Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי ' מענק הסיוע למחקר מדעי בתחומים חדשניים (חלבון להזדקנות המוח, דמנציה Control)(15H01552) MEXT, מענק הסיוע עבור צעירים מדענים (B) (16K 20969). המחבר תודה ד ר דוד מ הולצמן, ד ר ג'ון ר' Cirrito על עצות טכניות במהלך הפיתוח של שיטה זו.

מחקרים שנעשו בבעלי חיים כל היו נבדקו ואושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה בוגר בית הספר לרפואה של אוניברסיטת טוקיו.
1. מראש הליך כירורגי
<ol><li>לפני תחילת הניתוח, למחוק את הכל עם 70% אתנול כדי לשמור על תנאים סטריליים. תמיכה תרמי באמצעות כרית החימום מומלץ.</li>
	<li>...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

Microdialysis עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך ממברנות להפעלה על-ידי מצב מו-דו, וכך זה קריטי כי קצב הזרימה הוא מדויק וקבוע. אי-הדיוק את שיעורי זרימת יכול להיות הגורם של דור בועות אוויר, חוסר עקביות הריכוז לדוגמה. אם הזרם הוא לא עקבי, בדוק את כל חיבורי עבור דליפה. אם הבעיה עדיין נמשכת, ייתכן צורך להתחיל מח...

הקרן כוללת 15-20% נפח המוח הכולל, מציע microenvironment קריטי עבור אותות, ולהזמנת המצע פסולת סיווג1. לכן, היכולת של איסוף הקרן מבעלי חיים יספקו יותר השלכות על תהליכים ביולוגיים שונים, כמו גם מנגנון המחלה. Microdialysis in vivo הוא אחד מהשיטות הדגימה לכמת חוץ-תאי המולקולות של הקרן מ ער, בחופשיות חיות ו ובכך משמשת כלי שימושי2,בשדה מחקר מדעי המוח3. בשיטה זו, microdialysis הגששים עם ממברנות semipermeable מוכנס במוח, perfused עם מאגר זלוף קצב זרימה איטית יחסית (0.1-5 µL/min). במהלך זה זלוף, חוץ-תאי המולקולות של הקרן פסיבי לפזר לתוך המכשיר על פי מעבר הצבע ריכוז ולאסוף כמו dialysate. למרות מאמר זה מתמקד בשיטת מדגם הקרן במוח, העיקרון והן השיטה ניתן להחיל לאיברים אחרים על-ידי שינוי המתאים במידת הצורך.
Microdialysis הועסק לראשונה בשנות ה-60 המוקדמות, ומאז ואז היא בשימוש נרחב כדי לאסוף את מולקולות קטנות כולל חומצות אמינו או עצביים במוח. עם זאת, לאחרונה הזמינות המסחרית של הגששים microdialysis עם משקל גבוה-מולקולרי לחתוך ממברנות (kDa-3 100 מד א) האריך היישום שלה יחסית גדול יותר חלבונים ב- ISF כמו גם4,5,6 ,7. המחקרים באמצעות רגשים אלו הוביל הממצא הזה חלבונים כגון טאו או α-synuclein זה זמן נחשבו בלעדי cytoplasmic נוכחות גם הן מבחינה פיזיולוגית ב- ISF-4,-5,-8.
אחד הקשיים בעזרת microdialysis הגששים גדול לחתוך ממברנות (בדרך כלל מעל 1,000 kDa) היא כי הם רגישים יותר אולטראפילטרציה אובדן נוזלים עקב הלחץ הפנימי שמצטבר את הגששים. הגששים Microdialysis המשמש כאן יש מבנה ייחודי כדי להימנע מבעיה זו. הלחץ לא יבנה בשל מבנה זה, ובכך microdialysis עם הגששים אלה צריך להיות מופעל במצב "push-pull" באמצעות מזרק משאבה כדי perfuse את הגששים (= דחיפה), משאבה סחרור/רולר כדי לאסוף את מגיע dialysate מהשפך בדיקה (= משיכה) 9 (למרות שצריך לדחוף ולמשוך משאבות, בעקבות לחץ ביטול חורים פתח ב הגששים, המערכת טכנית רק מונעת על ידי משיכה המשאבה). מאמר זה מתחיל עם הניתוח stereotaxic של השרשה בצינורית מדריך, מאמר זה מתאר כיצד להגדיר קווים microdialysis כדי לאסוף הקרן באמצעות microdialysis הגששים עם 1,000 kDa ניתוק ממברנות.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

