Name: contrast-matching detergent in small-angle neutron scattering experiments for membrane protein structural analysis and ab initio modeling
Uploaded: 2018-10-21T12:30:00
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生物和环境研究办公室支持 ORNL 的结构分子生物学 (CSMB) 和生物 san 中心的研究, 使用由美国能源部基础能源科学办公室科学用户设施部支持的设施。的能量。在利伯曼实验室的膜蛋白结构工作已得到 NIH (DK091357, GM095638) 和 NSF (0845445) 的支持。

1. 准备并提交中子设施光束时间和仪器方案
<ol><li>请查阅在线资源, 以确定提供一般用户中子束时间访问的中子散射设施, 如橡树岭国家实验室 (ORNL)。有关中子设施的地图和有关全球中子研究的信息可在线获得。46请注意, 这些设施通常有定期要求的建议;这将确定下一个光束时间何时可用。中子用于各种应用;搜索小角度中子散射 (san) 仪器, 特别是那些具有生物样品能力的设备。...

结构生物学研究人员利用互补的结构技术, 如溶液散射, 获得生物化学和结构细节 (如整体大小和形状) 从生物分子在溶液中。san 是一种特别吸引人的技术, 用于确定膜蛋白的低分辨率结构, 这是现代结构生物学和生物化学的核心重点。san 需要与晶体试验 (1 毫克/样品) 相媲美的纯化蛋白数量。最近扩大的商业可用性与膜蛋白研究相关的高纯度氘代洗涤剂使可获取的手段来操纵这种氢/氘含量的无膜蛋...

