Name: nasal potential difference to quantify trans-epithelial ion transport in mice
Uploaded: 2018-07-04T14:30:00
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저자는 비판적 원고 편집에 대 한 교수 J. Lebacq 감사 합니다. Cftrtm1Eur (homozygous F508del-CFTR (FVB/129) 마우스는 에라스무스, 로테르 담, 네덜란드, 낭 성 섬유 증 EU FP6 연구를 위한 유럽 경제 공동체 유럽 조정 작업의 지원에 의해 개발 되었다 LHHM-CT-2005-018932입니다.

연구 및 절차 연구 (시 n ° 86/609)에서 동물 사용에 대 한 유럽 공동체 규정 동의 UCL (2017/UCL/MD/015)의 동물 연구에 대 한 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 조사 지침 2010/63/유럽 유럽의 회의 2010 년 9 월 월 22 일의 위원회의 과학적인 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 따라 동물 실험에 대 한 정규화 됩니다.
1. 테스트 전 평가 및 관리
<ol><li>더블 루멘 비 강 카 테 터를 준비 합?...

이 문서의 목적은 이온 운송업 자, 주로 CFTR 그리고 ENaC의 무결성을 테스트 하는 데 필요한 시간의 길이 대 한 자발적 호흡 생쥐에서 솔루션의 지속적인 관류에서 비 강 PD를 측정 하기 위한 적절 한 프로토콜을 설명 하는 것입니다. 프로토콜의 모든 단계 완전 동물 복구 및 좋은 품질 및 재현성 데이터도 최적화 되었습니다. 특히, 중요 한 단계는 마 취 평가 및 관리, 그리고 적절 한 동물 위치 그리?...