In vivo microdialysis היא טכניקה חזקה כדי לאסוף את הקרן מבעלי ער, מתנהג באופן חופשי המבוסס על עיקרון דיאליזה. בעוד microdialysis היא שיטה ותיקה המודד מולקולות קטנות יחסית, כולל חומצות אמינו או נוירוטרנסמיטורים, לאחרונה שהשתמשו בה להעריך גם את הדינמיקה של מולקולות גדולות יותר של הקרן באמצעות רגשים עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך ממברנות. בעת שימוש כזה הגששים, microdialysis יש לפעול במצב שכיבות למשוך כדי למנוע לחץ שהצטברו בתוך הגששים. מאמר זה מספק צעד אחר צעד פרוטוקולים כולל ניתוח stereotaxic וכיצד להגדיר קווים microdialysis לאסוף חלבונים מן הקרן. במהלך microdialysis, סמים יכול להינתן או מערכתית או על ידי אינפוזיה ישירה לתוך הקרן. Microdialysis הפוכה היא טכניקה להחדיר ישירות תרכובות לתוך הקרן. הכללת תרופות במאגר זלוף microdialysis מאפשר להם מפוזרת לתוך הקרן באמצעות הגששים תוך איסוף בו זמנית הקרן. על ידי מדידת חלבון טאו כדוגמה, המחבר מציג כמה רמות שלה השתנו בעת פעילות. עצבית מגרה על-ידי microdialysis ההפוך של picrotoxin. היתרונות והמגבלות של microdialysis מתוארים יחד עם הבקשה המורחבת על ידי שילוב של שיטות אחרות ויוו .

כדי לעורר או לעכב פעילות. עצבית הפוכה microdialysis11,12,13, picrotoxin, אנטגוניסט GABAA או טטרודוטוקסין, שימשו חוסם ערוץ Na+ . הוכח, כי שחרור טאו הוא מגורה על ידי הגדלת פעילות. עצבית13,14. בקנה אחד ע?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Microdialysis in vivo אפשרה אוסף של מולקולות נוכח נוזל בין-תאי המוח (הקרן) מבעלי ער, להתנהג בחופשיות. על מנת לנתח מולקולות גדולות יחסית של הקרן הלאומית למדע, המאמר הנוכחי מתמקד במיוחד בפרוטוקול microdialysis באמצעות רגשים עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך את הממברנות.

אין ויוו Microdialysis שיטת איסוף גדול חלבונים חוץ-תאית נוזל בין-תאי המוח עם משקל מולקולרי גבוה ניתוק רגשים

