Name: detecting protein subcellular localization by green fluorescence protein tagging and 4',6-diamidino-2-phenylindole staining in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2018-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans at JoVE.

وتم الحصول على سلالات C. ايليجانس المستخدمة في هذه الدراسة من مركز علم الوراثة كاينورهابديتيس، الذي يدعمه "المعاهد الوطنية للصحة"-مكتب برامج البنية التحتية البحثية (P40 OD010440). هذا العمل كان يدعمها في المعاهد الوطنية للصحة: 1R03AG048578-01 يونيو ليانغ، جامعة مدينة نيويورك-ككرج 1501 إلى يونيو ليانغ، ومجلس السلام والأمن-جامعة مدينة نيويورك 66184-00 44 و 45 67248-00 إلى يونيو ليانغ. ونحن نشكر كاثي سافاج--دان يرجى تقاسم الفضاء المختبر لها. وقد جمعت جميع الأسفار الصور في "المرافق الأساسية كلية كوينز". ونحن نشكر وليام ج. رايس لتعليقاته على المخطوطة.

1-الحلول
<ol><li>
لوحات NGM
	<ol>
<li>في قارورة Erlenmeyer ل 2، إضافة 3 غرام من كلوريد الصوديوم، ز 17 من أجار، 2.5 g من ببتون، ومل 975 درهم2سين غطاء فم قارورة مع رقائق الألومنيوم. اﻷوتوكﻻف قارورة للحد الأدنى 50 بارد عليه لمدة 20 – 30 دقيقة.</li>
		<li>قم بإضافة حلول المعقم: 1 مل كاكل م 12، 1 مل 5 ملغ/مل ...

