Name: functional evaluation of olfactory pathways in living xenopus tadpoles
Uploaded: 2018-12-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles at JoVE.com

यह काम El Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था; SAF2015-63568-R) द्वारा cofunded यूरोपीय क्षेत्रीय विकास निधि (ERDF), एम. जी. एफ. Fuortes मेमोरियल फैलोशिप, स्टीफन डब्ल्यू Kuffler फैलोशिप कोष, लौरा और आर्थर Colwin संपंन ग्रीष्मकालीन अनुसंधान फैलोशिप कोष से प्रतिस्पर्धी अनुसंधान पुरस्कार द्वारा , Fischbach फैलोशिप, और समुद्री जैविक प्रयोगशाला और राष्ट्रीय Xenopus संसाधन RRID के महान पीढ़ी निधि: SCR_013731 (वुड्स होल, MA) जहां इस काम के एक हिस्से का आयोजन किया गया था । हम भी CERCA कार्यक्रम/Generalitat de Catalunya संस्थागत सहायता के लिए धंयवाद । अल एक सेरा Húnter येता.

सभी प्रक्रियाओं पशु अनुसंधान नैतिकता समिति द्वारा बार्सिलोना के विश्वविद्यालय में अनुमोदित किया गया ।
नोट: x. tropicalis और x. laevis tadpoles मानक विधियों के अनुसार13,14का प?...

