Name: isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies
Uploaded: 2018-07-14T15:00:00
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박사 조 안 나 Kur Medtronic (트윈-도시, 미네소타, 미국)의 직원은 지금, 그녀의 현재 작업을 충돌 하지 않는 여기에 제시 된 그.

위에서 설명한 프로토콜 연습을 필요로 하지만 최소한의 문제 해결 달성 되어야 합니다. 평균 하루에 우리 6-8 사용할 arterioles 고립에서 얻을 것이 고 3-4 성공적인 실험을 달성. 그러나 문제가 발생 하는 경우, 성공률을 개선 하기 위해 취할 수 있는 몇 가지 단계가 있습니다. 때때로 우리는 발견, 어린 쥐 (< 8 주)를 사용 하는 경우에 특히 arterioles의 수익률 낮은 될 수 있습니다. 이 문제를 회피, 단계 1.12-1.14 단계는 분쇄의 각 사이 망막 조직 (500g x 10-30 s) centrifuging 좋습니다 것 이다. 이 종종 혈관의 수율을 개선 하는 데 도움이 하지만 준비 내 세포 파편의 양을 증가.
때 혈관 압력 myography 연구에 대 한 cannulating arterioles 수 분기 가까운 죽 습 되었습니다가지고 있는 모든 사이드 지점에 대 한 신중 하 게 확인 하기 중요 하다. 이 실험 동안 누설의 일반적인 원인 및 압력의 손실을 나타냅니다. [캘리포니아2 +]나 프로토콜 함께 발생할 수 있는 주요 문제는 염료 로드의 수준 이다. 불 쌍 한 염료 로드 일반 Ca2 + 항상성 장애에 결과 오버 로드 하는 동안 낮은 신호 대 잡음 비율, 리드. 이러한 문제 중 하나에의 가능성을 줄이기 위해, 망막 homogenate의 작은 약 수를 제거할 수 있습니다, 하 고 격리 된 선박 로드 프로토콜 동안 정기적으로 검사 합니다. 사업 패치 클램프 실험, gigaseal 형성의 성공률도 높은 방법에 의존 하는 경우 기저 lamina 소화 되어 있다. 때 처음이 프로토콜 테스트 또는 사용 하 여 새로운 많은 효소의 효소 소화 농도/기간 조정 필요할 수 있습니다. 충분히 기초를 제거 하는 충분 한 소화 보장 한다 내 피 및 평활 근 층의 분리를 신중 하 게 모니터링 액세스 laminal. 주의 깊은 모니터링 하는 것은 또한 혈관 수축 시작으로 매니 페스트 수 있습니다-소화를 방지 하는 데 필요한입니다. 이 경우, 평활 근 세포는 종종 패치 클램프 기록에 대 한 너무 약 합니다. 효소를 적용할 때 그것은 DNAse를 포함 하는 것이 중요 내가 DNA에서 해방의의 제거를 보장 하기 위해 손상 된 세포 격리 과정. DNA 파편은 끈 적 원인과 (4.4 단계), 청소 과정의 최종 단계는 되에 고착을 겸 종종 선박 손실의 결과로. 혈관 청소 기술적으로 어려운 이며 가장 높은 최고의 가능한 팁 직경의 닫힌된 집게의 부드러운 연소 움직임 확대 (20 X)에서 수행 됩니다. 스윕, 사이 랩 롤과 집게 청소.
