Name: isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies
Uploaded: 2018-07-14T15:00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies at JoVE.com

Разработка протоколов, описанных в этом документе была поддержана грантов от следующих финансовых учреждений: СИББН (BB/I026359/1), борьба за прицел (1429 и 1822), Юный Фонд исследования диабета (2-2003-525), Велком Траст (074648/Z/04), Фонд Британской сердца (PG/11/94/29169), HSC R & D Отдел (STL/4748/13) и MRC (MC_PC_15026).

<ol>
	<li>Kohner, E. M., Patel, V., Rassam, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+blood+flow+and+impaired+autoregulation+in+the+pathogenesis+of+diabetic+retinopathy.">Role of blood flow and impaired autoregulation in the pathogenesis of diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 44, 603-607 (1995).</li><li>Hafez, A. S., Bizzarro, R. L., Lesk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+optic+nerve+head+and+peripapillary+retinal+blood+flow+in+glaucoma+patients,+ocular+hypertensives,+and+normal+subjects.">Evaluation of optic nerve head and peripapillary retinal blood flow in glaucoma patients, ocular hypertensives, and normal subjects.</a> American Journal of Ophthalmology. 136, 1022-1031 (2003).</li><li>Curtis, T. M., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+lesions+of+diabetic+retinopathy:+clues+towards+understanding+pathogenesis?.">Microvascular lesions of diabetic retinopathy: clues towards understanding pathogenesis?.</a> Eye (London). 23, 1496-1508 (2009).</li><li>Pournaras, C. J., Rungger-Br&#228;ndle, E., Riva, C. E., Hardarson, S. H., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+retinal+blood+flow+in+health+and+disease).">Regulation of retinal blood flow in health and disease).</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27, 284-330 (2008).</li><li>Kuwabara, T., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+retinal+vascular+patterns.+I.+Normal+architecture.">Studies of retinal vascular patterns. I. Normal architecture.</a> Archives of Ophthalmology. 64, 904-911 (1960).</li><li>Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+physiology+of+retinal+and+choroidal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">Cellular physiology of retinal and choroidal arteriolar smooth muscle cells.</a> Microcirculation. 14 (1), 11-24 (2007).</li><li>Puro, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinovascular+physiology+and+pathophysiology:+new+experimental+approach/new+insights.">Retinovascular physiology and pathophysiology: new experimental approach/new insights.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 31 (3), 258-270 (2012).</li><li>Kur, J., Newman, E. A., Chan-Ling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+physiological+mechanisms+underlying+blood+flow+regulation+in+the+retina+and+choroid+in+health+and+disease.">Cellular and physiological mechanisms underlying blood flow regulation in the retina and choroid in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 31 (5), 377-406 (2012).</li><li>Delaey, C., Van de Voorde, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+Mechanisms+in+the+Retinal+and+Choroidal+Circulation.">Regulatory Mechanisms in the Retinal and Choroidal Circulation.</a> Ophthalmic Research. 32 (6), 249-256 (2000).</li><li>Metea, M. R., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+cells+dilate+and+constrict+blood+vessels:+a+mechanism+of+neurovascular+coupling.">Glial cells dilate and constrict blood vessels: a mechanism of neurovascular coupling.</a> Journal of Neuroscience. 26, 2862-2870 (2006).</li><li>Pournaras, C. J., Rungger-Br&#228;ndle, E., Riva, C. E., Hardarson, S. H., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+retinal+blood+flow+in+health+and+disease.">Regulation of retinal blood flow in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27 (3), 284-330 (2008).</li><li>Hughes, S., Chan-Ling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+smooth+muscle+cell+and+pericyte+differentiation+in+the+rat+retina+in+vivo.">Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (8), 2795-2806 (2004).</li><li>Shepro, D., Morel, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericyte+physiology.">Pericyte physiology.</a> The FASEB Journal. 7 (11), 1031-1038 (1993).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Blood+Flow+in+the+Retinal+Trilaminar+Vascular+Network.">Regulation of Blood Flow in the Retinal Trilaminar Vascular Network.</a> Journal of Neuroscience. 34 (34), 11504-11513 (2014).</li><li>Matsushita, K., Puro, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographical+heterogeneity+of+KIR+currents+in+pericyte-containing+microvessels+of+the+rat+retina:+effect+of+diabetes.">Topographical heterogeneity of KIR currents in pericyte-containing microvessels of the rat retina: effect of diabetes.</a> Journal of Physiology. 573, 483-495 (2006).</li><li>Needham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+K++and+Cl-+channels+in+the+regulation+of+retinal+arteriolar+tone+and+blood+flow.">The role of K+ and Cl- channels in the regulation of retinal arteriolar tone and blood flow.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (4), 2157-2165 (2014).</li><li>Hessellund, A., Jeppesen, P., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+vasomotion+in+porcine+retinal+arterioles.">Characterization of vasomotion in porcine retinal arterioles.</a> Acta Ophthalmologicaogica Scandinavica. 81, 278-282 (2003).</li><li>Delaey, C., Van de Voord, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+myogenic+responses+in+isolated+bovine+retinal+arteries.">Pressure-induced myogenic responses in isolated bovine retinal arteries.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1871-1875 (2000).</li><li>Kur, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ion+channels+and+subcellular+Ca2++signaling+in+arachidonic+acid-induced+dilation+of+pressurized+retinal+arterioles.">Role of ion channels and subcellular Ca2+ signaling in arachidonic acid-induced dilation of pressurized retinal arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (5), 2893-2902 (2014).</li><li>Kur, J., Bankhead, P., Scholfield, C. N., Curtis, T. M., McGeown, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(2+)+sparks+promote+myogenic+tone+in+retinal+arterioles.">Ca(2+) sparks promote myogenic tone in retinal arterioles.