<ol>
	<li>Hellsten, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+of+the+Western+clawed+frog+Xenopus+tropicalis.">The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis.</a> Science. 328 (5978), 633-636 (2010).</li><li>Session, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+evolution+in+the+allotetraploid+frog+Xenopus+laevis.">Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis.</a> Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).</li><li>Zhang, L. I., Tao, H. W., Holt, C. E., Harris, W. A., Poo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+window+for+cooperation+and+competition+among+developing+retinotectal+synapses.">A critical window for cooperation and competition among developing retinotectal synapses.</a> Nature. 395 (6697), 37-44 (1998).</li><li>Li, J., Erisir, A., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+time-lapse+imaging+and+serial+section+electron+microscopy+reveal+developmental+synaptic+rearrangements.">In vivo time-lapse imaging and serial section electron microscopy reveal developmental synaptic rearrangements.</a> Neuron. 69 (2), 273-286 (2011).</li><li>Dietrich, H., Glasauer, S., Straka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Organization+of+Vestibulo-Ocular+Responses+in+Abducens+Motoneurons.">Functional Organization of Vestibulo-Ocular Responses in Abducens Motoneurons.</a> Journal of Neuroscience. 37 (15), 4032-4045 (2017).</li><li>Buhl, E., Roberts, A., Soffe, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+a+trigeminal+sensory+nucleus+in+the+initiation+of+locomotion.">The role of a trigeminal sensory nucleus in the initiation of locomotion.</a> Journal of Physiology. 590, 2453-2469 (2012).</li><li>Junek, S., Kludt, E., Wolf, F., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+coding+with+patterns+of+response+latencies.">Olfactory coding with patterns of response latencies.</a> Neuron. 67 (5), 872-884 (2010).</li><li>Stout, R. P., Graziadei, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+the+olfactory+placode+on+the+development+of+the+brain+in+Xenopus+laevis+(Daudin).+I.+Axonal+growth+and+connections+of+the+transplanted+olfactory+placode.">Influence of the olfactory placode on the development of the brain in Xenopus laevis (Daudin). I. Axonal growth and connections of the transplanted olfactory placode.</a> Neuroscience. 5 (12), 2175-2186 (1980).</li><li>Yoshino, J., Tochinai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+regeneration+of+the+olfactory+bulb+requires+reconnection+to+the+olfactory+nerve+in+Xenopus+larvae.">Functional regeneration of the olfactory bulb requires reconnection to the olfactory nerve in Xenopus larvae.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 48 (1), 15-24 (2006).</li><li>Terni, B., Pacciolla, P., Masanas, H., Gorostiza, P., Llobet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+temporal+coupling+between+synaptic+rewiring+of+olfactory+glomeruli+and+the+emergence+of+odor-guided+behavior+in+Xenopus+tadpoles.">Tight temporal coupling between synaptic rewiring of olfactory glomeruli and the emergence of odor-guided behavior in Xenopus tadpoles.</a> Journal of Comparative Neurology. 525 (17), 3769-3783 (2017).</li><li>Goda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+screens+for+mutations+affecting+development+of+Xenopus+tropicalis.">Genetic screens for mutations affecting development of Xenopus tropicalis.</a> PLOS Genetics. 2 (6), 91 (2006).</li><li>Nakayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+efficient+CRISPR/Cas9-mediated+targeted+mutagenesis+in+Xenopus+tropicalis.">Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.</a> Genesis. 51 (12), 835-843 (2013).</li><li>Jafkins, A., Abu-Daya, A., Noble, A., Zimmerman, L. B., Guille, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Husbandry+of+Xenopus+tropicalis.">Husbandry of Xenopus tropicalis.</a> Methods in Molecular Biology. 917, 17-31 (2012).</li><li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Early Development of Xenopus laevis. A Laboratory manual. , (2000).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal table of Xenopus laevis (Daudin). A systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis. , (1956).</li><li>Xu, H., Dude, C. M., Baker, C. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+the+genetic+toolkit+in+Xenopus:+Approaches+and+opportunities+for+human+disease+modeling.">Expanding the genetic toolkit in Xenopus: Approaches and opportunities for human disease modeling.</a> Developmental Biology. 426 (2), 325-335 (2017).</li><li>Pratt, K. G., Khakhalin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+neurodevelopmental+disorders+in+the+Xenopus+tadpole:+from+mechanisms+to+therapeutic+targets.">Modeling human neurodevelopmental disorders in the Xenopus tadpole: from mechanisms to therapeutic targets.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (5), 1057-1065 (2013).</li><li>Truszkowski, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+mental+retardation+protein+knockdown+in+the+developing+Xenopus+tadpole+optic+tectum+results+in+enhanced+feedforward+inhibition+and+behavioral+deficits.">Fragile X mental retardation protein knockdown in the developing Xenopus tadpole optic tectum results in enhanced feedforward inhibition and behavioral deficits.</a> Neural Development. 11 (1), 14 (2016).</li><li>Hassenkl&#246;ver, T., Manzini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+wiring+logic+in+amphibians+challenges+the+basic+assumptions+of+the+unbranched+axon+concept.">Olfactory wiring logic in amphibians challenges the basic assumptions of the unbranched axon concept.</a> Journal of Neuroscience. 33 (44), 17247-17252 (2013).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo.">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29 (3), 583-591 (2001).</li><li>Sild, M., Van Horn, M. R., Schohl, A., Jia, D., Ruthazer, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Activity-Dependent+Regulation+of+Radial+Glial+Filopodial+Motility+Is+Mediated+by+Glial+cGMP-Dependent+Protein+Kinase+1+and+Contributes+to+Synapse+Maturation+in+the+Developing+Visual+System.">Neural Activity-Dependent Regulation of Radial Glial Filopodial Motility Is Mediated by Glial cGMP-Dependent Protein Kinase 1 and Contributes to Synapse Maturation in the Developing Visual System.</a> Journal of Neuroscience. 36 (19), 5279-5288 (2016).</li><li>McDiarmid, R., Altig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tadpoles: The biology of anuran larvae. , 149-169 (1999).</li><li>Heerema, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+molecular+analyses+of+olfaction-mediated+avoidance+responses+of+Rana+(Lithobates)+catesbeiana+tadpoles:+Sensitivity+to+thyroid+hormones,+estrogen,+and+treated+municipal+wastewater+effluent.">Behavioral and molecular analyses of olfaction-mediated avoidance responses of Rana (Lithobates) catesbeiana tadpoles: Sensitivity to thyroid hormones, estrogen, and treated municipal wastewater effluent.</a> Hormones and Behavior. 101, 85-93 (2018).</li><li>Gaudin, A., Gascuel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+atlas+describing+the+ontogenic+evolution+of+the+primary+olfactory+projections+in+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis.">3D atlas describing the ontogenic evolution of the primary olfactory projections in the olfactory bulb of Xenopus laevis.</a> Journal of Comparative Neurology. 489 (4), 403-424 (2005).</li><li>Scheidweiler, U., Nezlin, L., Rabba, J., M&#252;ller, B., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slice+culture+of+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis+tadpoles.">Slice culture of the olfactory bulb of Xenopus laevis tadpoles.</a> Chemical Senses. 26 (4), 399-407 (2001).</li><li>Manzini, I., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classes+and+narrowing+selectivity+of+olfactory+receptor+neurons+of+Xenopus+laevis+tadpoles.">Classes and narrowing selectivity of olfactory receptor neurons of Xenopus laevis tadpoles.</a> Journal of General Physiology. 123 (2), 99-107 (2004).</li><li>Kludt, E., Okom, C., Brinkmann, A., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+temperature+with+odor+processing+in+the+olfactory+bulb.">Integrating temperature with odor processing in the olfactory bulb.</a> Journal of Neuroscience. 35 (20), 7892-7902 (2015).</li></ol>