강조,이 원고에 설명 된 프로토콜의 개발 뒤에 주요 동기 망막 혈관 질환 중 혈 중단 왜 이해를 했다. 날짜를 우리의 작품의 대부분은 당뇨병 안구 질환28,33에 집중 했다. Arterioles 섹션 1에에서 설명 된 방법을 사용 하 여 당뇨병의 실험적인 설치류 모델의 망막에서 격리 될 수 있습니다. 실험에서 당뇨병 동물에서 분리 된 망막 arterioles 때 그것은 밀접 하 게 비보에혈관에 의해 경험 hyperglycemic 조건 복제 하려고 하는 것이 중요. 이러한 이유로, 우리가 일반적으로 우리의 절연 및 25 m m 실험적인 솔루션에서 D-포도 당 수준을 인상 것입니다. 혈관 지하실 막 두껍게 당뇨병34,35동안 망막 혈관에 잘 인식 된 현상입니다. 동물을 사용 하 여 장기간 당뇨병 (> 1 개월 질병 기간) 때 증가 효소 농도 또는 소화 시간 종종 필요 패치 클램프 기록 방법의 응용 프로그램을 활성화 합니다.
비보 전 을 사용 하 여 중요 한 제한 절연 망막 arterioles 망막 혈관 생리학을 공부 하 고 이상 주변 망막 neuropile의 손실 이다. 망막 폐해 및 신경 세포의 제거는 세포 생리학 연구에 대 한 망막 혈관 평활 근 세포에 쉽게 액세스할 수 있습니다,. 비록 vasoactive 중재자에 대 한 혈관의 응답 부재 및 망막의 존재에서 극적으로 변경할 수 있습니다. 조직입니다. 아데노신 트라이-인산 염 (ATP)의 작업은 예를 들어이 포인트의 좋은 그림을 제공합니다. 고립 된 쥐 망막 arterioles, ATP 트리거의 추가 선박36의 강력한 수축, 그대로 neuropile의 존재에 혈관 팽창37. 따라서, 가능 하다 면, 우리가 일반적으로 시도 비보 전 망막 전체 마운트 및 선박 직경 및 혈액 흐름16,37 의 측정 vivo에서 를 사용 하 여 우리의 고립된 되 준비에서 주요 연구 결과 유효성을 검사 하 . 주의 새로운 방법을 최근 작은 arterioles38,39 비보 전전체 끼얹는다 돼지 망막 모세 혈관을 공부 하 고 대 한 나왔다. 이러한 준비 크게 망막 neuropile 망막 arteriolar 및 모 세관 톤을 조절 하는 방법 및 망막 haemodynamics에 변화 망막에 신경 활동을 조절 하는 어떻게의 우리의 이해를 향상 시킬 가능성이 있다.
이 문서에서 설명 하는 절차는 이해 arteriolar 부드러운 근육 세포 생리학에 대 한 고립 된 쥐 망막 arterioles의 사용에 초점을 맞추고 있다, 하지만 우리는 현재 프로토콜에 내 피 세포 기능 연구 활성화를 개발합니다 이러한 선박입니다. 예비 작업에서 우리는 캘리포니아2 + 이미징 및 연구 기록 patchclamp 의무가 가능한 내 피 세포 튜브를 망막 arteriolar 세그먼트의 효소 소화 수정에 성공 되었습니다. Intraluminal 배달, 약물의 사용, 양쪽 끝에 격리 arterioles cannulation 수도 미래에 이러한 선박에 조사를 사용 피 종속 vasodilatory 응답.

