Name: isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies
Uploaded: 2018-07-14T15:00:00
Duration: 12 min 42 s
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इस पत्र में वर्णित प्रोटोकॉल का विकास निम्नलिखित धन एजेंसियों से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था: BBSRC (BB/I026359/1), दृष्टि के लिए लड़ो (१४२९ और १८२२), किशोर मधुमेह अनुसंधान फाउंडेशन (2-2003-525), वेलकम ट्रस्ट (074648/ ब्रिटिश हार्ट फाउंडेशन (PG/11/94/29169), HSC आर एंड डी श्रेणी (STL/4748/13) और MRC (MC_PC_15026) ।

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	<li>Kohner, E. M., Patel, V., Rassam, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+blood+flow+and+impaired+autoregulation+in+the+pathogenesis+of+diabetic+retinopathy.">Role of blood flow and impaired autoregulation in the pathogenesis of diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 44, 603-607 (1995).</li><li>Hafez, A. S., Bizzarro, R. L., Lesk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+optic+nerve+head+and+peripapillary+retinal+blood+flow+in+glaucoma+patients,+ocular+hypertensives,+and+normal+subjects.">Evaluation of optic nerve head and peripapillary retinal blood flow in glaucoma patients, ocular hypertensives, and normal subjects.</a> American Journal of Ophthalmology. 136, 1022-1031 (2003).</li><li>Curtis, T. M., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+lesions+of+diabetic+retinopathy:+clues+towards+understanding+pathogenesis?.">Microvascular lesions of diabetic retinopathy: clues towards understanding pathogenesis?.</a> Eye (London). 23, 1496-1508 (2009).</li><li>Pournaras, C. J., Rungger-Br&#228;ndle, E., Riva, C. E., Hardarson, S. H., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+retinal+blood+flow+in+health+and+disease).">Regulation of retinal blood flow in health and disease).</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27, 284-330 (2008).</li><li>Kuwabara, T., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+retinal+vascular+patterns.+I.+Normal+architecture.">Studies of retinal vascular patterns. I. Normal architecture.</a> Archives of Ophthalmology. 64, 904-911 (1960).</li><li>Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+physiology+of+retinal+and+choroidal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">Cellular physiology of retinal and choroidal arteriolar smooth muscle cells.</a> Microcirculation. 14 (1), 11-24 (2007).</li><li>Puro, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinovascular+physiology+and+pathophysiology:+new+experimental+approach/new+insights.">Retinovascular physiology and pathophysiology: new experimental approach/new insights.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 31 (3), 258-270 (2012).</li><li>Kur, J., Newman, E. A., Chan-Ling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+physiological+mechanisms+underlying+blood+flow+regulation+in+the+retina+and+choroid+in+health+and+disease.">Cellular and physiological mechanisms underlying blood flow regulation in the retina and choroid in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 31 (5), 377-406 (2012).</li><li>Delaey, C., Van de Voorde, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+Mechanisms+in+the+Retinal+and+Choroidal+Circulation.">Regulatory Mechanisms in the Retinal and Choroidal Circulation.</a> Ophthalmic Research. 32 (6), 249-256 (2000).</li><li>Metea, M. R., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+cells+dilate+and+constrict+blood+vessels:+a+mechanism+of+neurovascular+coupling.">Glial cells dilate and constrict blood vessels: a mechanism of neurovascular coupling.</a> Journal of Neuroscience. 26, 2862-2870 (2006).</li><li>Pournaras, C. J., Rungger-Br&#228;ndle, E., Riva, C. E., Hardarson, S. H., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+retinal+blood+flow+in+health+and+disease.">Regulation of retinal blood flow in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27 (3), 284-330 (2008).</li><li>Hughes, S., Chan-Ling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+smooth+muscle+cell+and+pericyte+differentiation+in+the+rat+retina+in+vivo.">Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (8), 2795-2806 (2004).