यह कागज तकनीकों कि रहने वाले Xenopus tadpoles में घ्राण रास्ते की कार्यक्षमता की जांच करने के लिए उपयोगी है वर्णन करता है । वर्तमान प्रोटोकॉल उन प्रयोगशालाओं के लिए विशेष रूप से उपयोगी है जो काम करते हैं, या X...

Xenopus tadpoles तंत्रिका तंत्र के सामांय समारोह का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट पशु मॉडल का गठन । पारदर्शिता, एक पूरी तरह से अनुक्रम जीनोम1,2, और शल्य चिकित्सा के लिए पहुंच, electrophysiological और इमेजिंग तकनीक Xenopus लार्वा के अद्वितीय गुण है कि vivo 3 में ंयूरॉन कार्यों की जांच की अनुमति . इस पशु मॉडल की कई प्रयोगात्मक संभावनाओं में से कुछ टैडपोल संवेदी और मोटर सिस्टम4,5,6पर प्रदर्शन पूरी तरह से अध्ययन से सचित्र हैं । synapses के स्तर पर सूचना संसाधन के कई पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एक विशेष रूप से अच्छी तरह से अनुकूल न्यूरॉन सर्किट Xenopus टैडपोल घ्राण प्रणाली7है. सबसे पहले, अपनी synaptic कनेक्टिविटी अच्छी तरह से परिभाषित किया गया है: घ्राण बल्ब के लिए घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स (ORNs) परियोजना और synaptic के dendrites के साथ mitral संपर्क स्थापित/glomeruli के भीतर के लिए गंध नक्शे उत्पन्न दूसरे, इसके ORNs लगातार8घ्राण रास्ते की कार्यक्षमता बनाए रखने के लिए जीवन भर neurogenesis द्वारा उत्पंन कर रहे हैं । और तीसरे, क्योंकि घ्राण प्रणाली एक महान अपक्षयी क्षमता से पता चलता है, Xenopus tadpoles9पृथक के बाद अपने घ्राण बल्ब पूरी तरह से सुधार करने में सक्षम हैं ।
इस पत्र में, हम दृष्टिकोण है कि व्यवहार प्रयोगों के साथ tadpoles रहने में घ्राण glomeruli के इमेजिंग गठबंधन का वर्णन करने के लिए घ्राण रास्ते की कार्यक्षमता का अध्ययन । यहां विस्तृत तरीकों घ्राण तंत्रिका transection10के बाद घ्राण बल्ब में glomerular कनेक्टिविटी के कार्यात्मक वसूली अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया । Xenopus tadpoles में प्राप्त डेटा रीढ़ के प्रतिनिधि के बाद से घ्राण प्रसंस्करण है विकासवादी संरक्षित है ।
वर्णित विधियाँ x. tropicalis का उपयोग कर उदाहरण हैं, लेकिन वे आसानी से xमें कार्यान्वित किया जा सकता है । laevis। वयस्क एक्स laevisके बड़े आकार के बावजूद, दोनों प्रजातियों टैडपोल चरणों के दौरान उल्लेखनीय समान हैं । मुख्य अंतर जीनोमिक स्तर पर रहते हैं । X. laevis ज्यादातर अपने allotetraploid जीनोम और लंबी पीढ़ी के समय (लगभग 1 वर्ष) द्वारा निर्धारित गरीब आनुवंशिक पथ, प्रदर्शित करता है । इसके विपरीत, एक्स tropicalis अधिक आनुवंशिक अपनी छोटी पीढ़ी के समय (5-8 महीने) और द्विगुणित जीनोम के कारण संशोधनों के लिए उत्तरदाई है । प्रतिनिधि प्रयोग जंगली प्रकार के जानवरों और तीन अलग ट्रांसजेनिक लाइनों के लिए सचित्र हैं: Hb9: GFP (x. tropicalis), एनबीटी: GFP (एक्स.tropicalis) और tubb2: GFP (एक्स. laevis) ।
मौजूदा काम में उल्लिखित के तरीके आनुवंशिक Xenopus क्षेत्र में प्रगति के साथ विचार किया जाना चाहिए । सादगी और प्रस्तुत तकनीक के आसान कार्यांवयन उंहें पहले से ही वर्णित मूल्यांकन के लिए विशेष रूप से उपयोगी बनाता है11म्यूटेंट, साथ ही साथ Xenopus CRISPR-Cas9 प्रौद्योगिकी12द्वारा उत्पंन लाइनें । हम भी एक शल्य घ्राण नसों कि किसी भी Xenopus tadpoles के लिए उपयोग कर प्रयोगशाला में लागू किया जा सकता है transect के लिए इस्तेमाल की प्रक्रिया का वर्णन । presynaptic कैल्शियम प्रतिक्रियाओं और घ्राण निर्देशित व्यवहार के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया दृष्टिकोण विशिष्ट उपकरण की आवश्यकता है, हालांकि एक उदारवादी कीमत पर उपलब्ध है । के तरीके एक साधारण रूप में प्रस्तुत कर रहे है अनुसंधान समूहों में उनके उपयोग को बढ़ावा देने और अधिक जटिल परख के आधार या तो सुधार लागू करने या अंय तकनीकों, यानी, ऊतकवैज्ञानिक या आनुवंशिक दृष्टिकोण से संघ द्वारा निर्धारित सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1133px;" width="1132">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:335px;">Salts for aquariums (Instant Ocean Salt)</td>
			<td style="width:359px;">Tecniplast</td>
			<td style="width:143px;">XPSIO25R</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tweezers #5 (tip 0.025 x 0.005 mm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vannas Scissors (tip 0.015 x 0.015)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Whatman qualitative filter paper</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>WH3030917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X. laevis tubb2-GFP</td>
			<td>National Xenopus Resource (NXR), RRID:SCR_013731</td>
			<td>NXR_0.0035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X.tropicalis NBT-GFP</td>
			<td>European Xenopus Resource Center (EXRC) RRID:SCR_007164</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellTracker CM-DiI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C-7001</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Calcium Green dextran, Potassium Salt, 10,000 MW, Anionic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C-3713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate capillaries for microinjection</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-75-10</td>
			<td>O.D.=1.0 mm., I.D.=0.75 mm.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microinjector</td>
			<td>Parker Instruments</td>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sylgard-184</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>761028-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microfil micropipettes</td>
			<td style="width:359px;">World Precision Instruments</td>
			<td>MF28G-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Upright microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>AxioImager-A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Master-8 stimulator</td>
			<td>A.M.P.I.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CCD Camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>Image EM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Solenoid valves</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>VC-6 Six Channel system</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>636082B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tubocurarine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCD Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>MRC-5 Camera</td>
			<td>Controlled by Zen software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">camera lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MVL8ML3</td>
			<td>There are multiple possibilities that should be adapted to the camera model used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epoxy resin</td>
			<td>RS Components</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Manifold</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>MP-6 perfusion manifold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator for local delivery of solutions</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MN-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini magnetic clamps</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>MAG-7, MAG-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0755</td>
			<td>O.D.=1.57 mm., I.D.=1.14 mm.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional evaluation of olfactory pathways in living xenopus tadpoles

