Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av '' Grant-in-Aid for vitenskapelig forskning på nyskapende områder (hjernen Protein aldring og demens Control)(15H01552) fra MEXT og Grant-in-Aid for unge forskere (B) (16K 20969). Forfatteren Takk Dr. David M. Holtzman og Dr. John R. Cirrito for tekniske råd under utviklingen av denne metoden.

Alle dyrestudier blir gjennomgått og godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen av Graduate School of Medicine ved University of Tokyo.
1. pre-kirurgisk prosedyre
<ol><li>Før du starter operasjonen, tørke alt med 70% etanol å opprettholde sterile forhold. Termisk støtte ved å bruke en varmeputen anbefales.</li>
	<li>Bedøve mus ved intraperitoneal injeksjon av chloral hydrat (400 mg/kg). Bekrefte anesthetization ved å utføre en tå knipe. Bruk av har meloksikam SR ind...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

Microdialysis med høy molekylvekt kuttet membraner har å bli operert av en push-pull-modus, derfor er det avgjørende at infusjonshastigheten er nøyaktige og konstant. Unøyaktighet i flow priser kan være årsaken til luft boble generasjon og inkonsekvens i prøven konsentrasjon. Hvis flyten er inkonsekvent, sjekk alle tilkoplingene for lekkasje. Hvis problemet vedvarer, kan det være nødvendig å starte på nytt med nye sonder og produksjonsrør.
Microdilaysis sonder er kontinuerlig parf...

ISF består av 15-20% av totale hjernens volum og tilbyr en microenvironment kritisk for signaltransduksjon, substrat transport og avfall klaring1. Derfor vil mulighet til å samle ISF fra levende dyr gi større implikasjoner for ulike biologiske prosesser samt sykdom mekanisme. I vivo microdialysis er en av få metoder den prøven og kvantifisere ekstracellulære molekyler fra ISF fra våken, fritt flytte dyr og fungerer dermed som et nyttig verktøy i nevrovitenskap forskning feltet2,3. Denne metoden microdialysis sonder med semipermeable membraner er satt inn i hjernen og parfyme med perfusjon buffer ved relativt langsom flow rate (0,1-5 µL/min). Under denne perfusjon, ekstracellulære molekyler i ISF passivt diffus i sonden ifølge konsentrasjon gradient og samle som en dialysate. Selv om denne artikkelen fokuserer på metoden utvalg ISF i hjernen, kan både prinsippet og metoden brukes til andre organer av aktuelle endringer om nødvendig.
Microdialysis ble først ansatt i begynnelsen av 1960 og siden da det har vært mye brukt til å samle små molekyler inkludert aminosyrer eller nevrotransmittere i hjernen. Men har siste kommersiell tilgjengelighet av microdialysis sonder med høy-molekylær vekt kuttet membraner (100 kDa-3 MDa) utvidet sin søknad til relativt større proteiner i ISF samt4,5,6 ,7. Studier med disse sonder har ført til funn at proteiner som tau eller α-synuclein som var lenge antatt å være eksklusiv cytoplasmatiske tilbys også fysiologisk ISF4,5,8.
En av vanskelighetene med microdialysis sonder med store avskåret membraner (vanligvis over 1000 kDa) er at de er mer utsatt for ultrafiltrasjon fluid forlis på grunn av indre trykket akkumulert i sonder. Microdialysis sonder brukt her har en unik struktur for å unngå dette problemet. Trykket vil ikke bli bygget på grunn av denne strukturen, dermed microdialysis med disse sonder skal brukes i en "push-pull"-modus bruker en Sprøytepumpe for perfuse sonder (= trykk) og en roller/peristaltiske pumpe å samle dialysate kommer fra sonden uttaket (= trekk) 9 (selv om både push- og pull pumper, på grunn av press avlyser Luftekanalene i sonder, systemet teknisk bare drives av trekk pumpen). Artikkelen begynner med stereotaxic operasjonen av en guide kanyle implantasjon, og beskriver hvordan du konfigurerer microdialysis linjer for å samle ISF gjennom microdialysis sonder med 1000 kDa cut-off membraner.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

