Name: quantitative cell biology of neurodegeneration in drosophila through unbiased analysis of fluorescently tagged proteins using imagej
Uploaded: 2018-08-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ at JoVE.com

Este trabalho é apoiado pela Sheila e David Fuente neuropática dor programa de pós-graduação bolsa de pesquisa (para J.M.B.), a Lois Pope LIFE Fellows programa (de C.L., Y.Z. e J.M.B.), o Snyder-Robinson Foundation Fellowship Predoctoral (para CL), o Dr. John T . MacDonald Foundation (CL), contratos, subvenções de institutos nacionais de saúde (NIH) HHSN268201300038C, R21GM119018 e R56NS095893 (para R.G.Z.) e pelo projeto de estudioso de Taishan (província de Shandong, República Popular da China) (para R.G.Z.).

1. considerações e preparações para projetar o experimento de análise de imagem
<ol><li>Predeterminar celular anatômico, adequado ou subcellular marcadores para servir como pontos de referência para a padronização de uma região de interesse (ROI) em amostras diferentes, por exemplo 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), marcadores de membrana, fluorescentes localizadas proteína, etc.
</li>
	<li>Selecione um marcador fluorescente que pode delimitar a partitura discreta, além de níveis de plano de f...

<ol>
	<li>Erkkinen, M. G., Kim, M. -. O., Geschwind, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Neurology+and+Epidemiology+of+the+Major+Neurodegenerative+Diseases.">Clinical Neurology and Epidemiology of the Major Neurodegenerative Diseases.</a> Cold Spring Harbor perspectives in biology. , a033118 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 671 (2012).</li><li>Mauvezin, C., Ayala, C., Braden, C. R., Kim, J., Neufeld, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+to+monitor+autophagy+in+Drosophila.">Assays to monitor autophagy in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 134-139 (2014).</li><li>Weiss, K. R., Kimura, Y., Lee, W. -. C. M., Littleton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntingtin+aggregation+kinetics+and+their+pathological+role+in+a+Drosophila+Huntington's+disease+model.">Huntingtin aggregation kinetics and their pathological role in a Drosophila Huntington's disease model.</a> Genetics. 190 (2), 581-600 (2012).</li><li>Babcock, D. T., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcellular+spreading+of+huntingtin+aggregates+in+the+Drosophila+brain.">Transcellular spreading of huntingtin aggregates in the Drosophila brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (39), E5427-E5433 (2015).</li><li>DeVorkin, L., Gorski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+autophagy+in+Drosophila+using+fluorescent+reporters+in+the+UAS-GAL4+system.">Monitoring autophagy in Drosophila using fluorescent reporters in the UAS-GAL4 system.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (9), (2014).</li><li>Williamson, W. R., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+developing+and+adult+Drosophila+brains+and+retinae+for+live+imaging.">Preparation of developing and adult Drosophila brains and retinae for live imaging.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (37), (2010).</li><li>Sweeney, S. T., Hidalgo, A., de Belle, J. S., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+adult+Drosophila+brains.">Dissection of adult Drosophila brains.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2011).</li><li>Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde+fixation.">Formaldehyde fixation.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 33 (8), 845-853 (1985).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+for+Drosophila+neural+development.">Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development.</a> Trends in neurosciences. 24 (5), 251-254 (2001).