비정상적인 혈 시력을 위협 하는 다양 한의 병 인에 연루 되어 이후 중요 한 목표는 망막에 혈액 흐름을 제어 하는 방법을 이해 망막 질병1,2,3, 4. 제공 안 망막 신경 그리고 glial 세포, 망막 순환 arterioles 망막 venules 그리고 마지막으로 혈관5모 세관을 통과 하 고 망막 동맥에서 혈액의 모든 최종 동맥 배열을, 있다. 망막에 혈액 흐름의 망막 동맥, arterioles 톤 후 모 세관 venules6,7, 및 망막 모세 혈관의 벽에 있는 pericytes의 수축 성 활동에 의해 통제 된다 8. 망막 혈관 음색의 제어는 복잡 하 고 다양 한 분자와 호르몬, 순환 혈액 가스를 포함 한 주변 망막 조직 하 고 순환 시스템에서 입력에 의해 변조 및 vasoactive 물질에서 발표는 망막 혈관 내 피와 macroglia9,,1011. 망막 arterioles 망막의 작은 동맥 가지 단일 층의 혈관 평활 근 세포의 구성와의 내부 안 감 경도 배열 내 피 세포12,13, 14. 이러한 혈관 망막 순환 내 혈관 저항의 주요 사이트를 형성 하 고 따라서 망막 혈액 흐름의 로컬 제어에서 중요 한 역할. 망막 arterioles dilating 또는 변화 혈관 평활 근 수축10,15,16에 의해 중재 luminal 그들의 직경을 constricting에 의해 망막에 모 세관 혈액의 흐름을 조절 합니다. Arterioles 규제는 망막을 통해 망막 관류 필요 준비 arteriolar 평활 근 세포를 액세스할 수 있으며 가능한 생리 적 조건에 가깝게에서 공부 하는 분자 메커니즘을 이해.
고립 된 망막 혈관의 비보 전 준비 아직도 그들의 기능 및 기본 피와 상호를 유지 하는 동안 혈관 평활 근 세포에 대 한 액세스를 제공 합니다. 격리 된 용기를 사용 하 여 현재까지 대부분의 연구는 큰 소 또는 돼지 동맥 혈관 (60-150 µ m)에 집중 했다. 이러한 상용 와이어 또는 혈관 평활 근 세포 수축 메커니즘17,18의 약리 심문 수 있도록 압력 myograph 시스템에 장착할 수 있습니다. 이러한 준비 정상적인 조건에서 망막 혈관 생리학의 우리의 지식에 크게 기여 했다. 몇 가지 연구는 그들의 작은 직경으로 작은 실험실 동물에서 분리 된 망막 arterioles 사용 (~ 8-45 µ m) 기존의 myography 시스템19,20,,2122에 그들의 사용을 방지. 그러나 중요 한 이점,, 작은 실험 동물에서 혈관을 사용 하 여 유전자 변형, 유전자 변형 및 망막 질환 모델의 넓은 가용성 이다. 작은 실험실 동물 개입 연구 비보에 대 한 더 많은 의무가 있습니다.
여기 우리는 분리 하 고 압력 myography 실험 쥐 망막 arterioles cannulating에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 캘리포니아2 + 이미징 및 전기 생리학 프로토콜 사용 하 여 이러한 혈관도 자세히 나와 있습니다. 이러한 추가 혈관 평활 근 수축 및 망막에 혈액 흐름의 규칙으로 통찰력을 제공할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Beakers</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>15409083</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-109-3542</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic pipette/ transfer</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1174</td>
			<td>6mL is best but other sizes are acceptable; remove tip to widen aperture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Brunel Microscopes LTD</td>
			<td></td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #5 14095</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11546963</td>
			<td>Fire polished to reduce friction but not enough to narrow the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7741</td>
			<td>Or any equilavent 10cm product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette teat</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12426180</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water supply</td>
			<td>Merek</td>
			<td>Milli-Q Integral Water Purification System</td>
			<td>Or any equilavent system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottomed test tube</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-958-10 B</td>
			<td>5 mL; any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seratted forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17-467-230</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge blades</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>T585</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184</td>
			<td>Or any pliable surface&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testtube rack</td>
			<td>Fisherbrand Derlin</td>
			<td>10257963</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure myography</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>x2 (or any equilavent product)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software&#160;</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis plugin</td>
			<td>Myotraker&#160;</td>
			<td>https://doi.org/10.1371/journal.pone.0091791.s002</td>
			<td>Custom plugin for imageJ Freely available for download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #7 14097</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura-2-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F1221</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manometer</td>
			<td>Riester</td>
			<td>LF1459</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W558818</td>
			<td>75&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video capture software</td>
			<td>Hypercam</td>
			<td>version 2.28.01</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patch clamping</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2411</td>
			<td>3 mg disolved daily in 50 &#956;L of DMSO (sonicate to dissolve)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Axopatch 200a</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analogue digital converter</td>
			<td>Axon</td>
			<td>Digidata 1440A</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9891&#160;</td>
			<td>0.1mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>260913</td>
			<td>Working stock 1 MU mL-1 (10 MU diluted in 10 mL LCH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Any equilavent commerical product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV203BU</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patching software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Pclamp v10.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Type XIV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5147&#160;</td>
			<td>0.01mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole cell pipette glass</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x40 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>40x/0.55, WD 2.1, &#8734;/1.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca2+ imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Acquisition Engine V1.1.5</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software for confocal imaging</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>SP5&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochromator&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Optoscan</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>LAS-AF version 3.3.</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x100 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>x100 N.A. 1.3 oil</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL FLUOTAR, 20x/0.50, &#8734;/0.17/D</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>C PLAN, 4x/0.10, &#8734;/-/&#10013;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x63 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL APO, 63x/1.40 - 0.60 OIL CS &#8734;/0.17/E</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Specifications and settings for fabrication of pipettes for experimentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;10 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 290 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 58 
			Time: 150 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 3-10 &#956;m 
			Polishing: no 
			Final Resistance: &#60;1 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>On-cell patching</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;5 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole-cell patching</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 296 
			Pressure: 200 
			Heat: 287 
			Pull : 0 
			Velocity: 50 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 2-3 &#956;m 
			Polishing: helpful but not necessary 
			Final Resistance: 1-2 M&#937;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies

