Name: functional evaluation of olfactory pathways in living xenopus tadpoles
Uploaded: 2018-12-11T13:00:00
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이 작품은 엘 정부의 드 Economía y Competitividad (MINECO;에서 교부 금에 의해 지원 되었다 SAF2015-63568-R)에 의해는 유럽 지역 개발 기금 (ERDF), M. G. F. Fuortes 기념 친교, 스티븐 W. Kuffler 친교 기금로 라와 아서 Colwin 부여 여름 연구 친교 기금에서 경쟁력 있는 연구 수상에 의해 cofunded Fischbach 친교 및 해양 생물학 연구소는 국가 Xenopus 리소스 RRID:SCR_013731 (나무 구멍, MA)이이 작품의 일부 실시 했다의 위대한 세대 기금. 우리는 또한 검색 프로그램 감사 / Generalitat 드 Catalunya 제도적 지원에 대 한. 앨 러 배 마 세라 Húnter 연구원 이다입니다.

모든 절차는 바르셀로나의 대학에서 동물 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다.
참고: X. tropicalis 및 X. laevis tadpoles 표준 방법13,14따라 reared 있습니다. 올챙이 물 물 역삼 여 상업 소금 ( 재료의 표참조)를 추가 하 여 준비가 되어 있습니다. 전도도 µS ∼700 및 ∼1, X. tropicalis 및 X. laevis</...

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	<li>Hellsten, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+of+the+Western+clawed+frog+Xenopus+tropicalis.">The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis.</a> Science. 328 (5978), 633-636 (2010).</li><li>Session, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+evolution+in+the+allotetraploid+frog+Xenopus+laevis.">Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis.</a> Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).</li><li>Zhang, L. I., Tao, H. W., Holt, C. E., Harris, W. A., Poo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+window+for+cooperation+and+competition+among+developing+retinotectal+synapses.">A critical window for cooperation and competition among developing retinotectal synapses.</a> Nature. 395 (6697), 37-44 (1998).</li><li>Li, J., Erisir, A., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+time-lapse+imaging+and+serial+section+electron+microscopy+reveal+developmental+synaptic+rearrangements.">In vivo time-lapse imaging and serial section electron microscopy reveal developmental synaptic rearrangements.</a> Neuron. 69 (2), 273-286 (2011).</li><li>Dietrich, H., Glasauer, S., Straka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Organization+of+Vestibulo-Ocular+Responses+in+Abducens+Motoneurons.">Functional Organization of Vestibulo-Ocular Responses in Abducens Motoneurons.</a> Journal of Neuroscience. 37 (15), 4032-4045 (2017).</li><li>Buhl, E., Roberts, A., Soffe, S. 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B., Guille, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Husbandry+of+Xenopus+tropicalis.">Husbandry of Xenopus tropicalis.</a> Methods in Molecular Biology. 917, 17-31 (2012).</li><li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Early Development of Xenopus laevis. A Laboratory manual. , (2000).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal table of Xenopus laevis (Daudin). A systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis. , (1956).</li><li>Xu, H., Dude, C. M., Baker, C. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+mental+retardation+protein+knockdown+in+the+developing+Xenopus+tadpole+optic+tectum+results+in+enhanced+feedforward+inhibition+and+behavioral+deficits.">Fragile X mental retardation protein knockdown in the developing Xenopus tadpole optic tectum results in enhanced feedforward inhibition and behavioral deficits.</a> Neural Development. 11 (1), 14 (2016).</li><li>Hassenkl&#246;ver, T., Manzini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+wiring+logic+in+amphibians+challenges+the+basic+assumptions+of+the+unbranched+axon+concept.">Olfactory wiring logic in amphibians challenges the basic assumptions of the unbranched axon concept.</a> Journal of Neuroscience. 33 (44), 17247-17252 (2013).</li><li>Haas, K., Sin, W. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Activity-Dependent+Regulation+of+Radial+Glial+Filopodial+Motility+Is+Mediated+by+Glial+cGMP-Dependent+Protein+Kinase+1+and+Contributes+to+Synapse+Maturation+in+the+Developing+Visual+System.">Neural Activity-Dependent Regulation of Radial Glial Filopodial Motility Is Mediated by Glial cGMP-Dependent Protein Kinase 1 and Contributes to Synapse Maturation in the Developing Visual System.</a> Journal of Neuroscience. 36 (19), 5279-5288 (2016).</li><li>McDiarmid, R., Altig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tadpoles: The biology of anuran larvae. , 149-169 (1999).</li><li>Heerema, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+molecular+analyses+of+olfaction-mediated+avoidance+responses+of+Rana+(Lithobates)+catesbeiana+tadpoles:+Sensitivity+to+thyroid+hormones,+estrogen,+and+treated+municipal+wastewater+effluent.">Behavioral and molecular analyses of olfaction-mediated avoidance responses of Rana (Lithobates) catesbeiana tadpoles: Sensitivity to thyroid hormones, estrogen, and treated municipal wastewater effluent.</a> Hormones and Behavior. 101, 85-93 (2018).</li><li>Gaudin, A., Gascuel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+atlas+describing+the+ontogenic+evolution+of+the+primary+olfactory+projections+in+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis.">3D atlas describing the ontogenic evolution of the primary olfactory projections in the olfactory bulb of Xenopus laevis.</a> Journal of Comparative Neurology. 489 (4), 403-424 (2005).</li><li>Scheidweiler, U., Nezlin, L., Rabba, J., M&#252;ller, B., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slice+culture+of+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis+tadpoles.">Slice culture of the olfactory bulb of Xenopus laevis tadpoles.</a> Chemical Senses. 26 (4), 399-407 (2001).</li><li>Manzini, I., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classes+and+narrowing+selectivity+of+olfactory+receptor+neurons+of+Xenopus+laevis+tadpoles.">Classes and narrowing selectivity of olfactory receptor neurons of Xenopus laevis tadpoles.</a> Journal of General Physiology. 123 (2), 99-107 (2004).</li><li>Kludt, E., Okom, C., Brinkmann, A., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+temperature+with+odor+processing+in+the+olfactory+bulb.">Integrating temperature with odor processing in the olfactory bulb.</a> Journal of Neuroscience. 35 (20), 7892-7902 (2015).</li></ol>