I vivo microdialysis er en kraftfull teknikk å samle ISF fra våken, fritt oppføre dyr basert på et dialyse prinsipp. Microdialysis er en etablert metode som måler relativt små molekyler inkludert aminosyrer eller nevrotransmittere, har det vært nylig brukt å også vurdere dynamikken i større molekyler i ISF sonder med høy molekylvekt kuttet membraner. Ved hjelp av slike sonder, har microdialysis skal kjøres i en push-pull-modus for å unngå press akkumulert i sonder. Denne artikkelen inneholder trinnvise protokoller inkludert stereotaxic kirurgi og hvordan du konfigurerer microdialysis linjer å samle proteiner fra ISF. Under microdialysis, kan legemidler administreres enten systemisk eller ved direkte infusjon i ISF. Omvendt microdialysis er en teknikk for å infundere direkte forbindelser til ISF. Inkludering av narkotika i microdialysis perfusjon bufferen tillater dem å spre inn i ISF gjennom sonder mens samtidig samle ISF. Ved å måle tau protein som et eksempel, viser forfatteren hvordan sin nivåer endres på stimulerende neuronal aktivitet av omvendt microdialysis av picrotoxin. Fordeler og begrensninger av microdialysis er beskrevet med utvidet programmet ved å kombinere andre i vivo metoder.

For å stimulere eller hemme neuronal aktivitet i omvendt microdialysis11,12,13, picrotoxin, GABAA reseptor antagonist eller tetrodotoxin, Na+ kanal blokker har blitt brukt. Det har vist at tau utgivelsen er stimulert av neuronal aktivitet13,14. Samsvar med disse tidligere observasjoner, når 50 µM picrotoxin (PTX) ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

I vivo microdialysis har aktivert samling av molekyler tilstede i hjernen interstitiell væske (ISF) fra våken, fritt oppføre dyr. For å analysere relativt store molekyler i ISF, fokuserer gjeldende artikkelen spesielt på microdialysis protokollen sonder med høy molekylvekt kuttet membraner.

I Vivo Microdialysis-metoden for å samle inn store ekstracellulære proteiner fra hjernen interstitiell væske med høy-molekylær vekt Cut-off sonder

