Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af '' licensbetaling for videnskabelig forskning på Innovative områder (hjernen Protein aldring og demens Control)(15H01552) fra MEXT og licensbetaling for unge forskere (B) (16K 20969). Forfatteren takker Dr. David M. Holtzman og Dr. John R. Cirrito for den tekniske råd under udviklingen af denne metode.

Alle dyreforsøg blev gennemgået og godkendt af institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Graduate School of Medicine ved University of Tokyo.
1. præ-kirurgisk Procedure
<ol><li>Før du starter kirurgi, tørre alt med 70% ethanol til at opretholde sterile forhold. Termisk støtte ved hjælp af en varmepude anbefales.</li>
	<li>Bedøver mus ved intraperitoneal injektion af Kloral hydrat (400 mg/kg). Bekræft anesthetization ved at udføre en tå knivspids. Brug af meloxicam SR på i...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

Mikrodalyse med høj molekylvægt afskåret membraner har skal betjenes af en push-pull-tilstand, derfor er det kritisk, at strømningshastigheden er præcis og konstant. Unøjagtighed i strømningshastigheder kan være årsag til luft boble generation og inkonsekvens i stikprøven koncentration. Hvis strømmen er strid, check alle forbindelser for lækage. Hvis problemet stadig fortsætter, kan det være nødvendigt at re-starte med nye sonder og tubings.
Microdilaysis sonder er løbende perf...

ISF omfatter 15-20% af total hjernen volumen og tilbyder en mikromiljø kritisk for signaltransduktion, substrat transport og affald clearance1. Evne til at indsamle ISF fra levende dyr vil derfor tildele større konsekvenser for forskellige biologiske processer samt sygdom mekanisme. In vivo mikrodalyse er en af de få metoder at prøve og kvantificere ekstracellulære molekyler fra ISF fra vågen, frit flytte dyr og fungerer dermed som et nyttigt redskab i neuroscience research felt2,3. I denne metode, mikrodalyse sonder med semipermeable membraner er indsat i hjernen og perfunderet med perfusion buffer på den relativt langsomme strømningshastighed (0,1-5 µL/min). Under denne perfusion ekstracellulære molekyler i ISF passivt diffuse ind i sonden efter koncentration gradient og indsamle så en dialysat. Selv om denne artikel fokuserer på metode til prøven ISF i hjernen, kan både princippet og metoden anvendes til andre organer ved passende ændring hvis nødvendigt.
Mikrodalyse var først ansat i begyndelsen af 1960 ' erne, og siden så det har været flittigt brugt til at indsamle små molekyler herunder aminosyrer eller neurotransmittere i hjernen. Men de seneste kommerciel tilgængelighed af mikrodalyse sonder med høj Molekylær vægt afskåret membraner (100 kDa-3 MDa) har udvidet sin ansøgning til relativt større proteiner i ISF samt4,5,6 ,7. Undersøgelser ved hjælp af disse sonder har ført til konklusionen at proteiner såsom tau eller α-synuclein, var længe menes at være eksklusiv cytoplasmatisk er også fysiologisk stede i ISF4,5,8.
En af vanskelighederne ved hjælp af mikrodalyse sonder med store cut off membraner (typisk over 1.000 kDa) er, at de er mere modtagelige for ultrafiltrering væsketab på grund af den indre pres akkumuleret i sonderne. Mikrodalyse sonder anvendes her har en unik struktur for at undgå dette problem. Trykket vil ikke blive bygget på grund af denne struktur, således mikrodalyse med disse sonder bør drives i en "push-pull" tilstand ved hjælp af en sprøjte pumpe til perfuse sonder (= push) og en rulle/peristaltisk pumpe til at indsamle den dialysat kommer fra sonden outlet (= pull) 9 (selv om det er nødvendigt både push og pull pumper, på grund af pres aflyser luftskrue huller i sonder, systemet er teknisk kun drevet af pull pumpe). Denne artikel begynder med en guide kanyle implantation stereotaxisk kirurgi og beskriver, hvordan du konfigurerer mikrodalyse linjer for at indsamle ISF gennem mikrodalyse sonder med 1.000 kDa cut-off membraner.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

