Name: quantitative cell biology of neurodegeneration in drosophila through unbiased analysis of fluorescently tagged proteins using imagej
Uploaded: 2018-08-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ at JoVE.com

Detta arbete stöds av Sheila och David Fuente neuropatisk smärta forskning Program Graduate Fellowship (till J.M.B.), Lois Pope LIFE Fellows Program (att C.L., Y.Z. och J.M.B.), Snyder-Robinson Foundation pre gemenskap (till C.L.), Dr John T . Macdonald Foundation (till C.L.), kontrakt, anslag från National Institutes of Health (NIH) HHSN268201300038C, R21GM119018 och R56NS095893 (till R.G.Z.), och av Taishan Scholar projekt (Shandong-provinsen, Folkrepubliken Kina) (till R.G.Z.).

1. överväganden och preparat för att utforma bild analys experimentet
<ol><li>Förbestämma lämplig anatomisk, mobilnät eller subcellulär markörer att tjäna som landmärken för att standardisera en region av intresse (ROI) över olika prover, till exempel 4', 6-diamidin-2-fenylindol (DAPI), membran markörer, lokaliserade lysrör protein, m.m.
</li>
	<li>Välj en fluorescerande markör som kan avgränsa diskret puncta bortom bakgrundsnivåerna för strukturera av intresse. Obs: Detta protokoll är ...

<ol>
	<li>Erkkinen, M. G., Kim, M. -. O., Geschwind, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Neurology+and+Epidemiology+of+the+Major+Neurodegenerative+Diseases.">Clinical Neurology and Epidemiology of the Major Neurodegenerative Diseases.</a> Cold Spring Harbor perspectives in biology. , a033118 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 671 (2012).</li><li>Mauvezin, C., Ayala, C., Braden, C. R., Kim, J., Neufeld, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+to+monitor+autophagy+in+Drosophila.">Assays to monitor autophagy in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 134-139 (2014).</li><li>Weiss, K. R., Kimura, Y., Lee, W. -. C. M., Littleton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntingtin+aggregation+kinetics+and+their+pathological+role+in+a+Drosophila+Huntington's+disease+model.">Huntingtin aggregation kinetics and their pathological role in a Drosophila Huntington's disease model.</a> Genetics. 190 (2), 581-600 (2012).</li><li>Babcock, D. T., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcellular+spreading+of+huntingtin+aggregates+in+the+Drosophila+brain.">Transcellular spreading of huntingtin aggregates in the Drosophila brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (39), E5427-E5433 (2015).</li><li>DeVorkin, L., Gorski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+autophagy+in+Drosophila+using+fluorescent+reporters+in+the+UAS-GAL4+system.">Monitoring autophagy in Drosophila using fluorescent reporters in the UAS-GAL4 system.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (9), (2014).</li><li>Williamson, W. R., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+developing+and+adult+Drosophila+brains+and+retinae+for+live+imaging.">Preparation of developing and adult Drosophila brains and retinae for live imaging.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (37), (2010).</li><li>Sweeney, S. T., Hidalgo, A., de Belle, J. S., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+adult+Drosophila+brains.">Dissection of adult Drosophila brains.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2011).</li><li>Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde+fixation.">Formaldehyde fixation.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 33 (8), 845-853 (1985).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+for+Drosophila+neural+development.">Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development.</a> Trends in neurosciences. 24 (5), 251-254 (2001).