</li><li>Shepro, D., Morel, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericyte+physiology.">Pericyte physiology.</a> The FASEB Journal. 7 (11), 1031-1038 (1993).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Blood+Flow+in+the+Retinal+Trilaminar+Vascular+Network.">Regulation of Blood Flow in the Retinal Trilaminar Vascular Network.</a> Journal of Neuroscience. 34 (34), 11504-11513 (2014).</li><li>Matsushita, K., Puro, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographical+heterogeneity+of+KIR+currents+in+pericyte-containing+microvessels+of+the+rat+retina:+effect+of+diabetes.">Topographical heterogeneity of KIR currents in pericyte-containing microvessels of the rat retina: effect of diabetes.</a> Journal of Physiology. 573, 483-495 (2006).</li><li>Needham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+K++and+Cl-+channels+in+the+regulation+of+retinal+arteriolar+tone+and+blood+flow.">The role of K+ and Cl- channels in the regulation of retinal arteriolar tone and blood flow.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (4), 2157-2165 (2014).</li><li>Hessellund, A., Jeppesen, P., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+vasomotion+in+porcine+retinal+arterioles.">Characterization of vasomotion in porcine retinal arterioles.</a> Acta Ophthalmologicaogica Scandinavica. 81, 278-282 (2003).</li><li>Delaey, C., Van de Voord, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+myogenic+responses+in+isolated+bovine+retinal+arteries.">Pressure-induced myogenic responses in isolated bovine retinal arteries.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1871-1875 (2000).</li><li>Kur, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ion+channels+and+subcellular+Ca2++signaling+in+arachidonic+acid-induced+dilation+of+pressurized+retinal+arterioles.">Role of ion channels and subcellular Ca2+ signaling in arachidonic acid-induced dilation of pressurized retinal arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (5), 2893-2902 (2014).</li><li>Kur, J., Bankhead, P., Scholfield, C. N., Curtis, T. M., McGeown, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(2+)+sparks+promote+myogenic+tone+in+retinal+arterioles.">Ca(2+) sparks promote myogenic tone in retinal arterioles.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1675-1686 (2013).</li><li>Fern&#225;ndez, J. A., McGahon, M. K., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaV3.1+T-Type+Ca2++Channels+Contribute+to+Myogenic+Signaling+in+Rat+Retinal+Arterioles.">CaV3.1 T-Type Ca2+ Channels Contribute to Myogenic Signaling in Rat Retinal Arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (9), 5125-5132 (2015).</li><li>McGahon, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV2+Channels+Contribute+to+Stretch-Activated+Cation+Currents+and+Myogenic+Constriction+in+Retinal+Arterioles.">TRPV2 Channels Contribute to Stretch-Activated Cation Currents and Myogenic Constriction in Retinal Arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (13), 5637-5647 (2016).</li><li>Guidoboni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+Pressure,+Blood+Pressure,+and+Retinal+Blood+Flow+Autoregulation:+A+Mathematical+Model+to+Clarify+Their+Relationship+and+Clinical+Relevance.">Intraocular Pressure, Blood Pressure, and Retinal Blood Flow Autoregulation: A Mathematical Model to Clarify Their Relationship and Clinical Relevance.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (7), 4105-4118 (2014).</li><li>Scholfield, C. N., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+cytosolic+calcium+regulation+among+different+microvascular+smooth+muscle+cells+of+the+rat+retina.">Heterogeneity in cytosolic calcium regulation among different microvascular smooth muscle cells of the rat retina.</a> Microvascular Research. 59 (2), 233-242 (2000).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 260, 3440-3450 (1985).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Single Channel Recording, Second Edition. , 53-90 (1995).</li><li>Fern&#225;ndez, J. A., Bankhead, P., Zhou, H., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+detection+and+measurement+of+isolated+retinal+arterioles+by+a+combination+of+edge+enhancement+and+cost+analysis.">Automated detection and measurement of isolated retinal arterioles by a combination of edge enhancement and cost analysis.