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1675-1686 (2013).</li><li>Fern&#225;ndez, J. A., McGahon, M. K., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaV3.1+T-Type+Ca2++Channels+Contribute+to+Myogenic+Signaling+in+Rat+Retinal+Arterioles.">CaV3.1 T-Type Ca2+ Channels Contribute to Myogenic Signaling in Rat Retinal Arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (9), 5125-5132 (2015).</li><li>McGahon, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV2+Channels+Contribute+to+Stretch-Activated+Cation+Currents+and+Myogenic+Constriction+in+Retinal+Arterioles.">TRPV2 Channels Contribute to Stretch-Activated Cation Currents and Myogenic Constriction in Retinal Arterioles.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (13), 5637-5647 (2016).</li><li>Guidoboni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+Pressure,+Blood+Pressure,+and+Retinal+Blood+Flow+Autoregulation:+A+Mathematical+Model+to+Clarify+Their+Relationship+and+Clinical+Relevance.">Intraocular Pressure, Blood Pressure, and Retinal Blood Flow Autoregulation: A Mathematical Model to Clarify Their Relationship and Clinical Relevance.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (7), 4105-4118 (2014).</li><li>Scholfield, C. N., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+cytosolic+calcium+regulation+among+different+microvascular+smooth+muscle+cells+of+the+rat+retina.">Heterogeneity in cytosolic calcium regulation among different microvascular smooth muscle cells of the rat retina.</a> Microvascular Research. 59 (2), 233-242 (2000).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 260, 3440-3450 (1985).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Single Channel Recording, Second Edition. , 53-90 (1995).</li><li>Fern&#225;ndez, J. A., Bankhead, P., Zhou, H., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+detection+and+measurement+of+isolated+retinal+arterioles+by+a+combination+of+edge+enhancement+and+cost+analysis.">Automated detection and measurement of isolated retinal arterioles by a combination of edge enhancement and cost analysis.</a> PLoS One. 9, e91791 (2014).</li><li>McGahon, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+downregulates+large-conductance+Ca2+-activated+potassium+beta+1+channel+subunit+in+retinal+arteriolar+smooth+muscle.">Diabetes downregulates large-conductance Ca2+-activated potassium beta 1 channel subunit in retinal arteriolar smooth muscle.</a> Circulation Research. 100 (5), 703-711 (2007).</li><li>Curtis, T. M., Scholfield, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nifedipine+blocks+Ca2++store+refilling+through+a+pathway+not+involving+L-type+Ca2++channels+in+rabbit+arteriolar+smooth+muscle.">Nifedipine blocks Ca2+ store refilling through a pathway not involving L-type Ca2+ channels in rabbit arteriolar smooth muscle.</a> Journal of Physiology. 532 (3), 609-623 (2001).</li><li>Tumelty, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin+1+stimulates+Ca2+-sparks+and+oscillations+in+retinal+arteriolar+myocytes+via+IP3R+and+RyR-dependent+Ca2++release.">Endothelin 1 stimulates Ca2+-sparks and oscillations in retinal arteriolar myocytes via IP3R and RyR-dependent Ca2+ release.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (6), 3874-3879 (2011).</li><li>Huynh, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+insight+into+the+assembly+of+TRPV+channels.">Structural insight into the assembly of TRPV channels.</a> Structure. 22 (2), 260-268 (2014).</li><li>McGahon, M. K., Dawicki, J. M., Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A-type+potassium+current+in+retinal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">A-type potassium current in retinal arteriolar smooth muscle cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 46 (9), 3281-3287 (2005).</li><li>McGahon, M. K., Zhang, X., Scholfield, C. N., Curtis, T. M., McGeown, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+downregulation+of+the+BKbeta1+subunit+in+diabetic+arteriolar+myocytes.">Selective downregulation of the BKbeta1 subunit in diabetic arteriolar myocytes.</a> Channels (Austin). 1 (3), 141-143 (2007).</li><li>Ljubimov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+abnormalities+in+human+eyes+with+diabetic+retinopathy.">Basement membrane abnormalities in human eyes with diabetic retinopathy.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44, 1469-1479 (1996).</li><li>Roy, S., Maiello, M., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+basement+membrane+collagen+in+human+diabetic+retinopathy.">Increased expression of basement membrane collagen in human diabetic retinopathy.</a> Journal of Clinical Investigation. 93, 438-442 (1994).</li><li>Scholfield, C. N., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+physiology+of+retinal+and+choroidal+arteriolar+smooth+muscle+cells.">Cellular physiology of retinal and choroidal arteriolar smooth muscle cells.</a> Microcirculation. 14 (1), 11-24 (2007).</li><li>Hinds, K., Monaghan, K. P., Fr&#248;lund, B., McGeown, J. G., Curtis, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+control+of+arteriolar+diameter+in+the+rat+retina.">GABAergic control of arteriolar diameter in the rat retina.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54 (10), 6798-6805 (2013).</li><li>Torring, M. S., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constriction+of+porcine+retinal+arterioles+induced+by+endothelin-1+and+the+thromboxane+analogue+U46619+in+vitro+decreases+with+increasing+vascular+branching+level.">Constriction of porcine retinal arterioles induced by endothelin-1 and the thromboxane analogue U46619 in vitro decreases with increasing vascular branching level.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (3), 232-237 (2014).</li><li>P, S. k. o. v. . J. e. n. s. e. n. ., S, M. e. t. z. . M. a. r. i. e. n. d. a. l. . P. e. d. e. r. s. e. n., Aalkjaer, C., Bek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vasodilating+effects+of+insulin+and+lactate+are+increased+in+precapillary+arterioles+in+the+porcine+retina+ex+vivo.">The vasodilating effects of insulin and lactate are increased in precapillary arterioles in the porcine retina ex vivo.</a> Acta Ophthalmologica. 94 (5), 454-462 (2016).</li></ol>

