ الدكتور ديفيد م. Holtzman والدكتور جون ر. سيريتو للنصائح التقنية أثناء تطوير هذا الأسلوب.

جميع الدراسات الحيوانية تم استعراضها والموافقة عليها برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة "مدرسة الدراسات العليا للطب" في جامعة طوكيو.
1-قبل إجراء العمليات الجراحية
<ol><li>قبل البدء بعملية جراحية، يمسح كل شيء مع الإيثانول 70% للحفاظ على ظروف معقمة. ويوصي بدعم الحرارية باس...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

ميكرودياليسيس مع ارتفاع الوزن الجزيئي قطع الأغشية ليدار بطريقة دفع وجذب، وبالتالي من الأهمية بمكان أن معدل التدفق دقيقة وثابتة. عدم دقة في معدلات التدفق يمكن أن تكون قضية توليد فقاعة هواء وعدم تناسق في تركيز العينة. إذا كان التدفق غير متناسقة، تحقق من كافة الاتصالات للتسرب. إذا استمرت الم...

قوي الأمن الداخلي تضم 15-20% حجم الدماغ الإجمالي ويوفر المكروية حاسمة بالنسبة لتوصيل الإشارة والنقل الركيزة وإزالة النفايات1. ولذلك، سيوفر قدرة جمع قوي الأمن الداخلي من الحيوانات الحية آثار أكبر بالنسبة لمختلف العمليات البيولوجية، فضلا عن إليه المرض. في فيفو ميكرودياليسيس هي واحدة من الطرق القليلة أن العينة وقياس الجزيئات خارج الخلية من قوي الأمن الداخلي من مستيقظا، تتحرك بحرية الحيوانات ومما يخدم كأداة مفيدة في علم الأعصاب البحوث الميدانية2،3. في هذا الأسلوب، وإدراجها في الدماغ ميكرودياليسيس تحقيقات مع الأغشية semipermeable و perfused مع المخزن المؤقت التروية بمعدل التدفق البطيء نسبيا (0.1-5 ميليلتر/دقيقة). خلال هذه التروية، جزيئات خارج الخلية في قوي الأمن الداخلي منتشر في التحقيق وفقا للتدرج تركيز سلبية وجمع دياليساتي. على الرغم من أن تركز هذه المقالة على أسلوب الذي عينة قوي الأمن الداخلي في الدماغ، المبدأ والطريقة يمكن تطبيقها على الأجهزة الأخرى بالتعديل المناسبة إذا لزم الأمر.
واستخدمت ميكرودياليسيس أول مرة في أوائل الستينات، ومنذ ثم أنها قد استخدمت على نطاق واسع لجمع جزيئات صغيرة بما في ذلك الأحماض الأمينية أو العصبية في الدماغ. ومع ذلك، وسعت الأخيرة التوافر التجاري لتحقيقات ميكرودياليسيس مع الوزن الجزيئي العالية قطع الأغشية (100 3 كاتشين MDa) تطبيقه على البروتينات أكبر نسبيا في قوي الأمن الداخلي، وكذلك4،،من56 ،7. الدراسات التي تستخدم هذه المجسات أدى إلى إيجاد تلك البروتينات مثل تاو أو α-سينوكلين الذي كان يعتقد منذ فترة طويلة أن تكون حصرية هيولى موجودة أيضا الناحية الفسيولوجية في قوي الأمن الداخلي4،،من58.
إحدى الصعوبات استخدام المسابير ميكرودياليسيس مع قطع كبيرة من الأغشية (كاتشين 1,000 عادة أكثر) أنهم أكثر عرضه ل ultrafiltration السوائل المفقودة بسبب الضغوط الداخلية المتراكمة في التحقيقات. وقد ميكرودياليسيس المسابر المستخدمة هنا بنية فريدة من نوعها لتجنب هذه المشكلة. سوف لا تكون تراكمت الضغط نتيجة لهذا الهيكل، وبالتالي ينبغي أن يدار ميكرودياليسيس مع هذه التحقيقات في وضع "دفع وجذب" باستخدام مضخة الحقن إلى نتخلل المسابر (= دفع) ومضخة اسطوانة/تحوي جمع dialysate القادمة من منفذ مسبار (= السحب) 9 (على الرغم من أنه يحتاج إلى مضخات الدفع والجذب، بسبب ضغط إلغاء تنفيس ثقوب موجودة في التحقيقات، النظام من الناحية الفنية فقط تحركها مضخة سحب). يبدأ بالجراحة ستيريوتاكسيك لغرس القنية دليل هذه المادة وتوضح هذه المقالة كيفية إعداد خطوط ميكرودياليسيس من أجل جمع قوي الأمن الداخلي من خلال تحقيقات ميكرودياليسيس مع كاتشين 1,000 وقف إنتاج الأغشية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

