Name: nasal potential difference to quantify trans-epithelial ion transport in mice
Uploaded: 2018-07-04T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice at JoVE.com

Yazarlar Prof. J. Lebacq eleştirel yazının düzenleme için teşekkür ederiz. CFTRtm1Eur (homozigoz F508del-CFTR (FVB/129) fareler tarafından geliştirilen Erasmus MC, Rotterdam, Hollanda, Avrupa Ekonomik Topluluğu Avrupa koordinasyon eylem kistik fibrozis Avrupa Birliği FP6 araştırma desteği ile LHHM-CT-2005-018932.

Çalışmalar ve yordamlar hayvan araştırma (2017/UCL/MD/015) UCL'nin ve hayvan araştırma (CEE n ° 86/609) kullanımda Avrupa Birliği Yönetmeliği ile anlaşma için Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Araştırmacılar bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması yönergesi 2010/63/AB sayılı Avrupa Parlamentosu ve Konsey, 22 Eylül 2010 aşağıdaki hayvan deneme için nitelikli.
1. değerlendirmesi ve yönetimi ön test
<ol><li>Çift lümen burun kateter hazırla.<b...

Bu kağıt amacı çözümleri farelerde kendiliğinden nefes iyon taşıyıcılar, esas olarak CFTR ve ENaC bütünlüğünü test etmek için gereken süreyi için sürekli perfüzyon altında burun PD ölçmek için yeterli bir iletişim kuralı tarif etmektir. İletişim kuralının tüm adımları dikkatlice tam hayvan kurtarma ve kaliteli ve tekrarlanabilir veri sağlamak için optimize edilmiştir. Özellikle, kritik adımlarda anestezi değerlendirmesi ve yönetimi ve yeterli hayvan pozisyon ve bakım sırasında...