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר במדעי המוח על איך אות טרנסדוקציה מצע תחבורה פינוי פסולת להתרחש בחללים חוץ תאיים במוח. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת דגימה וכימות של מולקולות חוץ-תאיות גדולות בנוזל הבין-תאי או ב- ISF של בעלי חיים ערים הנעים בחופשיות. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, הסר את השיער מהגולגולת של עכבר הרדמה ולהשתמש בפסי האוזן ומהדק האף כדי לתקן את החיה בבטחה על מתאם.יש למרוח משחה על עיני החיה ולהחיל את המתאם על המנגנון הסטריאוטקסי. השתמש אזמל כדי להפוך חתך בעור sagittally על הגולגולת ולצרף מקדחה על המניפולטור של מסגרת סטריאוטוקסית. מנמיך את התרגיל עד שהוא נוגע בעדינות lambda ולאפס את קואורדינטת DV של התרגיל לאפס.לאחר מכן, הזיזו את התרגיל ל-bregma לאיפוס קואורדינטות AP ו- ML לאפס. העבר את התרגיל מברגמה לתיאום האנכי. מנמיך את המקדחה לגולגולת והגדר את קואורדינטת DV לאפס שוב.לאחר חזרה על ההליך עבור קואורדינטת שלישית, לקדוח חור בר בזהירות על קואורדינטת היעד, ואחריו חור שני בצד הנגדי של עצם קודקודית. הכנס בורג עצם לתוך החור השני והצב את פיסת הנעילה ממכסה צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר על הגולגולת, כך חורי בר נמצאים בתוך המעגל. לאחר מכן, מניחים cannula מדריך על הזרוע הקצרה יותר של מתאם סטריאוטוקסי להדק את cannula עם אגוז כובע.הגדר את הזרוע הארוכה יותר של המתאם הסטריאוטוקסי על מהדק האלקטרודה והצמד את הזרוע על המניפולטור של המנגנון הסטריאוטקסי. סובב את ההרכבה הסטריאוטוקסית DV על זרוע המניפולטור ב -12 מעלות והזז את המדריך cannula לחור בר. לאחר מכן, לאט להוריד את המדריך cannula 1.2 מילימטרים לתוך המוח.מוסיפים מלט דנטלי לכתר עד שחלק המתכת של צינורית המדריך, בורג העצם וכל גולגולת חשופה מכוסים ומאובטחים ומאפשרים למלט להתייבש. לאחר 12 עד 20 דקות, הסר את המתאם הסטריאוטוקסי ממהדק האלקטרודה, הסר את אגוז המכסה והחלף את המתאם הסטריאוטקסי בבדיקה דמה. לאחר מכן, refasten אגוז כובע, לשחרר את העכבר מן המנגנון הסטריאוטוקסי, והאוס העכבר לבד בכלוב בודד.לפני הגדרת microdialysis, למלא מזרק חד פעמי אחד מיליליטר עם מים מזוקקים ולהשתמש צינור ויטון כדי לחבר את המזרק לשקע של בדיקה microdialysis. מכסים ידנית את חורי האוורור ומדכאים בעדינות את בוכנה המזרק כדי להחדיר את הגשוש במים. ודא כי מים מופיעים במבונית החללית כי יש דליפה על פני השטח של קרום microdialysis.כדי להפעיל את החללית, להטביע את קרום החללית ב 70-100% אתנול במשך שתי שניות, ואחריו עירוי מים מזוקק שני. חבר מחט חיבור למפרצה אחת ולקו שקע אחד וטען מזרק חד פעמי של שלושה מיליליטר עם חיץ תדלוק טרי. חבר מזרק המצויד במחט קהה לקצה התוך של הצינורות ולהשתמש במשאבת מזרק כדי למלא את הצינור כולו עם חיץ תדלוק.כאשר הצינור מלא, החלף את מחט החיבור בין קווי התוך והשקע עם בדיקה microdialysis מופעל ואגוז כובע ולהעלות צינור רולר לתוך צינורות שקע על משאבת רולר. הפעל את משאבת המזרק ב 10 microliters לדקה ואת משאבת רולר ב 9.5-9.8 microliters לדקה. עכשיו מניחים את הצווארון סביב הצווארון של המדריך הרדמה cannula מושתל בעלי חיים ולהסיר את אגוז כובע בדיקה דמה.הכנס לאט את בדיקה microdialysis דרך cannula מדריך להדק את אגוז הכובע. לאחר מכן, מקם את העכבר בכלוב המחובר למערכת הנעה בחופשיות ו לקשור את העכבר עם הצווארון. לאחר שעה אחת לפחות, עצרו ברצף את משאבת הגלילה ומשאבת המזרק, הפעילו מחדש את המשאבות עם משאבת המזרק מוגדרת ל-20% מהר יותר ממשאבת הגלילה והכניסו את הקצה החופשי של צינורות השקע על אספן שברים בקירור כדי לאסוף את ספק השירות של המוח.כאשר אמצעי האחסון הניסיוני המתאים הושג, להסיר את החללית ולטפל בהתאוששות העכבר כפי שהוכח רק. בקנה אחד עם תצפיות קודמות, כאשר 50 מיקרומולרי Picrotoxin מנוהל באמצעות microdialysis הפוך כפי שהוכח בעכברים C57B6J ער, עלייה ברמות טאו אנדוגני interstitial נצפתה בהשוואה לרמות שנמדדו בבעלי חיים שטופלו בבקרת רכב. בנוסף למינהלי תרופות, מיקרודיאליזה יכולה להיות משולבת עם שיטות אחרות vivo כמו הקלטת EEG או אופטוגנטיקה כדי לענות על שאלות נוספות על איך פעילות עצבית משפיעה על ריכוז המצע ב- ISF.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

נוזל הקשה Lateral: דגם של פגיעה מוחית טראומטית של עכברים

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

הקלטה בקנה מידה גדול הרכבים העצבית עם בדיקות הסיליקון ב עכברוש הרדים

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

בקנה מידה גדול הקלטה של ​​הנוירונים על ידי בדיקות מטלטלין סיליקון מתנהג מכרסמים

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

תיוג של פלורסנט מדרדר מאפשר להקלטה ממוקדת חד תאית מיחידת נוירונים שזוהו<em&gt; בvivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

הדמייה תפקודית באמצעות שיבוש Ultrasonic הדם למוח הגדר מנגן משופרת MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Microinjection האינסולין היפוקמפוס ו<em&gt; בחי</em&gt; Microdialysis במהלך בדיקת זיכרון המרחבי

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

עיצוב וייצור של Ultralight משקל, בדיקות Multi-אלקטרודה מתכוונן לקלטות אלקטרו בעכברים

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

מהיר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה באמצעות oligonucleotide בדיקות במוח-התחילית Paraformaldehyde של חולדות עם סרוטונין תסמונת

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

בזמן אמת Iontophoresis עם Tetramethylammonium כדי לכמת את נפח השבר ואת הצרות של המוח תאיים שטח

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

שיפור היישום של משקל מולקולרי גבוה Biotinylated לתוספי אמין עבור היטל Thalamocortical עקיבה בחולדה

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...