في فيفو ميكرودياليسيس تقنية قوية لتجميع قوي الأمن الداخلي من الحيوانات مستيقظا، ويتصرف بحرية استناداً إلى مبدأ الغسيل الكلوي. أن ميكرودياليسيس أسلوب المنشأة أن التدابير جزيئات صغيرة نسبيا بما في ذلك الأحماض الأمينية أو العصبية، فقد استخدم مؤخرا أيضا تقييم ديناميات الجزيئات الكبيرة في قوي الأمن الداخلي باستخدام المسابر مع ارتفاع الوزن الجزيئي قطع الأغشية. عند استخدام مثل هذه التحقيقات، وقد ميكرودياليسيس ليتم تشغيلها في وضع دفع وجذب لتجنب الضغوط التي تراكمت داخل التحقيقات. توفر هذه المقالة خطوة بخطوة البروتوكولات بما في ذلك الجراحة ستيريوتاكسيك وكيفية إعداد خطوط ميكرودياليسيس لتجميع البروتينات من قوي الأمن الداخلي. أثناء ميكرودياليسيس، يمكن إدارة الأدوية النظامية أو عن طريق التسريب المباشر إلى قوي الأمن الداخلي. وميكرودياليسيس عكس أسلوب لبث المركبات مباشرة إلى قوي الأمن الداخلي. إدراج العقاقير في المخزن المؤقت لنضح ميكرودياليسيس يسمح لهم منتشر في قوي الأمن الداخلي من خلال تحقيقات حين جمع قوي الأمن الداخلي في وقت واحد. ويبين المؤلف بقياس البروتين تاو كمثال، كيف تتغير مستوياته على حفز نشاط الخلايا العصبية بعكس ميكرودياليسيس من بيكروتوكسين. يرد وصف المزايا والقيود المفروضة على ميكرودياليسيس جنبا إلى جنب مع التطبيق الموسع عن طريق الجمع بين أساليب أخرى في فيفو .

أن تحفز أو تثبط نشاط الخلايا العصبية في عكس ميكرودياليسيس11،،من1213، بيكروتوكسين، خصم مستقبلات GABAA أو تيدرودوتاكسين، استخدمت مانع قناة نا+ . فقد ثبت أن إطلاق سراح تاو هو حفز زيادة نشاط الخلايا العصبية...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

وقد مكن في فيفو ميكرودياليسيس مجموعة من الجزيئات الموجودة في الدماغ السائل الخلالي (قوي الأمن الداخلي) من الحيوانات مستيقظا، ويتصرف بحرية. من أجل تحليل الجزيئات الكبيرة نسبيا في قوي الأمن الداخلي، المادة الحالية يركز تحديداً على البروتوكول ميكرودياليسيس باستخدام المسابر مع ارتفاع الوزن الجزيئي قطع الأغشية.

في فيفو يسبر ميكرودياليسيس طريقة لتجميع البروتينات خارج الخلية كبيرة من الدماغ السائل الخلالي مع الوزن الجزيئي عالية وقف إنتاج المواد الانشطارية