거의 3 년간 전기 잠재적인 차이 (PD) 측정 원심 항공1의 대표로 서 비 강 점 막에 표현 하는 막 횡단 이온 전송기의 기능 상태를 평가 하기 위해 사용 되었습니다. 둘 다의 꼭대기 막에 지역화 다단계 동적 테스트2,3, 코 PD 수 있습니다 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 (CFTR)과 상피 나트륨 채널 (ENaC) 활동의 기능 해 부 상피 세포 하 고 기도 표면 수 분에 중요 한 역할을 발휘. 비 강 PD 테스트의 주요 임상 응용 프로그램은 CF, 유럽 국가에 1 개 2500 라이브 출생의 평균 발생률과 백인 인구에 있는 가장 일반적인 치명적인 유전 질환의 진단에 도움을. 테스트는 오랫동안 감쇠, oligo 또는 모노 증상 형태 일반적으로 나중에 진단 하는 CF와 CF 관련 장애 vas deferens, 특 발성 만성 췌 장 염, 알레르기의 선 천 성 양측 부재 등의 진단에 도움이 입증 bronchopulmonary aspergillosis, 그리고 기관지 확장 증4. 더 최근에, 기본적인 CFTR의 치료 변조의 clinometric 평가5,6,7,,89,10,11 결함 ,12,,1314,,1516 새로운 CF 치료의 임상 시험에서 비 강 PD의 사용 했다. 전 임상 설정에서 테스트 새로운 CF 대상 치료18,19,,2021의 bioactivity의 조사 수 있도록 마우스17 에 적응 되었습니다. 마우스에는 기술은 이다 섬세 한, 설치류와 인간 사이 코 영역의 크기에 종 관련 해 부 차이 설치류에 nasofacial 지역에서 감각 입력의 필수적인 역할에 주로 기반으로. 그것은 훈련 되 고 숙련 된 운영자, 전용된 장비 및 공급을 요구 한다.
CF는 전 샘의 다중 조직 장애는 만성 호흡기 질환에서 임상 그림을 지배 하고있다. 질병은 인코딩 순환 아데노신 monophosphate (캠프) 유전자에 돌연변이 의해 발생-규제 CFTR 염화 물 채널22. 날짜 하려면, 2000 개 이상의 CFTR 돌연변이 발견된23되었습니다. 가장 일반적인 돌연변이24,25, CF 대립 유전자의 거의 90%에서 발견 위치 508 (F508del-CFTR) 단백질의 polypeptide 사슬에서에서 페닐알라닌의 삭제에 해당 합니다. CFTR 단백질은 순전히 저항 작은 전도성 염화 물 채널 이다. CFTR 다른 전송 메커니즘, 특히 ENaC26,27을 조절 하는 상당한 증거가 있다. 결함이 전해질 수송, CFTR 종속 염화 전도도 감소 등 증가 ENaC 종속 나트륨 전도성, CF epithelia의 특징 이다. 전 결함 감소 또는 폐지 repolarization 전기 그라데이션 좋아하는 염화 경과 isoprenaline (는 β-아드레날린 길 항 제는 세포내 cAMP를 증가) 또는 산림 (는 adenylate의 추가에 의해 반영 된다 있고 주 작동 근, 임상 사용을 위해 승인 되지). 후자의 결점은 비 강 점 막 (더 부정적인 PD)와 amiloride, ENaC28을 차단 하는 뇨 제 약물에 대 한 증가 응답의 기저 hyperpolarization에 의해 반영 됩니다.
CF 마우스 모델 자주 CF 연구에 사용 되 고 CF 병 리 해 부에 귀중 한 되었습니다. 요즘, 적어도 15 모델 설명된29, 중 3 개는 되는 가장 임상 관련 F508del 돌연변이30,,3132homozygous 되었습니다. 이 세30, 로테르 담의 에라스무스 대학에서 개발 중 대학교 catholique 드 루 뱅 (UCL) 실험에서 거의 20 년 동안 사용 되었습니다. Cftrtm1Eur 모델30 CF 질병의 multiorgan 이상 공부 하 고 새로운 치료 전략18,,1920의 효능을 테스트 하는 매우 유용한 것으로 입증 되었습니다. 21. 동안 또는 후 초기 수많은 문제가 발생할 수 있습니다 (< 24 h) 쥐에서 비 강 PD 테스트. 이 논문에서는, broncho-코에 끼얹는다 솔루션의 포부를 피하는 비 강 카 테 터에 현장에서 지속적인 관류 및 측정값에 대 한 유지에 필요한 마 취의 적절 한 깊이 설명 되어 있습니다. 테스트의 끝에 동물 보호, 빠르게 반전 하는 완전 한 복구는 동물의 마 취로 이어지는 마 취 약물의 해독의 조합의 관리를 포함 하 여 설명 이기도 합니다. 이러한 절차 자발적 호흡 마우스, 감소 테스트 관련 사망률과 같은 동물에 테스트 반복에 신뢰성 높은 측정을 허용 합니다. 비 강 PD 테스트와 야생-타입 마우스는 CF에서에서 가져온 대표적인 데이터는 표시 하 고 논의.
Murine 코 PD 테스트 프로토콜은 3 개의 회의에 보고: 평가 및 관리 하기 전에, 하는 동안, 그리고 테스트 후. 사전 테스트 평가 및 관리, 지속적인 비 강 관류에 대 한 사용 되는 솔루션의 이중 루멘 비 강 카 테 터의 준비의 프로토콜 자세히 설명 되어 있습니다. 평가 시험의 관리 부분 동안 실험 설정 및 마우스의 처리는 일 분 해 부. 마지막으로, 전체 동물 복구를 향상 시키기 위해 테스트의 끝에 동물의 관리를 설명 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1092px;" width="1091">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Portex polyethylene tube&#160;</td>
			<td style="width:403px;">Smiths Medical, Hythe, Kent, England CT21 6JL</td>
			<td style="width:225px;">Portex 800/100/500;2.0mm ID, 3.0 mmOD</td>
			<td style="width:167px;">to prepare capillary tubes for nasal probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Electrode cream</td>
			<td style="width:403px;">Parker, Fairfield, NJ, USA</td>
			<td style="width:225px;">Redux cream</td>
			<td>to build electrode bridges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ag/AgCl electrodes</td>
			<td style="width:403px;">Biomedical, Clinton Township, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">JNS BNT131-1,0</td>
			<td>measuring and reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">amiloride hydrochloride</td>
			<td style="width:403px;">Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">A7410</td>
			<td>to prepare perfusion solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">forskolin</td>
			<td style="width:403px;">Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">F6886</td>
			<td>to prepare perfusion solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Knick Portamess voltmeter</td>
			<td>Elektronisch Me&#946;ger&#228;te, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:225px;">Portavo 904 pH</td>
			<td>to measure potential difference</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraly SW 112 Software&#160;</td>
			<td>Elektronisch Me&#946;ger&#228;te, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:225px;">Paraly SW112 software</td>
			<td>to capture potential difference data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">midazolam&#160;</td>
			<td style="width:403px;">Mylan, Hoeilaart, Belgium</td>
			<td style="width:225px;">Dormicum 15mg/3ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic premedication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">fentanyl</td>
			<td>Janssen Cilag, Berchem, Belgium</td>
			<td>Fentanyl-Janssen 0.05 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">medetomidine</td>
			<td>Orion Pharma, Espoo, Finland</td>
			<td>Domitor 1 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">droperidol&#160;</td>
			<td>Janssen&#160; Cilag, Berchem, Belgium</td>
			<td>Dehydrobenzperidol 2.5 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">clonidine&#160;</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim am Rhein, Germany</td>
			<td>Catapressan 0.15 mg/ml,</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">refernce IV catheter</td>
			<td>Becton Dickinson, Sandy, UT, USA</td>
			<td>24 GA x 0.75 IN, BD Insyte-W</td>
			<td>to build electrode bridges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">forceps&#160;</td>
			<td>Fine science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>Dumont #5, Fine science Tools</td>
			<td>to place the nasal catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">naloxone&#160;</td>
			<td>Braun Medical, Brussels, Belgium</td>
			<td>Narcan, 0.4 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic antagonist</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">atipamezole&#160;</td>
			<td>Zoetis, Bloomberg, Belgium</td>
			<td>Antisedan, 5 mg/ml</td>
			<td>to serve as a medetomedine specific antidote&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Heating pads&#160;</td>
			<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA</td>
			<td>18,8x37,5 cm; 15,5x15,5 cm</td>
			<td>to avoid hypothermia during and after the test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Peristaltic pump P1</td>
			<td>GE Life Sciences, Uppsala, Sweden</td>
			<td>18111091</td>
			<td>to perfuse solutions in the mouse nose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:403px;">Loctite, Henkel, D&#252;sseldorf, Germany&#160;</td>
			<td style="width:225px;">super glue 3</td>
			<td>to glue together two capillary tubes&#160; for nasal probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">NaCl</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">RES0926S-A7</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">CaCl2.2H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">M7304</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MgCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">1551128</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">K2HPO4</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">1551139</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Na gluconate</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">S2054</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ca gluconate</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">C8231</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MgSO4.7H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">RES0089M-A7</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">BD needle&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, USA</td>
			<td style="width:225px;">BD 26G (0.45x10 mm)</td>
			<td>intraperitoneal injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nasal potential difference to quantify trans-epithelial ion transport in mice