</li><li>Fischbach, K. -. F., Dittrich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+optic+lobe+of+Drosophila+melanogaster.+I.+A+Golgi+analysis+of+wild-type+structure.">The optic lobe of Drosophila melanogaster. I. A Golgi analysis of wild-type structure.</a> Cell and tissue research. 258 (3), 441-475 (1989).</li><li>Ruan, K., Zhu, Y., Li, C., Brazill, J. M., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+splicing+of+Drosophila+Nmnat+functions+as+a+switch+to+enhance+neuroprotection+under+stress.">Alternative splicing of Drosophila Nmnat functions as a switch to enhance neuroprotection under stress.</a> Nature Communications. 6, 10057 (2015).</li><li>Zhai, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAD+synthase+NMNAT+acts+as+a+chaperone+to+protect+against+neurodegeneration.">NAD synthase NMNAT acts as a chaperone to protect against neurodegeneration.</a> Nature. 452 (7189), 887 (2008).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spermine+synthase+deficiency+causes+lysosomal+dysfunction+and+oxidative+stress+in+models+of+Snyder-Robinson+syndrome.">Spermine synthase deficiency causes lysosomal dysfunction and oxidative stress in models of Snyder-Robinson syndrome.</a> Nat Commun. 8 (1), 1257 (2017).</li><li>Prokop, A., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+structure+of+synaptic+contacts+in+Drosophila.">Development and structure of synaptic contacts in Drosophila.</a> Semin Cell Dev Biol. 17 (1), 20-30 (2006).</li><li>Maday, S., Holzbaur, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagosome+biogenesis+in+primary+neurons+follows+an+ordered+and+spatially+regulated+pathway.">Autophagosome biogenesis in primary neurons follows an ordered and spatially regulated pathway.</a> Dev Cell. 30 (1), 71-85 (2014).</li><li>Mizushima, N., Yamamoto, A., Matsui, M., Yoshimori, T., Ohsumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+autophagy+in+response+to+nutrient+starvation+using+transgenic+mice+expressing+a+fluorescent+autophagosome+marker.">In vivo analysis of autophagy in response to nutrient starvation using transgenic mice expressing a fluorescent autophagosome marker.</a> Molecular biology of the cell. 15 (3), 1101-1111 (2004).</li><li>Lee, S., Sato, Y., Nixon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+lysosomal+dysfunction+causes+cargo-specific+deficits+of+axonal+transport+leading+to+Alzheimer-like+neuritic+dystrophy.">Primary lysosomal dysfunction causes cargo-specific deficits of axonal transport leading to Alzheimer-like neuritic dystrophy.</a> Autophagy. 7 (12), 1562-1563 (2011).</li><li>Vincent, L., Soille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Watersheds+in+digital+spaces:+an+efficient+algorithm+based+on+immersion+simulations.">Watersheds in digital spaces: an efficient algorithm based on immersion simulations.</a> IEEE Transactions on Pattern Analysis &amp; Machine Intelligence. (6), 583-598 (1991).</li><li>Najman, L., Schmitt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geodesic+saliency+of+watershed+contours+and+hierarchical+segmentation.">Geodesic saliency of watershed contours and hierarchical segmentation.</a> IEEE Transactions on pattern analysis and machine intelligence. 18 (12), 1163-1173 (1996).</li><li>Shiber, A., Breuer, W., Ravid, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+quantification+and+characterization+of+intracellular+protein+aggregates+in+yeast.">Flow cytometric quantification and characterization of intracellular protein aggregates in yeast.</a> Prion. 8 (3), 276-284 (2014).</li><li>Mizushima, N., Yoshimori, T., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+mammalian+autophagy+research.">Methods in mammalian autophagy research.</a> Cell. 140 (3), 313-326 (2010).</li></ol>