Д-р Джоанна Kur теперь сотрудник Medtronic (побратимы, Миннесота, США), ее настоящей работы не конфликтуют с этим представлены здесь.

Протоколы, описанные выше требует практики, но должны быть достижимыми с минимальными устранение неполадок. В среднем в день мы бы получить 6-8 полезная артериол от изоляции и достижения 3-4 успешных экспериментов. Если возникают проблемы, однако, есть некоторые шаги, которые могут быть предприняты, чтобы помочь улучшить показатели успеха. Иногда мы нашли, особенно при использовании молодых крыс (< 8 недель), что доходность артериол может быть низким. Чтобы обойти эту проблему, мы предлагаем, центрифугирование ткани сетчатки (10-30 s на 500 x g) между каждым из Тритурация шаги в шагах 1.12-1.14. Это часто помогает улучшить доходность судов, но также увеличит количество клеток мусора в рамках подготовки.
Когда cannulating сосудов давления миография исследований важно проверить артериол тщательно для любого боковых ветвей, которые возможно были расщепляется недалеко от раздвоения сайта. Это является распространенной причиной утечки и потери давления во время экспериментов. Главный вопрос, который может возникнуть в связи с [Ca2 +]я протоколов является уровень загрузки красителя. Бедных краситель загрузки приводит к низким соотношения сигнал шум, а перегрузка приводит к нарушению нормальной Ca2 + гомеостаза. Чтобы уменьшить вероятность возникновения любой из этих вопросов, могут быть удалены небольшой Алиготе сетчатки огневки, и изолированных судов проверяются периодически во время загрузки протокол. При проведении патч зажим эксперименты, успеха формирования gigaseal сильно зависит как хорошо базальной пластинки были осмыслены. Когда первоначально этот протокол испытания или с помощью новых много ферментов, это может быть необходимо отрегулировать концентрацию/продолжительность Пищеварение энзима. Внимательно следит за разделение слоев эндотелия и гладкой мускулатуры обеспечит достаточные пищеварение для удаления достаточно базальной Ламинальный получить доступ. Тщательный мониторинг необходим также избежать чрезмерной пищеварения, который может проявляться как судно начинает сжиматься. Если это происходит, гладкомышечные клетки часто являются слишком хрупкие для записи зажим патч. При применении ферментов, важно включить DNAse I обеспечение удаления нитей ДНК, освобожденных от поврежденных клеток во время процесса изоляции. Фрагменты ДНК липкое и вызывают щипцы придерживаться противовоспали на заключительных этапах процесса очистки (шаг 4.4), часто приводит к гибели судна. Очистка судов является технически сложным и лучше всего выполняется в большом увеличении (20 X) с нежным радикальных движений закрытых Щипцы диаметром лучших возможных подсказка. Между отчётами чистые пинцет с роликом лаборатории.
Как отмечалось ранее, основные мотивы для разработки протоколов, изложенные в этой рукописи был лучше понять, почему кровоток нарушается во время заболеваний сетчатки сосудистого. Большая часть нашей работы до настоящего времени уделялось диабетических глазных болезней28,33. Артериолы могут быть изолированы от сетчатки экспериментальных моделей грызунов диабета с помощью методов, описанных в разделе 1. При проведении экспериментов на изолированных артериол сетчатки от диабетической животных, важно, чтобы попытаться тесно воспроизвести гипергликемической условия, испытываемых судов в естественных условиях. По этой причине мы обычно бы поднять уровни D-глюкозы в нашей изоляции и экспериментальных решений до 25 мм. Утолщение мембран сосудистой подвале явление общепризнанным в сосуды сетчатки при диабете34,35. При использовании животных с длительного диабета (> 1 месяцев продолжительность болезни), увеличение фермента концентрации или пищеварения раз часто требуются для включения применения методов записи патч зажим.
Важное ограничение использования ex vivo изолированные артериол сетчатки для изучения сетчатки сосудистой физиологии и патофизиологии является потеря окружающие neuropile сетчатки. Хотя удаление глиальных и нейрональных клеток сетчатки позволяет легкий доступ для исследования физиологии клетки сетчатки сосудистого гладких мышечных клеток, ответ судов вазоактивных посредников можно резко измениться в отсутствие и наличие сетчатки ткани. Например, действия аденозин tri фосфат (АТФ), обеспечивают хорошей иллюстрацией этой точки. В изолированных крыса артериол сетчатки, добавление триггеров АТФ надежные сужение сосудов36, находясь в присутствии нетронутыми neuropile, сосуды расширяются37. Поэтому где это возможно, мы обычно пытаемся проверять основные выводы из наших изолированных противовоспали препаратов с помощью ex vivo сетчатки целом кронштейны и в естественных условиях измерений судна диаметр и крови поток16,37 . Следует отметить недавно появились новые методы для изучения малых артериол и капилляров в целом перфузии свинину сетчатки ex vivo38,39. Такие препараты способны значительно улучшить наше понимание как сетчатки neuropile регулирует сетчатки тонус артериол и капилляров и как изменения гемодинамики сетчатки модулируют активность нейронов в сетчатке.
Хотя описанные в настоящем документе ориентированы на использование изолированных крыса артериол сетчатки для понимания артериол гладкомышечные клетки физиологии, в настоящее время мы разрабатываем протоколы, чтобы также включить изучение функции эндотелиальных клеток в Эти суда. В предварительной работы мы добились успеха в изменении ферментативного пищеварения сетчатки артериол сегментов приносить трубы жизнеспособных эндотелиальных клеток, которые поддаются Ca2 + изображений и patchclamp записи исследования. Катетеризации изолированных артериол на обоих концах, позволяя внутрипросветная доставки наркотиков, могли бы в будущем также включить эндотелий зависимой сосудорасширяющих ответы должны расследоваться в этих судов.