비 강 잠재적인 차이 테스트 낭 성 섬유 증 (CF)의 진단에 도움을 거의 3 수십 년 동안 사용 되었습니다. 그것은의 경우에 도움이 될 감쇠, 일반적으로 나중에 진단 하는 CF와 CF 관련 장애 vas deferens, 특 발성 만성 췌 장 염, 알레르기의 선 천 성 양측 부재 등의 oligo 또는 모노 증상 형태 입증 bronchopulmonary aspergillosis, 그리고 기관지 확장 증입니다. 임상 및 전 임상 설정에서 테스트로 cf. Adapting 마우스를 테스트에 대 한 타겟된 치료 전략에 대 한 응답을 측정 하는 바이오 마커 도전 이며 관련된 사망률을 수반할 수 있습니다 사용 되었습니다. 이 문서는 비 강 카 테 터에 현장에서 지속적인 관류에 대 한 유지 하는 데 필요한 마 취의 적절 한 깊이 설명 합니다. 그것을 코에 끼얹는다 솔루션의 broncho-열망을 피하기 위해 조치를 나열 합니다. 그것은 또한 빠르게 반전 하는 전체 복구는 동물의 마 취로 이어지는 마 취 약의 해독의 조합의 관리를 포함 하 여 테스트의 끝에서 동물 관리를 설명 합니다. 대표적인 데이터는 CF와 CF와 CF 비 사이 차별 테스트 야생-타입 마우스 쇼에서 가져온. 모두, 여기에 설명 된 프로토콜 신뢰할 수 있는 측정 가능 줄이면서 동일한 동물에 여러 테스트로 서 저절로 호흡 쥐, 트랜스 상피 나트륨과 염화 물 전송기의 기능 상태의 테스트 관련 사망입니다.

CF에서 특성 이온 수송 이상을 설명 하기 위해 비 강 PD 측정 수행한 다음 위에서 설명한 F508del CF 마우스와의 브뤼셀 식민지의 유전 배경 FVB/129의 야생 유형 제어 프로토콜 Cftrtm1Eur 마우스30. 가장 일반적인 및 가장 심각한 F508del CFTR 돌연변이23,,2425, 중 하나를 품고이 임상 관련 ?...

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Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

여기, 선물이 쥐에서 코 전위차를 측정 하는 프로토콜. 테스트는 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 및 상피 나트륨 채널 같은 막 횡단 이온 전송기의 기능을 단정. 그것은 낭 성 섬유 증에 대 한 새로운 치료의 효능을 평가 하기 위해 중요 합니다.

마우스에 트랜스 상피 이온 수송 계량 비 전위차

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

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