Name: in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes
Uploaded: 2018-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

Bu eser tarafından desteklenen '' Grant-in-Aid bilimsel araştırma yenilikçi alanlarda (Beyin Protein eskime ve demans Control)(15H01552) MEXT ve Grant-in-Aid için genç bilim adamları (B) (16K 20969). Yazar Dr David M. Holtzman ve Dr. John R. Cirrito bu yöntem geliştirme sırasında teknik tavsiye için teşekkürler.

Tüm hayvan çalışmaları gözden geçirilmiş ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi lisansüstü Tıp Fakültesi Tokyo Üniversitesi tarafından onaylanmış.
1. önceden cerrahi müdahale
<ol><li>Ameliyat başlamadan önce Steril koşullar korumak için % 70 etanol ile her şeyi silin. Bir ısıtma yastığı kullanan termal desteği önerilir.</li>
	<li>Fareler kloral hidrat (400 mg/kg) mayi enjeksiyonu ile anestezi. Anesthetization bir ayak çimdik gerçekleştirerek onaylay...

<ol>
	<li>Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+interstitial+system:+Anatomy,+modeling,+in+vivo+measurement,+and+applications.">The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications.</a> Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).</li><li>Kushikata, T., Hirota, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptide+microdialysis+in+free-moving+animals.">Neuropeptide microdialysis in free-moving animals.</a> Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+and+human+brain+parenchyma.">Assessment of &#945;-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma.</a> PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+microdialysis+reveals+age-dependent+decrease+of+brain+interstitial+fluid+tau+levels+in+P301S+human+tau+transgenic+mice.">In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).</li><li>Ulrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+apolipoprotein+E+from+the+brain+interstitial+fluid+using+microdialysis.">In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13 (2013).</li><li>Emmanouilidou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+transmission+via+ATP-dependent+K++channels+regulates+&#945;-synuclein+secretion+in+mouse+striatum.">GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates &#945;-synuclein secretion in mouse striatum.</a> Brain. 139 (3), 871-890 (2016).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed-competent+high-molecular-weight+tau+species+accumulates+in+the+cerebrospinal+fluid+of+Alzheimer's+disease+mouse+model+and+human+patients.">Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients.</a> Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).</li><li>Yamada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Microdialysis+of+brain+interstitial+fluid+for+the+determination+of+extracellular+tau+levels.">In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels.</a> Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).</li><li>Kang, J. -. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-&#946;+dynamics+are+regulated+by+orexin+and+the+sleep-wake+cycle.">Amyloid-&#946; dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle.</a> Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+activity+regulates+interstitial+fluid+amyloid-beta+levels+in+vivo.">Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo.</a> Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).</li><li>Bero, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+the+regional+vulnerability+to+amyloid-&#946;+deposition.">Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-&#946; deposition.</a> Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+regulates+extracellular+tau+in+vivo.">Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).</li><li>Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+release+of+endogenous+tau+is+stimulated+by+neuronal+activity.">Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity.</a> EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).</li><li>Castellano, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apoE+isoforms+differentially+regulate+brain+amyloid-&#946;+peptide+clearance.">Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-&#946; peptide clearance.</a> Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57 (2011).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+in+vivo+turnover+of+tau+in+a+mouse+model+of+tauopathy.">Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy.</a> Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55 (2015).</li><li>Taylor, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+local+and+long-range+neuronal+network+dynamics+by+simultaneous+optogenetics,+reverse+microdialysis+and+silicon+probe+recordings+in+vivo.">Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo.</a> Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).</li></ol>

Microdialysis yüksek molekül ağırlıklı membranlar kesim ile bir itme-çekme modu tarafından ameliyat olmak zorunda, böylece akış hızı doğru ve sürekli önemlidir. Yanlışlık içinde akış oranları hava kabarcık üretimi ve örnek konsantrasyon tutarsızlığına neden olabilir. Akış tutarsız ise, sızıntı için tüm bağlantılarını kontrol edin. Sorun hala devam ederse, yeni probları ve Bacalar ile yeniden başlatmak gerekli olabilir.
Microdilaysis sondalar sürekli...