Понимание, как поток крови контролируется в сетчатке является важной задачей, так как ненормальные кровотока было вовлечено в патогенезе различных зрение угрожая заболевания сетчатки1,2,3, 4. Сетчатки циркуляции, которая поставляет внутреннюю сетчатки нейронов и глиальных клеток, имеет договоренность конец артерии, со всеми из крови от сетчатки артерий и артериол, проходящей через капилляров сетчатки венулы и, наконец, Вены5. Кровообращения в сетчатке регулируется тон сетчатки артерий и артериол, а также сократительная активность pericytes, расположенных на стенках капилляров сетчатки и пост капиллярного венулы6,7, 8. контроль сетчатки сосудистого тонуса является сложным и модулируется широкий спектр материалов из системы кровообращения и окружающие ткани сетчатки, включая газов крови, циркулирующей молекул и гормонов, и высвобождение вазоактивных веществ от сетчатки сосудистого эндотелия и macroglia9,10,11. Артериолы сетчатки являются веточек артерий сетчатки и состоят из одного слоя клеток сосудистой гладкой мускулатуры и внутренней оболочки продольно расположенных эндотелиальных клеток12,13, 14. эти сосуды формируют главный сайт сосудистого сопротивления в пределах сетчатки циркуляции и поэтому играют важную роль в местные управления сетчатки кровотока. Артериолы сетчатки регулировать капиллярного кровотока в сетчатке, расширяя или сжимает их Люминал диаметр, при посредничестве изменения в сосудистой гладкой мускулатуры сократимости10,15,16. Понимание молекулярных механизмов, через который сетчатки, регулировать артериол сетчатки перфузии поэтому требует подготовки где артериол гладкомышечные клетки могут быть доступны и учился в условиях как можно ближе к физиологической как можно скорее.
Ex vivo препараты изолированных сетчатки сосудов обеспечивают доступ к сосудистой гладких мышечных клеток, по-прежнему сохраняя их функциональности и совместимости с базовой эндотелия. Большинство исследований на сегодняшний день использование изолированных судов были сосредоточены на больших говядины или свинины артериальных сосудов (60-150 мкм). Это может быть установлен в коммерчески доступных проволоки или давления myograph систем, позволяющих фармакологических допроса сосудистой гладкой мышечной клетки сократительной механизмы17,18. Такие препараты внесли наши знания физиологии сетчатки сосудов при нормальных условиях. Несколько исследований использовали артериол сетчатки, изолированных от мелких лабораторных животных как их меньшего диаметра (~ 8-45 мкм) предотвращает их использование в обычных миография систем19,20,21,22. Важным преимуществом, однако, с помощью судов от мелких лабораторных животных является широкая доступность модели заболеванием генетически модифицированные, трансгенных и сетчатки. Мелких лабораторных животных, также более сговорчивым в vivo исследований вмешательства.
Здесь мы опишем простой протоколы для изоляции и cannulating сетчатки крыс артериол для давления миография экспериментов. CA2 + визуализации электрофизиологии протоколы и с помощью этих судов также подробно. Эти дополнительные может обеспечить понимание регулирования сократимости гладких мышц сосудов и кровообращения в сетчатке.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Beakers</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>15409083</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-109-3542</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic pipette/ transfer</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1174</td>
			<td>6mL is best but other sizes are acceptable; remove tip to widen aperture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Brunel Microscopes LTD</td>
			<td></td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #5 14095</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11546963</td>
			<td>Fire polished to reduce friction but not enough to narrow the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7741</td>
			<td>Or any equilavent 10cm product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette teat</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12426180</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water supply</td>
			<td>Merek</td>
			<td>Milli-Q Integral Water Purification System</td>
			<td>Or any equilavent system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottomed test tube</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-958-10 B</td>
			<td>5 mL; any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seratted forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17-467-230</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge blades</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>T585</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184</td>
			<td>Or any pliable surface&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testtube rack</td>
			<td>Fisherbrand Derlin</td>
			<td>10257963</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure myography</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>x2 (or any equilavent product)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software&#160;</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis plugin</td>
			<td>Myotraker&#160;</td>
			<td>https://doi.org/10.1371/journal.pone.0091791.s002</td>
			<td>Custom plugin for imageJ Freely available for download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Dumont #7 14097</td>
			<td>Any equivalent fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura-2-AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F1221</td>
			<td>Make 1 mM stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manometer</td>
			<td>Riester</td>
			<td>LF1459</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W558818</td>
			<td>75&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video capture software</td>
			<td>Hypercam</td>
			<td>version 2.28.01</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patch clamping</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2411</td>
			<td>3 mg disolved daily in 50 &#956;L of DMSO (sonicate to dissolve)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Axopatch 200a</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analogue digital converter</td>