이 문서에 설명 합니다 생활에서 후 각 통로의 기능을 조사 하기 위해 유용한 기술 Xenopus tadpoles. 현재 프로토콜을 작동, 또는 Xenopus;에 접근이 그 실험실에 대 한 특히 유용 그러나, 그것은 또한 신경 재생 및 수리의 세포질과 분자 기초를 공부 하 고 그 연구에 대 한 흥미로운입니다. Xenopus 에서 얻은 결과 보존된 메커니즘을 식별 하기 위해 다른 척추 동물 모델에서 수집한 데이...

Xenopus tadpoles 신경 시스템의 정상적인 기능을 공부 하는 우수한 동물 모델을 구성 합니다. 투명성, 완전히 시퀀스 게놈1,2, 그리고 수술, electrophysiological 및 이미징 기법에 대 한 접근은 신경 기능 vivo에서3 조사 허용 Xenopus 애벌레의 독특한 속성 . 이 동물 모델의 여러 실험 가능성의 일부 올챙이 감각 및 모터 시스템4,,56에 수행 하는 철저 한 연구에 의해 설명 됩니다. 정보 처리 시 냅 스 수준에서의 여러 측면을 연구 하는 특히 적합된 신경 회로 Xenopus 올챙이 후 각 시스템7입니다. 첫째, 그것의 시 냅 스 연결은 잘 정의 된: 후 각 수용 체 신경 (ORNs) 후 각 전구에 프로젝트 및 냄새 지도 생성 하기 위해 glomeruli 내의 셀 mitral/술의 dendrites와 시 냅 스 연락처 설정. 둘째, 그것의 ORNs 후 각 경로8의 기능을 유지 하기 위해 전 생애에 걸쳐 신생에 의해 지속적으로 생성 됩니다. 그리고 셋째, 때문에 후 각 시스템 훌륭한 재생 능력을 보여줍니다, Xenopus tadpoles 수 있습니다 완전히 절제9후 그들의 후 각 전구를 개혁.
이 논문에서 우리 생활 tadpoles에 후 각 glomeruli의 이미징 행동 실험 연구 후 각 통로의 기능을 결합 하는 방법을 설명 합니다. 여기서 설명 하는 방법은 후 각 신경 transection10후 후 각 전구에 사 연결의 기능 회복을 공부 하 사용 되었다. Xenopus tadpoles에서 얻은 데이터는 척추 동물의 진화 후 각 처리 이므로 보존.
X. tropicalis 를 사용 하 여 설명 하는 방법 exemplified 하지만 그들은 X에서 쉽게 구현할 수 있습니다. laevis. 성인 X. laevis의 더 큰 크기에도 불구 하 고 두 종의 올챙이 단계 동안 현저 하 게 유사 하다. 주요 차이점은 게놈 수준에서 상주합니다. X. laevis allotetraploid 게놈 및 긴 생성 시간 (약 1 년)에 의해 주로 결정 가난한 유전자 추적성을 표시 합니다. 반대로, tropicalis 엑스는 더 짧은 생성 시간 (5-8 개월)와 2 중 게놈 유전자 수정 의무가. 대표적인 실험 동물 야생-타입 및 3 개의 다른 유전자 변형 라인에 대 한 설명 된다: Hb9:GFP (X. tropicalis), NBT:GFP (X. tropicalis) 및 tubb2:GFP (X. laevis).
현재 작업에 설명 된 방법론 Xenopus 필드에 유전 진행 함께 고려 되어야 한다. 단순 하 고 쉬운 구현 기술 제시의 그들이 이미 설명된 돌연변이11, CRISPR-Cas9 기술12에 의해 생성 된 Xenopus 라인 평가 하는 데 특히 유용 합니다. 우리는 또한 수술 Xenopus tadpoles에 액세스할 모든 실험실에서 구현할 수 있는 후 각 신경 transect를 사용을 설명 합니다. 연 접 칼슘 응답을 평가 하는 데 사용 하는 접근 하 고 후 각 기반 동작 임에도 불구 하 고 적절 한 비용에 사용할 수 있는 특정 장비를 요구. 방법론 연구 그룹에서 그들의 사용을 촉진 하는 간단한 형태로 제시 하 고 개선을 구현 하거나 다른 기술, 즉, 조직학 또는 유전 접근에 협회에 의해 더 복잡 한 분석의 기초를 설정할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1133px;" width="1132">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:335px;">Salts for aquariums (Instant Ocean Salt)</td>
			<td style="width:359px;">Tecniplast</td>
			<td style="width:143px;">XPSIO25R</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tweezers #5 (tip 0.025 x 0.005 mm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vannas Scissors (tip 0.015 x 0.015)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Whatman qualitative filter paper</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>WH3030917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X. laevis tubb2-GFP</td>
			<td>National Xenopus Resource (NXR), RRID:SCR_013731</td>
			<td>NXR_0.0035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">X.tropicalis NBT-GFP</td>