Neredeyse üç yıl için elektrik potansiyel farkı (PD) ölçümleri transmembran iyon taşıyıcılar, nazal mukoza, distal airways1temsilcisi olarak ifade edilen fonksiyonel durumunu değerlendirmek için kullanılmaktadır. Bir multistep dinamik test olarak2,3, nazal PD Kistik Fibrozis Transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) ve epitel sodyum kanal (ENaC) etkinlik, fonksiyonel diseksiyon sağlar her ikisi de apikal zarı lokalize epitel hücreleri ve hava yolu yüzey hidrasyon önemli rollerde uygulamakla. Büyük klinik uygulama burun PD testinin CF, 1 dışarı-in 2500 canlı Doğum Avrupa ülkelerinde ortalama bir insidans ile beyaz nüfus en yaygın ölümcül genetik bozukluk tanısında yardımcı olmaktır. Test uzun zayıflatılmış, oligo veya mono semptomatik formlar genellikle daha sonra hayatında tanısı CF ve vas deferens, idiyopatik kronik pankreatit, Alerjik ikili konjenital yokluğu gibi CF ile ilgili hastalıkların tanısında yararlı kanıtlamıştır bronkopulmoner aspergilloz ve bronşiektazi4. Daha yakın zamanlarda,5,6,7,8,9,10,11 defect temel CFTR tedavi modülasyon clinometric değerlendirilmesi ,12,13,14,15,16 burun PD klinik çalışmalarda yeni CF tedavilerin kullanımı yaptı. Preklinik ayarında test yeni CF hedef terapiler18,19,20,21bioactivity incelenmesi izin vermek için fare17 ' ye uyarlanmıştır. Farelerde, kemirgenler ve insan arasındaki burun bölgenin boyutunu türler ile ilgili anatomik farklılıkları ve ağırlıklı olarak Rodents nasofacial bölgesinden duyusal girdilerin önemli rol dayalı hassas, bir tekniktir. Eğitimli ve vasıflı operatörler, özel ekipman ve malzemeleri gerektirir.
CF ekzokrin bezleri, çok sistemik bir hastalığı olduğunu hangi kronik solunum yolu hastalığı klinik resim hakim. Hastalığı siklik adenozin monofosfattır (kampı) kodlama gen mutasyonlar neden olur-CFTR klorür kanal22düzenlenir. Bugüne kadar 2.000'den fazla CFTR mutasyonları tespit23olmuştur. CF gen, neredeyse % 90 bulundu en yaygın mutasyon24,25, Fenilalanin polipeptid zinciri protein (F508del-CFTR) 508 pozisyonda silinmesiyle karşılık gelir. CFTR proteini bir tamamen içinden küçük gürültülerinden klorür kanalıdır. CFTR diğer taşıma mekanizmaları, özellikle de ENaC26,27düzenleyen önemli kanıtlar vardır. Arızalı elektrolit taşıma azaltılmış CFTR bağımlı klorür gürültülerinden ve artan ENaC bağımlı sodyum gürültülerinden, dahil olmak üzere, CF epiteli özelliğidir. Eski kusur küçültülmüş veya kaldırılmış repolarization bir elektrokimyasal gradyan favour klorür sızma ve isoprenaline (hücre içi kampı artıran bir β-adrenergic agonist) veya forskolin (bir adenilat eklenmesi karşısında yansıtır klinik kullanım için onaylanmamış cyclase agonist,). İkincisi kusur bazal hyperpolarization nazal mukoza (daha olumsuz PD) ve amiloride, ENaC28blok bir idrar söktürücü ilaç için artan bir tepki yansıtır.
CF fare modelleri sık CF araştırmalarında kullanılan ve CF patoloji dissekan çok değerli olmuştur. Günümüzde, en az on beş modelleri açıklanan üç olan en klinik F508del mutasyon30,31,32için homozigoz29, olmuştur. Bir Rotterdam, Erasmus Üniversitesi'nde geliştirilen bu üç suş30, yaklaşık 20 yıldır Université catholique de Louvain (UCL) laboratuvar olarak kullanılmıştır. Cftrtm1Eur modeli30 CF hastalığı multiorgan Patofizyoloji çalışmaya ve yeni tedavi stratejileri18,19,20etkinliğini test etmek için çok yararlı olduğunu kanıtlamıştır, 21. Çok sayıda sorunları sırasında veya erken sonra ortaya çıkabilir (< 24 h) farelerde burun PD testi. Bu yazıda, anestezi solunum-aspirasyon burnuna periosteum çözümleri önlemek için sürekli perfüzyon ve önlemleri burun kateter situ içinde tutmak için gereken yeterli derinliği açıklanmıştır. Test sonunda hayvan bakımı da, panzehir hızla anestezi hayvanların tam kurtarma ile geri için önde gelen anestezik ilaçların bir arada, yönetimi de dahil olmak üzere tanımlanır. Özet olarak, bu yordamları güvenilir ölçümler spontan solunum fareler, azaltılmış testi ile ilgili mortalite ve aynı hayvan içinde belgili tanımlık sınav yinelenen sağlar. Temsilcisi veri burun PD testinden bir CF ve vahşi-tipi fare elde gösterilen ve tartışıldı.
Fare burun PD test protokolü üç oturumlarda bildirilmektedir: değerlendirmesi ve yönetimi öncesinde, sırasında ve sonra testi. Ön-test değerlendirmesi ve yönetimi hazırlık çift lümen burun kateter ve çözümleri sürekli burun perfüzyon için kullanılan protokolü ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Değerlendirme ve test yönetimi bölümleri sırasında deneysel kurulum ve fare kullanımı özenle kesmiştim. Son olarak, hayvan test sonunda yönetiminin tam hayvan kurtarma geliştirmek için tanımlanır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1092px;" width="1091">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Portex polyethylene tube&#160;</td>
			<td style="width:403px;">Smiths Medical, Hythe, Kent, England CT21 6JL</td>
			<td style="width:225px;">Portex 800/100/500;2.0mm ID, 3.0 mmOD</td>
			<td style="width:167px;">to prepare capillary tubes for nasal probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Electrode cream</td>
			<td style="width:403px;">Parker, Fairfield, NJ, USA</td>
			<td style="width:225px;">Redux cream</td>
			<td>to build electrode bridges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ag/AgCl electrodes</td>
			<td style="width:403px;">Biomedical, Clinton Township, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">JNS BNT131-1,0</td>
			<td>measuring and reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">amiloride hydrochloride</td>
			<td style="width:403px;">Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">A7410</td>
			<td>to prepare perfusion solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">forskolin</td>
			<td style="width:403px;">Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">F6886</td>
			<td>to prepare perfusion solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Knick Portamess voltmeter</td>
			<td>Elektronisch Me&#946;ger&#228;te, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:225px;">Portavo 904 pH</td>
			<td>to measure potential difference</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraly SW 112 Software&#160;</td>
			<td>Elektronisch Me&#946;ger&#228;te, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:225px;">Paraly SW112 software</td>
			<td>to capture potential difference data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">midazolam&#160;</td>
			<td style="width:403px;">Mylan, Hoeilaart, Belgium</td>
			<td style="width:225px;">Dormicum 15mg/3ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic premedication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">fentanyl</td>
			<td>Janssen Cilag, Berchem, Belgium</td>
			<td>Fentanyl-Janssen 0.05 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">medetomidine</td>
			<td>Orion Pharma, Espoo, Finland</td>
			<td>Domitor 1 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">droperidol&#160;</td>
			<td>Janssen&#160; Cilag, Berchem, Belgium</td>
			<td>Dehydrobenzperidol 2.5 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">clonidine&#160;</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim am Rhein, Germany</td>
			<td>Catapressan 0.15 mg/ml,</td>
			<td>to serve as anaesthetic medication</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">refernce IV catheter</td>
			<td>Becton Dickinson, Sandy, UT, USA</td>
			<td>24 GA x 0.75 IN, BD Insyte-W</td>
			<td>to build electrode bridges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">forceps&#160;</td>
			<td>Fine science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>Dumont #5, Fine science Tools</td>
			<td>to place the nasal catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">naloxone&#160;</td>
			<td>Braun Medical, Brussels, Belgium</td>
			<td>Narcan, 0.4 mg/ml</td>
			<td>to serve as anaesthetic antagonist</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">atipamezole&#160;</td>
			<td>Zoetis, Bloomberg, Belgium</td>
			<td>Antisedan, 5 mg/ml</td>
			<td>to serve as a medetomedine specific antidote&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Heating pads&#160;</td>
			<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA</td>
			<td>18,8x37,5 cm; 15,5x15,5 cm</td>
			<td>to avoid hypothermia during and after the test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Peristaltic pump P1</td>
			<td>GE Life Sciences, Uppsala, Sweden</td>
			<td>18111091</td>
			<td>to perfuse solutions in the mouse nose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:403px;">Loctite, Henkel, D&#252;sseldorf, Germany&#160;</td>
			<td style="width:225px;">super glue 3</td>
			<td>to glue together two capillary tubes&#160; for nasal probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">NaCl</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">RES0926S-A7</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">CaCl2.2H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">M7304</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MgCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">1551128</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">K2HPO4</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">1551139</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Na gluconate</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">S2054</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Ca gluconate</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">C8231</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MgSO4.7H2O</td>
			<td>Sigma, St Louis, MI, USA</td>
			<td style="width:225px;">RES0089M-A7</td>
			<td>Pharma-Grade, USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">BD needle&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, USA</td>
			<td style="width:225px;">BD 26G (0.45x10 mm)</td>
			<td>intraperitoneal injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nasal potential difference to quantify trans-epithelial ion transport in mice