망막은 상당한 혈액 공급을 필요로 하는 높은 metabolically 활성 조직. 망막 순환 안 배는 대뇌를 공급 하는 동안 내부 망막을 지원 합니다. 당뇨병 성 망막 증을 포함 하 여 수많은 시력을 위협 하는 장애에 기여 하는 망막 관류에 변경, 녹 내장 및 망막 정 맥 않기. 망막이 안구 질병 동안 변경 되는 방법을 통해 혈액 흐름의 제어에 관련 된 분자 메커니즘을 이해 이러한 조건의 치료에 대 한 새로운 목표의 식별 될 수 있습니다. 망막 arterioles, 망막의 주요 저항 혈관 이며 따라서 luminal 직경에서 변화를 통해 망막 hemodynamics 조절에 핵심적인 역할을 담당할. 최근 몇 년 동안, 우리는 다양 한 세포 생리학 연구를 포함 하는 응용 프로그램에 대 한 적당 한 쥐 망막에서 arterioles 격리 하기 위한 방법을 개발 했습니다. 이 준비는 이미 혈은 망막에 제어 방법과 눈 질병 중 발생 하는 주요 변경 사항 중 일부를 식별 하기 위해 우리 수 있다에 새로운 통찰력을 얻을 시작 됩니다. 이 문서에서는, 우리는 쥐 망막 arterioles의 고립 위한 방법을 설명 하 고 패치 클램프 전기 생리학, 칼슘 이미징 및 압력 myography 연구에 그들의 사용에 대 한 프로토콜을 포함. 이러한 혈관 PCR-서 부 럽 고 immunohistochemistry-기반 연구에 사용 하기 위해 의무가 있습니다.

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Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

이 원고는 arterioles, electrophysiological 칼슘 이미징 및 압력 myography 연구에 사용 될 수 있는 쥐 망막에서의 격리에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다.

Ex Vivo 세포 생리학 연구에 대 한 망막 Arterioles의 절연

The retina is a highly metabolically active tissue that requires a substantial blood supply. The retinal circulation supports the inner retina, while the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

마우스 부신 Chromaffin 셀 절연

Adrenal medullary chromaffin cell culture systems are extremely useful for the study of excitation-secretion coupling in an in vitro setting.  This ...

연구

생물학

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

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마우스 망막 신경절 세포의 유전자 발현에 대한 utero 및 전직 생체내의 Electroporation에

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Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

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Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

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운동성의 시공간 매핑<em&gt; 전의 VIVO</em내장의&gt; 준비

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

쥐 Cremaster 근육의 세동맥의 셀이없는 계층의 시각화 및 정량화

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Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 통로를 분석하는 전 비보 분석으로 구체 아웃스승

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...