			<td>Axon</td>
			<td>Digidata 1440A</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9891&#160;</td>
			<td>0.1mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>260913</td>
			<td>Working stock 1 MU mL-1 (10 MU diluted in 10 mL LCH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Any equilavent commerical product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV203BU</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclypse TE 300</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>P97</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge +&#160; Olympus CX 31 microscope</td>
			<td>Glassworks</td>
			<td>Fine Point F-550</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>MP-285</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patching software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Pclamp v10.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Type XIV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5147&#160;</td>
			<td>0.01mg/mL in LCH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipette glass</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB camera</td>
			<td>&#160;Logitech&#160;</td>
			<td>HD Pro Webcam C920</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole cell pipette glass</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x40 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>40x/0.55, WD 2.1, &#8734;/1.2</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca2+ imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way taps</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UY-30600-02</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-axis mechanical manipulator</td>
			<td>Scientifica</td>
			<td>LBM-7&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Acquisition Engine V1.1.5</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air table</td>
			<td>Technical Manufacturing Corporation&#160;</td>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis software for confocal imaging</td>
			<td>Image J</td>
			<td>https://downloads.imagej.net/fiji/</td>
			<td>Free imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 7010</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>SP5&#160;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>RS</td>
			<td>206-3722</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No. 7</td>
			<td>Any superfine forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottomed recording chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0759</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In-line heater</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Commerical equilavent SH-27B Solution In-Line Heater from Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochromator&#160;</td>
			<td>Cairn Research Ltd.</td>
			<td>Optoscan</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel delivery manifold&#160;</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>Perfusion Pencil</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette filler&#160;</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>1mL</td>
			<td>Syringe heated and pulled to internal diameter of pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for confocal microscope</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>LAS-AF version 3.3.</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pump</td>
			<td>Interpet</td>
			<td>AP1</td>
			<td>Converted aeration pump by reversing bellows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>20mL Luer-lok</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>Advent</td>
			<td>W557418</td>
			<td>50&#956;m diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>miscellaneous sizes</td>
			<td>Any equilavent product to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant</td>
			<td>Sub Aqua 12 Plus</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x100 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>x100 N.A. 1.3 oil</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>20x/0.40 WD 3.8, &#8734;/0.17</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL FLUOTAR, 20x/0.50, &#8734;/0.17/D</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>4x/0.10, WD 30, &#8734;/-</td>
			<td>Or any equilavent product; microfluorimetry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x4 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>C PLAN, 4x/0.10, &#8734;/-/&#10013;</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x63 lens</td>
			<td>Leica Geosystems</td>
			<td>HCX PL APO, 63x/1.40 - 0.60 OIL CS &#8734;/0.17/E</td>
			<td>Or any equilavent product; confocal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-connectors</td>
			<td>World Percision Instruments</td>
			<td>14012</td>
			<td>Or any equilavent product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Specifications and settings for fabrication of pipettes for experimentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helper pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;10 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulation pipette</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 290 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 58 
			Time: 150 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 3-10 &#956;m 
			Polishing: no 
			Final Resistance: &#60;1 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>On-cell patching</td>
			<td>World Percision instruments</td>
			<td>IB150F-3</td>
			<td>Inner diameter: 0.86 mm 
			Ramp: 261 
			Pressure: 300 
			Heat: 280 
			Pull : 0 
			Velocity: 56 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 0.5-2 &#956;m 
			Polishing: yes 
			Final Resistance: &#62;5 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole-cell patching</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>GC150TF-7.5</td>
			<td>Inner diameter: 1.17 mm 
			Ramp: 296 
			Pressure: 200 
			Heat: 287 
			Pull : 0 
			Velocity: 50 
			Time: 250 
			No of cycles: 4 
			Tip diameter: 2-3 &#956;m 
			Polishing: helpful but not necessary 
			Final Resistance: 1-2 M&#937;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal arterioles for ex vivo cell physiology studies

