Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door '' Grant-in-Aid voor wetenschappelijkonderzoek op innovatieve gebieden (hersenen eiwitten veroudering en dementie Control)(15H01552) van MEXT en Grant-in-Aid voor jonge wetenschappers (B) (16K 20969). De auteur dankt Dr. David M. Holtzman en Dr. John R. Cirrito voor de technische adviezen tijdens de ontwikkeling van deze methode.

Alle dierlijke studies werden herzien en goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik van het Comité van de Graduate School of Medicine aan de Universiteit van Tokio.
1. pre-operatieve ingreep
<ol><li>Voordat u begint chirurgie, veeg alles met 70% ethanol steriele voorwaarden te handhaven. Thermische ondersteuning met behulp van een verwarming pad wordt aanbevolen.</li>
	<li>Anesthetize de muizen door intraperitoneale injectie van Chloraalhydraat (400 mg/kg). Afstomping bevest...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

Microdialysis met ultrahoog moleculair gewicht afgesneden membranen moet worden bediend door een push-pull-modus, dus is het essentieel dat het debiet nauwkeurig en constant is. De onnauwkeurigheid in de stroomsnelheid kunnen de oorzaak van air bubble generatie en inconsistentie in de concentratie van het monster. Als de stroom niet consistent is, controleert u alle verbindingen op lekkage. Als het probleem nog steeds aanhoudt, is het mogelijk dat het nodig om opnieuw te beginnen met nieuwe sondes en tubings.
<p clas...

ISF bestaat uit 15-20% van de totale hersenvolume en biedt een communicatie cruciaal voor signaaltransductie, substraat vervoer en afval goedkeuring1. Daarom zullen de mogelijkheid van het ISF verzamelen van levende dieren verlenen meer gevolgen voor verschillende biologische processen, alsmede ziekte mechanisme. In vivo microdialysis is een van de enkele methoden die steekproef en kwantificeren van extracellulaire moleculen van ISF van wakker, vrij bewegende dieren en daardoor fungeert als een nuttig hulpmiddel in neurowetenschap onderzoek veld2,3. Bij deze methode, microdialysis sondes met semipermeable membranen zijn ingevoegd in de hersenen en geperfundeerd met perfusie buffer op de relatief trage stroomsnelheid (0.1-5 µL/min). Tijdens deze perfusie, extracellulaire moleculen in ISF passief diffuse in de sonde volgens het verloop van de concentratie en verzamelen als een dialysate. Hoewel dit artikel richt zich op de methode om te monster ISF in de hersenen, kunnen zowel het beginsel als de methode worden toegepast op andere organen door de juiste wijziging indien nodig.
Microdialysis werkte eerst in de vroege jaren 1960, en sinds dan het uitgebreid gebruikt is voor het verzamelen van kleine molecules, zoals aminozuren of neurotransmitters in de hersenen. Echter, recente commerciële beschikbaarheid van microdialysis sondes met hoog-moleculair gewicht afgesneden membranen (100 kDa-3 MDa) heeft uitgebreid de toepassing ervan op relatief grotere proteïnen in ISF evenals4,5,6 ,7. De studies met behulp van deze sondes heeft geleid tot de bevinding dat eiwitten zoals tau of α-synuclein die werden lang beschouwd als exclusieve cytoplasmatische zijn ook fysiologisch aanwezig in ISF4,5,8.
Een van de problemen microdialysis sondes met grote afgesneden membranen (meestal meer dan 1.000 kDa) is dat ze gevoeliger voor ultrafiltratie vocht verlies als gevolg van de innerlijke druk opgebouwd in de sondes. Microdialysis sondes gebruikt hier hebben een unieke structuur om te voorkomen dat dit probleem. De druk zal niet worden opgebouwd als gevolg van deze structuur, dus microdialysis met deze sondes moet worden beheerd in een modus van de "push-pull" een spuitpomp met perfuse de sondes (= druk) en een roller/peristaltische pomp voor het verzamelen van de dialysate komen uit het stopcontact sonde (= Trek) 9 (hoewel het zowel push- en pull-pompen, als gevolg van druk annuleren luchtgaten aanwezig in de sondes, moet het systeem is technisch alleen aangestuurd door de pull-pomp). Dit artikel begint met de stereotaxic operatie een gids canule innesteling en wordt beschreven hoe u microdialysis regels instellen om te verzamelen van ISF via microdialysis sondes met 1.000 kDa cut-off membranen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