膜蛋白是由估计的30% 的所有基因1编码, 并代表了大多数现代药物的目标。2这些蛋白质执行一系列重要的细胞功能,3但尽管它们的丰度和重要性-仅代表在结构生物信息学 (蛋白质) 蛋白研究磁场中沉积的总结构的约1%数据银行。4由于其部分疏水性, 对膜结合蛋白的结构测定一直是极其具有挑战性的。5,6,7
由于许多生物物理技术需要在溶液中单分散颗粒进行测量, 因此在本机膜中隔离膜蛋白和稳定这些蛋白质是近年来研究的一个活跃领域。几十 年。8,9,10这些调查导致许多新的两亲性组件的发展溶解膜蛋白, 如 nanodiscs,11,12,13 bicelles,14,15和 amphipols。16,17然而, 洗涤剂胶束的使用仍然是满足给定蛋白质溶解度要求的最常见和最直接的方法之一。18,19,20,21,22,23,24,25不幸的是, 目前尚无单一洗涤剂或混合洗涤剂, 满足所有膜蛋白的存在;因此, 这些条件必须经过经验筛选, 以满足每种蛋白质的独特要求。26,27
洗涤剂在其临界胶束浓度以上的溶液中自组装, 形成称为胶束的聚合结构。胶束由许多洗涤剂单体组成 (通常范围从 20-200), 疏水性烷基链形成胶束芯和亲水性头组排列在胶束壳层, 面对水性溶剂。洗涤剂和胶束形成的行为是典型的查尔斯 Tanford 在疏水性作用,28和大小和形状的胶束从常用洗涤剂在膜蛋白研究已采用小角度散射特征。29,30对膜蛋白的洗涤剂组织也进行了研究, 并预期蛋白质洗涤剂复合物 (PDCs) 的形成与洗涤剂分子周围的蛋白质在一个安排, 类似于整洁的洗涤剂胶 束。31
使用洗涤剂的一个优点是, 所产生的胶束特性可以通过结合其他洗涤剂来操作。许多洗涤剂表现出理想的混合, 而混合胶束的选择性能甚至可以从组分和混合比例预测。22然而, 洗涤剂的存在仍然会给整个信号带来生物物理表征的挑战。例如, 使用 X 射线和光散射技术, PDC 中洗涤剂的信号与蛋白质几乎没有区别。32使用单粒子低温电子显微镜 (低温 EM) 进行的调查通常依赖于被困 (冰冻) 粒子;蛋白质的结构细节仍然被某些洗涤剂或高浓度的洗涤剂掩盖, 增加了背景。33通过计算方法来解释整个 PDC 结构 (包括洗涤剂) 的替代方法, 它试图在给定的膜蛋白周围重建洗涤剂。34
在中子散射的情况下, 胶束中洗涤剂的芯壳排列会产生一种有助于观测散射的形状因子。幸运的是, 可以更改解决方案组件, 使其不会对观察到的网络散射造成影响。这种 "对比匹配" 过程是通过用氘代替氢气来实现与背景 (缓冲器) 相匹配的散射长度密度来实现的。明智的选择洗涤剂 (与可用的氘代对应) 和他们的混合比例必须考虑。对于洗涤剂胶束, 这种替代可以使用同一头组的洗涤剂进行, 但具有氘代烷基链 (d-尾部而不是 h 尾)。由于洗涤剂混合良好,35它们的骨料将具有散射长度密度, 这是两个分量 (h 尾和 d 尾) 的摩尔分数加权平均值。当这种平均对比度与头部组一致时, 可以完全匹配均匀骨料结构, 以消除所有对观测到散射的贡献。
我们在这里介绍了一种通过将化学相同的洗涤剂分子与氘标记的烷基链结合在一起来操纵洗涤剂胶束中子对比度的协议。19,36,37这使得胶束核和壳体的同时对比度匹配, 这是一种独特的中子散射能力。35,38有了这一显著细化的细节水平, 对比度匹配可以使膜蛋白结构的其他不可行的研究。此外, 这种对比匹配方法可以扩展到其他涉及洗涤剂的系统, 如聚合物交换反应39和油水分散剂,40甚至其他增溶制剂, 如 bicelles,41nanodiscs,42或嵌段共聚物。43本手稿中概述的类似方法, 但在烷基链和/或头组采用了单一的含氘替代剂, 最近发表。37虽然这可以预期改善氢和氘在整个洗涤剂中的随机分布与此处介绍的方法相比, 在替代品和两个步骤的洗涤剂的可用位置数量有限洗涤剂的合成需要考虑更多的挑战。
下面详细介绍的协议步骤1和2经常重叠, 因为必须进行初步的实验规划才能提交质量建议。然而, 提案提交在这里被认为是第一步, 强调这一过程应该在中子实验之前很好地开始。还应指出的是, 建议应说明的一个先决条件步骤是对需要进行中子研究的样品进行生化和物理表征 (包括纯度和稳定性)。关于小角中子散射 (san) 的一般讨论超出了本文的范围。考夫曼44材料的参考工作表征中提供了一个简短而全面的介绍, 最近出版了一本以生物小角度溶液散射为重点的综合教科书。45在讨论部分给出了进一步建议的阅读。小角度散射使用所谓的散射矢量 Q 作为描述散射过程的中心量。本文使用广泛接受的定义 Q = 4π sin (θ)/λ, 其中θ是入射和散射光束的一半角, λ是埃中子辐射的波长。还存在使用不同符号 (如 "散射矢量") 的其他定义, 并且可能因2π或使用纳米代替埃而有所不同 (参见图 10的讨论)。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="848">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Amicon Ultra MWCO 50KDa concentrator&#160;</td>
			<td style="width:209px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:108px;">UFC905096</td>
			<td style="width:135px;">labware</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ammonium citrate dibasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A663</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ammonium sulfate</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>2150</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bioflo 310 Bioreactor System</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>M1287-2110</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Acros</td>
			<td>423525000</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Carbenicillin</td>
			<td>IBI Scientific</td>
			<td>IB02025</td>
			<td>antibiotic</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Chloramphenicol</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>3130</td>
			<td>antibiotic</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cobalt (II) chloride</td>
			<td>Acros</td>
			<td>AC21413-0050</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Copper (II) sulfate</td>
			<td>Acros</td>
			<td>AC19771-1000&#160;</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Deuterium oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>756822</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Drierite Gas Purifier</td>
			<td>W.A. Hammond Drierite Co. Ltd.</td>
			<td>27068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EDTA, disodium, dihydrate</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>4010</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Emulsiflex-C3</td>
			<td>Avestin</td>
			<td>EF-C3</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#196;kta Purifier UPC100</td>
			<td>GE Healthcare&#160;</td>
			<td></td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HiPrep 16/60 Sephacryl S-300 HR column</td>
			<td>GE Healthcare&#160;</td>
			<td>17116701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Imidazole</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IPTG</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>I3325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Iron(III) chloride hexahydrate</td>
			<td>MP Biochemicals</td>
			<td>ICN19404590</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LB Agar Miller</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1425-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-134</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Manganese(II) sulfate monohydrate</td>
			<td>Acros</td>
			<td>AC20590-5000</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Shaker</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SHKE6000-7&#160;</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">n-Dodecyl-d25-&#946;-D-maltopyranoside</td>
			<td>Anatrace</td>
			<td>D310T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">n-Dodecyl-&#946;-D-maltopyranoside</td>
			<td>Anatrace</td>
			<td>D310A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-346</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">RC 6 Plus Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific Sorvall</td>
			<td>46910</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SIGMAFAST protease inhibitor cocktail tablets, EDTA-free</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>795429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile 25mm syringe filter with 0.2&#181;m PES membrane</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28145-501</td>
			<td>labware</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile disposable bottle top filter with 0.2&#181;m PES membrane</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>596-4520&#160;</td>
			<td>labware</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Superdex 200 10/300 GL&#160;</td>
			<td>GE Healthcare&#160;</td>
			<td>17517501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Superose-12 10/300 GL column&#160;</td>
			<td>GE Healthcare&#160;</td>
			<td>17517301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ultrospec 10 Cell Density Meter</td>
			<td>GE Healthcare&#160;</td>
			<td>80211630</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Zinc sulfate monohydrate</td>
			<td>Acros</td>
			<td>AC38980-2500&#160;</td>
			<td>medium component</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

