Name: analyzing spatial learning and prosocial behavior in mice using the barnes maze and damsel-in-distress paradigms
Uploaded: 2018-11-17T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Spatial Learning and Prosocial Behavior in Mice Using the Barnes Maze and Damsel-in-Distress Paradigms at JoVE.com

Universidad de Hampden-Sydney damos reconocimiento y aprecio a Sean Walden, Zach Leitner, Hunter Lee y Anton Kheirani por su participación en las pruebas de los protocolos para el laberinto de Barnes y experimentos de la damisela en peligro. También nos gustaría agradecer a James Foster en el Randolph-Macon College por la construcción del laberinto de Barnes y del Departamento de Biología de Randolph-Macon College para proporcionar espacio de pruebas.

Todos los métodos aquí descritos fueron aprobados por el institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC) de Hampden-Sydney College o Universidad de Randolph-Macon (donde previamente se realizó un trabajo).
1. básicos de vivienda de los ratones
<ol><li>Casa de los ratones en jaulas con fondos sólidos y lados y una capa de ropa de cama suave y jerarquización material tales como trituración de papel. Utilizar ropa de cama se compone de mazorcas de maíz rallado o virutas de madera ...

<ol>
	<li>Sunyer, B., Patil, S., H&#246;ger, H., Lubec, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barnes+maze,+a+useful+task+to+assess+spatial+reference+memory+in+the+mice.">Barnes maze, a useful task to assess spatial reference memory in the mice.</a> Protocol Exchange. 2007, (2016).</li><li>Vorhees, V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Spatial+Learning+and+Memory+in+Rodents.">Assessing Spatial Learning and Memory in Rodents.</a> ILAR Journal. 55 (2), 310-332 (2014).</li><li>Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+deficits+associated+with+senescence:+A+neurophysiological+and+behavioral+study+in+the+rat.">Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat.</a> Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (1), 74-104 (1979).</li><li>Harrison, F. E., Hosseini, A. H., McDonald, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+anxiety+and+stress+responses+in+water+maze+and+Barnes+maze+spatial+memory+tasks.">Endogenous anxiety and stress responses in water maze and Barnes maze spatial memory tasks.</a> Behavioural Brain Research. 198 (1), 247-251 (2009).</li><li>Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. 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M., Heinricher, M. M., Ryabinin, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+transfer+of+pain+in+mice.">Social transfer of pain in mice.</a> Science Advances. 2 (10), e1600855 (2016).</li><li>Melia, K. R., Ryabinin, A. E., Schroeder, R., Bloom, F. E., Wilson, M. 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V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Types+and+functions+of+ultrasonic+vocalizations+in+laboratory+rats+and+mice.">Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 46 (1), 28-34 (2007).</li><li>Houl&#233;, K., Abdi, M., Clabough, E. B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ethanol+exposure+during+late+mouse+neurodevelopment+results+in+long+term+deficits+in+memory+retrieval,+but+not+in+social+responsiveness.">Acute ethanol exposure during late mouse neurodevelopment results in long term deficits in memory retrieval, but not in social responsiveness.</a> Brain and Behavior. , (2017).</li><li>Sales, G. D., Wilson, K. J., Spencer, K. E., Milligan, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+ultrasound+in+laboratories+and+animal+houses:+A+possible+cause+for+concern+in+the+welfare+and+use+of+laboratory+animals.">Environmental ultrasound in laboratories and animal houses: A possible cause for concern in the welfare and use of laboratory animals.</a> Laboratory Animals. 22, 369-375 (1988).</li><li>Crabbe, J. C., Walhsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+Interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: Interactions with laboratory environment.</a> Science. 248, 1670-1672 (1999).</li><li>Attar, A., Liu, T., Chan, W. T. C., Hayes, J., Nejad, M., Lei, K., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+shortened+Barnes+maze+protocol+reveals+memory+deficits+at+4-months+of+age+in+the+triple-transgenic+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">A shortened Barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> PloS One. 8 (11), (2013).</li><li>Inman-Wood, S. L., Williams, M. T., Morford, L. L., Vorhees, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prenatal+cocaine+on+Morris+and+Barnes+maze+tests+of+spatial+learning+and+memory+in+the+offspring+of+C57BL/6J+mice.">Effects of prenatal cocaine on Morris and Barnes maze tests of spatial learning and memory in the offspring of C57BL/6J mice.</a> Neurotoxicology and Teratology. 22 (4), 547-557 (2000).</li><li>Harrison, F. E., Reiserer, R. S., Tomarken, A. J., McDonald, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+nonspatial+escape+strategies+in+the+Barnes+maze.">Spatial and nonspatial escape strategies in the Barnes maze.</a> Learning and Memory. 13 (6), 809-819 (2006).</li><li>O'Leary, T. P., Savoie, V., Brown, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning,+memory+and+search+strategies+of+inbred+mouse+strains+with+different+visual+abilities+in+the+Barnes+maze.">Learning, memory and search strategies of inbred mouse strains with different visual abilities in the Barnes maze.</a> Behavioural Brain Research. 216 (2), 531-542 (2011).</li><li>Kaidanovich-Beilin, O., Lipina, T., Vukobradovic, I., Roder, J., Woodgett, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+social+interaction+behaviors.">Assessment of social interaction behaviors.</a> Journal of Visualized Experiments. 48, (2011).</li></ol>