</a> PLoS One. 9, e91791 (2014).</li><li>McGahon, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+downregulates+large-conductance+Ca2+-activated+potassium+beta+1+channel+subunit+in+retinal+arteriolar+smooth+muscle.">Diabetes downregulates large-conductance Ca2+-activated potassium beta 1 channel subunit in retinal arteriolar smooth muscle.</a> Circulation Research. 100 (5), 703-711 (2007).</li><li>Curtis, T. M., Scholfield, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nifedipine+blocks+Ca2++store+refilling+through+a+pathway+not+involving+L-type+Ca2++channels+in+rabbit+arteriolar+smooth+muscle.">Nifedipine blocks Ca2+ store refilling through a pathway not involving L-type Ca2+ channels in rabbit arteriolar smooth muscle.</a> Journal of Physiology. 532 (3), 609-623 (2001).</li><li>Tumelty, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin+1+stimulates+Ca2+-sparks+and+oscillations+in+retinal+arteriolar+myocytes+via+IP3R+and+RyR-dependent+Ca2++release.">Endothelin 1 stimulates Ca2+-sparks and oscillations in retinal arteriolar myocytes via IP3R and RyR-dependent Ca2+ release.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (6), 3874-3879 (2011).</li><li>Huynh, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+insight+into+the+assembly+of+TRPV+channels.">Structural insight into the assembly of TRPV channels.</a> Structure. 22 (2), 260-268 (2014).</li><li>McGahon, M. K., Dawicki, J. M., Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A-type+potassium+current+in+retinal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">A-type potassium current in retinal arteriolar smooth muscle cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (9), 3281-3287 (2005).</li><li>McGahon, M. K., Zhang, X., Scholfield, C. N., Curtis, T. M., McGeown, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+downregulation+of+the+BKbeta1+subunit+in+diabetic+arteriolar+myocytes.">Selective downregulation of the BKbeta1 subunit in diabetic arteriolar myocytes.</a> Channels (Austin). 1 (3), 141-143 (2007).</li><li>Ljubimov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+abnormalities+in+human+eyes+with+diabetic+retinopathy.">Basement membrane abnormalities in human eyes with diabetic retinopathy.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44, 1469-1479 (1996).</li><li>Roy, S., Maiello, M., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+basement+membrane+collagen+in+human+diabetic+retinopathy.">Increased expression of basement membrane collagen in human diabetic retinopathy.</a> Journal of Clinical Investigation. 93, 438-442 (1994).</li><li>Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+physiology+of+retinal+and+choroidal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">Cellular physiology of retinal and choroidal arteriolar smooth muscle cells.</a> Microcirculation. 14 (1), 11-24 (2007).</li><li>Hinds, K., Monaghan, K. P., Fr&#248;lund, B., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+control+of+arteriolar+diameter+in+the+rat+retina.">GABAergic control of arteriolar diameter in the rat retina.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54 (10), 6798-6805 (2013).</li><li>Torring, M. S., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constriction+of+porcine+retinal+arterioles+induced+by+endothelin-1+and+the+thromboxane+analogue+U46619+in+vitro+decreases+with+increasing+vascular+branching+level.">Constriction of porcine retinal arterioles induced by endothelin-1 and the thromboxane analogue U46619 in vitro decreases with increasing vascular branching level.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (3), 232-237 (2014).</li><li>P, S. k. o. v. . J. e. n. s. e. n. ., S, M. e. t. z. . M. a. r. i. e. n. d. a. l. . P. e. d. e. r. s. e. n., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vasodilating+effects+of+insulin+and+lactate+are+increased+in+precapillary+arterioles+in+the+porcine+retina+ex+vivo.">The vasodilating effects of insulin and lactate are increased in precapillary arterioles in the porcine retina ex vivo.</a> Acta Ophthalmologica. 94 (5), 454-462 (2016).</li></ol>