</li><li>Fischbach, K. -. F., Dittrich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+optic+lobe+of+Drosophila+melanogaster.+I.+A+Golgi+analysis+of+wild-type+structure.">The optic lobe of Drosophila melanogaster. I. A Golgi analysis of wild-type structure.</a> Cell and tissue research. 258 (3), 441-475 (1989).</li><li>Ruan, K., Zhu, Y., Li, C., Brazill, J. M., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+splicing+of+Drosophila+Nmnat+functions+as+a+switch+to+enhance+neuroprotection+under+stress.">Alternative splicing of Drosophila Nmnat functions as a switch to enhance neuroprotection under stress.</a> Nature Communications. 6, 10057 (2015).</li><li>Zhai, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAD+synthase+NMNAT+acts+as+a+chaperone+to+protect+against+neurodegeneration.">NAD synthase NMNAT acts as a chaperone to protect against neurodegeneration.</a> Nature. 452 (7189), 887 (2008).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spermine+synthase+deficiency+causes+lysosomal+dysfunction+and+oxidative+stress+in+models+of+Snyder-Robinson+syndrome.">Spermine synthase deficiency causes lysosomal dysfunction and oxidative stress in models of Snyder-Robinson syndrome.</a> Nat Commun. 8 (1), 1257 (2017).</li><li>Prokop, A., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+structure+of+synaptic+contacts+in+Drosophila.">Development and structure of synaptic contacts in Drosophila.</a> Semin Cell Dev Biol. 17 (1), 20-30 (2006).</li><li>Maday, S., Holzbaur, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagosome+biogenesis+in+primary+neurons+follows+an+ordered+and+spatially+regulated+pathway.">Autophagosome biogenesis in primary neurons follows an ordered and spatially regulated pathway.</a> Dev Cell. 30 (1), 71-85 (2014).</li><li>Mizushima, N., Yamamoto, A., Matsui, M., Yoshimori, T., Ohsumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+autophagy+in+response+to+nutrient+starvation+using+transgenic+mice+expressing+a+fluorescent+autophagosome+marker.">In vivo analysis of autophagy in response to nutrient starvation using transgenic mice expressing a fluorescent autophagosome marker.</a> Molecular biology of the cell. 15 (3), 1101-1111 (2004).</li><li>Lee, S., Sato, Y., Nixon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+lysosomal+dysfunction+causes+cargo-specific+deficits+of+axonal+transport+leading+to+Alzheimer-like+neuritic+dystrophy.">Primary lysosomal dysfunction causes cargo-specific deficits of axonal transport leading to Alzheimer-like neuritic dystrophy.</a> Autophagy. 7 (12), 1562-1563 (2011).</li><li>Vincent, L., Soille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Watersheds+in+digital+spaces:+an+efficient+algorithm+based+on+immersion+simulations.">Watersheds in digital spaces: an efficient algorithm based on immersion simulations.</a> IEEE Transactions on Pattern Analysis &amp; Machine Intelligence. (6), 583-598 (1991).</li><li>Najman, L., Schmitt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geodesic+saliency+of+watershed+contours+and+hierarchical+segmentation.">Geodesic saliency of watershed contours and hierarchical segmentation.</a> IEEE Transactions on pattern analysis and machine intelligence. 18 (12), 1163-1173 (1996).</li><li>Shiber, A., Breuer, W., Ravid, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+quantification+and+characterization+of+intracellular+protein+aggregates+in+yeast.">Flow cytometric quantification and characterization of intracellular protein aggregates in yeast.</a> Prion. 8 (3), 276-284 (2014).</li><li>Mizushima, N., Yoshimori, T., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+mammalian+autophagy+research.">Methods in mammalian autophagy research.</a> Cell. 140 (3), 313-326 (2010).</li></ol>