			<td>European Xenopus Resource Center (EXRC) RRID:SCR_007164</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CellTracker CM-DiI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C-7001</td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Calcium Green dextran, Potassium Salt, 10,000 MW, Anionic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C-3713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Borosilicate capillaries for microinjection</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-75-10</td>
			<td>O.D.=1.0 mm., I.D.=0.75 mm.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microinjector</td>
			<td>Parker Instruments</td>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sylgard-184</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>761028-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microfil micropipettes</td>
			<td style="width:359px;">World Precision Instruments</td>
			<td>MF28G-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Upright microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>AxioImager-A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Master-8 stimulator</td>
			<td>A.M.P.I.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CCD Camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>Image EM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Solenoid valves</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>VC-6 Six Channel system</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>636082B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tubocurarine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCD Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>MRC-5 Camera</td>
			<td>Controlled by Zen software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">camera lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MVL8ML3</td>
			<td>There are multiple possibilities that should be adapted to the camera model used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epoxy resin</td>
			<td>RS Components</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Manifold</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>MP-6 perfusion manifold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator for local delivery of solutions</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MN-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini magnetic clamps</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>MAG-7, MAG-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0755</td>
			<td>O.D.=1.57 mm., I.D.=1.14 mm.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional evaluation of olfactory pathways in living xenopus tadpoles

Xenopus tadpoles 신경 시스템의 기능을 조사 하기 위해 독특한 플랫폼을 제공 합니다. 그들은 수많은 이미징 접근, electrophysiological 기법과 행동 분석에 대 한 접근 등 여러 실험 장점을 제공합니다. Xenopus 올챙이 후 각 시스템은 정상적인 개발 동안 또는 부상 후 개혁 시 냅 스의 기능을 조사 하는 특히 적합 합니다. 여기, 우리 생활에서 후 각 정보 처리를 평가 하는 방법론을 설명 Xenopus 애벌레. 우리는 후 각 기반 동작 분석으로 후 각 전구의 glomeruli에 연 접 칼슘 반응의 vivo에서 측량의 조합 개요. 메서드 후 각 신경 시 냅 스 연결의 rewiring 공부 transection 결합 될 수 있다. 실험은 중앙 신 경계 세포에서 GFP 기자 표현 야생-타입 및 유전자 변형 동물을 사용 하 여 표시 됩니다. 유전자 변형된 tadpoles를 설명 하는 방식의 응용 분자 기초 척추 동작을 정의 하는 분열에 대 한 유용할 수 있습니다.