contrast-matching detergent in small-angle neutron scattering experiments for membrane protein structural analysis and ab initio modeling

橡树岭国家实验室高通量同位素反应器生物小角中子散射仪致力于生物材料、生物燃料加工和生物启发材料的研究, 涵盖纳米到微米长度刻度。本文介绍了在胶束成型洗涤剂溶液中研究膜蛋白 (这里, MmIAP, intramembrane aspartyl 蛋白酶, Methanoculleus marisnigri) 的物理性质 (即尺寸和形状) 的方法。非常适合这种小角度中子散射仪器, 等等。其他生物物理表征技术由于无法在蛋白质洗涤剂复合结构中处理洗涤剂的贡献而受到阻碍。此外, 对生物氘化实验室的访问提供了独特的能力, 以制备大规模培养和表达氘标记蛋白, 增强散射信号从蛋白质。虽然这种技术不提供高分辨率的结构细节, 但膜蛋白结构知识缺口包含许多可寻址的研究领域, 而无需近原子分辨率。例如, 这些区域包括寡聚状态的测定、复杂的形成、摄动过程中的构象变化和折叠/展开事件。通过这种方法的应用, 可以很容易地完成这些调查。

光束时间和仪器建议应清楚地将所需的所有资料传达给审查委员会, 以便对所提议的试验进行有效的评估。对于经验不足的用户, 强烈建议与 NSS 进行通信。NSS 可以评估初步可行性并指导提案提交, 以强调可行性、安全性和高影响科学的潜力。建议中提供的资料应包括背景资料和背景, 以说明研究的重要性;预计将获得的知识, 以及这对相关科学领域目前的理解有何影响;将使?...

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Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

用于膜蛋白结构分析和从头建模的小角中子散射实验中的对比匹配洗涤剂

该协议演示了如何获得一个低分辨率的从头模型和洗涤剂-溶解膜蛋白在溶液中使用小角中子散射与洗涤剂的对比匹配的结构细节。

The biological small-angle neutron scattering instrument at the High-Flux Isotope Reactor of Oak Ridge National Laboratory is dedicated to the ...