Protokollet som beskrivs här kan användas för att kraftfullt och reproducibly kvantifiera cell biologiska processer visualiseras av fluorescens-baserad avbildning. Biologiska sammanhang och tekniska begränsningar måste övervägas noggrant vägleda experimentell design. Fluorescerande markörer av subcellulära strukturer av intresse, oavsett om immunhistokemisk, färgämnet-baserade eller genetiskt uttryckt, måste vara åtskiljbar ovan bakgrund av morfologi och intensitet. UAS/GAL4 systemet är allmänt a...

Neurodegenerativa sjukdomar drabbar miljontals människor varje år och incidensen ökar med en åldrande befolkning1. Medan varje neurodegenerativ sjukdom har en unik etiologi, är aggregering av felveckning proteiner och uppdelning av proteostasis nätverket gemensamma patologiska kännetecken för många av dessa sjukdomar. Belysa hur störningar av dessa grundläggande och inbördes relaterade processer går snett är för att bidra till neuronal dysfunktion och cell död kritisk för förståelse neurodegenerativa sjukdomar samt vägledande terapeutiska interventioner. Fluorescens-baserat imaging möjliggör undersökning av dessa komplexa och dynamiska processer i nervceller och har starkt bidragit till vår förståelse av neuronala cellbiologi. Analys av fluorescently märkta proteiner är utmanande, särskilt när experimenten utförs i vivo, på grund av mycket kompakta vävnader, olika celltyper och morfologiska heterogenitet. Manuellt assisterad kvantifiering är prisvärda och enkla, men är ofta tidskrävande och föremål för mänsklig partiskhet. Därför finns det ett behov av opartisk, reproducerbar och tillgängliga metoder för att extrahera kvantifierbara data från studier avbildning.
Vi har sammanställt en enkel och anpassningsbar arbetsflöden med Fiji/ImageJ, en kraftfull och fritt tillgängliga bildbehandling programvara2,3, extrahera kvantitativ data från fluorescens imaging studier i experimentella modeller av neurodegeneration använda Drosophila. Genom att följa detta protokoll för att kvantifiera protein aggregering och autophagic flux — två cell biologiska funktioner som är mycket relevanta för neurodegenerativa sjukdomen patologi — vi visat känslighet och reproducerbarhet av detta synsätt. Analysen av fluorescently märkta muterade huntingtin (Htt) proteiner i den Drosophila optic loben visade antal, storlek och intensitet av protein aggregat. Vi visualiserat en tandem fluorescerande reporter på autophagic flux i Drosophila visuella system, som visar olika utsläpp signaler beroende på den compartmental miljö4. Proportionerlig-baserad analys av tandem reporter tillåtet för en kvantitativ och heltäckande bild av autofagi-Lysosomen flux från autophagosome bildning, mognad och transport till nedbrytning i lysosomen, och dessutom markeras utsatta fack störs i neurodegenerativa sjukdomar. Ännu viktigare, i båda analyser genomfört vi semi automatiserade tröskelvärde och segmentering steg i våra protokoll till minimera omedvetna fördomar, öka provtagning makt och ger en standard för att underlätta jämförelser mellan liknande studier. Det enkla arbetsflödet är avsedd att göra kraftfulla Fiji/ImageJ plugins (utvecklat av datavetare som baseras på matematiska algoritmer) mer tillgängliga för neurobiologists och biovetenskap samhället i stort.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1102">
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">SYLGARD(R) 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td style="width:164px;">Dow Corning Corporation</td>
			<td style="width:243px;">PF184250</td>
			<td style="width:349px;">Dissection dish</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">Falcon 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td style="width:243px;">351008</td>
			<td style="width:349px;">Dissection dish</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Dumont #5 Forceps</td>
			<td style="width:164px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:243px;">11251-20</td>
			<td style="width:349px;">Dissection tool</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">S3014</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Sodium Phosphate Dibasic&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">S5136</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">P5655</td>
			<td style="width:349px;">PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Triton&#160;X-100</td>
			<td style="width:164px;">Sigma</td>
			<td style="width:243px;">T9284</td>
			<td style="width:349px;">Washing and antibody incubaton solution.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">37% Formaldehyde</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">10790-710</td>
			<td style="width:349px;">Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Disposable Microcentrifuge Tubes (0.5mL, blue)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">89000-022</td>
			<td style="width:349px;">Fixation, washing, and antibody incubaton.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Plain and Frosted Micro Slides (25&#215;75mm)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">48312-004</td>
			<td style="width:349px;">Slides for confocal imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Micro Cover Glasses, rectangular (22&#215;40mm)</td>
			<td style="width:164px;">VWR</td>
			<td style="width:243px;">48393-172</td>
			<td style="width:349px;">Slides for confocal imaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Rubber Cement</td>
			<td style="width:164px;">Slime</td>
			<td style="width:243px;">1051-A</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td style="width:164px;">Vector Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:243px;">H-1000</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Scotch Magic 810 Invisible Tape (19mm&#215;25.4m)</td>
			<td style="width:164px;">3M Company</td>
			<td style="width:243px;">810</td>
			<td style="width:349px;">Mounting</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:243px;">PCN5000</td>
			<td style="width:349px;">Antibody incubaton</td>
		</tr>
		<tr height="76">
			<td height="76" style="height:76px;width:347px;">DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:243px;">D1306</td>
			<td style="width:349px;">Nucleic acid staining. Dissolve in deionized water to make a 5 mg/mL stock solution and store at -80&#176;C. Dilute to a working concentration of 10-20 &#956;g/mL in PBTx.</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:347px;">3.5X-90X Stereo Zoom Inspection Industrial Microscope</td>
			<td style="width:164px;">AmScope</td>
			<td style="width:243px;">SM-1BNZ</td>
			<td style="width:349px;">Dissection scope. Equipped with 6W LED Dual Gooseneck Illuminator</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">ImageJ/Fiji</td>
			<td style="width:164px;">NIH</td>
			<td style="width:243px;">v1.51u</td>
			<td style="width:349px;">With SCF_MPI_CBG plugins (version 1.1.2)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">FV1000-IX81 Confocal-laser Scanning Microscope</td>
			<td style="width:164px;">Olympus</td>
			<td style="width:243px;"></td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant Construct</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td style="width:243px;">BL37749</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative cell biology of neurodegeneration in drosophila through unbiased analysis of fluorescently tagged proteins using imagej