이 문서에서는 Xenopus 올챙이 후 각 시스템의 기능 vivo에서 연구를 수행 하기 위해 두 가지 보완 방법의 조합 소개: 나) 생활의 glomeruli 이미징 연 접 캘리포니아2 + 하는 방법 변경 tadpoles는 형광 칼슘 표시기, 및 ii를 사용 하 여) 냄새 유도 행동 분석 결과 특정 waterborne odorants에 대 한 응답을 조사 하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 접근 부상<sup class="xre...

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Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

생활 Xenopus Tadpoles에 후 각 통로의 기능 평가

Xenopus tadpoles vivo에서 신경 시스템의 기능을 조사 하기 위해 독특한 플랫폼을 제공 합니다. 우리 생활에서 후 각 정보 처리를 평가 하는 방법론을 설명 Xenopus 애벌레 정상적인 양육 조건에서 또는 부상 후.

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

이 방법은 사전 시냅스 말단이 생체 내에서 어떻게 작동하는지와 같은 신경 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 유용할 수 있습니다. 이 기술 세트의 주요 장점은 제노푸스 올챙이를 동물 모델로 사용하여 후각 경로의 기능을 어설프게 하는 무료 접근 법을 보여 준다는 것입니다. 이 절차를 시연하는 것은 나 자신, 베아트리체 테르니, 파올로 파치올라가 될 것입니다.0.02%MS2 22 마취용액에 셀룰로오스 질적 필터 용지 2개를 적시고 해부 범위 아래에 배치하여 담부 절차를 시작합니다. 그런 다음 탱크에서 올챙이를 선택하고 마취 용액 접시에 담가 두세요. 올챙이는 2~4분 이내에 수영을 중단해야 합니다.핀셋을 사용하여 꼬리 수준에 적용되는 기계적 자극에 대한 반응이 없기 때문에 적절한 마취를 확인하십시오. 마취된 올챙이를 필터 용지에 범위 아래에 놓습니다. 뇌 구조를 시각화할 수 있도록 등쪽면을 위쪽으로 향하여 동물을 배치합니다.행동 실험의 경우 베니 가위를 사용하여 두 신경을 모두 분리하여 후각 전구에 도착하는 모든 악취 정보를 억제하십시오. 칼슘 녹색 1 개의 덱스트린 용액의 두 마이크로 리터로 폴드 유리 파이펫을적재하고 마이크로 인젝터에 넣습니다. 필터 용지에 해부 현미경 아래에 마취 된 올챙이를 놓고 파이펫 끝을 비강 캡슐의 주요 캐비티로 이동하고 염료의 0.15 내지 0.3 마이크로 리터를 전달합니다.올챙이를 2~3분 동안 제자리에 두십시오. 파스퇴르 파이펫을 사용하여 0.02%MS2 22 용액을 건조를 피하기 위해 동물의 더 많은 코들 부분에 드립하십시오. 올챙이가 10 분 이내에 정상적인 수영을 회복해야하는 복구 탱크로 동물을 옮길 수 있습니다.주사 후 날에 후각 전구의 구체 층 의 수준에서 꽃집을 관찰하십시오. 먼저 후각 전구 위의 피부를 제거하여 이미징을 위해 마취 된 올챙이를 준비합니다. 베니 가위를 사용하여 후각 전구 의 수준에서 중추 신경계의 가장자리에 올챙이의 피부에 측면 절개를합니다.시신경의 위치에 의해 쉽게 식별 될 수있는 텍텀으로 절단을 연장하지 마십시오. 파스퇴르 파이펫을 사용하여 0.02%MS2 22 용액을 떨어 뜨린 다음 핀셋을 사용하여 절단 된 피부를 꼬집어 신경계 위로 당겨 동물을 촉촉하게 유지하십시오. 후각 전구 위에 멜라닌세포의 부재에 의해 성공적인 제거를 확인합니다.올챙이를 셀 가드 코팅 접시의 우물에 넣습니다. 높은 진공 그리스로 코팅된 유리 커버 슬립을 배치하여 텍텀의 상단을 꼬리 끝까지 덮습니다. 후각 전구와 플라코드가 세포 외 배지에 노출되어 있는지 확인합니다.제노푸스 링거용으로 피트리 접시를 100마이크로몰러 튜보쿠라린이 함유하여 근육 수축을 방지합니다. 올챙이를 들고 있는 접시를 직립 현미경 아래에 놓습니다. 제노푸스 링거용이 들어 있는 저수지와 폴리에틸렌 튜빙을 사용하여 제노푸스 링거 용액을 지속적으로 풍부히게 합니다.제노푸스 링거의 솔루션을 퍼퓨처스로 시작하십시오. 실험 전반에 걸쳐 접시상수에 있는 용액의 수준을 유지한다. 혈관을 통한 혈액 순환을 관찰하여 올챙이 생존 가능성을 지속적으로 평가합니다.올챙이를 시각화하기 위해 낮은 배율 목표를 사용하여 라이브 이미징을 시작합니다. 미세 조작기 축을 이동하여 모세관을 하나의 비강 캡슐 위에 전달하여 후각 신경으로 90도 각도를 형성합니다. 