Сетчатка является весьма метаболически активные ткани, которая требует существенной кровоснабжение. Сетчатки циркуляции поддерживает внутренний сетчатки, в то время как хориоидальные сосуды снабжения фоторецепторов. Изменения сетчатки перфузии способствуют многочисленные зрение угрожая расстройств, включая диабетической ретинопатии, глаукомы и сетчатки филиал окклюзии вен. Понимание молекулярных механизмов, участвующих в элементе потока крови через сетчатки и как они изменяются при глазной болезни может привести к выявлению новых мишеней для лечения этих условий. Артериолы сетчатки являются основными сопротивление сосудов сетчатки и следовательно, играют ключевую роль в регуляции гемодинамики сетчатки через изменения в Люминал диаметр. В последние годы мы разработали методы для изоляции артериол от сетчатки крыс, которые подходят для широкого спектра приложений, включая исследования физиологии клетки. Этот препарат уже начали приносить новый взгляд на как поток крови контролируется в сетчатке и позволило нам выявить некоторые из ключевых изменений, которые происходят во время глазных заболеваний. В этой статье мы описать методы для изоляции артериол сетчатки крыс и включить протоколы для их использования в патч зажим электрофизиологии, кальция изображений и давление миография исследований. Эти суда подлежат также для использования в ПЦР-, Западный blotting и иммуногистохимия-на основе исследования.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies at JoVE.com