<ol>
	<li>Essers, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOXO+transcription+factor+activation+by+oxidative+stress+mediated+by+the+small+GTPase+Ral+and+JNK.">FOXO transcription factor activation by oxidative stress mediated by the small GTPase Ral and JNK.</a> The EMBO Journal. 23 (24), 4802-4812 (2004).</li><li>Oh, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JNK+regulates+lifespan+in+Caenorhabditis+elegans+by+modulating+nuclear+translocation+of+forkhead+transcription+factor/DAF-16.">JNK regulates lifespan in Caenorhabditis elegans by modulating nuclear translocation of forkhead transcription factor/DAF-16.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (12), 4494-4499 (2005).</li><li>Gross, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+cleaved+BID+targets+mitochondria+and+is+required+for+cytochrome+c+release,+while+BCL-XL+prevents+this+release+but+not+tumor+necrosis+factor-R1/Fas+death.">Caspase cleaved BID targets mitochondria and is required for cytochrome c release, while BCL-XL prevents this release but not tumor necrosis factor-R1/Fas death.</a> The Journal of Biological Chemistry. 274 (2), 1156-1163 (1999).</li><li>Doerflinger, M., Glab, J. A., Puthalakath, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BH3-only+proteins:+a+20-year+stock-take.">BH3-only proteins: a 20-year stock-take.</a> The FEBS Journal. 282 (6), 1006-1016 (2015).</li><li>Mayorova, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+containing+aragonite+crystals+mediate+responses+to+gravity+in+Trichoplax+adhaerens+(Placozoa),+an+animal+lacking+neurons+and+synapses.">Cells containing aragonite crystals mediate responses to gravity in Trichoplax adhaerens (Placozoa), an animal lacking neurons and synapses.</a> PLoS One. 13 (1), e0190905 (2018).</li><li>Terron-Camero, L. C., Molina-Moya, E., Sanz-Fernandez, M., Sandalio, L. M., Romero-Puertas, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+(ROS/RNS)+during+hypersensitive+cell+death.">Detection of reactive oxygen and nitrogen species (ROS/RNS) during hypersensitive cell death.</a> Methods in Molecular Biology. , 97-105 (2018).</li><li>Pedrazzini, E., Vitale, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+biosynthesis+and+maturation+in+the+ER.">Protein biosynthesis and maturation in the ER.</a> Methods in Molecular Biology. , 179-189 (2018).</li><li>Liang, J., Shaulov, Y., Savage-Dunn, C., Boissinot, S., Hoque, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+intracellular+channel+proteins+respond+to+heat+stress+in+Caenorhabditis+elegans.">Chloride intracellular channel proteins respond to heat stress in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 12 (9), e0184308 (2017).</li><li>Evans, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+and+microinjection.">Transformation and microinjection.</a> Wormbook. , (2006).</li><li>Mello, C., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+transformation.">DNA transformation.</a> Methods in Cell Biology. 48, 451-482 (1995).</li><li>Yochem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nomarski+images+for+learning+the+anatomy,+with+tips+for+mosaic+analysis.">Nomarski images for learning the anatomy, with tips for mosaic analysis.</a> Wormbook. , (2006).</li><li>Dulhunty, A., Gage, P., Curtis, S., Chelvanayagam, G., Board, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+transferase+structural+family+includes+a+nuclear+chloride+channel+and+a+ryanodine+receptor+calcium+release+channel+modulator.">The glutathione transferase structural family includes a nuclear chloride channel and a ryanodine receptor calcium release channel modulator.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (5), 3319-3323 (2001).</li><li>Suh, K. S., Malik, M., Shukla, A., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLIC4,+skin+homeostasis+and+cutaneous+cancer:+surprising+connections.">CLIC4, skin homeostasis and cutaneous cancer: surprising connections.</a> Molecular Carcinogenesis. 46 (8), 599-604 (2007).</li><li>Yao, Q., Qu, X., Yang, Q., Wei, M., Kong, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLIC4+mediates+TGF-beta1-induced+fibroblast-to-myofibroblast+transdifferentiation+in+ovarian+cancer.">CLIC4 mediates TGF-beta1-induced fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation in ovarian cancer.</a> Oncology Reports. 22 (3), 541-548 (2009).</li><li>Ronnov-Jessen, L., Villadsen, R., Edwards, J. C., Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+a+chloride+intracellular+channel+gene,+CLIC4,+in+transforming+growth+factor-beta1-mediated+conversion+of+fibroblasts+to+myofibroblasts.">Differential expression of a chloride intracellular channel gene, CLIC4, in transforming growth factor-beta1-mediated conversion of fibroblasts to myofibroblasts.