In vivo mikrodalyse er en effektiv teknik til at indsamle ISF fra vågen, frit opfører dyr baseret på et princip, dialyse. Mens mikrodalyse er en etableret metode, der måler relativt små molekyler herunder aminosyrer eller neurotransmittere, har det været for nylig brugt også vurdere dynamikken i større molekyler i ISF ved hjælp af sonder med høj molekylvægt afskåret membraner. Ved hjælp af sådanne sonder, har mikrodalyse til at køre i en push-pull-tilstand for at undgå pres akkumuleret i sonderne. Denne artikel indeholder trinvise protokoller inklusive stereotaxisk kirurgi og opsætning af mikrodalyse linjer til at indsamle proteiner fra ISF. Under mikrodalyse, kan medicin administreres enten systemisk eller ved direkte infusion i ISF. Omvendt mikrodalyse er en teknik til at indgyde direkte forbindelser i ISF. Optagelse af stoffer i mikrodalyse perfusion buffer mulighed at diffuse i ISF gennem sonderne mens samtidig indsamling ISF. Ved måling af tau protein som eksempel, viser forfatteren, hvordan dens niveauer er ændret ved stimulerende neuronal aktivitet af reverse mikrodalyse af picrotoxin. Fordele og begrænsninger af mikrodalyse er beskrevet sammen med det udvidede program ved at kombinere andre i vivo -metoder.

For at stimulere eller hæmme neuronal aktivitet i reverse mikrodalyse11,12,13, picrotoxin, GABAA receptor antagonist eller tetrodotoxin, Na+ kanal blokker har været brugt. Det har vist sig at tau frigivelse er stimuleret af stigning af neuronal aktivitet13,14. Overensstemmelse med disse tidligere observationer, nå...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

In vivo mikrodalyse har aktiveret samling af molekyler findes i hjernen interstitiel væske (ISF) fra vågen, frit opfører dyr. For at analysere forholdsvis store molekyler i ISF, fokuserer den nuværende artikel specifikt på mikrodalyse-protokollen ved hjælp af sonder med høj molekylvægt afskåret membraner.

In Vivo Mikrodalyse metode til at indsamle store ekstracellulære proteiner fra hjernen interstitiel væske med høj Molekylær vægt Cut-off sonder

