Name: stereotactic adoptive transfer of cytotoxic immune cells in murine models of orthotopic human glioblastoma multiforme xenografts
Uploaded: 2018-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts at JoVE.com

लेखकों ने पशुपालन और देखभाल के लिए नांत के विश्वविद्यालय अस्पताल पशु सुविधा (ूते) के कर्मचारियों, इमेजिंग के लिए नांत विश्वविद्यालय (MicroPICell) की सेलुलर और tissular इमेजिंग कोर सुविधा, और Cytometry सुविधा (Cytocell) नांत से धन्यवाद उनके विशेषज्ञ तकनीकी सहायता के लिए. यह काम INSERM, CNRS, विश्विद्यालय डी नांत, institute नेशनल ड्यूल कैंसर (इंका # PLBio2014-155), Ligue राष्ट्रीयकृत contre le Cancer (ओ. सी. २०१७), और यूरोपियन कंसोर्टियम एरा-नेट Transcan2 (Immunoglio) द्वारा वित्त पोषित किया गया. टीम के शौकीनों ने पैसा ला सभ्य मेडिकल (DEQ20170839118) डाल दिया है । यह काम LabEX इगो और इहु-Cesti कार्यक्रमों के संदर्भ में महसूस किया गया, जो क्रमशः राष्ट्रीय अनुसंधान एजेंसी Investissements d'Avenir द्वारा समर्थित कार्यक्रमों ANR-11-LABX-0016-01 और ANR-10-IBHU-005 के माध्यम से है । इहु-Cesti परियोजना भी नांत Metropole द्वारा समर्थित है और डी ला लॉयर क्षेत्र देता है । लेखक पांडुलिपि को सही करने में मदद प्रदान करने के लिए Chirine रफिया धंयवाद ।

निंनलिखित प्रक्रिया पशु विषयों को शामिल संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया था (समझौते #00186 .02; भुगतान करता है de la लॉयर की क्षेत्रीय नैतिकता समिति [फ्रांस]) । मानव PBMCs सूचित स्वस्थ दाताओं से एकत्र रक्?...

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	<li>Stupp, R., Roila, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+glioma:+ESMO+clinical+recommendations+for+diagnosis,+treatment+and+follow-up.">Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).</li><li>Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standards+of+care+for+treatment+of+recurrent+glioblastoma--are+we+there+yet?.">Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet?.</a> Neuro-Oncology. 15 (1), 4-27 (2013).</li><li>Chen, S. H., Shine, H. D., Goodman, J. C., Grossman, R. G., Woo, S. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li></ol>

चयनित देशी या इंजीनियर प्रतिरक्षा प्रभावक कोशिकाओं का एक दत्तक हस्तांतरण के लिए कुशलता से घुसपैठ मस्तिष्क कैंसर जैसे ट्यूमर का इलाज करने के लिए एक होनहार दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करता है, गैर-रूपां...