Dr. जोआना Kur अब Medtronic (जुड़वां शहरों, मिनेसोटा, संयुक्त राज्य अमरीका) के एक कर्मचारी है, उसे वर्तमान काम है कि यहां प्रस्तुत के साथ संघर्ष नहीं करता है ।

ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल अभ्यास की आवश्यकता होती है, लेकिन ंयूनतम समस्या निवारण के साथ प्राप्त किया जाना चाहिए । एक औसत दिन हम अलगाव से 6-8 प्रयोग करने योग्य धमनियों प्राप्त होगा और 3-4 सफल प्रयोगों को प्राप्त करने पर । समस्याओं का सामना कर रहे हैं, हालांकि, कुछ कदम है कि सफलता दरों में सुधार करने में मदद करने के लिए लिया जा सकता है । कभी कभार हमने पाया है, विशेष रूप से जब छोटे चूहों का उपयोग कर (< 8 सप्ताह), कि धमनियों की उपज कम हो सकती है । इस समस्या को दरकिनार करने के लिए, हम रेटिना ऊतक (५०० x g पर 10-30 s) चरणों १.१२-१.१४ में trituration चरणों में से प्रत्येक के बीच केंद्रापसारक सुझाव है । यह अक्सर जहाजों की उपज में सुधार करने में मदद करता है, लेकिन यह भी तैयारी के भीतर सेल मलबे की मात्रा में वृद्धि होगी ।
जब दबाव myography अध्ययन के लिए cannulating वाहिकाओं यह विभाजन साइट के करीब सट गया हो सकता है कि किसी भी पक्ष-शाखाओं के लिए ध्यान से धमनियों की जाँच करने के लिए महत्वपूर्ण है. यह रिसाव और प्रयोग के दौरान दबाव के नुकसान का एक आम कारण का प्रतिनिधित्व करता है । मुख्य मुद्दा है कि [2 Ca +]मैं प्रोटोकॉल के साथ पैदा कर सकते है डाई लदान के स्तर पर है । गरीब डाई लोडिंग कम संकेत करने वाली शोर अनुपात करने के लिए सुराग, जबकि सामान्य सीए2 + homeostasis के विघटन में परिणाम ओवरलोडिंग. इन समस्याओं में से या तो की संभावना को कम करने के लिए, रेटिना homogenate का एक छोटा aliquot निकाला जा सकता है, और अलग-थलग जहाजों लोड प्रोटोकॉल के दौरान आवधिक जाँच की । पैच दबाना प्रयोग जब उपक्रम, gigaseal गठन की सफलता की दर कितनी अच्छी तरह बेसल लेमिना पच गया है पर निर्भर है । जब शुरू में इस प्रोटोकॉल का परीक्षण या एंजाइमों की नई बहुत सारी का उपयोग कर यह एकाग्रता को समायोजित करने के लिए आवश्यक हो सकता है/ ध्यान से endothelial और चिकनी मांसपेशी परतों की जुदाई की निगरानी पर्याप्त पाचन को दूर करने के लिए काफी बेसल laminal का उपयोग प्राप्त करने के लिए सुनिश्चित करेगा । सावधान निगरानी भी अधिक से बचने के लिए आवश्यक है-पाचन, जो प्रकट कर सकते है के रूप में पोत कसना शुरू होता है । यदि ऐसा होता है, चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं अक्सर पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए भी नाजुक हैं । जब एंजाइमों आवेदन, यह DNAse मैं आइसोलेशन प्रक्रिया के दौरान क्षतिग्रस्त कोशिकाओं से मुक्त डीएनए की किस्में को हटाने को सुनिश्चित करने के लिए शामिल करने के लिए महत्वपूर्ण है. डीएनए टुकड़े चिपचिपा रहे है और संदंश कारण सफाई की प्रक्रिया (४.४ कदम), अक्सर पोत हानि में जिसके परिणामस्वरूप के अंतिम चरणों के दौरान arteriole का पालन करें । जहाजों की सफाई तकनीकी रूप से मुश्किल है और सबसे अच्छा संभव टिप व्यास के बंद संदंश के कोमल व्यापक गति के साथ उच्च आवर्धन (20X) पर प्रदर्शन किया है । राज्यभर के बीच, लैब रोल के साथ संदंश साफ ।