</a> The American Journal of Pathology. 161 (2), 471-480 (2002).</li><li>He, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CLIC4+in+the+host+innate+responses+to+bacterial+lipopolysaccharide.">Role of CLIC4 in the host innate responses to bacterial lipopolysaccharide.</a> European Journal of Immunology. 41 (5), 1221-1230 (2011).</li><li>Zhong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+CLIC4+enhances+autophagy+and+triggers+mitochondrial+and+ER+stress-induced+apoptosis+in+human+glioma+U251+cells+under+starvation.">Inhibition of CLIC4 enhances autophagy and triggers mitochondrial and ER stress-induced apoptosis in human glioma U251 cells under starvation.</a> PLoS One. 7 (6), e39378 (2012).</li><li>Liang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+schnurri+homolog+sma-9+mediates+stage-+and+cell+type-specific+responses+to+DBL-1+BMP-related+signaling.">The Caenorhabditis elegans schnurri homolog sma-9 mediates stage- and cell type-specific responses to DBL-1 BMP-related signaling.</a> Development. 130 (26), 6453-6464 (2003).</li><li>Leopold, L. E., Heestand, B. N., Seong, S., Shtessel, L., Ahmed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+pairing+during+meiosis+triggers+multigenerational+transgene+silencing+in+Caenorhabditis+elegans.">Lack of pairing during meiosis triggers multigenerational transgene silencing in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (20), E2667-E2676 (2015).</li><li>Schultz, R. D., Bennett, E. E., Ellis, E. A., Gumienny, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+extracellular+matrix+organization+by+BMP+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of extracellular matrix organization by BMP signaling in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 9 (7), e101929 (2014).</li><li>Matus, D. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+cell+fate+requires+G1+cell-cycle+arrest+and+histone+deacetylase-mediated+changes+in+gene+expression.">Invasive cell fate requires G1 cell-cycle arrest and histone deacetylase-mediated changes in gene expression.</a> Developmental Cell. 35 (2), 162-174 (2015).</li><li>Reddy, K. C., Villeneuve, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+HIM-17+links+chromatin+modification+and+competence+for+initiation+of+meiotic+recombination.">C. elegans HIM-17 links chromatin modification and competence for initiation of meiotic recombination.</a> Cell. 118 (4), 439-452 (2004).</li><li>Ames, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-cell-autonomous+role+of+BEC-1/BECN1/Beclin1+in+coordinating+cell-cycle+progression+and+stem+cell+proliferation+during+germline+development.">A non-cell-autonomous role of BEC-1/BECN1/Beclin1 in coordinating cell-cycle progression and stem cell proliferation during germline development.</a> Current Biology. 27 (6), 905-913 (2017).</li><li>Pekar, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+the+environment,+DAF-7/TGFbeta+signaling+and+LAG-2/DSL+ligand+expression+in+the+germline+stem+cell+niche.">Linking the environment, DAF-7/TGFbeta signaling and LAG-2/DSL ligand expression in the germline stem cell niche.</a> Development. 144 (16), 2896-2906 (2017).</li><li>Schvarzstein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+helicase+HIM-6/BLM+both+promotes+MutSgamma-dependent+crossovers+and+antagonizes+MutSgamma-independent+interhomolog+associations+during+caenorhabditis+elegans+meiosis.">DNA helicase HIM-6/BLM both promotes MutSgamma-dependent crossovers and antagonizes MutSgamma-independent interhomolog associations during caenorhabditis elegans meiosis.</a> Genetics. 198 (1), 193-207 (2014).</li><li>Flemming, A. J., Shen, Z. Z., Cunha, A., Emmons, S. W., Leroi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+polyploidization+and+cellular+proliferation+drive+body+size+evolution+in+nematodes.">Somatic polyploidization and cellular proliferation drive body size evolution in nematodes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (10), 5285-5290 (2000).</li><li>Nagamatsu, Y., Ohshima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+for+the+control+of+body+size+by+a+G-kinase+and+a+downstream+TGFbeta+signal+pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">Mechanisms for the control of body size by a G-kinase and a downstream TGFbeta signal pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Genes to Cells. 9 (1), 39-47 (2004).</li></ol>