जीबीएम (डब्ल्यूएचओ ग्रेड IV तारिकाकोशिकार्बुद), वयस्कों में सबसे लगातार और आक्रामक प्राथमिक मस्तिष्क कैंसर है । आक्रामक उपचार है कि सर्जरी और रेडियो-कीमोथेरेपी गठबंधन के बावजूद, जीबीएम एक अत्यंत गरीब पूर्वानुमान के साथ जुड़े रहता है (१४.६ महीने के औसत अस्तित्व और एक 2 साल की मृत्यु दर > ७३%)1। यह सबूत है कि कुछ कुशल चिकित्सीय अग्रिम पिछले2दशक से अधिक मांय किया गया है । अधिक प्रभावी चिकित्सकीय रणनीति3,4,5, immunotherapies6 के डिजाइन के लिए उंमीदवारों के अलावा वर्तमान में ट्रैक करने के लिए और अत्यधिक इनवेसिव और रेडियो/chemo प्रतिरोधी ट्यूमर को खत्म करने का पता लगाया है कोशिकाओं, तेजी से और घातक ट्यूमर पतन के लिए उनके महत्वपूर्ण योगदान के लिए संदिग्ध7. विभिन्न संभावित प्रतिरक्षा लक्ष्यों की पहचान की और immunotherapies के लिए प्रस्तावित किया गया था, जिसमें प्राकृतिक या संशोधित αβ या υδ टी लिम्फोसाइटों जैसे जीबीएम-विशिष्ट ट्यूमर एंटीजन या तनाव प्रेरित अणुओं8,9, 10. चयनित जीबीएम-प्रतिक्रियाशील प्रतिरक्षा सेल प्रभाव प्रबंधन करने के लिए संभावना अवशिष्ट द्रोह की साइट में सीधे प्रभाव लिम्फोसाइटों की ऊंचा राशि देने के लिए एक अनूठा अवसर का प्रतिनिधित्व करता है । इस रणनीति का समर्थन करने के लिए, हम हाल ही में दिखाया गया है कि immunodeficient चूहों पर आधारित मॉडल orthotopic प्राथमिक मानव जीबीएम ले xenografts ईमानदारी दोहराऊंगा रोगियों में ब्रेन ट्यूमर के विकास जीबीएम9,11. इसके अलावा, इन मॉडलों के लिए adoptively हस्तांतरित allogeneic मानव vυ9vδ2t लिम्फोसाइटों की मजबूत अर्बुदरोधी क्षमता का प्रदर्शन किया गया ।
इस प्रोटोकॉल allogeneic टी लिम्फोसाइटों के दत्तक हस्तांतरण के आधार पर जीबीएम के रूप में मस्तिष्क ट्यूमर, के स्टीरियोटैक्टिक immunotherapies को प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक कदम का वर्णन । लेख से पता चलता है: (i) चिकित्सीय allogeneic प्रतिरक्षा प्रभावक T लिम्फोसाइटों, जैसे मानव vυ9vδ2t लिम्फोसाइटों के प्रवर्धन; (ii) इंजेक्शन के लिए इन effects T लिम्फोसाइटों की तैयारी; (iii) मस्तिष्क के भीतर स्टीरियोटैक्टिक प्रशासन के लिए प्रक्रिया, ट्यूमर के पास. यह लेख भी स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्शन के बाद इन सेलुलर प्रभाव के व्यवहार में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है ।
चिकित्सीय दृष्टिकोण यहां प्रस्तुत 20 x 10 प्रत्येक ब्रेन ट्यूमर असर immunodeficient माउस के लिए खुराक प्रति 6 प्रभाव कोशिकाओं के इंजेक्शन पर आधारित है । इन विट्रो विस्तार चरण में एक प्रारंभिक प्रतिरक्षा कोशिकाओं की बड़ी मात्रा का उत्पादन करने के लिए आवश्यक है । इसलिए, गैर-विशिष्ट सेल विस्तार phytohemagglutinin (के ्ह्-L) और विकिरणित allogeneic फीडर कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है: परिधीय-रक्त mononuclear कोशिकाओं (PBMCs) स्वस्थ दाताओं और Epstein बर्र वायरस (EBV) से-तब्दील बी-lymphoblastoid सेल लाइनों (BLCLs), द्वारा PBMCs इन विट्रो में EBV से युक्त संस्कृति supernatant के साथ संक्रमण Marmoset B95-8 सेल लाइन से, 1 µ जी की उपस्थिति में/एमएल cyclosporin-ए ।
जीबीएम-प्रतिक्रियाशील प्रभाव प्रतिरक्षा कोशिकाओं की तुलना में और इन विट्रो परख9में से चुना जाता है । इन प्रभाव कोशिकाओं को सक्रिय और मानक प्रोटोकॉल का उपयोग कर परिवर्धित कर रहे हैं, उनके स्वभाव के अनुसार (जैसे, मानव Vγ9Vδ2 टी लिम्फोसाइटों9 या मानव विरोधी दाद वायरस αβ टी लिम्फोसाइटों12) की एक ंयूनतम शुद्धता के साथ > ८०%, के रूप में नियमित रूप से cytometric विश्लेषण द्वारा जांच की । सेल विस्तार नीचे विस्तृत प्रक्रिया विभिंन मानव लिम्फोसाइट सबसेट के लिए लागू होता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:825px;" width="825">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">PBMCs</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:232px;">from 3 different healthy donors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">BLCLs</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>from 3 different donors</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:339px;">Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI)</td>
			<td style="width:136px;">Gibco</td>
			<td>31870-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:339px;">FCS</td>
			<td style="width:136px;">Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">S1810-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:136px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:136px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">IL-2</td>
			<td style="width:136px;">Novartis</td>
			<td style="width:119px;">proleukin</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">PHA-L</td>
			<td style="width:136px;">Sigma</td>
			<td>L4144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td align="right">51600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Mouse adaptator for stereotaxic frame&#160;&#160;</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td align="right">51624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microsyringe pump injector&#160;</td>
			<td style="width:136px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">UMP3-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NanoFil Syringe</td>
			<td style="width:136px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">NF34BV-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">NSG mice</td>
			<td style="width:136px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;">NSGSSFE07S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Ketamine</td>
			<td style="width:136px;">Merial</td>
			<td style="width:119px;">Imalg&#232;ne 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Xylazine</td>
			<td style="width:136px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;">Rompur 2%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Scissors</td>
			<td style="width:136px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">201758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Forceps</td>
			<td style="width:136px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">OmniDrill 115/230V</td>
			<td style="width:136px;">WPI</td>
			<td align="right">503598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Vicryl 4-0</td>
			<td style="width:136px;">Ethicon</td>
			<td>VCP397H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Xylocaine</td>
			<td style="width:136px;">Astrazeneca</td>
			<td>3634461</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotactic adoptive transfer of cytotoxic immune cells in murine models of orthotopic human glioblastoma multiforme xenografts