के रूप में पहले प्रकाश डाला, इस पांडुलिपि में उल्लिखित प्रोटोकॉल के विकास के पीछे एक महत्वपूर्ण प्रेरणा को बेहतर क्यों रक्त प्रवाह रेटिना संवहनी रोगों के दौरान बाधित है समझ गया था । तिथि करने के लिए हमारे काम के अधिकांश मधुमेह नेत्र रोग28,३३पर ध्यान केंद्रित किया है । धमनियों खंड 1 में वर्णित विधियों का उपयोग कर मधुमेह के प्रायोगिक कुतर मॉडलों के रेटिना से अलग किया जा सकता है । जब मधुमेह जानवरों से अलग रेटिना धमनियों पर प्रयोग, यह बारीकी से vivo मेंजहाजों द्वारा अनुभवी hyperglycemic स्थितियों को दोहराने की कोशिश करने के लिए महत्वपूर्ण है. इस कारण से, हम आम तौर पर डी-ग्लूकोज का स्तर बढ़ाने के लिए होगा हमारे अलगाव और प्रायोगिक समाधान में 25 मिमी. संवहनी तहखाने झिल्ली की और अधिक मोटा होना मधुमेह३४,३५के दौरान रेटिना वाहिकाओं में एक अच्छी तरह से पहचाना घटना है । लंबे समय तक मधुमेह के साथ जानवरों का उपयोग करते समय (> 1 महीने की बीमारी की अवधि), बढ़ी हुई एंजाइम सांद्रता या पाचन बार अक्सर पैच-क्लैंप रिकॉर्डिंग तरीकों के आवेदन को सक्षम करने के लिए की जरूरत है ।
रेटिना संवहनी फिजियोलॉजी और pathophysiology का अध्ययन करने के लिए पूर्व vivo पृथक रेटिना धमनियों का उपयोग करने की एक महत्वपूर्ण सीमा आसपास के रेटिना neuropile का नुकसान है. हालांकि रेटिना glial और न्यूरॉन कोशिकाओं को हटाने के सेल फिजियोलॉजी अध्ययन के लिए रेटिना संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं के लिए आसान पहुँच सक्षम बनाता है, vasoactive मध्यस्थों के लिए जहाजों की प्रतिक्रिया रेटिना की अनुपस्थिति और उपस्थिति में नाटकीय रूप से बदल सकते हैं ऊतक. adenosine त्रिकोणीय फॉस्फेट (एटीपी) के कार्यों, उदाहरण के लिए, इस बिंदु का एक अच्छा चित्रण प्रदान करते हैं । अलग चूहे रेटिना धमनियों में, एटीपी के अलावा३६जहाजों की एक मजबूत कसना चलाता है, जबकि एक बरकरार neuropile की उपस्थिति में, जहाजों३७का फैलाव । इसलिए, जहां भी संभव हो, हम आमतौर पर हमारे पृथक arteriole पूर्व विवो रेटिना पूरे का उपयोग कर तैयारियों से महत्वपूर्ण निष्कर्षों को मान्य करने की कोशिश-माउंट और vivo माप में पोत व्यास और रक्त प्रवाह16,३७ . ध्यान दें की, नए तरीके हाल ही में छोटे धमनियों और केशिकाओं पूरे perfused सुअर का में अध्ययन के लिए उभरा है रेटिना ex३८,३९। इस तरह की तैयारी बहुत रेटिना neuropile रेटिना arteriolar और केशिका टोन कैसे नियंत्रित करता है की हमारी समझ में सुधार करने के लिए की संभावना है और रेटिना में ंयूरॉन गतिविधि कैसे haemodynamics में परिवर्तन मॉडुलन ।
हालांकि इस पत्र में वर्णित प्रक्रियाओं arteriolar चिकनी मांसपेशी कोशिका शरीर क्रिया विज्ञान को समझने के लिए अलग चूहे रेटिना धमनियों के उपयोग पर ध्यान केंद्रित कर रहे हैं, हम वर्तमान में भी endothelial सेल समारोह के अध्ययन को सक्षम करने के लिए प्रोटोकॉल विकसित कर रहे हैं इन जहाजों । प्रारंभिक काम में, हम रेटिना arteriolar क्षेत्रों के एंजाइमी पाचन को संशोधित करने के लिए व्यवहार्य endothelial सेल ट्यूबों कि सीए 2 के लिए उत्तरदायी है उपज+ इमेजिंग और patchclamp रिकॉर्डिंग अध्ययन में सफल रहे हैं । दोनों सिरों पर पृथक धमनियों की Cannulation, दवाओं के intraluminal वितरण को सक्षम करने, भविष्य में भी endothelium-निर्भर vasodilatory प्रतिक्रियाओं को सक्षम करने के लिए इन जहाजों में जांच की जा सकती है ।