该方法有助于回答有关整离子膜蛋白的关键问题，如寡聚状态、其大小、整体形状和溶液中的低分辨率结构。膜蛋白的溶液研究需要稳定分子，如洗涤剂。该技术的优点是使洗涤剂不可见，并突出显示膜蛋白的信号。这种技术的影响延伸到许多生物和医学研究问题，因为超过1/3的蛋白质存在于膜中，在那里它们执行许多重要的细胞功能。这种方法的视觉演示至关重要，因为很难学习铀标记和中子散射步骤，因为很少有机构提供这些技术方面的培训。首先，使用 Web 应用程序 MULCh 确定中子散射长度密度或 SLD，该模块用于分析对比度变化数据。单击位于左侧导航窗格中的对比度，打开对比度模块。提供项目标题的文本，并输入以下两个组件的详细信息，作为子单元 1 和子单元 2。在公式文本框中输入每个组件的分子公式。然后输入音量下方框中每个组件的立方焦虑的体积。最后，输入缓冲区组件的详细信息。单击提交以执行中子对比度计算。生成结果页，该页提供散射长度密度和对比度匹配点的表，以及用于在缓冲区中任何给定的 D2O 百分比确定这些参数的公式。查看散射参数，特别注意组件对比度匹配点。生长大肠杆菌细胞，在LB介质中为目标蛋白序列提供可识别的表达载体，以600纳米或约1的OD 600达到光学密度。通过稀释LB培养物一至二十毫升的最小介质，将大肠杆菌细胞调整为标记介质，然后扩大规模，以过度表达脱白的蛋白质。在生长到大约 1 的 OD 600 后，使用含有 50、75 和 100%D2O 的最小介质重复 1 到 20 次稀释。一旦适应，继续生长在生物反应器中的培养，以提高脱化细胞质量的产量。随着 D2O 内容的增加，增长率将下降。继续收获，细胞和纯化细胞，如文本协议中描述的。接下来，使用快速蛋白质液相色谱系统，平衡具有大于两列最终交换缓冲液的尺寸排除柱。注射样本后，以与感兴趣的蛋白质对应的分离分数运行列。为小角度中子散射或 SANS 背景减法保留匹配缓冲液。要收集 SANS 数据，请先将样品和缓冲液加载到石英电池中。确保光束快门闭合后，接近样品环境区域，将石英电池放在样品更换器中。记录每个样本单元的样本更改器位置。在离开样品环境区域之前，检查该区域并确保光束路径没有障碍物。然后打开光束快门。执行表扫描以进行自动数据收集。按照中子散射科学家提供的仪器操作说明进行操作。使用 Mantid 绘图软件和 Python 脚本将 SANS 数据从 2D 图像缩减到 1D 绘图。为此，请登录到远程分析群集，然后从命令行执行 Mantid 绘图。然后打开提供的用户缩减脚本，并在相应的列表中将样本的相应扫描编号或标识放在缓冲区对中。执行脚本以在指定位置以四列文本文件生成缩减的数据。右键单击适当的工作空间和 Mantid 绘图，并选择有错误的绘图，以初始检查散射轮廓。下载 ATSAS 软件套件，并使用 PRIMUS 进行数据绘制、缓冲区缩放和减法以及 Guinier 分析。启动 ATSAS、SAS 数据分析应用程序，并加载与样本和缓冲区对对应的缩减数据文件。要正确缩放缓冲区，请选择高 Q 中的数据范围，其中两个配置文件在平面中相似，然后单击操作选项卡下的缩放按钮。增加数据范围以查看所有点，单击"减法"以执行此操作。使用 SAS 数据分析应用程序的分析选项卡对缓冲区减去的样本数据执行 Guinier 分析。请确保在列表中选择了正确的文件，然后单击旋转半径。单击自动 RG 按钮即可自动尝试执行 Guinier 拟合。扩展用于包括所有低 Q 数据的数据范围，并开始通过带走高 Q 点来缩小数据范围，直到 Q 最大时间 RG 限制低于 1.3。使用残差图验证数据在拟合范围内是否为线性。对拟合区域进行小调整，并监视这些值对拟合中使用的数据范围的灵敏度。获取侏儒中R的概率分布函数P。现在，在分析选项卡中启动距离分布向导。获得与数据良好的拟合对于获得质量模型至关重要。确定Dmax，分子内的最大原子间距离。通过取消选中框以强制 Rmax 等于零并输入 Dmax 的大值来估计 Dmax 的值。R P 图中的第一个 X 截取产生此估计值。对此 Dmax 值进行增量更改，以及用于优化侏儒拟合数据和 R 曲线 P 的点数的数据范围。从 SAS 数据分析分析选项卡上的水坝按钮启动 PRIMUS 形状向导，并使用手动选择的参数。定义 Guinier 范围从拟合，然后使用导航按钮继续执行下一步。从 R 图的 P 定义拟合值，然后继续执行下一步。为 ab 启动建模过程提供参数。然后使用提交按钮启动进程。使用 ATSAS 中的 supcomb 将最终无包络与相关的高分辨率模型叠加和叠加。将高分辨率 PDB 模型的副本放在工作目录中，以适合 SANS 信封。然后使用 PDB 文件名作为两个参数从命令行执行 supcomb，并首先列出模板结构。最后使用 PyMOL（3D 分子图形查看程序）可视化 ab initio 模型结果。一旦叠加了 SANS 包络和高分辨率结构，这些模型就可以使用任何分子图形查看程序进行可视化。将显示 PyMOL 可视化过程的概述。在 PyMOL 中打开 PDB 结构文件后，模型应在 PyMOL 查看器窗口中可见。可以使用每个文件名旁边的 S 按钮更改每个模型的表示形式。此处用于 SANS 包络的表面表示，卡通表示用于高分辨率模型的蛋白质骨干。可以从"C"按钮下提供的选项中选择合适的配色方案。对于蛋白质链，链弓着色提供从 N 到 C 的色梯度，以帮助解释。透明度应用于表面表示，以便更好地可视化包络中的蛋白质结构。对于出版物图像，建议使用白色背景。应用这些可视化提示后，可以通过单击并拖动结构来检查 3D 结构。可以执行透视和分子旋转和平移的操作。在尝试此程序时，必须记住将洗涤剂头和尾部组中的中子对比度与 D2O H2O 溶剂准确匹配。该技术开发后，为探索膜内阿斯巴托蛋白酶的结构铺平了道路。这些蛋白质参与免疫反应，丙型肝炎和阿尔茨海默病。不要忘记，在生化实验室和中子束设施工作可能是危险的。执行本程序时，必须采取佩戴个人防护设备以及遵守所有设施安全规则和放射张贴等预防措施。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

