Name: a versatile model of hard tick infestation on laboratory rabbits
Uploaded: 2018-10-06T15:00:00
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Reconhecemos a assistência técnica de Evelyne Le Naour, francês Instituto Nacional de pesquisa agrícola (INRA), Alain Bernier (INRA) e Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán foi apoiado por uma bolsa do laboratório de excelência, Integrativa biologia of Emerging Infectious Diseases (LabEx IBEID), Instituto Pasteur. Os coelhos e ovelhas foram compradas pela ANSES. Parte deste trabalho foi financiado pelos institutos nacionais de subsídio de saúde RO1AI090062 para Y. Park. Dr. Jeffrey L. Blair é reconhecido para revisar o manuscrito.

Nota: Neste estudo, coelhos foram mantidos em gaiolas padrão com comida e água oferecidos ad libitum na agência francesa para a alimentação, meio ambiente e saúde ocupacional & segurança (ANSES) credenciado instalações animais em Maisons-Alfort, França. Os animais foram monitorados duas vezes diariamente por dois técnicos experientes por reações anormais da pele, problemas de saúde ou complicações. A sala experimental foi assegurada enquadrando o interior da porta com fita dupla-face para evitar ...

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O passo mais importante no presente protocolo inteiro é colar a cápsula com firmeza para a pele depilada. Por esta razão, pressão constante pelo menos 3 minutos é crítica, especialmente nos cantos. Quando vacinar os carrapatos na cápsula, é importante aplicá-los profundamente no canto oposto do aberto para evitar a fuga de carrapato durante a selagem. Quando o planejamento de experimentos, certifique-se de que todas as cápsulas são cobertas pelo casaco para evitar danos por mastigar ou coçar. Certifique-se qu...

Os carrapatos duro (Ixodidae) são conhecidos como artrópodes alimentação lentas e podem ser conectados em um host para vários dias, ou semanas, dependendo da espécie e do desenvolvimento fase1. Estes artrópodes hematófagos obrigatórios são vetores de uma grande variedade de agentes infecciosos, como bactérias, protozoários e vírus e, portanto, constituem um risco significativo para os seres humanos e animais saúde1. Quando estudando biologia carrapato ou avaliar novos métodos de controle, o estabelecimento de uma escala eficaz sistema de alimentação é crucial para efetivamente desenha os experimentos e realizar o objetivo (s) do estudo. Recentemente, vários sistemas de alimentação artificial de carrapato (evitando o uso de animais vivos) foram desenvolvidos2,3,4 e devem ser usados sempre que possível. No entanto, estes sistemas não foram capazes de substituir carrapato, alimentando-se de animais vivos, e eles não são substitutos adequados para muitas condições fisiológicas necessárias para estudos científicos. Portanto, em alguns casos, o uso de cobaias animais é crucial para garantir a relevância dos resultados experimentais.
Coelhos Nova Zelândia de laboratório têm mostrado os anfitriões mais adequados e acessíveis para vários ixodid carrapato espécie5,6,7,8,9. Duas estratégias comuns de carrapato, alimentando-se de coelhos foram usadas frequentemente: a) alimentar em orelhas de coelho, cobertas com algodão pano ou meias6,7e b) em sacos de algodão9, nylon garrafas10 ou neopreno câmaras11 colado à traseira do coelho. Alimentando-se de orelhas de coelho não é um sistema elegante, porque carrapatos (especialmente primeiros estágios, larvas ou ninfas) podem rastejar e anexar no fundo do canal auditivo, que é desconfortável para o animal e faz o acompanhamento da escala de alimentação e/ou a recuperação de ingurgitadas difícil de carrapatos. Este sistema também é limitado a apenas dois grupos de carrapato na orelhas totalmente cobertos por meias protegidas por colares Elizabetanos, representando um significativo desconforto para o animal. Outros sistemas9,10,11 são definitivamente mais avançados e adequados para a manutenção de colônia de tiquetaque duro. No entanto, eles são limitados no número de grupos experimentais colocados no coelho, bem como nas formas/tamanhos modificáveis das câmaras de alimentação. Além disso, esses protocolos exigem muitas vezes as pernas traseiras coelho para evitar coçar e o uso de colares elizabetanos para evitar o aliciamento a coxear.
Neste documento, propomos um método simples, não-trabalhoso e muito eficaz para alimentar vários grupos de carrapatos duro nas câmaras fechadas colados o coelho volta coberto por uma jaqueta, eliminando a necessidade para os colares elizabetanos ou coxear durante o experimento. Especificamente, nosso sistema usa cápsulas elásticas, feita de uma folha de espuma do etileno-vinil acetato (EVA) abrangidos pela malha de mosquito e colado para o coelho raspado volta com cola látex de não-irritante rápida solidificação (3 min). Esta técnica permite a fixação de várias cápsulas de forma ou tamanho desejado, e poucas semanas após o experimento os coelhos são totalmente recuperados. O sistema é adequado principalmente para os estágios de ninfa e adultos tiquetaque duro, mas com uma pequena modificação pode ser usada para larvas de alimentação também. Os métodos baseados em espuma de EVA para tiquetaque duro de alimentação podem ser adaptados para outros tipos de hospedeiros vertebrados, por exemplo, carneiros (que são mostrados como uma das alternativas neste artigo).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1157px;" width="1158">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg)</td>
			<td style="width:197px;">Charles River&#160;</td>
			<td style="width:399px;">Strain Code 571</td>
			<td style="width:267px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rambouillet sheep</td>
			<td style="width:197px;">Local provider-tick free farm</td>
			<td>Female 6 months old</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">EVA foam 5 mm thick&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Cosplay Shop</td>
			<td style="width:399px;">EVA-PE451kg (950mm x 450mm)</td>
			<td>10 mm PE45kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Foam Sheet 9&#34; X 12&#34; 6 mm-White</td>
			<td style="width:197px;">Amazon</td>
			<td style="width:399px;">FOAMSHT6-20</td>
			<td>6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Full length rabbit jackets&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Harvard Apparatus, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:399px;">620077- medium, 6270078 - large&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Non-toxic latex glue&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Tear mender&#160;</td>
			<td style="width:399px;">Fabric &#38; Leather Adhesive</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Tubular cotton orthopedic stockinette</td>
			<td style="width:197px;">BSN Medical</td>
			<td style="width:399px;">9076 (12-15 cm wide)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Mosquito mesh&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Loisirs Creatifs</td>
			<td style="width:399px;">Very fine filter nylon mesh fabric</td>
			<td>Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 microns is suitable.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Leukoplast&#160;</td>
			<td style="width:197px;">BSN medical S.A.S</td>
			<td style="width:399px;">LF 72361-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Adhesive hook-and-loop tape</td>
			<td style="width:197px;">AIEX store</td>
			<td style="width:399px;">AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour</td>
			<td>Fullfiled by Amazon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast drying glue &#160;</td>
			<td>Fixtout&#160;</td>
			<td>Superglue</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a versatile model of hard tick infestation on laboratory rabbits