O protocolo descrito aqui pode ser usado de forma robusta e reproducibly dosar processos biológicos de célula visualizados pela geração de imagens baseada em fluorescência. Contexto biológico e limitações técnicas precisam ser cuidadosamente considerados para guiar o projeto experimental. Marcadores fluorescentes de estruturas subcelulares de interesse, se imuno-histoquímica, à base de corantes, ou geneticamente expressa, precisa ser distinguíveis acima fundo pela morfologia e intensidade. O sistema UAS/G...

Doenças neurodegenerativas afectam milhões de pessoas a cada ano e a incidência está aumentando com uma população de envelhecimento1. Enquanto cada doença neurodegenerativa tem uma única etiologia, agregação de misfolded proteínas e desagregação da rede proteostasis são comuns características patológicas muitas destas doenças. Elucidar como interrupção destes processos fundamentais e inter-relacionados dá errado contribuir para a morte neuronal de disfunção e célula é fundamental para o entendimento das doenças neurodegenerativas, bem como orientar intervenções terapêuticas. Geração de imagens baseada em fluorescência permite a investigação destes processos complexos e dinâmicos em neurônios e contribuiu enormemente para a nossa compreensão da biologia celular neuronal. Análise de proteínas fluorescente etiquetadas é um desafio, especialmente quando são realizados experimentos na vivo, devido à heterogeneidade morfológica, tipos de diversas células e tecidos altamente compactos. Quantificação manualmente assistida é acessível e simples, mas muitas vezes é demorado e sujeito a viés humano. Portanto, há uma necessidade de abordagens imparciais, reprodutíveis e acessíveis para extrair dados quantificáveis de estudos de imagem.
Nós esboçamos um fluxo de trabalho simples e adaptável usando Fiji/ImageJ, uma software de2,3, de processamento de imagem poderosa e livremente acessível para extrair dados quantitativos de estudos de imagiologia de fluorescência em modelos experimentais de Neurodegeneração utilizando drosófila. Seguindo este protocolo para quantificar a agregação da proteína e fluxo autophagic — duas células características biológicas que são altamente relevantes para a patologia de doenças neurodegenerativas — temos demonstrado a sensibilidade e a reprodutibilidade desta abordagem. Análise de proteínas fluorescente etiquetado huntingtina mutante (Htt) no lobo óptico Drosophila revelou o número, tamanho e intensidade de agregados de proteínas. Nós visualizado um repórter fluorescentes em tandem de autophagic fluxo dentro do sistema visual de Drosophila , que exibe sinais de emissão diferentes dependendo do ambiente compartimental4. Análise baseada em Ratiometric do repórter em tandem permitiu uma visão quantitativa e abrangente de fluxo de autofagia-lisossoma do autophagosome de formação, maturação e transporte para a degradação do lisossomo e adicionalmente destacou vulneráveis compartimentos interrompidos em condições neurodegenerativas. Importante, em ambas as análises implementamos limiarização semi-automático e passos de segmentação em nosso protocolo para minimizar o preconceito inconsciente, aumentar o poder de amostragem e fornecer um padrão para facilitar comparações entre estudos semelhantes. O fluxo de trabalho simples destina-se a fazer poderosos plugins de Fiji/ImageJ (desenvolvido por cientistas de computador baseados em algoritmos matemáticos) mais acessível a neurobiologia isto e a comunidade de Ciências da vida em geral.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1102">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">SYLGARD(R) 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td style="width:164px;">Dow Corning Corporation</td>
			<td style="width:243px;">PF184250</td>
			<td style="width:349px;">Dissection dish</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">Falcon 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td style="width:243px;">351008</td>
			<td style="width:349px;">Dissection dish</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Dumont #5 Forceps</td>
			<td style="width:164px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:243px;">11251-20</td>
			<td style="width:349px;">Dissection tool</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">S3014</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Sodium Phosphate Dibasic&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">S5136</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">P5655</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Triton&#160;X-100</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">T9284</td>
			<td style="width:349px;">Washing and antibody incubaton solution.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">37% Formaldehyde</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">10790-710</td>
			<td style="width:349px;">Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Disposable Microcentrifuge Tubes (0.5mL, blue)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">89000-022</td>
			<td style="width:349px;">Fixation, washing, and antibody incubaton.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Plain and Frosted Micro Slides (25&#215;75mm)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">48312-004</td>
			<td style="width:349px;">Slides for confocal imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Micro Cover Glasses, rectangular (22&#215;40mm)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">48393-172</td>
			<td style="width:349px;">Slides for confocal imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Rubber Cement</td>
			<td style="width:164px;">Slime</td>
			<td style="width:243px;">1051-A</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td style="width:164px;">Vector Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:243px;">H-1000</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Scotch Magic 810 Invisible Tape (19mm&#215;25.4m)</td>
			<td style="width:164px;">3M Company</td>
			<td style="width:243px;">810</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:243px;">PCN5000</td>
			<td style="width:349px;">Antibody incubaton</td>
		</tr>
		<tr height="76">
			<td height="76" style="height:76px;width:347px;">DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:243px;">D1306</td>
			<td style="width:349px;">Nucleic acid staining. Dissolve in deionized water to make a 5 mg/mL stock solution and store at -80&#176;C. Dilute to a working concentration of 10-20 &#956;g/mL in PBTx.</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">3.5X-90X Stereo Zoom Inspection Industrial Microscope</td>
			<td style="width:164px;">AmScope</td>
			<td style="width:243px;">SM-1BNZ</td>
			<td style="width:349px;">Dissection scope. Equipped with 6W LED Dual Gooseneck Illuminator</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">ImageJ/Fiji</td>
			<td style="width:164px;">NIH</td>
			<td style="width:243px;">v1.51u</td>
			<td style="width:349px;">With SCF_MPI_CBG plugins (version 1.1.2)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">FV1000-IX81 Confocal-laser Scanning Microscope</td>
			<td style="width:164px;">Olympus</td>
			<td style="width:243px;"></td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant Construct</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:243px;">BL37749</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative cell biology of neurodegeneration in drosophila through unbiased analysis of fluorescently tagged proteins using imagej