Xenopus tadpoles तंत्रिका तंत्र के समारोह की जांच करने के लिए एक अनूठा मंच प्रदान करते हैं । वे कई इमेजिंग दृष्टिकोण, electrophysiological तकनीक और व्यवहार परख के लिए पहुंच के रूप में कई प्रयोगात्मक लाभ, प्रदान करते हैं । Xenopus टैडपोल घ्राण प्रणाली विशेष रूप से अच्छी तरह से सामांय विकास के दौरान स्थापित synapses के समारोह की जांच या चोट के बाद सुधार के लिए अनुकूल है । यहां, हम Xenopus लार्वा रहने में घ्राण जानकारी के प्रसंस्करण का मूल्यांकन करने के तरीके का वर्णन करते हैं । हम घ्राण के साथ घ्राण बल्ब के glomeruli में presynaptic कैल्शियम प्रतिक्रियाओं के vivo माप में का एक संयोजन रूपरेखा-निर्देशित व्यवहार परख । तरीकों घ्राण नसों के transection के साथ synaptic कनेक्टिविटी के rewiring का अध्ययन करने के लिए जोड़ा जा सकता है । प्रयोगों दोनों जंगली प्रकार और आनुवंशिक रूप से संशोधित केंद्रीय तंत्रिका तंत्र कोशिकाओं में GFP पत्रकारों को व्यक्त पशुओं का उपयोग कर प्रस्तुत कर रहे हैं । आनुवंशिक रूप से संशोधित tadpoles के लिए वर्णित दृष्टिकोण के आवेदन आणविक आधार है कि हड्डीवाला व्यवहार को परिभाषित करने के लिए उपयोगी हो सकता है ।