Med den ökande förekomsten av neurodegenerativa sjukdomar är det allt viktigare att förstå underliggande patofysiologin som leder till neuronal dysfunktion och förlust. Fluorescens-baserat imaging verktyg och tekniker möjliggör oöverträffad analys av subcellulär neurobiologiska processer, ändå finns det fortfarande ett behov av opartisk, reproducerbar och tillgängliga metoder för att extrahera kvantifierbara data från studier avbildning . Vi har utvecklat en enkel och anpassningsbar arbetsflöde för att extrahera kvantitativ data från fluorescens-baserat imaging studier Drosophila modeller av neurodegeneration. Specifikt, beskriver vi en lätt att följa, halvautomatisk metod med Fiji/ImageJ för att analysera två cellulära processer: först, vi kvantifiera sammanlagda proteinhalten och profil i den Drosophila optic LOB med lysrör-taggade mutant huntingtin protein; och för det andra, vi bedöma autofagi-Lysosomen flux i Drosophila visuella systemet med proportionerlig-baserade kvantifiering av tandem fluorescerande reporter av autofagi. Ännu viktigare, innehåller protokollet beskrivs här ett halvautomatiskt segmentering steg för att säkerställa alla fluorescerande strukturer analyseras att minimera urval bias och öka upplösning av subtila jämförelser. Detta tillvägagångssätt kan förlängas för analys av andra cell biologiska strukturer och processer inblandad i neurodegeneration, såsom proteinhaltiga puncta (stressgranula och synaptic komplex), samt som membran-bundna fack (mitokondrier och membranet människohandel blåsor). Denna metod ger en standardiserad, men anpassningsbar referenspunkt för bildanalys och kvantifiering, och kunde underlätta pålitlighet och reproducerbarhet över fältet, och som i slutändan förbättra mekanistisk förståelse av neurodegeneration.

Kvantifiering av antal, yta och intensiteten i fluorescently märkta mutant Htt aggregerar i den Drosophila optic loben
Att undersöka felveckning protein aggregation i centrala nervsystemet en Drosophila modell av Huntingtons sjukdom, RFP-taggade mutant mänskliga Htt med en icke-patologiska (UAS-RFP-hHttQ15) eller patologisk expansion ( UAS-RFP-hHttQ138) och membran GFP (UAS-mCD8::GFP)...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ at JoVE.com

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Kvantitativa cellbiologi för Neurodegeneration i Drosophila genom förutsättningslös analys av Fluorescently märkta proteiner med hjälp av ImageJ

Vi har utvecklat en enkel och anpassningsbar arbetsflöde för att extrahera kvantitativ data från fluorescens-imaging-baserade cell biologiska studier av protein aggregering och autophagic flux i det centrala nervsystemet Drosophila modeller av neurodegeneration.

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

Automatiserad Sholl Analys av digitaliserade Neuronal Morfologi på flera skalor

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Testmetoder motoriskt, inlärning och minne Brister i Drosophila Modeller för neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

Kvantitativ analys av Synaptic Blås Pool Påfyllnad i odlade Cerebellar Granule nervceller med hjälp av FM-färgämnen

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Spektral Confocal avbildning av fluorescensmärkta nikotinreceptorer i Knock-in Möss med kronisk Nikotin Administration

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders

Kvantitativ analys av Klättring Defekter i en Drosophila modell av neurodegenerativa sjukdomar

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Genöverföring in vivo till Schwann-celler i gnagare ischiasnerven genom elektroporering

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

Mass histologi att kvantifiera neurodegeneration i<em&gt; Drosophila</em

Progressive neurodegenerative diseases like Alzheimer&#39;s disease (AD) or Parkinson&#39;s disease (PD) are an increasing threat to human health ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Använda Linear Agarose kanaler att studera<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvernas Genomsökning Behavior

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Kvantitativ analys av neuronala dendritiska Arborization komplexitet i Drosophila

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

An Unbiased Approach of Sampling TEM Sections in Neuroscience

En förutsättningslös strategi för provtagning TEM sektioner i neurovetenskap

Investigations of the ultrastructural features of neurons and their synapses are only possible with electron microscopy. Especially for comparative ...