ISF toplam beyin hacmi 15-%20 oluşur ve sinyal iletimi, substrat taşıma ve atık temizleme1için kritik bir microenvironment sunmaktadır. Bu nedenle, yaşayan hayvanlardan ISF toplama yeteneği büyük etkileri çeşitli biyolojik süreçlerin yanı sıra hastalığı mekanizması için sağlayacaktır. İn vivo microdialysis birkaç yöntemden birini bu örnek ve serbestçe hareket hayvan hücre dışı molekülleri ISF üzerinden gelen uyanık, ölçmek ve böylece nörolojik araştırma alanı2,3yararlı bir araç olarak hizmet vermektedir. Bu yöntemde, microdialysis sonda semipermeable Membranlar ile beyinde eklenen ve perfüzyon arabelleği nispeten yavaş akış oranı ile periosteum (0,1-5 µL/dak). Bu perfüzyon sırasında ISF ekstraselüler molekülleri pasif konsantrasyon gradyanı göre soruşturma içine diffüz ve diyalizat toplamak. Bu makale örnek ISF beyinde yöntemine üzerinde duruluyor olsa da, ilke ve yöntemi diğer organlara uygun değişikliğe göre gerekirse uygulanabilir.
O zaman yoğun amino asitler veya nörotransmitter beyinde de dahil olmak üzere küçük moleküller toplamak için kullanılan Microdialysis 1960'ların ve beri ilk istihdam edildi. Ancak, microdialysis probları yüksek moleküler ağırlığı membranlar (100 kDa-3 MDa) kesme son ticari durumu4,5,6 yanı sıra ISF nispeten daha büyük proteinler için uygulama genişletti ,7. Bu sonda kullanarak çalışmaları için bulma açmıştır bu proteinler tau veya α-synuclein gibi uzun olması düşünülen özel sitoplazmik Ayrıca ISF4,5,8' fizyolojik olarak mevcut.
Membranlar (genellikle üzerinde 1.000 kDa) büyük kesik ile microdialysis sonda kullanarak zorluklar Ultrafiltrasyon sıvı kaybı sondalar içinde birikmiş basınç nedeniyle daha duyarlı oldukları biridir. Burada kullanılan Microdialysis sondalar bu sorunu önlemek için benzersiz bir yapıya sahip. Böylece bu sonda ile microdialysis (= Itme) prob ve diyalizat geliyor sonda prizinden toplamak için bir silindir/peristaltik pompa sıvı için bir şırınga pompa kullanarak bir "itme-çekme" modunda ameliyat, basınç bu yapısı sayesinde yerleşik değil (= çekme) 9 (her ne kadar itme ve çekme pompalar, havalandırma delikleri sonda, mevcut iptal baskısı yüzünden ihtiyacı sistem teknik olarak sadece çekme pompası tarafından tahrik edilmektedir). Bu makale kılavuzu kanül implantasyon stereotaksik cerrahi ile başlar ve ISF microdialysis probları ile 1.000 kDa kesme membranlar yoluyla toplamak için microdialysis satırlarını ayarlamak nasıl açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>The Univentor 820 Microsampler</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8303002</td>
			<td>Refrigerated fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>KDS-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>ERP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raturn Stand-Alone System</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1409</td>
			<td>Free-moving system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual species cage kit</td>
			<td>BASi</td>
			<td>CX-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AtmosLM Microdialysis probe (shaft length 8 mm, membrane length 2 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEP-8-02</td>
			<td>Shaft length for a probe, a guide, a dumy probe and a stereotaxic adaptor should be identical.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis guide (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PEG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdialysis dummy probe (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PED-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone screw</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super bond C&#38;B set</td>
			<td>Sunmedical</td>
			<td></td>
			<td>Dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal Stereotaxic Instrument with digital display console</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 940</td>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Ear Bars and Rubber Tips for Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin solution from bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7284-50ML</td>
			<td>30% BSA solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEP tubing (70 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JF-10-70</td>
			<td>Internal volume = 0.5 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing (50 cm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JT-10-50</td>
			<td>Internal volume = 0.08 &#181;L/cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Byton tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>JB-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic luer stab adaptor 23G</td>
			<td>BD</td>
			<td>427565</td>
			<td>Blunt end needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller tube</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RT-5S</td>
			<td>Internal volume = 4 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cap nut</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>AC-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mL microcentrifuge tube with cap</td>
			<td>QSP</td>
			<td>503-Q</td>
			<td>Tubes for fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic adaptor (shaft length 8 mm)</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>PESG-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connection needle</td>
			<td>Eicom microdialysis</td>
			<td>RTJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse animal collar</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-1365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor kit</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K.1070</td>
			<td>Drill</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver for bone screws</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo microdialysis method to collect large extracellular proteins from brain interstitial fluid with high-molecular weight cut-off probes