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

Эта рукопись описывает простой протокол для изоляции артериол от сетчатки крыс, который может использоваться в электрофизиологических, кальция изображений и давления миография исследований.

Изоляция артериол сетчатки для исследования физиологии клетки Ex Vivo

The retina is a highly metabolically active tissue that requires a substantial blood supply. The retinal circulation supports the inner retina, while the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Arterioles for Ex Vivo Cell Physiology Studies

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Мышь надпочечников сотовый хромаффинных Изоляция

Adrenal medullary chromaffin cell culture systems are extremely useful for the study of excitation-secretion coupling in an in vitro setting.  This ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

В утробе матери и исключая виво Электропорация для экспрессии генов у мыши ганглиозных клеток сетчатки

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

В естественных условиях подобные органотипической мышей сетчатки культуры Wholemount

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Лентивирусов-опосредованной Нокдаун В Ex Vivo Эритропоэз прав гемопоэтических стволовых клеток

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Бывший естественных условиях Изолированный скелета Подготовка микрососудов для исследования сосудистой реактивности

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

<em&gt; Экс естественных</em&gt; Культура Система по изучению развития щитовидной железы

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Пространственно-временная Отображение подвижности в<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Подготовка кишечника

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

Визуализация и Количественное бесклеточной слоя в артериол мышцы крысы Кремастер

The cell-free layer is defined as the parietal plasma layer in the microvessel flow, which is devoid of red blood cells. The measurement of the in vivo ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Метод Ex Vivo для оценки спонтанной подвижности репродуктивных путей мыши и алгоритмотслеживания движения uterus на основе MATLAB для анализа данных

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

Гломерулярный рост, как Ex Vivo Assay для анализа путей, участвующих в пареталальной активации клеток

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...