비강 캡슐에 ipsilaterally 위치한 후각 전구를 찾습니다.장거리 작업 거리의 고배율 수분 목표로 전환합니다. I.구체 구조에 의한 꽃 방출을 확인하십시오. 먼저 신선한 아미노산 용액 20 밀리리터를 높은 저수지로 파이프로 넣습니다.그런 다음 주택 탱크에서 6 개의 음식 박탈 된 올챙이를 가져 와서 냄새에 노출되는 것을 최소화하기 위해 깨끗한 올챙이 물 두 리터에 넣습니다. 수정된 6개의 웰 디쉬를 흰색 LED 트랜일루미노이터에 놓습니다. 올챙이 물 10밀리리터로 각 우물을 채웁니다.올챙이 1개를 잘 놓고 적어도 3분 동안 그대로 둡니다. 이미지 수집을 시작하고 기초, 자극 및 복구 기간이 포함된 영화를 습득합니다. 매력적인 반응은 아미노산의 용액을 전달하는 노즐을 향한 움직임으로 검출될 수 있다.이미징 후 동물을 탱크로 돌려보내보시면 됩니다. 35mm x 35밀리미터 의 영역 내의 올챙이 헤드 위치를 추적하거나 픽셀의 크기와 동등한 크기를 추적하면 후각 유도 동작을 정량적 분석할 수 있습니다. 점선은 악취 용액 입구에 대한 근접 영역을 나타낸다.올챙이 움직임의 개별 플롯은 이미지 분석에 의해 얻은 X Y 좌표를 사용하여 구성됩니다. 추출된 운동성 플롯은 비디오 이미지를 충실하게 재현해야 합니다. 용액 입구를 중심으로 8.75 밀리미터 반경의 관심 영역은 냄새 공급원에 동물의 근접성을 분류하는 데 사용된다.냄새의 노즐 부근에서 더 많은 시간을 보내는 것은 긍정적 인 트로피주의를 나타냅니다. 정의된 기간 동안 노즐 근처의 올챙이에 소요되는 시간(예: 15초 간격)은 아미노산 용액을 검출할 수 있는 능력을 식별할 수 있습니다. 올챙이 집단의 전체 적인 동작은 개별 데이터의 분포를 플로팅하여 얻을 수 있습니다.아미노산 용액이 1 밀리머 또는 160 마이크로몰러에서 제조될 때 양성 열대성액을 검출할 수 있다. 동물은 물 응용 프로그램에 응답하지 않습니다. 이 절차에 따라, 조직학 기술 또는 전기 생리학과 같은 다른 방법은 부상 후 시냅스 특성의 변경과 같은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다.개발 후, 이 기술은 신경 생물학 분야의 연구원들이 제노푸스 올챙이의 후각 정보의 처리를 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

연구

신경과학

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

메뚜기에 신경 활동을 특성화하기 위해 다중 단위 기록 방법 (<em&gt; Schistocerca 아메리카나</em&gt;) 강한 회로

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

본래 Vomeronasal 기관 및 액세서리 후각 망울의 생체 준비

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Functional Evaluation of Biological Neurotoxins in Networked Cultures of Stem Cell-derived Central Nervous System Neurons

줄기의 네트워크 문화 생물 신경 독소의 기능 평가 중추 신경계 신경 세포가 유래

Therapeutic and mechanistic studies of the presynaptically targeted clostridial neurotoxins (CNTs) have been limited by the need for a scalable, ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

본래 Neuroepithelium에서 마우스 강한 감각 뉴런의 천공 패치 클램프 녹음 : 확인 된 부 취제 수용체를 발현 뉴런의 기능 분석

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

의 후각 망울에서 칼슘의 변경 사항을 모니터링을 통해 온도에 의한 신경 세포의 활동을 기록<em&gt; Xenopus의의 laevis의</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

준비 및 Xenopus laevis Tectal 신경의 전체 셀 패치 클램프 기록에 대 한 프로토콜

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...