इस पत्र में, हम vivo में प्रदर्शन करने के लिए दो पूरक दृष्टिकोण का एक संयोजन वर्तमान Xenopus टैडपोल घ्राण प्रणाली की कार्यक्षमता का अध्ययन: i) इमेजिंग presynaptic Ca के लिए एक विधि2 + जीने के glomeruli में ...

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Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

लिविंग Xenopus Tadpoles में घ्राण मार्ग का कार्यात्मक मूल्यांकन

Xenopus tadpoles vivo में नर्वस सिस् टम के फंक्शन की जांच के लिए एक अनोखा प् लेटफॉर्म पेश करते हैं । हम सामान्य पालन स्थितियों में या चोट के बाद रहने वाले Xenopus लार्वा में घ्राण जानकारी के प्रसंस्करण का मूल्यांकन करने के तरीके का वर्णन करते हैं ।

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

यह विधि न्यूरोबायोलॉजी क्षेत्रों में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने के लिए उपयोगी हो सकती है जैसे कि वीवो में प्रेसिनैप्टिक टर्मिनल कैसे कार्य करते हैं। तकनीकों के इस सेट का मुख्य लाभ यह है कि हम पशु मॉडल के रूप में ज़ेनोपस टैडपोल का उपयोग करके घ्राण रास्तों के कार्य को गधे करने के लिए मानार्थ दृष्टिकोण दिखाते हैं। इस प्रक्रिया का प्रदर्शन अपने आप को, Beatrice Terni, और पाओलो Pacciolla होगा ।0.02% MS2 22 संवेदनाहारी समाधान में सेल्यूलोज गुणात्मक फिल्टर पेपर के दो टुकड़ों को गीला करके ट्रांसेक्शन प्रक्रिया शुरू करें, और उन्हें विच्छेदन दायरे में रखें। फिर टैंक से एक टैडपोल चुनें और इसे संवेदनाहारी समाधान के पकवान में विसर्जित करें। टैडपोल को दो से चार मिनट के भीतर तैराकी बंद कर नी चाहिए।चिमटी का उपयोग कर पूंछ के स्तर पर लागू यांत्रिक उत्तेजनाओं की प्रतिक्रिया के अभाव में उचित एनेस्थेटाइजेशन की जांच करें। एनेस्थेटाइज्ड टैडपोल को स्कोप के तहत फिल्टर पेपर पर रखें। ऊपर की ओर अपने पृष्ठीय पक्ष के साथ जानवर की स्थिति तो मस्तिष्क संरचनाओं कल्पना किया जा सकता है ।व्यवहार प्रयोगों के लिए, घ्राण बल्ब तक पहुंचने वाली सभी गंध जानकारी को दबाने के लिए दोनों नसों को पार करने के लिए वेनी कैंची का उपयोग करें। कैल्शियम ग्रीन वन डेक्सट्रिन समाधान के दो माइक्रोलीटर के साथ एक पोल्ड ग्लास पिपेट लोड करें, और इसे माइक्रोइंजेक्टर में रखें। फिल्टर पेपर पर विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे एक एनेस्थेटाइज्ड टैडपोल रखें, फिर पिपेट की नोक को नाक कैप्सूल के प्रमुख गुहा में ले जाएं, और डाई के 0.15 से 0.3 माइक्रोलीटर वितरित करें।टैडपोल को दो से तीन मिनट के लिए जगह में छोड़ दें। एक पाश्चर पिपेट का उपयोग करना, सुखाने से बचने के लिए जानवर के अधिक कोडल भागों पर 0.02% MS2 22 समाधान ड्रिप करें। पशु को रिकवरी टैंक में स्थानांतरित करें जहां टैडपोल को 10 मिनट के भीतर सामान्य तैराकी ठीक करनी चाहिए।इंजेक्शन के बाद दिन में घ्राण बल्ब की ग्लोमरुलर परत के स्तर पर फ्लोरोसेंस का निरीक्षण करें। पहले घ्राण बल्ब के ऊपर त्वचा को हटाकर इमेजिंग के लिए एक एनेस्थेटाइज्ड टैडपोल तैयार करें। घ्राण बल्ब के स्तर पर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के किनारे पर टैडपोल की त्वचा पर पार्श्व चीरा बनाने के लिए वेनी कैंची का उपयोग करें।टेक्टम में कट का विस्तार करने से बचें, जिसे ऑप्टिक तंत्रिका के स्थान से आसानी से पहचाना जा सकता है। एक पाश्चर पिपेट का उपयोग करके 0.02% एमएस2 22 समाधान की बूंदों को लागू करके जानवर को नम रखें फिर चिमटी का उपयोग करके कट त्वचा को चुटकी लें और इसे तंत्रिका तंत्र पर खींचें। घ्राण बल्ब के ऊपर मेलानोसाइट्स की अनुपस्थिति से सफल निष्कासन को सत्यापित करें।टैडपोल को सेल गार्ड लेपित डिश के कुएं में रखें। पूंछ के अंत तक टेक्टम के शीर्ष को कवर करने के लिए उच्च वैक्यूम तेल के साथ लेपित ग्लास कवर स्लिप रखें। सुनिश्चित करें कि घ्राण बल्ब और प्लाकोड बाह्य माध्यम के संपर्क में रहें।