Vivo microdialysis bir diyaliz ilkesine dayanarak uyanık, özgürce davranmaya hayvanlardan ISF toplamak için güçlü bir tekniktir. Microdialysis amino asitler veya nörotransmiterler gibi nispeten küçük moleküller ölçer kurulan bir yöntem olmakla birlikte, bu son zamanlarda da büyük moleküllerin probları yüksek molekül ağırlıklı kesilmiş ile kullanarak ISF dinamikleri değerlendirmek için kullanılmıştır membranlar. Bu tür sondalar kullanarak üzerine microdialysis sondalar içinde birikmiş basınç önlemek için bir itme-çekme modunda çalışmak zorundadır. Bu makalede stereotaksik cerrahi ve proteinler ISF toplamak için microdialysis satırlarını ayarlamak nasıl da dahil olmak üzere adım adım iletişim kurallarını sağlar. Microdialysis sırasında ilaçların sistemik veya ISF içine doğrudan infüzyon tarafından yönetilebilir. Ters microdialysis doğrudan bileşikler ISF demlemek için bir tekniktir. Uyuşturucu microdialysis perfüzyon arabellekte eklenmesi ISF sonda aynı anda ISF toplarken diffüz almalarını sağlar. Tau protein örnek olarak ölçerek, yazar nasıl kendi düzeyleri uyarıcı nöronal aktivite picrotoxin ters microdialysis tarafından değiştirilmiş gösterir. Avantajları ve microdialysis sınırlamaları genişletilmiş uygulama ile birlikte diğer vivo içinde yöntemleri birleştirerek anlatılmaktadır.

Teşvik veya ters microdialysis11,12,13, picrotoxin, GABAA reseptör antagonisti veya Tetradotoksin nöronal aktivite etkisizleştirmek için Na+ kanal engelleyici kullanılmıştır. Tau yayın nöronal aktivite13,14artış tarafından uyarılır gösterilmiştir. Bunlar ile tutarlı 50 µM picrotoxin (PTX) (daha fa...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes at JoVE.com

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Vivo microdialysis molekülleri uyanık, özgürce davranmaya hayvanlardan beyin interstisyel sıvı (ISF) mevcut topluluğu sağlamıştır. ISF nispeten büyük molekülleri çözümlemek amacıyla geçerli madde özellikle probları yüksek molekül ağırlıklı membranlar kesim ile microdialysis iletişim kuralı'nı odaklanır.

Vivo Microdialysis beyin interstisyel sıvı yüksek moleküler ağırlık kesme ile gelen büyük hücre dışı proteinler toplamak için yöntem probları

In vivo microdialysis is a powerful technique to collect ISF from awake, freely-behaving animals based on a dialysis principle. While microdialysis is an ...