使用脚手架脂质体重构脂质近端蛋白质 - 蛋白质相互作用<em&gt;体外</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

科研

生物化学

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

结合 x 射线晶体学与小角度 x 射线散射到模型的非结构化区域的 Nsa1 从s 酿酒酵母

Determination of the full-length structure of ribosome assembly factor Nsa1 from Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) is challenging because of the ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

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采用自动结晶耦合原位动态光散射的不同尺寸生长蛋白晶体

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

膜蛋白对洗涤剂敏感相互作用的检测

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

利用商用仪器和自由开源亮度分析软件对蛋白质的聚齐聚进行无标定的体外定量化

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Structural Studies of Macromolecules in Solution using Small Angle X-Ray Scattering

小角度 x 射线散射溶液中大分子的结构研究

Protein-protein interactions involving proteins with multiple globular domains present technical challenges for determining how such complexes form and ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

细胞细胞接触物蛋白质-蛋白质相互作用的荧光波动光谱测定

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

放射性脉冲追逐对活细胞蛋白质折叠、迁移和降解的分析

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization

离子交换色谱 (IEX) 与多角度光散射 (ALS) 相结合, 用于蛋白质分离和表征

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

蛋白质的表征(按尺寸-排除色谱与多角度光散射相结合(SEC-MALS)

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...