In vivo microdialysis is een krachtige techniek voor het verzamelen van ISF van wakker, vrij-gedragen dieren gebaseerd op het beginsel van een dialyse. Terwijl microdialysis een gevestigde methode die relatief kleine molecules, zoals aminozuren of neurotransmitters maatregelen is, is het onlangs gebruikt om te beoordelen ook dynamica van grotere moleculen in ISF sondes met ultrahoog moleculair gewicht afgesneden membranen. Op het gebruik van dergelijke sondes, moet microdialysis worden uitgevoerd in een push-pull-modus om te voorkomen dat druk opgebouwd binnenkant van de sondes. Dit artikel bevat stapsgewijze protocollen zoals stereotaxic chirurgie en microdialysis lijnen instellen voor het verzamelen van eiwitten van ISF. Tijdens microdialysis, kunnen drugs worden toegediend hetzij systemisch, hetzij door directe infusie in ISF. Omgekeerde microdialysis is een techniek om direct inblazen ISF verbindingen. Integratie van drugs in de microdialysis perfusie buffer hen in staat stelt om te verspreiden in ISF via de sondes terwijl gelijktijdig het verzamelen van ISF. Door het meten van tau-eiwit als voorbeeld, toont de auteur aan hoe haar niveau op stimulerende Neuronale activiteit worden gewijzigd door omgekeerde microdialysis van picrotoxin. Voordelen en beperkingen van microdialysis worden beschreven samen met de uitgebreide toepassing door het combineren van andere methoden in vivo .

Om te stimuleren of remmen Neuronale activiteit in omgekeerde microdialysis11,12,13, picrotoxin, GABAA receptor antagonist of tetrodotoxine, nb+ kanaal blocker zijn gebruikt. Het is aangetoond dat tau release wordt gestimuleerd door toename van neuronale activiteit13,14. Overeenstemming met dit eerdere opmerkingen, w...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

In vivo microdialysis heeft ingeschakeld collectie van moleculen aanwezig in de interstitiële vloeistof van de hersenen (ISF) van wakker, vrij-gedragen dieren. Om te analyseren relatief grote moleculen in ISF, het huidige artikel richt zich specifiek op het microdialysis protocol sondes met ultrahoog moleculair gewicht afgesneden membranen.

In Vivo Microdialysis methode voor het verzamelen van grote extracellulaire eiwitten van de interstitiële vloeistof van de hersenen met hoog-moleculair gewicht Cut-off Probes