Burun potansiyel farkı test neredeyse üç yıldır kistik fibrozis (CF) tanısında yardımcı olmak için kullanılmıştır. Durumlarında yardımcı olmak, zayıflatılmış oligo veya mono semptomatik formlar genellikle daha sonra hayatında tanısı CF ve vas deferens, idiyopatik kronik pankreatit, Alerjik ikili konjenital yokluğu gibi CF ile ilgili hastalıkların kanıtlamıştır bronkopulmoner aspergilloz ve bronşiektazi. CF. uyarlayarak test etmek için bir fare için hedeflenmiş tedavi stratejileri yanıtlarını ölçmek için bir biyomarker meydan okuyor ve ilişkili bir ölüm gerektirecektir preklinik ve klinik ayarları, testi kullanılmıştır. Bu kağıt için sürekli perfüzyon burun kateter in situ korumak için gerekli anestezi yeterli derinliği açıklar. Solunum-aspirasyon burnuna periosteum çözümleri önlemek için ölçülerin listeler. Ayrıca hayvan bakımı panzehir hızla anestezi hayvanların tam kurtarma ile geri için önde gelen anestezik ilaçların bir arada, yönetimi de dahil olmak üzere test sonunda açıklar. Temsilcisi veri bir CF ve test CF ve sigara-CF arasında ayrımcılık bir vahşi tipi fare Haritayı aldı. Özet olarak, burada açıklanan protokol test ile ilgili güvenilir ölçümler spontan solunum farelerde trans-epitel klorür ve sodyum taşıyıcılar gibi azaltırken aynı hayvan birden çok test fonksiyonel durumu sağlar ölüm.