El laberinto de Barnes y los experimentos de Damsel en señal de socorro son maneras baratos, rápidos y relativamente fáciles de evaluar el aprendizaje espacial, actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones. Otras ventajas incluyen la ausencia de factores estresantes manifiestos, el dolor o la restricción de alimento para el animal. Como la mayoría paradigmas de aprendizaje/memoria, una desventaja del laberinto de Barnes es el número de ensayos necesarios para que los animales aprender donde se encuentra el ...

El propósito de este protocolo es medir el aprendizaje espacial y memoria en ratones con el laberinto de Barnes como respuesta social y locomoción utilizando el paradigma de la damisela en peligro. Utilizan pruebas de aprendizaje y memoria espaciales para roedores incluyen el laberinto de brazo radial, que mide la capacidad de un ratón para encontrar comida oculta en uno de los brazos de un aparato multi-spoked, y el laberinto de agua de Morris, que coloca un ratón en una gran tina o piscina de agua y evalúa el tiempo que tarda para encontrar una plataforma oculta bajo el agua. Por lo general, entrenamiento para estos paradigmas abarca múltiples ensayos y permite la medición de ambas tasas de adquisición y retención a corto plazo y a largo plazo memoria ensayos de aprendizaje.
Aunque el laberinto de brazos radiales y laberinto acuático de Morris son maneras confiables para probar la memoria en roedores, presentan complicaciones para algunos investigadores. Ambos laberintos usan privación o fuertes estímulos aversivos como refuerzo1. El laberinto de brazos radiales utiliza la carencia de alimentos para asegurar que los roedores son adecuadamente motivados para encontrar una recompensa de comida. En el laberinto acuático de Morris, los efectos del estrés inducido por un baño forzado pueden alterar los resultados en los ratones2.
El laberinto de Barnes es una tarea de conciencia espacial alternativa que requiere de roedores aprender la posición de un agujero para escapar de la superficie brillante, abierto laberinto3. Débil estimulación aversiva (luz o sonido) se aplica para aumentar la probabilidad de que los ratones se escaparán de la plataforma. El laberinto de Barnes no requiere privación de alimentos, por lo que la cantidad de preparación animal es menos que en el laberinto radial del brazo. Puede ser utilizado sin conflicto por los investigadores que investigan conductas o moléculas asociadas con comer, regulación hormonal o vías hipotalámicas.
El laberinto de Barnes también tiene ventajas sobre el laberinto acuático de Morris. Es menos estresante que el laberinto de agua de Morris, causando niveles menos elevados de corticosterona en ratones4. Además, es mucho más simple de montar y requiere menos espacio durante el procedimiento de prueba y el almacenamiento.
El ensayo de Damsel en señal de socorro es un simple experimento de dos partes que puede evaluar actividad locomotor seguida de comportamiento prosocial. El ensayo de Damsel en señal de socorro está diseñado para evaluar comportamientos exploratorios y la sensibilidad social de un roedor macho en respuesta a un roedor hembra atrapado. Un método comúnmente utilizado para evaluar la sociabilidad (como preferencia por la novedad social) es el uso de test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley, que valora la libre elección de un ratón para pasar cerca o lejos de otros ratones5.
Similar al test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley, el ensayo de Damsel en señal de socorro también mide libre elección acerca de cómo pasar tiempo en la presencia de otro ratón, pero también proporciona mediciones de aspectos más profundos del funcionamiento social: 1) en el Ensayo de damisela en peligro, el ratón hembra atrapado se lleva a cabo en el centro de un campo abierto, así que aversión potencial del macho a campo abierto se enfrentó contra su unidad social explorar o investigar una angustiada mujer conespecíficos. 2) el modelo Damsel en señal de socorro también proporciona una manera de evaluar el comportamiento prosocial y empatía en respuesta al ratón atrapado, que no se ha explorado con frecuencia en los ratones.
Empatía animal es definitivamente observables y medibles, aunque no muchos paradigmas existen para este propósito. Por ejemplo, en ratas, un compañero de jaula atrapada puede inducir un estado de motivación prosocial, donde las ratas trabajará para liberar los animales atrapados. De hecho, las ratas decide ayudar al animal capturado incluso antes de abrir un recipiente similar que contenga un bocado de chocolate, luego accederás el chocolate y compartir con los recién liberados rata6.
Medidas de empatía en los ratones generalmente involucran infligir dolor; de hecho, ratones que observan a otros ratones en el dolor son más sensibles a sí mismos del dolor7,8. Sistema de seguridad para el estrés es un fenómeno caracterizado en roedores y ha sido acompañado de choque para examinar respuestas de estrés, como una medida de la empatía en ratones9,10.
Hay consideraciones éticas asociadas con dolor inducido o choque, por lo que se necesitan alternativas inductores de estrés. Hemos desarrollado el paradigma de la damisela en peligro como medida de comportamiento empático en la ausencia de dolor o tratamiento de shock. Los ratones atrapados en nuestro protocolo de Damsel en señal de socorro muestran signos manifiestos de angustia después de varios minutos como no son capaces de dar vuelta alrededor en el recipiente pequeño, sin embargo son ilesos mientras que proporciona una oportunidad para que otros ratones responder a su angustia.
Para comenzar la evaluación de la damisela en peligro, un ratón macho se coloca en una gran arena novela que contiene un pequeño cilindro central vacío. Se registran comportamientos exploratorios durante varios minutos, incluyendo cómo muchas secciones de la arena se cruzan y cuánto tiempo se gasta en el área abierta central. Este método proporciona una manera rápida y fácil para descartar déficit locomotor como un confounder potencial en una situación de aprendizaje que requiere movimiento coordinado para completar con éxito. También proporciona una medida básica de cuánto aversión a campo abierto del centro está presente. Ambas medidas podrían influir en rendimiento de laberinto de Barnes.