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de neurowetenschappelijke onderzoekssector over hoe signaal transductie substraat transport en een afval klaring optreden in de hersenen extracellulaire ruimten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de bemonstering en kwantificering van grote extracellulaire moleculen in de Interstitiële Vloeistof of ISF van wakkere vrij bewegende dieren mogelijk maakt. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op teen knijpen, verwijder het haar uit de schedel van een verdoofde muis en gebruik de oorspen en een neusklem om het fix dier veilig op een adapter.Breng zalf aan op de ogen van het dier en plaats de adapter op het stereotaxic-apparaat. Gebruik een scalpel om een huidincisie sagittally over de schedel te maken en bevestig een boor op de manipulator van het stereotaxic frame. Laat de boor zakken totdat het lambda zachtjes raakt en zet de DV-coördinaat van de boor op nul.Verplaats vervolgens de boor naar bregma voor het resetten van de AP- en ML-coördinaten naar nul. Verplaats de boor van bregma naar de verticale coördinaat. Laat de boor naar de schedel zakken en zet de DV-coördinaat weer op nul.Na het herhalen van de procedure voor een derde coördinaat, boor een braamgat zorgvuldig op de doelcoördinaat, gevolgd door een tweede gat aan de contralaterale kant van het pariëtale bot. Steek een botschroef in het tweede gat en plaats het vergrendelingsstuk van een 1,5 milliliter microcentrifugebuisdeksel op de schedel, zodat de braamgaten zich binnen de cirkel bevinden. Plaats vervolgens een geleidekanule op de kortere arm van de stereotaxic-adapter en bevestig de canule met een dopmoer.Stel de langere arm van de stereotaxic adapter op de elektrodeklem en bevestig de arm op de manipulator van het stereotaxic-apparaat. Draai de DV stereotaxic montage op de manipulator arm met 12 graden en beweeg de geleide canule naar de braam gat. Dan, langzaam lager de gids canule 1,2 millimeter in de hersenen.Voeg tandcement toe aan de kroon totdat het metalen deel van de geleidekanule, de botschroef en elke blootgestelde schedel zijn bedekt en bevestigd en laat het cement drogen. Verwijder na 12 tot 20 minuten de stereotaxic-adapter uit de elektrodeklem, verwijder de dopmoer en vervang de stereotaxic-adapter door een dummy-sonde. Dan, refasten de dop moer, laat de muis van de stereotaxic apparaat, en huis de muis alleen in een individuele kooi.Voordat u de microdialyse opzet, vult u een wegwerpspuit van één milliliter met gedestilleerd water en gebruikt u een vitonbuis om de spuit aan te sluiten op de uitlaat van een microdialysesonde. Bedek handmatig de ventilatiegaten en druk de spuitzuiger voorzichtig in om de sonde met water te bezielen. Controleer of er water in de sondeinlaat voorkomt en dat er lekkage is op het oppervlak van het microdialysemembraan.Om de sonde te activeren, dompelt u de sondemembranen gedurende twee seconden onder in 70-100%-ethanol, gevolgd door een tweede gedestilleerde waterinfusie. Bevestig een verbindingsnaald aan één inlaat en één uitlaatlijn en laad een wegwerpspuit van drie milliliter met vers bereide perfusiebuffer. Sluit een spuit uitgerust met een stompe naald aan op het inlaateinde van de slang en gebruik een spuitpomp om de hele slang te vullen met perfusiebuffer.Wanneer de buis vol is, vervang de verbindingsnaald tussen de inlaat- en uitlaatlijnen door de geactiveerde microdialysesonde en de dopmoer en monteer een rolbuis in de uitlaatbuizen op een rolpomp. Start de spuitpomp met 10 microliter per minuut en de rolpomp met 9,5-9,8 microliter per minuut. Plaats nu de halsband rond de hals van de verdoofde geleide canule geïmplanteerd dier en verwijder de dop moer en dummy sonde.Steek de microdialysesonde langzaam door de geleide canule en maak de dopmoer vast. Plaats vervolgens de muis in een kooi die is aangesloten op een vrij bewegend systeem en koppel de muis aan de kraag. Na ten minste een uur, achtereenvolgens stoppen met de rolpomp en de spuitpomp, het opnieuw opstarten van de pompen met de spuit pomp ingesteld op 20% sneller dan de rolpomp en plaats het vrije uiteinde van de uitlaat slang op een gekoelde fractie collector om de hersenen ISF te verzamelen.Wanneer het juiste experimentele volume is verkregen, verwijdert u de sonde en behandelt u het herstel van de muis zoals zojuist is aangetoond. In overeenstemming met eerdere waarnemingen, wanneer 50 micromolar Picrotoxine wordt toegediend via omgekeerde microdialyse zoals aangetoond bij wakkere C57B6J-muizen, wordt een toename van interstitiële endogene tau-niveaus waargenomen in vergelijking met niveaus die worden gemeten bij dieren die met een voertuigcontrole worden behandeld. Naast medicijnadministraties kan microdialyse worden gecombineerd met andere in vivo methoden zoals EEG-opname of optogenetica om aanvullende vragen te beantwoorden over hoe neuronale activiteit de substraatconcentratie in ISF beïnvloedt.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Laterale Fluid Percussie: Model van traumatisch hersenletsel bij muizen

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Opname Grootschalige Neuronale Ensembles met Silicon Probes in de verdoofde Rat

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Grootschalige Opname van Neuronen door Movable Silicon Probes in Behaving Knaagdieren

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescerende Labeling Maakt Gerichte Extracellulair Single-unit Opnemen van geïdentificeerde neuronen<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Insuline en hippocampale Microinjection<em&gt; In vivo</em&gt; Microdialyse Tijdens ruimtelijk geheugen testen

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

Ontwerp en de fabricage van Ultralight Gewicht, verstelbare Multi-elektrode Probes voor elektrofysiologische registraties in Muizen

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Snel<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie met behulp van oligonucleotideprobes op Paraformaldehyde vooraf hersenen van ratten met Serotonine Syndroom

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Real-time iontophorese met tetramethylammonium om volume-fractie en tortuositeit van de extracellulaire ruimte van de hersenen te kwantificeren

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

Verbetering van de toepassing van ultrahoog moleculair gewicht biotinyleerd Dextran Amine voor Thalamocortical projectie traceren in de Rat

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...