मांसपेशियों के संकुचन को रोकने के लिए 100 माइक्रोमोलर ट्यूबोक्यूरिन युक्त ज़ेनोपस रिंगर के समाधान के साथ पिट्री डिश भरें। एक ईमानदार माइक्रोस्कोप के नीचे टैडपोल पकड़े पकवान रखें। ज़ेनोपस रिंगर के समाधान के निरंतर प्रचुरता के लिए पॉलीथीन ट्यूबिंग का उपयोग करके डिश के साथ ज़ेनोपस रिंगर के समाधान वाले जलाशय को जोड़ें।Xenopus रिंगर के समाधान को परफ्यूस करना शुरू करें। पूरे प्रयोग में लगातार डिश में समाधान के स्तर को बनाए रखें। लगातार वाहिकाओं के माध्यम से रक्त परिसंचरण देख कर टैडपोल व्यवहार्यता का मूल्यांकन करें।टैडपोल की कल्पना करने के लिए कम आवर्धन उद्देश्य का उपयोग करके लाइव इमेजिंग शुरू करें। एक नाक कैप्सूल के शीर्ष पर गंध समाधान देने के लिए केशिका रखने के लिए माइक्रोमैनिपलेटर अक्ष को स्थानांतरित करें, जो घ्राण तंत्रिका के साथ 90 डिग्री कोण बनाते हैं। नाक कैप्सूल के लिए ipsilaterally स्थित घ्राण बल्ब का पता लगाएं।लंबी कार्य दूरी के साथ उच्च आवर्धन जल उद्देश्य पर स्विच करें। I.Glomerular संरचनाओं द्वारा फ्लोरेसेंस उत्सर्जन की जांच स्पष्ट होना चाहिए। एक ऊंचा जलाशय में ताजा अमीनो एसिड समाधान के 20 मिलीलीटर पाइपिंग द्वारा शुरू करें।फिर अपने आवास टैंक से छह खाद्य वंचित टैडपोल लें, और उन्हें गंध के संपर्क को कम करने के लिए दो लीटर साफ टैडपोल पानी में रखें। एक सफेद एलईडी ट्रांसिलुमिनेटर पर एक संशोधित छह अच्छी तरह से पकवान रखें। प्रत्येक अच्छी तरह से टैडपोल पानी के 10 मिलीलीटर के साथ भरें।एक टैडपोल को अच्छी तरह से रखें, फिर कम से कम तीन मिनट के लिए आराम करने के लिए छोड़ दें। छवि अधिग्रहण शुरू करें और ऐसी फिल्में प्राप्त करें जिनमें बेसल, उत्तेजना और वसूली अवधि शामिल हैं। अमीनो एसिड के समाधान को वितरित करने वाले नोजल की दिशा में एक आंदोलन के रूप में एक आकर्षक प्रतिक्रिया का पता लगाया जा सकता है।इमेजिंग के बाद अपने टैंक में जानवरों को वापस करें। 35 मिलीमीटर या पिक्सल में समकक्ष आकार द्वारा 35 मिलीमीटर के क्षेत्र के भीतर टैडपोल हेड पोजीशन पर नज़र रखने से घ्राण-निर्देशित व्यवहार का मात्रात्मक विश्लेषण होता है। बिंदीदार रेखा गंध समाधान इनलेट के लिए समीपस्थ क्षेत्र का प्रतिनिधित्व करता है।टैडपोल आंदोलनों के व्यक्तिगत भूखंडों का निर्माण छवि विश्लेषण द्वारा प्राप्त एक्स वाई निर्देशांक का उपयोग करके किया जाता है। निकाले गए गतिशीलता भूखंडों को ईमानदारी से वीडियो छवियों को पुन: पेश करना चाहिए। समाधान प्रवेश पर केंद्रित 8.75 मिलीमीटर त्रिज्या के हित का क्षेत्र गंध स्रोत के लिए जानवरों की निकटता को वर्गीकृत करने के लिए उपयोग किया जाता है।गंध के नोजल के आसपास बिताया गया अधिक समय सकारात्मक ट्रोपिज्म को इंगित करता है। परिभाषित अवधियों के दौरान नोजल के पास टैडपोल द्वारा बिताया गया समय, उदाहरण के लिए, 15 सेकंड के अंतराल, अमीनो एसिड समाधानों का पता लगाने की क्षमता की पहचान की अनुमति देता है। टैडपोल की आबादी का समग्र व्यवहार व्यक्तिगत डेटा के वितरण की साजिश रचकर प्राप्त किया जा सकता है।एक मिलीमोलर या 160 माइक्रोमोलर पर अमीनो एसिड सॉल्यूशन तैयार होने पर पॉजिटिव ट्रॉपिज्म का पता लगाया जा सकता है। जानवर पानी के आवेदन का जवाब नहीं देते हैं। इस प्रक्रिया के बाद, हिस्टोलॉजिकल तकनीक या इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी जैसे अन्य तरीकों को चोट के बाद सिनैप्टिक गुणों के परिवर्तन जैसे अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है।इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने न्यूरोबायोलॉजी के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए ज़ेनोपस टैडपोल में घ्राण जानकारी के प्रसंस्करण का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