Tras la exploración inicial, el macho se retira de la arena y un ratón hembra se coloca en un cilindro transparente central cerrado, pequeño (similar al utilizado para recolección de sangre de los ratones). Luego, el ratón macho original es reintroducido en la arena, y conducta exploratoria se anotó otra vez. El paradigma de la damisela en peligro evalúa si un ratón está interesado en una interacción social basada en los cambios en los patrones de comportamiento cuando una mujer atrapada (marcados por el tiempo pasado en la Plaza del centro y el número de episodios de excavación) y si el ratón exhibe comportamiento prosocial hacia la mujer atrapada (marcada por la cantidad de cilindros investigaciones y eventos de contacto con la mujer atrapada). El ensayo de Damsel en señal de socorro puede ser usado para medir una propensión para la novedad social (similar al test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley) dependiendo de si los investigadores atrapan un ratón familiar o novedoso.
Juntos, el laberinto de Barnes y los experimentos de Damsel en señal de socorro permiten la evaluación precisa del ratón las capacidades de aprendizaje y capacidad de respuesta social en ausencia de estímulos extremadamente estresantes. Como con todos los ensayos conductuales, estos experimentos deben realizarse con una gran sensibilidad hacia la experiencia animal, reduciendo al mínimo el malestar experimentado por el animal.
Como la mayoría de los laberintos, diferencias en la actividad locomotriz pueden influir desempeño en el laberinto de Barnes, por lo que los investigadores también deberían evaluar actividad locomotriz, especialmente cuando se usa el laberinto de Barnes para evaluar el aprendizaje en ratones con mutaciones que pueden afectar el movimiento (tales como ésos encontrados en modelos de ratón de la enfermedad de Huntington, o los expuestos a las toxinas que pueden producir hiperactividad o retardar el movimiento, como el etanol). Además, las superficies de laberinto y la cámara deben ser limpiadas y ropa de cama cambiado entre cada animal para evitar la señal de olor confunde.
Lo importante, todos los materiales pueden ser fabricados en sitio con mínima inversión financiera y la pequeña huella física de estos ensayos significa que estos experimentos pueden reproducirse en casi cualquier entorno, permitiendo una gran flexibilidad. Este tipo de accesibilidad permite buena ciencia a realizarse en las instituciones más pequeñas con recursos limitados o en situaciones donde piloto datos deben recogerse rápidamente en ausencia de una ayuda sustancial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1391px;" width="1389">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Damsel-in-Distress</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:317px;"></td>
			<td style="width:731px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL conical tube</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:317px;">14-432-22</td>
			<td>Any brand of 50 mL conical tube will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber bands</td>
			<td>Sprano Brand</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Size 62, used to keep caps held to plywood</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">hammer</td>
			<td style="width:127px;">Grainger</td>
			<td style="width:317px;">6R252</td>
			<td>Any standard hammer will work</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">nail (size 8D)</td>
			<td style="width:127px;">Grainger</td>
			<td style="width:317px;">4NFE3</td>
			<td>Similarly-sized nails should work just as well</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">opaque, topless plastic box</td>
			<td style="width:127px;">AcmePlastics</td>
			<td style="width:317px;">CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025</td>
			<td>Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">video camera (smartphone)</td>
			<td style="width:127px;">N/A</td>
			<td style="width:317px;">N/A</td>
			<td>Any camera-equipped smartphone will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bite-resistant gloves</td>
			<td style="width:127px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:317px;">GLVDYN02</td>
			<td>Any brand offering appropriate protection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">transparency sheet</td>
			<td style="width:127px;">Staples</td>
			<td style="width:317px;">954145</td>
			<td>Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Barnes Maze</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri Dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353025</td>
			<td>Spray painted and used as covers for Barnes maze holes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plywood (3/4 in.)</td>
			<td>LP Building Products</td>
			<td>22487</td>
			<td>To contruct Barnes maze</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spray Paint</td>
			<td>Krylon</td>
			<td>1274937</td>
			<td>Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cup Hooks (5/8 in.)</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>5360615</td>
			<td>2 used on either side of ventral hole surfaces; rubberband wraps around hooks to hold cap flat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poster Board</td>
			<td>Creatology</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Used at edges of maze as extra cues</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Bulbs</td>
			<td>Phillips</td>
			<td>n/a</td>
			<td>100W light bulb, used to during the trials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber bands</td>
			<td>Sprano Brand</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Size 62, used to keep caps held to plywood</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ultrasonic noisemaker</td>
			<td style="width:127px;">Victor mini PestChaser</td>
			<td>M753SN</td>
			<td>Used as aversive stimuli</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing spatial learning and prosocial behavior in mice using the barnes maze and damsel-in-distress paradigms