O uso de animais vivos em pesquisa de carrapato é crucial para uma variedade de fins experimentais, incluindo a manutenção de colônias de tiquetaque duro no laboratório. Em carrapatos, todas as fases do desenvolvimento (exceto ovo) são hematófagos e adquirir uma refeição de sangue quando anexado a seus hospedeiros vertebrados é essencial para a conclusão bem sucedida de seu ciclo de vida. Aqui vamos demonstrar um método simples que utiliza cápsulas facilmente openable para alimentação de carrapato duro em coelhos. As vantagens do método proposto incluem sua simplicidade, curta duração e sobretudo versátil ajuste às necessidades dos requisitos específicos de experimentais. O método possibilita o uso de múltiplas câmaras (de vários tamanhos) do mesmo animal, que permite a alimentação de vários estágios ou diferentes grupos experimentais, reduzindo a exigência geral de animais. Os materiais não-irritante e facilmente acessíveis usados minimiza o desconforto para os animais, que podem ser facilmente recuperados de um experimento e oferecido para adoção ou reutilizados se o protocolo ético permitir.

Aqui propomos pela primeira vez um método detalhado passo-a passo de tiquetaque duro alimentação em espuma EVA cápsulas aplicadas à traseira de um coelho raspada, coberto por uma jaqueta (Figura 1 e Figura 2). Este protocolo é apropriado para vários tipos de experimentos, quando grupos de escala diferentes no mesmo host são necessários e também podem ser usados para a criação em massa de carrapatos d...

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A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

Nós desenvolvemos um sistema simples e versátil para alimentar carrapatos duro em coelhos de laboratório. Nosso protocolo não-laborioso usa materiais facilmente acessíveis e pode ser ajustado dependendo das exigências das diversas configurações experimentais. O método permite monitoramento confortável e/ou amostragem de carrapatos durante todo o período de alimentação.