تقدم هذه المقالة طريقة سريعة وفعالة للتحقق من التغييرات البروتين سوبسيلولار من السيتوبلازم إلى النواة. وأبدى تعبير البروتين بدمج التجارة والنقل، بينما تم التحقق من بنية نواة طريق DAPI تلطيخ (الشكل 3). منذ إيمونوستينينج C. ايليجانس البروتينات التحدي، معظم C. ايليجانس </e...

تغيير التعريب سوبسيلولار البروتين إليه مشتركة استجابة لإشارات داخلية أو خارجية مثل الإجهاد الحراري، والمجاعة، والأكسدة، المبرمج، الفسفرة البروتين وغيرها. على سبيل المثال، يحفز الإجهاد الحراري عضو فوكسو DAF-16 النووية إزفاء1،2، والبروتين BCL-2 برو-apoptotic محاولة translocates إلى الميتوكوندريا عند وفاة تلقي الإشارات3،4. وتتوفر تقنيات مختلفة للكشف عن هذه التغييرات. مزيج من النشاف الغربية وعزل المتحلل هياكل سوبسيلولار (مثلاً، الميتوكوندريا أو الأنوية) يمكن أيضا تحقيق الهدف3. بيد أنه يتطلب جسم معين ضد بروتين الفائدة. وهكذا، يصبح جسم راسخة مفتاح النجاح. نهج بديل يتمثل في تسمية مختلف الهياكل سوبسيلولار أو العضيات مع علامات مختلفة مثل مشري والأسفار الصفراء البروتين (يفب)، البروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل) والبروتين الأحمر الفلورية (RFP)، وفي الوقت نفسه تسمية البروتين من الفائدة مع علامات أخرى. ثم، مراقبة لهم تحت مجهر [كنفوكل] إلى ترجمة أهداف5،6. النظائر المشعة خيار بديل لوسم البروتينات المستهدفة وثم كشف عن التعريب سوبسيلولار7. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب التدريب السليم والتعامل مع النفايات المشعة. تحت ظروف مثل الافتقار إلى جسم معين، وعدم وجود علامة السليم، أو [سكرسنس] معدات مثل مجهر [كنفوكل]، يحتاج نهج بديل النظر. لتحديد إزفاء بروتين النووي، أنها جذابة لتسمية البروتينات المستهدفة فقط مع علامة ووصمة عار الأنوية مع الكاشف الكيميائي 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) منذ هذا يتطلب إلا مجهر الأسفار عادية.
إيمونولابيلينج C. ايليجانس مع الأجسام المضادة صعبة بسبب نفاذية منخفضة قشر البيض أو بشرة collagenous المحيطة بالحيوان. وفي الوقت نفسه، نظراً للبروتينات C. ايليجانس متباينة إلى حد كبير من تلك أورثولوجس الفقاريات، تقديم عدد قليل من الشركات التجارية C. ايليجانس بمنتجات محددة. من الصعب لمختبر صغير لتوليد الأجسام المضادة C. ايليجانس لأنفسهم. الباحثين في المجتمع غالباً ما تستخدم البروتينات المعلمة كعلامات لإظهار تعبير بروتين التعريب أو الجينات. يستخدم هذا المقال أكسل 1::GFP كمثال لتعقب إزفاء بروتين النووي تحت ضغط الحرارة8. متعدية الجنسيات متكامل أكسل 1::gfp في جينوم الحيوان يستخدم ستابلي التعبير عن الجينات مع الانصهار بروتينات فلورية خضراء . وأظهرت الأبحاث أن أكسل-1 هو المعرب عنها في الأمعاء وجدار الجسم العضلات وغيرها من الهياكل سوبسيلولار8. هذا البروتوكول يوضح كيفية مزامنة الديدان إلى المرحلة الرابعة اليرقات (L4)، أداء الإجهاد الحرارة التجربة، وسلوك تلطيخ DAPI، تثبيت الإيثانول والاسيتون التثبيت، وتصوير تحت مجهر فلورية عادية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>40043</td>
			<td>both Hoechst 33258 and Hoechst 33342 also works well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50</td>
			<td>CGC</td>
			<td>OP50</td>
			<td>https://cgc.umn.edu/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://cgc.umn.edu/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kim Wipe</td>
			<td>Kimberly-Clark Corporation</td>
			<td></td>
			<td>soft tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss&#160; AX10</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiovision Rel 4.8</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>microscope software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AxioCam MR Rev3</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>digital camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent nail polish gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm petri dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-20 &#181;L pipettor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-200 &#181;L pipettor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200-1000 &#181;L pipettor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-200 &#181;L pipet tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200-1000 &#181;L pipet tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire worm pick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting protein subcellular localization by green fluorescence protein tagging and 4',6-diamidino-2-phenylindole staining in caenorhabditis elegans