El laberinto de Barnes es una medida confiable del aprendizaje espacial y la memoria que no requieren restricción de alimentos o la exposición a estímulos extremadamente estresantes. El laberinto de Barnes también puede evaluar otros comportamientos de ratón, como motivación general para escapar de la plataforma de laberinto y conducta exploratoria. El laberinto de Barnes puede medir Si una mutación genética o variable ambiental puede impactar la adquisición y retención de recuerdos espaciales, así como proporcionar información sobre la estrategia de búsqueda empleada por los ratones. Aquí utilizamos el laberinto de Barnes para detectar un déficit de memoria en ratones adultos después de un evento de exposición de etanol del desarrollo individual. El paradigma de damisela en peligro nuevamente descrito expone un ratón macho a un hembra ratón atrapado en una cámara en el campo abierto del centro de la arena. Proporciona una oportunidad para que el ratón para responder a la mujer atrapada socialmente y muestran un comportamiento prosocial. El paradigma del Damsel en señal de socorro puede utilizarse también para examinar el comportamiento del ratón en una novedosa actividad locomotor arena y medida. El laberinto de Barnes y los protocolos de Damsel en señal de socorro requieren mínima inversión financiera y aspectos más de las pruebas pueden construirse de fuentes comunes del laboratorio. Estas herramientas flexibles y accesibles pueden utilizarse también para detectar cambios de comportamiento a lo largo del desarrollo.

El laberinto de Barnes
Para ilustrar cómo se puede utilizar el laberinto de Barnes, investigamos si una sola exposición temprana de etanol causa una diferencia en el aprendizaje a lo largo del desarrollo del ratón. Ratones C57Bl6/J o fueron inyectadas con una solución de etanol de 2,5 g/kg (n = 8) o con solución fisiológica (n = 6) dos veces, dos horas, en el día postnatal 6. Entrenados los anima...