Um modelo versátil de infestação de carrapato duro em coelhos de laboratório

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

Este método é adequado para manter colônias duras, estudar a biologia do carrapato ou interações de patógenos vetoriais hospedeiros ou avaliar diferentes medidas de controle desses atributos medicamente importantes. As principais vantagens dessas técnicas são sua simplicidade e curta duração. e, mais importante, capacidade de ser modificado, de acordo com as necessidades experimentais do estudo.Embora este método possa ser usado para alimentar os diferentes estágios de vida de carrapatos duros em coelhos de laboratório. Também pode ser adaptado para outros sistemas de hospedagem, como ovelhas. Comece cortando uma moldura de cápsula de tamanho apropriado de uma folha de espuma EVA arredondando os cantos externos para minimizar o desprendimento acidental durante a colagem.Corte quatro tiras de oito milímetros de largura de fita adesiva autoadesiva e conecte as tiras às laterais do quadro. Corte as tiras do mesmo tamanho da fita de loop autoadesiva e amarre-as à fita adesiva na moldura. Em seguida, corte um pedaço de malha de mosquito pinheiro grande o suficiente para cobrir a moldura e coloque a malha nas tiras de laço autoadesivo, aparando qualquer material pendente conforme necessário.Quando a cápsula estiver pronta, contenha manualmente o coelho e raspe as regiões experimentais nas costas e nas laterais do animal. Aplique cola de látex não irritante de secagem rápida em toda a superfície da cápsula preparada e, após um minuto, pressione suavemente a cápsula para a pele. O passo mais crítico do protocolo é o acessório de campo da cápsula à pele.Portanto, é necessária pressão constante da cápsula sobre a pele do coelho especialmente nos cantos por pelo menos três minutos. Após três minutos, levante ligeiramente a cápsula para confirmar visualmente seu acessório usando uma espátula para aplicar cola em quaisquer partes não anexadas. Quando a cápsula estiver presa, aplique fita protetora nas patas traseiras para evitar danos na jaqueta e coloque as pernas dianteiras através das aberturas da jaqueta frontal apertando o pescoço da jaqueta para uma largura de dedo entre o animal e a jaqueta.Para iniciar a infestação do carrapato, adicione primeiro os carrapatos na extremidade do êmbolo de um plugue de algodão plástico à seringa com uma ponta de corte. Em seguida, levante a malha de um canto da cápsula e coloque a seringa profundamente na cápsula através da abertura. Insira o êmbolo até a seringa para infestar o animal com os carrapatos.Em seguida, torça lentamente o êmbolo em direção à pele para remover quaisquer carrapatos restantes enquanto simultaneamente puxa o êmbolo para fora da cápsula. Quando todos os carrapatos tiverem sido entregues, refasten o gancho e a fita de loop. Feche a jaqueta fechando a parte traseira e insira as pernas traseiras do coelho nos gabinetes elásticos traseiros.Então devolva o coelho para sua gaiola. No momento experimental apropriado, transfira o coelho para o banco e descompacte a jaqueta. Contenha suavemente o coelho, abra a cápsula e use fórceps para coletar os adultos totalmente engorgados e um twister de carrapato para coletar os adultos parcialmente alimentados.Larvas engorgadas e ninfas podem ser coletadas escovando-as no prato. Em seguida, feche novamente a cápsula se experimentalmente apropriado. No final do experimento, remova a malha do mosquito completamente da cápsula sem remover a jaqueta.Três a quatro semanas depois, corte suavemente um dos cantos para tentar remover a cápsula. Uma vez que a cápsula tenha sido removida, remova a jaqueta e permita que o coelho se recupere em sua gaiola. Se o protocolo e os experimentos permitirem, o coelho recuperado pode ser reutilizado ou oferecido para adoção.Este protocolo é adequado para vários tipos de experimentos, incluindo a criação em massa de vários grupos de carrapatos no mesmo hospedeiro. O sistema de cápsulas de espuma EVA tem sido provado ser altamente bem sucedido ao alimentar diferentes estágios de desenvolvimento de várias espécies de carrapatos duros. Também pode ser adaptado para outros tipos de hospedeiros de laboratório, como ovelhas.Além disso, este método versátil facilita a criação de uma variedade de diferentes configurações experimentais baseadas no número, forma e composição modificáveis das cápsulas no hospedeiro. O procedimento também permite uma recuperação completa dos hospedeiros coelho após os experimentos. Este protocolo não é trabalhoso e nenhum treinamento intensivo é necessário para se familiarizar com a técnica.Além disso, é necessária uma quantidade mínima de materiais, passos e estresse para os animais experimentais.

Research

JoVE Journal

Biology

Laser-Induced Chronic Ocular Hypertension Model on SD Rats

Laser-Induced Ocular Modelo Hipertensão crônica em ratos SD

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular ...

Biologia

Intranuclear Microinjection of DNA into Dissociated Adult Mammalian Neurons

Intranucleares microinjeção de DNA em Dissociated neurônios de mamíferos adultos

Primary neuronal cell cultures are valuable tools to study protein function since they represent a more biologically relevant system compared to ...

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

Estudos genéticos de proteínas de reparo do DNA Humano Utilizando Levedura como um sistema modelo

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

Medição e Análise de Produção de Ácido Extracelular determinar Glicosidases Classificação

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Técnicas para induzir e quantificar a senescência celular

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Intubação endotraqueal de coelhos utilizando um cateter guia de polipropileno

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

Um método versátil para a montagem de Arabidopsis deixa para Intravital imagem de lapso de tempo

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Análise de espectrometria de massa para identificar a ubiquização do CENP-A marcado pelo EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

Um modelo baseado em cápsulas para infestação de estágios de carrapato duro imaturo em ratos de laboratório

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

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Mantendo culturas laboratoriais de Gryllus bimaculatus, um modelo ortopéde versátil para agricultura de insetos e fisiologia de invertebrados

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...