ग्लियोब्लास्टोमा मल्टीफार्मी (जीबीएम), वयस्कों में सबसे लगातार और आक्रामक प्राथमिक मस्तिष्क कैंसर, आम तौर पर एक गरीब पूर्वानुमान के साथ जुड़ा हुआ है, और दुर्लभ कुशल चिकित्सा पिछले दशक में प्रस्तावित किया गया है । उपंयास चिकित्सकीय रणनीतियों डिजाइनिंग के लिए होनहार उंमीदवारों के अलावा, सेलुलर immunotherapies के लिए अत्यधिक आक्रामक और chemo-radioresistant ट्यूमर कोशिकाओं को खत्म करने का लक्ष्य दिया गया है, इस कैंसर के एक तेजी से और घातक पतन में शामिल होने की संभावना । इस प्रकार, प्रशासन (ओं) allogeneic जीबीएम-प्रतिक्रियाशील प्रतिरक्षा सेल प्रभाव, जैसे मानव vυ9vδ2 टी लिम्फोसाइटों के रूप में, ट्यूमर के आसपास के क्षेत्र में एक अनूठा कुशल और उच्च केंद्रित चिकित्सकीय एजेंटों को सीधे देने का अवसर का प्रतिनिधित्व करता है मस्तिष्क द्रोह की साइट । यहाँ, हम orthotopic मानव प्राथमिक मस्तिष्क ट्यूमर ले जाने immunodeficient चूहों में तैयारी और allogeneic मानव लिम्फोसाइटों के stereotaxic प्रशासन के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं. यह अध्ययन व्यवहार्यता और इन सेलुलर immunotherapies कि लिम्फोसाइटों ट्यूमर बिस्तरों के भीतर allogeneic मानव intrabrain के स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्शन पर निर्भर की अर्बुदरोधी प्रभावकारिता के लिए एक नैदानिक सबूत-की अवधारणा प्रदान करता है ।

इस अध्ययन ट्यूमर ले जाने वाले चूहों के मस्तिष्क के भीतर सेलुलर प्रतिरक्षा प्रभाव कोशिकाओं के दत्तक स्थानांतरण की रणनीति का वर्णन, स्टीरियोटैक्टिक इंजेक्शन के आधार पर ट्यूमर बिस्तर के भी...

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Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Orthotopic मानव ग्लियोब्लास्टोमा मल्टीफार्मी Xenografts के Murine मॉडलों में साइटोटोक्सिक प्रतिरक्षा कोशिकाओं का स्टीरियोटैक्टिक दत्तक अंतरण

यहाँ, हम orthotopic मानव प्राथमिक मस्तिष्क ट्यूमर ले जाने immunodeficient चूहों में तैयारी और allogeneic मानव लिम्फोसाइटों के stereotaxic प्रशासन के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं. इस अध्ययन व्यवहार्यता और intrabrain की अर्बुदरोधी प्रभावकारिता-सेलुलर immunotherapies दिया दोनों के लिए एक सबूत की अवधारणा प्रदान करता है ।

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

प्रायोगिक मेटास्टेसिस और सीटीएल दत्तक स्थानांतरण Immunotherapy माउस मॉडल

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Seven Steps to Stellate Cells

सात कदम कक्ष तारामय

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

प्रतिरक्षा कोशिकाओं के भीतर murine aortas Cytometry विश्लेषण फ्लो

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

प्रायोगिक Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) प्रतिरोधी माउस खींच में दत्तक स्थानांतरण और प्रतिजनी चैलेंज के द्वारा पर काबू पाने unresponsiveness

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

मधुमेहजनक सीडी 4 की दत्तक स्थानांतरण से चूहे में त्वरित टाइप 1 मधुमेह प्रेरण + टी कोशिकाओं

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

Hematopoietic progenitors के दत्तक हस्तांतरण का उपयोग कर Peyer पैच में murine plasmacytoid वृक्ष के समान कोशिकाओं के विकास का आकलन

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

देखभाल के ग्लियोब्लास्टोमा मानक के संदर्भ में दत्तक थेरेपी के लिए कार टी कोशिकाओं की पीढ़ी

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Effector के सीडी 4 की दत्तक हस्तांतरण द्वारा Murine आंतों में सूजन की प्रेरण<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; उच्च</sup&gt; Immunodeficient चूहों में टी कोशिकाओं

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...