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Analyzing Spatial Learning and Prosocial Behavior in Mice Using the Barnes Maze and Damsel-in-Distress Paradigms

Analizar el aprendizaje espacial y el comportamiento Prosocial en los ratones con el laberinto de Barnes y paradigmas de la damisela en peligro

Este protocolo mide aprendizaje espacial y memoria con el laberinto de Barnes. Un nuevo paradigma de Damsel en señal de socorro se utiliza para evaluar la actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones.

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia conductual sobre si una mutación genética o una variable ambiental pueden afectar los comportamientos sociales o la adquisición y retención de recuerdos espaciales. Las principales ventajas de estas técnicas son que ambos estudios pueden construirse simplemente con una inversión financiera mínima y que ninguno de los dos protocolos requiere que los animales experimenten estímulos extremos o estresantes. El método Damisela en Apuros puede proporcionar información sobre los comportamientos pro-sociales del ratón, pero también se puede utilizar como medida de empatía en otros organismos modelo de mamíferos.Antes de comenzar el procedimiento de prueba de barnes Laberinto, limpie todos los componentes del laberinto con agua y 70%etanol. Cuando los componentes estén secos, ensamble el laberinto y asigne aleatoriamente cada ratón a un orificio de destino para utilizarlo durante todo el período de prueba. Los agujeros se pueden etiquetar de uno a 20 en la parte inferior del laberinto o en el exterior del perímetro del laberinto donde no son visibles desde dentro del laberinto.Para iniciar una prueba de entrenamiento, reemplace el disco de orificio asignado por una caja negra de 23 por 11 centímetros y utilice bandas de goma y ganchos para fijar firmemente la caja al laberinto. Luego, coloca un ratón en el centro del Laberinto de Barnes debajo de una taza y deja que el ratón se aclimate durante 30 segundos. Al final del período de aclimatación, comience la grabación de vídeo y encienda la luz y el fabricante de ruido ultrasónico.Levante la copa a través de un mecanismo de cuerda para evitar sesgar el rumbo inicial del animal e inicie un temporizador detrás de una cortina de observación. Realice un seguimiento de los movimientos del animal en un pedazo de papel con un diagrama del laberinto y utilice el diagrama para analizar las estrategias de búsqueda del ratón, así como para determinar el número de agujeros que se exploraron en el cuadrante frente al objetivo. Cuando el ratón entre en el orificio de destino, cubra el agujero con un aglutinante opaco pesado y apague el fabricante de ruido ultrasónico.Si el ratón no ha entrado en el objetivo después de cinco minutos, acorrala al animal en el orificio objetivo. A continuación, deje que el ratón permanezca en el cuadro de destino durante un minuto sin perturbar, asegurándose de apagar el ruido ultrasónico. Luego, devuelve al animal a su jaula.Cuando todos los ratones hayan sido probados, revise manualmente su grabación para realizar un seguimiento del movimiento general del ratón para determinar el número de agujeros incorrectos explorados antes y después de que se encuentre el objetivo, así como el número de agujeros desde el agujero de destino hasta el primer agujero explorado y cualquier comportamiento de limpieza notable. Para el comportamiento exploratorio Damsel en pruebas de socorro, coloque una cámara de tensión cerrada y vacía en el centro de una arena de empatía y comience a grabar con la cámara suspendida. Coloca suavemente un ratón macho debajo de una taza en la esquina inferior izquierda de la arena durante 30 segundos.A continuación, retire la copa a través de un mecanismo de cuerda y permita que el ratón explore durante 10 minutos teniendo cuidado de mantenerse fuera del campo de visión durante la grabación. Al final del período de exploración, mueva el ratón de la arena a una jaula de retención durante cinco minutos y deténgase y guarde la grabación. Para la capacidad de respuesta social Damsel en pruebas de socorro, sujeta suavemente manualmente un ratón hembra y baja el ratón en una cámara de retención.Cierre el extremo abierto de la cámara detrás del ratón y confirme que el ratón no puede dar la vuelta. Comience a grabar con la cámara suspendida y coloque la cámara de sujeción dentro en el centro de la arena. Deje que el animal se aclimate durante 10 minutos teniendo cuidado de permanecer fuera del campo de visión.Luego, transfiera el ratón macho de la zona de retención de nuevo a la arena de empatía durante 10 segundos y permita que el ratón masculino unos minutos adicionales para explorar la arena teniendo cuidado de permanecer fuera del campo de visión. Al final del período de exploración, detenga y guarde el archivo de vídeo y devuelva ambos ratones a sus jaulas. A continuación, reemplace la ropa de cama de maíz y desinfecte tanto la arena como la cámara de tensión con 70% de etanol.Para analizar los datos, abra el archivo de vídeo en el software de seguimiento adecuado y coloque una hoja transparente sobre la pantalla. Delinea el cuadrado de la arena con un marcador y divide el cuadrado de la arena en nueve compartimentos iguales. Revise los datos de vídeo durante los primeros cinco minutos de la medida exploratoria inicial registrando el número de compartimentos cruzados, el tiempo pasado en la plaza central de la arena, el número de episodios de excavación y aseo, y el número de veces que el ratón tocó la cámara de retención central vacía.Luego, revise los datos de video durante los cinco minutos de la medida de respuesta social inmediatamente después de que el macho sea reintroducido en la arena con la hembra atrapada registrando los mismos datos que para la medida exploratoria inicial, pero agregando el seguimiento del número de veces que el ratón macho tocó las naciones con el ratón hembra atrapado. Cuando los neonatos entrenados por Barnes Maze se ejecutan como adultos en un solo ensayo a largo plazo, los ratones inyectados de etanol tienen más dificultades para recordar dónde se encontraba el agujero objetivo que los animales de control inyectados con solución salina. Los ratones tratados con etanol también exploran significativamente más agujeros en el cuadrante opuesto del objetivo, lo que indica que no se puede recordar la ubicación espacial general correcta y utilizar un agujero secuencial para realizar búsquedas en forma de anillo hasta que se encuentre el agujero.En el modelo Damisela en apuros, los ratones más viejos cruzan más cuadrados que los ratones más jóvenes. Sin embargo, en presencia de una hembra atrapada, los ratones machos de ambas edades pasan menos tiempo explorando la arena. Los machos juveniles pasan más tiempo cavando durante su tiempo en la arena en presencia de un ratón hembra atrapado que cuando están solos sugiriendo ansiedad o comportamiento pro-social hacia la hembra atrapada.Por el contrario, los ratones machos tocan el tubo que contiene a la hembra atrapada e inician el contacto femenino atrapado significativamente más frecuentemente como adultos que como juveniles. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener las condiciones constantes entre y dentro de los ensayos para asegurarse de que las variables ambientales no confunden los resultados del estudio. Después del uso inicial de estos ensayos conductuales, los mismos animales pueden ser reexterados en varios momentos durante el desarrollo para responder preguntas sobre la memoria a largo plazo y posibles cambios en los comportamientos sociales.