समझ कैसे रक्त प्रवाह रेटिना में नियंत्रित किया जाता है एक महत्वपूर्ण लक्ष्य है, के बाद से असामांय रक्त प्रवाह दृष्टि की एक किस्म के रोगजनन में फंसा दिया गया है-धमकी रेटिना रोगों1,2,3, 4. रेटिना परिसंचरण, जो भीतरी रेटिना न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं की आपूर्ति, एक अंत धमनी व्यवस्था है, रेटिना धमनियों और धमनियों से रक्त के सभी के साथ रेटिना venules करने के लिए केशिकाओं के माध्यम से गुजर रहा है और अंत में5नसों. रेटिना में रक्त का प्रवाह रेटिना की धमनियों और धमनियों के टोन द्वारा विनियमित है और साथ ही रेटिना केशिकाओं और पोस्ट-केशिका venules6,7की दीवारों पर स्थित pericytes की सिकुड़ा गतिविधि है, 8. रेटिना संवहनी टोन के नियंत्रण जटिल है और संचार प्रणाली और आसपास के रेटिना ऊतक, रक्त गैसों सहित से आदानों की एक श्रृंखला द्वारा संग्राहक है, अणु और हार्मोन घूम रहा है, और vasoactive पदार्थों से जारी रेटिना संवहनी endothelium और macroglia9,10,11. रेटिना धमनियों रेटिना की छोटी धमनी शाखाओं रहे हैं और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं की एक परत से बना रहे हैं और longitudinally की व्यवस्था की भीतरी अस्तर endothelial कोशिकाओं12,13, 14. इन जहाजों रेटिना परिसंचरण के भीतर संवहनी प्रतिरोध की मुख्य साइट के रूप में और इसलिए रेटिना रक्त प्रवाह के स्थानीय नियंत्रण में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं । रेटिना धमनियों का फैलाव या उनके चमकदार व्यास कसना द्वारा रेटिना में केशिका रक्त प्रवाह को विनियमित, संवहनी चिकनी मांसपेशी सिकुड़ना10,15,16में परिवर्तन के द्वारा मध्यस्थता । आणविक तंत्र को समझना जिसके माध्यम से रेटिना धमनियों रेटिना को विनियमित छिड़काव इसलिए तैयारी की आवश्यकता है जहां arteriolar चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं तक पहुँचा जा सकता है और संभव के रूप में शारीरिक के करीब के रूप में स्थितियों में अध्ययन किया.
पूर्व vivo अलग रेटिना रक्त वाहिकाओं की तैयारी संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं के लिए पहुँच प्रदान करते हैं, whilst अभी भी उनकी कार्यक्षमता और अंतर्निहित endothelium के साथ संपर्क बनाए रखने. अलग जहाजों का उपयोग करने की तारीख करने के लिए अधिकांश अध्ययनों बड़े गोजातीय या सुअर का धमनी वाहिकाओं पर ध्यान केंद्रित किया है (६०-१५० µm). ये व्यावसायिक रूप से उपलब्ध तार या दबाव myograph प्रणालियों में संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिका सिकुड़ा तंत्र17,18के औषधीय पूछताछ सक्षम करने के लिए मुहिम शुरू की जा सकती है । इस तरह की तैयारी बहुत सामांय परिस्थितियों में रेटिना संवहनी फिजियोलॉजी के हमारे ज्ञान के लिए योगदान दिया है । कुछ अध्ययनों रेटिना धमनियों अपने छोटे व्यास के रूप में छोटे प्रयोगशाला जानवरों से अलग इस्तेमाल किया है (~ 8-45 µm) पारंपरिक myography प्रणालियों में उनके उपयोग को रोकता है19,20,21,22. एक महत्वपूर्ण लाभ, तथापि, छोटे प्रयोगशाला पशुओं से जहाजों का उपयोग कर के आनुवंशिक रूप से संशोधित, ट्रांसजेनिक और रेटिना रोग मॉडल की व्यापक उपलब्धता है । छोटे प्रयोगशाला जानवरों को भी अधिक vivo हस्तक्षेप अध्ययन में के लिए उत्तरदाई हैं ।
यहाँ हम अलग और दबाव myography प्रयोगों के लिए cannulating चूहे रेटिना धमनियों के लिए सीधा प्रोटोकॉल का वर्णन. Ca2 + इमेजिंग और इन जहाजों का उपयोग इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रोटोकॉल भी विस्तृत रहे हैं । ये संवहनी चिकनी मांसपेशी सिकुड़ना और रेटिना में रक्त के प्रवाह के विनियमन में और अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Beakers</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>15409083</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-109-3542</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic pipette/ transfer</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1174</td>
			<td>6mL is best but other sizes are acceptable; remove tip to widen aperture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Brunel Microscopes LTD</td>
			<td></td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #5 14095</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11546963</td>
			<td>Fire polished to reduce friction but not enough to narrow the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7741</td>
			<td>Or any equilavent 10cm product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette teat</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12426180</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water supply</td>
			<td>Merek</td>
			<td>Milli-Q Integral Water Purification System</td>
			<td>Or any equilavent system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottomed test tube</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-958-10 B</td>
			<td>5 mL; any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seratted forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17-467-230</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge blades</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>T585</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184</td>
			<td>Or any pliable surface&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testtube rack</td>
			<td>Fisherbrand Derlin</td>
			<td>10257963</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure myography</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>x2 (or any equilavent product)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software&#160;</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis plugin</td>
			<td>Myotraker&#160;</td>
			<td>https://doi.org/10.1371/journal.pone.0091791.s002</td>
			<td>Custom plugin for imageJ Freely available for download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #7 14097</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura-2-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F1221</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manometer</td>
			<td>Riester</td>
			<td>LF1459</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W558818</td>
			<td>75&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video capture software</td>
			<td>Hypercam</td>
			<td>version 2.28.01</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patch clamping</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2411</td>
			<td>3 mg disolved daily in 50 &#956;L of DMSO (sonicate to dissolve)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Axopatch 200a</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analogue digital converter</td>
			<td>Axon</td>
			<td>Digidata 1440A</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9891&#160;</td>
			<td>0.1mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>260913</td>
			<td>Working stock 1 MU mL-1 (10 MU diluted in 10 mL LCH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Any equilavent commerical product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV203BU</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patching software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Pclamp v10.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Type XIV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5147&#160;</td>
			<td>0.01mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole cell pipette glass</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x40 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>40x/0.55, WD 2.1, &#8734;/1.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca2+ imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Acquisition Engine V1.1.5</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software for confocal imaging</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>SP5&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochromator&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Optoscan</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>LAS-AF version 3.3.</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x100 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>x100 N.A. 1.3 oil</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL FLUOTAR, 20x/0.50, &#8734;/0.17/D</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>C PLAN, 4x/0.10, &#8734;/-/&#10013;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x63 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL APO, 63x/1.40 - 0.60 OIL CS &#8734;/0.17/E</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Specifications and settings for fabrication of pipettes for experimentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;10 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 290 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 58 
			Time: 150 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 3-10 &#956;m 
			Polishing: no 
			Final Resistance: &#60;1 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>On-cell patching</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;5 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole-cell patching</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 296 
			Pressure: 200 
			Heat: 287 
			Pull : 0 
			Velocity: 50 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 2-3 &#956;m 
			Polishing: helpful but not necessary 
			Final Resistance: 1-2 M&#937;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies

रेटिना एक अत्यधिक चयापचय सक्रिय ऊतक है कि एक पर्याप्त रक्त की आपूर्ति की आवश्यकता है । रेटिना परिसंचरण भीतरी रेटिना का समर्थन करता है, जबकि धमनियां जहाजों photoreceptors की आपूर्ति । रेटिना छिड़काव में परिवर्तन मधुमेह रेटिनोपैथी, मोतियाबिंद और रेटिना शाखा नस occlusions सहित कई दृष्टि धमकी विकारों, के लिए योगदान. आणविक रेटिना के माध्यम से रक्त के प्रवाह के नियंत्रण में शामिल तंत्र को समझना और कैसे इन नेत्र रोग के दौरान बदल रहे है इन शर्तों के उपचार के लिए नए लक्ष्य की पहचान के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । रेटिना धमनियों रेटिना के मुख्य प्रतिरोध वाहिकाओं हैं, और फलस्वरूप, चमकदार व्यास में परिवर्तन के माध्यम से रेटिना hemodynamics को विनियमित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. हाल के वर्षों में, हम चूहे रेटिना जो सेल फिजियोलॉजी अध्ययन सहित आवेदनों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त है से धमनियों अलग करने के लिए तरीके विकसित किया है । यह तैयारी पहले से ही कैसे रक्त प्रवाह रेटिना में नियंत्रित है और हमें महत्वपूर्ण परिवर्तन है कि नेत्र रोग के दौरान होने के कुछ की पहचान करने की अनुमति दी है में नए अंतर्दृष्टि उपज शुरू कर दिया है । इस अनुच्छेद में, हम चूहे रेटिना धमनियों के अलगाव के लिए तरीकों का वर्णन और पैच-क्लैंप इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, कैल्शियम इमेजिंग और दबाव myography अध्ययन में उनके उपयोग के लिए प्रोटोकॉल शामिल हैं । इन जहाजों को भी पीसीआर में उपयोग के लिए उत्तरदायी हैं, पश्चिमी सोख्ता-और immunohistochemistry आधारित अध्ययन.