CF karakteristik iyon taşıma anormallikleri göstermek için burun PD ölçümleri bir F508del-CF fare ve Brüksel kolonisi FVB/129 genetik kökenli bir vahşi tipi kontrol yukarıda açıklanan protokol sonrası gerçekleştirilen CFTRtm1Eur fareler30. En yaygın ve en ağır F508del-CFTR mutasyon23,24,25, birini barındıran bu klinik modeli en iyisi şu and...

Watch this Scientific Journal Video about Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice at JoVE.com

Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

Burada, farelerde burun potansiyel farkı ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Test transmembran iyon taşıyıcılar Kistik Fibrozis Transmembran gürültülerinden regülatör ve epitel sodyum kanalı gibi işlev quantifies. Kistik fibrozis için roman tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için değerlidir.

Trans-epitel iyon taşıma farelerde ölçmek için burun potansiyel fark

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment

A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment

-Cell Hücre makromoleküler Ulaştırma Testi Planta Biyolistik Bombardıman kullanımı

Here, we present a simple and rapid protocol to detect and assess the extent of cell-to-cell macromolecular transport in planta. In this protocol, a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

İyon Kanalları incelenmesi için yama Kelepçe ve Perfüzyon Teknikleri cinsinden ifade edilir Xenopus Oosit

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Using SCOPE to Identify Potential Regulatory Motifs in Coregulated Genes

Coregulated Genler Potansiyel Düzenleme Motifler belirlenmesi için KAPSAMI

SCOPE is an ensemble motif finder that uses three component algorithms in parallel to identify potential regulatory motifs by over-representation and ...

An Effective Manual Deboning Method To Prepare Intact Mouse Nasal Tissue With Preserved Anatomical Organization

Korunan Anatomik Örgütü ile bozulmamış Fare Burun Doku hazırlamak için etkili bir Manuel kemik sıyırma Yöntemi

The mammalian nose is a multi-functional organ with intricate internal structures.  The nasal cavity is lined with various epithelia such as olfactory, ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

Hava Sıvı Arayüz İnsan Burun Epitel Hücrelerinin ekimi

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

Functional Characterization of Na+/H+ Exchangers of Intracellular Compartments Using Proton-killing Selection to Express Them at the Plasma Membrane

Functional Characterization of Na+/H+ Exchangers of Intracellular Compartments Using Proton-killing Selection to Express Them at the Plasma Membrane

Na fonksiyonel karakterizasyonu<sup&gt; +</sup&gt; / H<sup&gt; +</sup&gt; Seçim Proton-öldürme Kullanma hücre içi Bölmeler ve Eşanjörleri Plazma Membran Them Express

Endosomal acidification is critical for a wide range of processes, such as protein recycling and degradation, receptor desensitization, and ...

Use of Enzymatic Biosensors to Quantify Endogenous ATP or H2O2 in the Kidney

Use of Enzymatic Biosensors to Quantify Endogenous ATP or H2O2 in the Kidney

Enzimatik Biyosensörlerin Kullanımı Endojen ATP veya H belirlememize<sub&gt; 2</sub&gt; O<sub&gt; 2</sub&gt; Böbrek

Enzymatic microelectrode biosensors have been widely used to measure extracellular signaling in real-time. Most of their use has been limited to brain ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Teknikler İndüklemek ve Ölçmek Hücresel Yaşlılık etmek

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Modified Methods for Loading of High-Throughput DNA Extraction Plates Reduce Potential for Contamination

Yüksek İşlemli DNA Çıkarma Plakalarının Yüklenmesinde Modifiye Yöntemler Kontaminasyon Potansiyelini Azaltır

High-throughput DNA sequencing techniques have contributed substantially to advances in our understanding of relationships among microbial communities, ...

Primary Human Nasal Epithelial Cells: Biobanking in the Context of Precision Medicine

Primer İnsan Burun Epitel Hücreleri: Hassas Tıp Bağlamında Biyobankacılık

Human nasal epithelial (HNE) cells are easy to collect by simple, non-invasive nasal brushing. Patient-derived primary HNE cells can be amplified and ...