Research

JoVE Journal

Behavior

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

Contextuales y complementada el condicionamiento del miedo de prueba utilizando un sistema de análisis de vídeo en ratones

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Investigación

Comportamiento

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice

El uso del campo Maze abierto para medir el comportamiento locomotor y la ansiedad-como en ratones

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of ...

The Double-H Maze: A Robust Behavioral Test for Learning and Memory in Rodents

El Doble-H Maze: Una prueba del comportamiento robusto para el Aprendizaje y la Memoria en roedores

Spatial cognition research in rodents typically employs the use of maze tasks, whose attributes vary from one maze to the next. These tasks vary by their ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

Coloque y Aprendizaje de respuesta en el Abierto de campo Torre Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

Prueba de reconocimiento de objeto novedoso para la investigación del aprendizaje y la memoria en ratones

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

Assessing Spatial Memory Impairment in a Mouse Model of Traumatic Brain Injury Using a Radial Water Tread Maze

Evaluación del deterioro de la memoria espacial en un modelo de ratón de lesión cerebral traumática utilizando un laberinto radial

Despite the recent increase in use of mouse models in scientific research, researchers continue to use cognitive tasks that were originally designed and ...

The (Spatial) Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

The Spatial Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

El juego de memoria (espacial): Prueba de la relación entre el lenguaje espacial, objeto de conocimiento y cognición espacial

The memory game paradigm is a behavioral procedure to explore the relationship between language, spatial memory, and object knowledge. Using two different ...

A Behavioral Assay for Investigating the Role of Spatial Memory During Instinctive Defense in Mice

Un ensayo conductual para investigar el papel de la memoria espacial durante defensa instintiva en ratones

Evolution has selected a repertoire of defensive behaviors that are essential for survival across all animal species. These behaviors are often ...

Paradigms of Lower Extremity Electrical Stimulation Training After Spinal Cord Injury

Paradigmas de formación de estimulación eléctrica de la extremidad inferior después de lesión de la médula espinal

Skeletal muscle atrophy, increased adiposity and reduced physical activity are key changes observed after spinal cord injury (SCI) and are associated with ...