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Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

इस पांडुलिपि चूहे रेटिना कि electrophysiological, कैल्शियम इमेजिंग और दबाव myography अध्ययन में इस्तेमाल किया जा सकता से धमनियों के अलगाव के लिए एक सीधा प्रोटोकॉल का वर्णन ।

पूर्व Vivo सेल फिजियोलॉजी अध्ययन के लिए रेटिना धमनियों का अलगाव

The retina is a highly metabolically active tissue that requires a substantial blood supply. The retinal circulation supports the inner retina, while the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

माउस अधिवृक्क Chromaffin सेल अलगाव

Adrenal medullary chromaffin cell culture systems are extremely useful for the study of excitation-secretion coupling in an in vitro setting.  This ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

Utero और पूर्व जीन एक्सप्रेशन के लिए माउस रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं में vivo electroporation में

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

Organotypic murine रेटिनल Wholemount संस्कृति vivo की तरह

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

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Lentiviral - मध्यस्थता नॉकडाउन के दौरान पूर्व vivo</emमानव hematopoietic स्टेम सेल के> erythropoiesis

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

पूर्व vivo पृथक संवहनी जेट की जांच के लिए कंकाल Microvessel तैयारी

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

एक<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; संस्कृति सिस्टम थायराइड विकास का अध्ययन करने के लिए

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

गतिशीलता की spatiotemporal मानचित्रण में<em&gt; पूर्व Vivo</emआंतों के&gt; तैयारी

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

चूहा cremaster मांसपेशियों की धमनियों में दृश्य और सेल मुक्त लेयर की मात्रा

The cell-free layer is defined as the parietal plasma layer in the microvessel flow, which is devoid of red blood cells. The measurement of the in vivo ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

माउस प्रजनन पथ सहज गतिशीलता और डेटा विश्लेषण के लिए एक MATLAB आधारित गर्भाशय मोशन ट्रैकिंग एल्गोरिथ्म का आकलन करने के लिए पूर्व Vivo विधि

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

पैराइटल एपिथेलियल सेल एक्टिवेशन में शामिल रास्तों का विश्लेषण करने के लिए एक पूर्व वीवो परख के रूप में ग्लोमेरुलर आउटग्रोथ

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...