Bu yöntem, sinyal transdüksiyon substrat taşıma ve atık temizleme beyin hücre dışı alanlarda meydana nasıl hakkında nörolojik araştırma alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, interstisyel sıvı veya isf serbestçe hareket eden hayvanların büyük hücre dışı moleküllerin örnekleme ve niceliksel sağlar. Ayak ucurlemeye yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, anestezili bir farenin kafatasındaki saçı çıkarın ve kulağı ve burun kelepçesini kullanarak hayvanı bir adaptöre sabitleştirin.Merhemi hayvanın gözlerine uygulayın ve adaptörü stereotaksik cihaza yerleştirin. Kafatası üzerinde sagittally bir deri kesi yapmak ve stereotaksik çerçeve manipülatör üzerine bir matkap eklemek için bir neşter kullanın. Lambda'ya hafifçe dokunana kadar matkabı düşürün ve matkabın DV koordinatını sıfırlayın.Daha sonra, AP ve ML koordinatlarının sıfırlanması için matkabı bregma'ya sıfıra taşıyın. Matkabı bregma'dan dikey koordinata taşıyın. Matkabı kafatasına indirin ve DV koordinatını tekrar sıfıra ayarlayın.Üçüncü bir koordinat için prosedürü tekrarladıktan sonra, hedef koordinatında dikkatlice bir çapak deliği delin ve ardından parietal kemiğin kontralateral tarafında ikinci bir delik açıl. İkinci deliğe bir kemik vidası yerleştirin ve kilit parçasını 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüp kapağından kafatasının üzerine yerleştirin, böylece çapak delikleri dairenin içinde dir. Daha sonra, stereotaksik bağdaştırıcının kısa koluna bir kılavuz kanül yerleştirin ve kanülü bir kap somunla sabitle.Stereotaksik adaptörün uzun kolunu elektrot kelepçesi üzerine ayarlayın ve kolu stereotaksik aygıtın manipülatöre takın. Manipülatör kolundaki DV stereotaksik tertibatını 12 derece döndürün ve kılavuz kanüllerini çapak deliğine taşıyın. Sonra, yavaşça beyne kılavuz kanül 1.2 milimetre indirin.Kılavuz kanül, kemik vidası ve herhangi bir maruz kafatası metal parçası kaplı ve güvenli ve çimento kurumasını sağlar kadar taç diş çimento ekleyin. 12 ila 20 dakika sonra stereotaksik adaptörü elektrot kıskaçından çıkarın, kapak somunu çıkarın ve stereotaksik adaptörü sahte bir sondayla değiştirin. Daha sonra, kapak somunu yeniden bağlayın, fareyi stereotaksik cihazdan bırakın ve fareyi tek bir kafeste tek başına barındırın.Mikrodiyaliz kurmadan önce, distile su ile tek kullanımlık bir mililitreşile şırınga doldurun ve bir mikrodiyaliz prob çıkışına şırınga bağlamak için bir viton tüp kullanın. Havalandırma deliklerini manuel olarak kapatın ve sondayı suyla aşılamak için şırınga pistonuna hafifçe bastırın. Sonda girişinde suyun göründüğünü ve mikrodiyaliz membranının yüzeyine sızıntı olduğunu doğrulayın.Sondayı etkinleştirmek için, sonda membranlarını iki saniye boyunca %70-100 etanolle batırın ve ardından ikinci bir distile su infüzyonu yapın. Bir giriş ve bir çıkış hattına bir bağlantı iğnesi takın ve tek kullanımlık üç mililitrelik şırıngayı taze hazırlanmış perfüzyon tamponuyla yükleyin. Borunun girişine künt uçlu bir iğne yle donatılmış bir şırınga bağlayın ve tüm tüpü perfüzyon tamponuyla doldurmak için bir şırınga pompası kullanın.Tüp dolduğunda, giriş ve çıkış hatları arasındaki bağlantı iğnesini aktif mikrodiyaliz sondası ve kapak somunu ile değiştirin ve bir silindir pompası üzerindeki çıkış borusuna bir rulo tüp monte edin. Dakikada 10 mikrolitre ve dakikada 9,5-9,8 mikrolitre de silindir pompası şırınga pompası başlatın. Şimdi anestezi kılavuzu kanül implante hayvan boynuna yaka yerleştirin ve kapak somun ve kukla sonda kaldırın.Mikrodiyaliz sondasını yavaşça kılavuz kanüle takın ve kapak somunu sabitle. Daha sonra fareyi serbest hareket sistemine bağlı bir kafese yerleştirin ve fareyi yakayla bağlayın. En az bir saat sonra, sırayla silindir pompası ve şırınga pompası durdurmak, şırınga pompası ile pompaları yeniden başlatArak 20% daha hızlı silindir pompası daha ve beyin ISF toplamak için bir soğutmalı fraksiyon toplayıcı üzerinde çıkış boru serbest ucunu yerleştirin.Uygun deneysel hacim elde edildiğinde, sondayı çıkarın ve fare kurtarmayı az önce gösterildiği gibi ele alın. Önceki gözlemlerile tutarlı, uyanık C57B6J farelerde gösterildiği gibi ters mikrodiyaliz ile 50 mikromolar Picrotoksin uygulandığında, interstisyel endojen tau düzeylerinde bir artış bir araç kontrolü ile tedavi edilen hayvanlarda ölçülen seviyelere göre gözlenmektedir. İlaç yönetimlerine ek olarak, mikrodiyaliz EEG kayıt veya optogenetik gibi diğer in vivo yöntemleri ile nöronal aktivite NIN SUBSTRAT konsantrasyonunu nasıl etkilediği ne kadar ek soruları yanıtlamak için kombine edilebilir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Microdialysis Method to Collect Large Extracellular Proteins from Brain Interstitial Fluid with High-molecular Weight Cut-off Probes

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Yanal Akışkan Perküsyon: Travmatik Beyin Hasarı Farelerde Modeli

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Anestezi Rat Silikon Probları Büyük ölçekli Nöronal Toplulukları Kaydı

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Kemirgenler davranmak yılında Hareketli Silikon Problar tarafından Nöronlar Büyük ölçekli Kaydı

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograd Floresan Etiketleme Belirlenen Nöronlar gelen Hedefli Hücre dışı Tek ünitesi Kayıt izin verir<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Ultrasonik Kan-beyin bariyeri bozulması ve Manganez kontrastlı MRG kullanma İşlevsel beyin görüntüleme

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hipokampal İnsülin Mikroenjeksiyon ve<em&gt; In vivo</emMekansal Bellek Test sırasında&gt; mikrodivaliz

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

Farelerde Elektrofizyolojik Recordings Tasarım ve Ultralight Ağırlık Fabrikasyon, Ayarlanabilir Çoklu elektrot Probları

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Çabuk<em&gt; In Situ</emSerotonin Sendromu ile Ratlarda Paraformaldehyde-öneki Beyin oligonükleotid Problar kullanarak&gt; Melezleme

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Beyin Ekstraselüler Alanının Hacim Fraksiyonu ve Kıvrımını Nicelleştirmek için Tetrametilamonyum ile Gerçek Zamanlı İyontoforez

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

Yüksek molekül ağırlıklı Biotinylated Dextran Amin uygulama içinde sıçan izleme Thalamocortical projeksiyon için geliştirmek

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...