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen nevrovitenskapsforskningsfeltet om hvordan signaltransduksjonssubstrattransport og avfallsklaring forekommer i hjernens ekstracellulære rom. Den største fordelen med denne teknikken er at den tillater prøvetaking og kvantifisering av store ekstracellulære molekyler i Interstitial Fluid eller ISF av våkne fritt bevegelige dyr. Etter å ha bekreftet mangel på respons på tåklemmen, fjern håret fra skallen på en bedøvet mus og bruk ørestengene og en neseklemme for å sikre fikse dyret på en adapter.Påfør salve på dyrets øyne og plasser adapteren på det stereotoksiske apparatet. Bruk en skalpell for å lage et hud snitt sagittally over skallen og feste en drill på manipulatoren av stereotaksisk ramme. Senk boret til den berører lambda forsiktig og tilbakestill DV-koordinaten til boret til null.Deretter flytter du boret til bregma for tilbakestilling av AP- og ML-koordinatene til null. Flytt boret fra bregma til den vertikale koordinaten. Senk boret ned i skallen og sett DV-koordinaten til null igjen.Etter å ha gjentatt prosedyren for en tredje koordinat, bor et burr hull forsiktig på målkoordinaten, etterfulgt av et andre hull på den kontralaterale siden av parietalbenet. Sett inn en beinskrue i det andre hullet og plasser låsestykket fra et 1,5 milliliter mikrocentrifugrørlokk på skallen slik at burrhullene er innenfor sirkelen. Deretter plasserer du en førings kanyle på den kortere armen på stereotaksadapteren og feste kanylen med en hettemutter.Still inn den lengre armen til stereotaksisk adapter på elektrodeklemmen og fest armen på manipulatoren til det stereotoksiske apparatet. Roter DV stereotoksisk montering på manipulatorarmen med 12 grader og flytt føringsmetralen til burrhullet. Deretter senker du sakte førerkanylen 1,2 millimeter inn i hjernen.Tilsett tannsement til kronen til metalldelen av føringsnegenlen, beinskruen og eventuell eksponert hodeskalle er dekket og sikret og la sementen tørke. Etter 12 til 20 minutter, fjern stereotaksisk adapter fra elektrodeklemmen, fjern hettemutteren og skift ut stereotaksisk adapter med en dummy-sonde. Deretter festes hetten mutter, slipper musen fra stereotaksisk apparat, og huser musen alene i et individuelt bur.Før du setter opp mikrodialyse, fyll en engangs sprøyte med en mlert sprøyte med destillert vann og bruk et vitonrør til å koble sprøyten til utløpet av en mikrodialysesonde. Dekk ventilasjonshullene manuelt og trykk forsiktig ned sprøytestempelet for å sette sonden med vann. Bekreft at vann vises i sondeinntaket og at det er lekkasje på overflaten av mikrodialysemembranen.For å aktivere sonden, senk sondemembranene i 70-100% etanol i to sekunder, etterfulgt av en annen destillert vanninfusjon. Fest en tilkoblingsnål til en innløps- og en utløpsledning og last en engangssprøyte med nylaget perfusjonsbuffer. Koble en sprøyte utstyrt med en stump kanyle til innløpsenden av slangen og bruk en sprøytepumpe til å fylle hele slangen med perfusjonsbuffer.Når røret er fullt, skifter du tilkoblingsnålen mellom innløps- og utløpsledningene med den aktiverte mikrodialysesonden og hettemutteren og monterer et rullerør i utløpsslangen på en rullepumpe. Start sprøytepumpen med 10 mikroliter per minutt og rullepumpen på 9,5-9,8 mikroliter per minutt. Plasser nå kragen rundt halsen på det bedøvede førermutter implantert dyret og fjern hettemutteren og dummy-sonden.Sett mikrodialysesonden langsomt inn gjennom føringsmuden og fest hettemutteren. Deretter plasserer du musen i et bur som er koblet til et frittgående system og tether musen med kragen. Etter minst en time stopper du rullepumpen og sprøytepumpen på nytt, starter pumpene på nytt med sprøytepumpen satt til 20 % raskere enn rullepumpen og plasserer den frie enden av utløpsslangen på en nedkjølt fraksjonssamler for å samle hjernen ISF.Når riktig eksperimentelt volum er oppnådd, fjern sonden og håndter musegjenopprettingen som nettopp demonstrert. I samsvar med tidligere observasjoner, når 50 mikromolar Picrotoxin administreres via omvendt mikrodialyse som vist i våken C57B6J mus, observeres en økning i interstitielle endogene taunivåer sammenlignet med nivåer målt i dyr behandlet med en kjøretøykontroll. I tillegg til legemiddeladministrasjoner kan mikrodialyse kombineres med andre in vivo-metoder som EEG-opptak eller optogenetikk for å svare på flere spørsmål om hvordan nevronal aktivitet påvirker substratkonsentrasjonen i ISF.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Storskala opptak av nevroner med bevegelige Silicon Sonder i oppfører Gnagere

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Merking Tillater målrettet Ekstracellulær Single-enhet Opptak fra Identifiserte Nerveceller<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funksjonell Bildediagnostiske Bruke Ultrasonic blod-hjerne barrieren avbrudd og mangan forbedret MR

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampus Insulin mikroinjeksjon og<em&gt; In vivo</em&gt; Mikrodialyse Under Spatial Memory Testing

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

Design og fabrikasjon av Ultralight Vekt, justerbare Multi-elektrode prober for Elektro Recordings i Mus

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering bruker oligonukleotidprober på Paraformaldehyde-prefiks Brain of Rats med serotonergt syndrom

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Real-time Iontophoresis med tetrametylammonium for å kvantifisere volumfraksjon og tortuositet i hjernens ekstracellulære rom

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

Forbedre anvendelsen av høy molekylvekt Biotinylated dekstran Amin for Thalamocortical projeksjon sporing i rotte

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...