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i neurovidenskab forskning område om, hvordan signal transduktion substrat transport og en affald clearance forekomme i hjernen ekstracellulære rum. Den største fordel ved denne teknik er, at den gør det muligt at udtage prøver og kvantificere store ekstracellulære molekyler i den interstitielle væske eller ISF af vågne frit bevægende dyr. Efter at have bekræftet en manglende reaktion på tå knivspids, fjerne håret fra kraniet af en bedøvet mus og bruge ørestænger og en næse klemme til sikkert fix dyret på en adapter.Påfør salven i dyrets øjne, og sæt adapteren på det stereotaxiske apparat. Brug en skalpel til at lave en hud indsnit sagideligt over kraniet og vedhæfte en boremaskine på manipulator af stereotaxic ramme. Sænk boret, indtil den forsigtigt rører lambda og nulstille DV-koordinaten for boret til nul.Flyt derefter boret til bregma for nulstilling af AP- og ML-koordinaterne. Flyt boret fra bregma til den lodrette koordinat. Sænk boret til kraniet og sæt DV-koordinaten til nul igen.Efter at proceduren for en tredje koordinat gentages, bores et grathul omhyggeligt ved målkoordinaten efterfulgt af endnu et hul på den kontralaterale side af parietalknoglen. Sæt en knogleskrue ind i det andet hul og placer låsestykket fra et 1,5 milliliter mikrocentrifuge rørlåg på kraniet, så grathullerne er inden for cirklen. Dernæst skal du placere en guide kanyle på den kortere arm af stereotaxic adapter og fastgøre kanylen med en hætte møtrik.Indstil den længere arm på den stereoaxe adapter på elektrodeklemmen, og fastgør armen på manipulatoren på det stereotaxiske apparat. Drej DV's stereoskateaksiske enhed på manipulatorarmen med 12 grader, og flyt guidedylen til grathullet. Derefter langsomt sænke guide kanyle 1,2 millimeter ind i hjernen.Tilsæt dental cement til kronen, indtil metaldelen af guide kanylen, knogleskruen og eventuelle udsatte kranium er dækket og sikret og lad cementen tørre. Efter 12 til 20 minutter skal du fjerne stereotaxe adapteren fra elektrodeklemmen, fjerne hættemømningen og udskifte den stereoaxe adapter med en attrapsonde. Derefter skal du fastgøre hætten møtrik, slippe musen fra stereotaxic apparat, og hus musen alene i et individuelt bur.Før mikrodialysesættes, fyldes der en engangsnillilitersprøjte med destilleret vand, og der anvendes et vitonrør til at forbinde sprøjten til udløbet af en mikrodialysesonde. Dæk udluftningshullerne manuelt, og tryk forsigtigt sprøjtestemplet ned for at indgyde sonden med vand. Bekræft, at der forekommer vand i sondeindtaget, og at der er lækage på mikrodialysemembranens overflade.For at aktivere sonden nedsænkes sondemembranerne i 70-100%ethanol i to sekunder efterfulgt af en anden destilleret vandinfusion. Fastgør en tilslutningsnål til en indløbs- og en udløbsledning, og læg en engangssprøjte på tre milliliter med frisklavet perfusionsbuffer. Tilslut en sprøjte udstyret med en stump-ende nål til indløb ende af slangen og bruge en sprøjte pumpe til at fylde hele slangen med perfusion buffer.Når røret er fyldt, skal tilslutningsnålen udskiftes mellem indløbs- og udløbsledningerne med den aktiverede mikrodialysesonde og hættemøtrikken, og der monteres et rullerør i udløbsslangen på en rullepumpe. Start sprøjtepumpen med 10 mikroliter i minuttet og rullepumpen ved 9,5-9,8 mikroliter i minuttet. Placer nu kraven rundt om halsen på det bedøvede guide kanyleopererede dyr og fjern hætten møtrik og dummy sonde.Sæt langsomt mikrodialysesonden gennem guidedylen og fastgør hættemøtrikken. Derefter placere musen i et bur forbundet til en fritgående system og binde musen med kraven. Efter mindst en time, sekventielt stoppe rullepumpen og sprøjten pumpen, genstarte pumperne med sprøjten pumpen sat til 20% hurtigere end rullepumpen og placere den frie ende af udløbsslangen på en nedkølet fraktion opkøber til at indsamle hjernen ISF.Når det relevante forsøgsvolumen er opnået, fjernes sonden, og musen skal håndteres som netop påvist. I overensstemmelse med tidligere observationer observeres der en stigning i interstitiel endogen tau-niveauer sammenlignet med niveauer, der måles hos dyr behandlet med en køretøjskontrol, når 50 mikromolar Picrotoxin administreres via omvendt mikrodialyse som påvist hos vågne C57B6J-mus. Ud over lægemiddeladministrationer kan mikrodialyse kombineres med andre in vivo-metoder som EEG-optagelse eller optogenetics for at besvare yderligere spørgsmål om, hvordan neuronal aktivitet påvirker substratkoncentrationen i ISF.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Storstilet Registrering af neuroner ved Flytbare Silicon Probes at opføre sig Gnavere

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograd fluorescensmærkning Tillader Målrettet Extracellular Single-unit Optagelse fra Identificerede Neuroner<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionel Neuroimaging Med Ultrasonic blod-hjerne barrieren forstyrrelser og mangan-forstærket MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampale Insulin Mikroinjektion og<em&gt; In vivo</em&gt; Mikrodialyse Under Spatial Memory Test

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

Design og fabrikation af Ultralight Vægt, Justerbare multi-elektrode Sonder til elektrofysiologiske målinger i mus

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Hurtig<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering anvendelse af oligonukleotidprober på Paraformaldehyd-præfikset Brain af rotter med serotonin syndrom

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Real-time iontophorese med tetramethylammonium til kvantificering af volumen fraktion og tortuosity af hjernens ekstracellulære rum

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

Forbedring af anvendelsen af høj molekylvægt Biotinylated Dextran Amin for Thalamocortical projektion sporing i rotter

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...