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث علم الأعصاب حول كيفية نقل الركيزة في مجال نقل الإشارات وإزالة النفايات في المساحات خارج الخلية في الدماغ. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بأخذ العينات والتخصيم للجزيئات الكبيرة خارج الخلية في السائل الخلالي أو ISF للحيوانات المستيقظة التي تتحرك بحرية. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع و إصبع، إزالة الشعر من الجمجمة من الماوس تخدير واستخدام أشرطة الأذن ومشابك الأنف لتأمين إصلاح الحيوان على محول.تطبيق مرهم على عيون الحيوان ووضع محول على جهاز stereotaxic. استخدام مشرط لجعل شق الجلد على مرجمة وإرفاق الحفر على المتلاعب من الإطار stereotaxic. خفض الحفر حتى يلامس بلطف لامدا وإعادة تنسيق DV من الحفر إلى الصفر.ثم، نقل الحفر إلى bregma لإعادة تعيين إحداثيات AP وML إلى الصفر. نقل الحفر من bregma إلى الإحداثي العمودي. خفض الحفر إلى الجمجمة وتعيين تنسيق DV إلى الصفر مرة أخرى.بعد تكرار الإجراء لإجراء ثالث، حفر حفرة دبر بعناية في إحداث الهدف، تليها ثقب الثاني على الجانب contralateral من العظام الجدارية. أدخل برغيًا عظميًا في الحفرة الثانية ووضع قطعة القفل من غطاء أنبوب microcentr microcentuge 1.5 ملليلتر على الجمجمة بحيث تكون ثقوب البور داخل الدائرة. المقبل، ووضع cannula دليل على الذراع أقصر من محول stereotaxic وربط كانولا مع الجوز غطاء.تعيين الذراع أطول من محول stereotaxic على المشبك القطب وأرفق الذراع على المتلاعب من جهاز stereotaxic. تدوير الجمعية ستيريو DV على ذراع المتلاعب من قبل 12 درجة ونقل قنية دليل إلى حفرة دبر. ثم، ببطء خفض كانولا دليل 1.2 ملليمتر في الدماغ.إضافة أسمنت الأسنان إلى التاج حتى يتم تغطية الجزء المعدني من قنية الدليل، والمسمار العظمي، وأي جمجمة مكشوفة وتأمينها والسماح للأسمنت بالجفاف. بعد 12 إلى 20 دقيقة، قم بإزالة محول الالكابر من المشبك الكهربائي، وإزالة الجوز الغطاء، واستبدال محول stereotaxic مع مسبار وهمية. ثم، refasten الجوز قبعة، والإفراج عن الماوس من جهاز stereotaxic، ومنزل الماوس وحده في قفص الفردية.قبل إعداد التحليل المجهري ، املأ حقنة واحدة قابلة للغسيل مع الماء المقطر واستخدم أنبوب viton لتوصيل الحقنة بمأخذ مسبار غسيل الكلى الدقيق. تغطية يدويا ثقوب تنفيس والاكتئاب بلطف المكبس حقنة لبث المسبار بالماء. تأكد من أن الماء يظهر في مدخل المسبار وأن هناك تسرب على سطح غشاء التحليل الدقيق.لتنشيط المسبار، غمر أغشية المسبار في 70-100٪ الإيثانول لمدة ثانيتين، تليها ضخ الماء المقطر الثاني. إرفاق إبرة اتصال إلى مدخل واحد وخط منفذ واحد وتحميل حقنة ثلاثة ملليلتر المتاح مع عازلة التسريب الطازجة. قم بتوصيل حقنة مجهزة بإبرة حادة النهاية إلى نهاية مدخل الأنبوب واستخدم مضخة حقنة لملء الأنبوب بأكمله بمخزنة النفخ.عندما يكون الأنبوب ممتلئًا، استبدل إبرة التوصيل بين خطوط المدخل ومنافذ التوصيل بمسبار التحليل الدقيق المنشط وجوز الغطاء وثب أنبوب الأسطوانة في أنبوب المنفذ على مضخة الأسطوانة. بدء ضخ حقنة في 10 ميكرولتر في الدقيقة الواحدة ومضخة الأسطوانة في 9.5-9.8 ميكرولتر في الدقيقة الواحدة. الآن وضع طوق حول عنق قنية دليل تخدير زرع الحيوانات وإزالة الجوز غطاء ومسبار وهمية.أدخل ببطء مسبار غسيل الكلى من خلال cannula دليل وربط الجوز الغطاء. ثم، ضع الماوس في قفص متصل بنظام حر الحركة وربط الماوس مع ذوي الياقات البيضاء. بعد ساعة واحدة على الأقل، وقف متتالية المضخة الدوارة ومضخة حقنة، وإعادة تشغيل المضخات مع مضخة حقنة تعيين إلى 20٪ أسرع من مضخة الأسطوانة ووضع نهاية حرة من أنابيب منفذ على جامع جزء المبرد لجمع الدماغ ISF.عندما تم الحصول على وحدة التخزين التجريبية المناسبة، إزالة التحقيق ومعالجة الانتعاش الماوس كما أظهرت للتو. بما يتفق مع الملاحظات السابقة، عندما يتم إعطاء 50 بيكروسومين ميكرومولار عن طريق التحليل المجهري العكسي كما هو موضح في الفئران C57B6J مستيقظا، لوحظ زيادة في مستويات تاو الداخلية بين الخلالي مقارنة بمستويات تقاس في الحيوانات تعامل مع التحكم في السيارة. بالإضافة إلى إدارات الأدوية، يمكن الجمع بين التحليل الدقيق مع طرق أخرى في الجسم الحي مثل تسجيل EEG أو optogenetics للإجابة على أسئلة إضافية حول كيفية تأثير نشاط الخلايا العصبية تركيز الركيزة في ISF.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

الوحشي قرع السائل : نموذج لإصابات في الدماغ لدى الفئران

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

تسجيل على نطاق واسع اطقم متعلق بالخلايا العصبية مع مجسات للسيليكون في الجرذ خدر

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

على نطاق واسع التسجيل من الخلايا العصبية بواسطة مجسات سيليكون المنقول في يتصرفون القوارض

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

تصوير الأعصاب وظيفية عن طريق الموجات فوق الصوتية تعطيل حاجز الدم في الدماغ والتصوير بالرنين المغناطيسي المنغنيز معززة لل

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

الحصين حقن مكروي الأنسولين و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; Microdialysis أثناء اختبار الذاكرة المكانية

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

تصميم وتصنيع وخفيفة الوزن، قابل للتعديل تحقيقات متعددة القطب للتسجيلات الكهربية في الفئران

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

سريع<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين باستخدام قليل النوكليوتيد تحقيقات على مسبوقة لامتصاص العرق دماغ الفئران مع السيروتونين متلازمة

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

في الوقت الحقيقي الرحلان الشاردي مع تيتراميثيلامونيوم لكمية حجم الكسر و تورتوسيتي من الدماغ خارج الخلية الفضاء

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

تحسين تطبيق أمين ديكستران بيوتينيلاتيد عالية الوزن الجزيئي للإسقاط ثالاموكورتيكال تتبع في الفئران

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...