क्षुधावर्धक साहचर्य में घ्राण सीखने<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

बहु इकाई रिकॉर्डिंग Locust में तंत्रिका गतिविधि विशेषताएँ तरीके (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) घ्राण सर्किट

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

परिधीय तंत्रिका चोट के बाद कार्यात्मक वसूली का मूल्यांकन करने के लिए घ्राण ensheathing कोशिकाओं के प्रत्यारोपण

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

बरकरार vomeronasal अंग और गौण घ्राण बल्ब की पूर्व vivo तैयारी

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Functional Evaluation of Biological Neurotoxins in Networked Cultures of Stem Cell-derived Central Nervous System Neurons

स्टेम नेटवर्क संस्कृतियों में जैविक neurotoxins के कार्यात्मक मूल्यांकन केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र न्यूरॉन्स सेल व्युत्पन्न

Therapeutic and mechanistic studies of the presynaptically targeted clostridial neurotoxins (CNTs) have been limited by the need for a scalable, ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

बरकरार neuroepithelium में माउस घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के छिद्रित पैच दबाना रिकॉर्डिंग: एक की पहचान odorant रिसेप्टर व्यक्त न्यूरॉन्स की कार्यात्मक विश्लेषण

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

समकालिक<em&gt; पूर्व vivo</emदो Retinas की&gt; कार्यात्मक परीक्षण से<em&gt; Vivo</em&gt; Electroretinogram सिस्टम

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

की घ्राण बल्ब में कैल्शियम परिवर्तन की निगरानी के माध्यम से रिकॉर्डिंग तापमान प्रेरित neuronal गतिविधि<em&gt; Xenopus laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

घ्राण सीखने और चूहों में भेदभाव का एक उद्देश्य और Reproducible परीक्षण

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

तैयारी और पूरे सेल पैच दबाना के लिए प्रोटोकॉल Xenopus laevis Tectal ंयूरॉंस की रिकॉर्डिंग

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...