في هذا البروتوكول، بروتين انصهار بروتين (بروتينات فلورية خضراء) فلورية خضراء و 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) تلطيخ تستخدم لتعقب التغييرات التعريب سوبسيلولار البروتين؛ على وجه الخصوص، يؤكد إزفاء نووية تحت حرارة الشرط. تتفاعل البروتينات إشارات في المقابل إلى الخارجية والداخلية. إنشاء إليه مشتركة لتغيير به التعريب سوبسيلولار. توضح هذه المقالة بروتوكول لتتبع البروتين التعريب التي لا تتطلب جسم أو وضع العلامات المشعة أو مجهر [كنفوكل]. في هذه المقالة، يتم استخدام بروتينات فلورية خضراء للوسم أكسل-1 البروتين المستهدف في C. ايليجانس، عضو الأسرة كلوريد البروتينات (كليكس) قناة داخل الخلايا، بما في ذلك CLIC4 الثدييات. خط المعدلة وراثيا متعدية متكامل أكسل-1::gfp (مع أحد المروجين وتسلسل جين كامل) أنشئت γ-الإشعاع والتحول، وثابت يعبر عن الجينات و التجارة والنقل. وأظهرت البحوث التي أجريت مؤخرا أن أكسل 1::GFP عند الإجهاد الحراري، عدم الأكسدة، يتراكم في النواة. تداخل إشارة بروتينات فلورية خضراء مع هيكل النوى و DAPI إشارات تؤكد التغييرات التعريب سوبسيلولار أكسل-1 تحت الضغط. هذا البروتوكول يقدم طريقتين تثبيت مختلفة لتلوين DAPI: التثبيت الإيثانول والاسيتون التثبيت. البروتوكول المصبوغة DAPI الواردة في هذه المادة بسرعة وكفاءة ويحافظ على إشارة بروتينات فلورية خضراء والتغييرات التعريب سوبسيلولار البروتين. هذا الأسلوب يتطلب إلا مجهر الأسفار مع نومارسكي وعامل تصفية فيتك وعامل تصفية DAPI. ومناسبة لإعداد مختبر صغير والبحث الجامعي والبحوث طالب مدرسة ثانوية وفصول دراسية في مجال التكنولوجيا الأحيائية.

كلوريد قناة داخل الخلايا البروتينات (انقر) هي بروتينات متعددة الوظائف التي هي الغاية حفظت عبر الأنواع12. ويبين الكثير من البحوث أن كليكس تنظيم الإجهاد الخلوية، أوتوفاجي، المبرمج، التسرطن، والأوعية، والاستجابة المناعية الفطرية بلعم في نظام الثدييات<sup class="xre...

Watch this Scientific Journal Video about Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans at JoVE.

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

هذا البروتوكول يوضح كيفية تعقب إزفاء بروتين النووي تحت الإجهاد الحراري باستخدام بروتين انصهار بروتين (بروتينات فلورية خضراء) فلورية خضراء كعلامة 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) وتلطيخ. DAPI تلطيخ البروتوكول بسرعة ويحافظ على إشارات التعريب سوبسيلولار البروتين والتجارة والنقل.

الكشف عن "البروتين التعريب سوبسيلولار الأخضر Fluorescence علامات البروتين" و 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي تلطيخ في ايليجانس كاينورهابديتيس

In this protocol, a green fluorescence protein (GFP) fusion protein and 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining are used to track protein ...

Research

JoVE Journal

Biology

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

باستخدام نظام التقطير GELFREE 8100 لتقطير الوزن الجزيئي وبناء مع مرحلة الانتعاش السائل

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

الأساسية<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em&gt; طرق: التزامن والمراقبة

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Preparation of the Mgm101 Recombination Protein by MBP-based Tagging Strategy

إعداد البروتين التوحد Mgm101 بواسطة استراتيجية توصيف المستندة إلى MBP

The MGM101 gene was identified 20 years ago for its role in the maintenance of mitochondrial DNA. Studies from several groups have suggested that the ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

البروتين البروتين التفاعلات تصور من قبل ثنائي الجزيء الإسفار التكملة في Protoplasts التبغ وأوراق

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

الأخضر الفلورسنت القائم على البروتين التعبير فحص غشاء البروتينات في<em&gt; الإشريكية القولونية</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

الكميات التعبير البروتين والتعاون التعريب عن طريق تعدد المناعية النسيجية تلطيخ والمتعددة الأطياف التصوير

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Quantitative Localization of a Golgi Protein by Imaging Its Center of Fluorescence Mass

تعريب كمية البروتين غولجي بالتصوير كتلته مركز الأسفار

The Golgi complex consists of serially stacked membrane cisternae which can be further categorized into sub-Golgi regions, including the cis-Golgi, ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

أساليب "دراسة التغيرات" في "تجميع البروتين الأصيل" مع التقدم في السن في ايليجانس كاينورهابديتيس

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...