Com a crescente prevalência de doenças neurodegenerativas, é cada vez mais importante entender a fisiopatologia subjacente que leva à perda e disfunção neuronal. Tecnologias e ferramentas de imagem baseada em fluorescência permitem uma análise sem precedentes dos processos neurobiológicos subcellular, no entanto, há ainda a necessidade de abordagens imparciais, reprodutíveis e acessíveis para extrair dados quantificáveis de estudos de imagem . Nós desenvolvemos um fluxo de trabalho simples e adaptável para extrair dados quantitativos de estudos de imagens baseada em fluorescência usando modelos da drosófila de neurodegeneração. Especificamente, nós descrevemos uma abordagem fácil de seguir, semi automatizada usando Fiji/ImageJ para analisar dois processos celulares: em primeiro lugar, podemos quantificar agregar conteúdo de proteína e perfil no lobo óptico drosófila usando fluorescente-tag mutante huntingtina proteínas; e em segundo lugar, avaliamos o fluxo de autofagia-lisossoma no sistema visual de drosófila com quantificação baseada em ratiometric de um repórter fluorescentes em tandem de autofagia. Importante, o protocolo descrito aqui inclui uma etapa de segmentação semi-automática para garantir que todas as estruturas fluorescentes são analisadas para minimizar o viés de seleção e aumentar a resolução de comparações sutis. Esta abordagem pode ser estendida para a análise de outras estruturas biológicas celulares e processos implicados na neurodegeneração, tais como partitura proteicas (grânulos de stress e complexos sinápticos), compartimentos, bem como membrana-limite (mitocôndrias e vesículas de tráfico de membrana). Este método oferece uma forma padronizada, ainda referência adaptável aponte para análise de imagens e quantificação e poderia facilitar a confiabilidade e reprodutibilidade através do campo e, finalmente, melhorar a compreensão mecanicista da neurodegeneração.

Quantificação do número, área e intensidade de mutante fluorescente etiquetado Htt agrega no lobo óptico drosófila
Para investigar a agregação de misfolded proteínas no sistema nervoso central de um modelo de Drosophila da doença de Huntington, RFP-tag mutante Htt humana com uma expansão patológica ( ou não-patológica (UAS-RFP-hHttQ15) UAS-RFP-hHttQ138) e membrana GFP (UAS-mCD8:...

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Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Biologia celular quantitativa de neurodegeneração em Drosophila , através de uma análise imparcial das proteínas fluorescente etiquetadas usando o ImageJ

Nós desenvolvemos um fluxo de trabalho simples e adaptável para extrair dados quantitativos de estudos biológicos fluorescência-imagem latente-à base de célula de agregação de proteínas e autophagic fluxo no sistema nervoso central de Drosophila modelos de Neurodegeneração.

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

Análise Sholl automatizado de Morfologia Neuronal Digitized em múltiplas escalas

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

Neurociência

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Locomotor ensaio, Aprendizagem e Memória Os déficits no Drosophila Modelos de neurodegeneração

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

Análise quantitativa de Reposição da vesícula sináptica Piscina em Cultured neurônios granulares do cerebelo usando Dyes FM

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Imagem Confocal Espectral de fluorescência com a tag receptores nicotínicos na Knock-em camundongos com a administração de nicotina crônica

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders

Análise Quantitativa de Defeitos de escalada em um modelo de Drosophila de doenças neurodegenerativas

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Em Gene Vivo Transferência de células de Schwann no nervo ciático de roedores por Eletroporação

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

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Mass Histologia para quantificar neurodegeneração em<em&gt; Drosophila</em

Progressive neurodegenerative diseases like Alzheimer&#39;s disease (AD) or Parkinson&#39;s disease (PD) are an increasing threat to human health ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Usando Canais Linear de agarose para o Estudo<em&gt; Drosophila</em&gt; Comportamento larval Crawling

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

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Análise quantitativa da arborização dendrítica Neuronal complexidade em Drosophila

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An Unbiased Approach of Sampling TEM Sections in Neuroscience

Uma abordagem imparcial de amostragem TEM seções em neurociência

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