Name: intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model
Uploaded: 2018-10-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

تمت الموافقة على البروتوكولات التجريبية "لجنة الاستخدام" في مستشفى فيلادلفيا "الأطفال" و "رعاية الحيوان المؤسسية".
1-إنشاء الماصات حقن
<ol><li>استخدام ساحبة ميكروبيبيتي رأسي، سحب ماصة ميكروكابيلاري 100 ميليلتر (الشكل 1A -ج 1). معايرة ساحبة ميكروبيبيتي حيث...

<ol>
	<li>Loukogeorgakis, S., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+stem+cell+and+gene+therapy:+current+status+and+future+perspectives.">In utero stem cell and gene therapy: current status and future perspectives.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 24, 237-245 (2014).</li><li>Vrecenak, J., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+hematopoietic+cell+transplantation:+recent+progress+and+the+potential+for+clinical+application.">In utero hematopoietic cell transplantation: recent progress and the potential for clinical application.</a> Cytotherapy. 15, 525-535 (2013).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+murine+hemoglobinopathies+by+prenatal+tolerance+induction+and+postnatal+nonmyeloablative+allogeneic+BM+transplants.">Correction of murine hemoglobinopathies by prenatal tolerance induction and postnatal nonmyeloablative allogeneic BM transplants.</a> Blood. 126 (10), 1245-1254 (2015).</li><li>Vrecenak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Long-Term+Mixed+Chimerism+Achieved+in+a+Canine+Model+of+Allogeneic+in+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">Stable Long-Term Mixed Chimerism Achieved in a Canine Model of Allogeneic in utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Blood. 124 (12), 1987-1995 (2014).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD26+Inhibition+Enhances+Allogeneic+Donor-Cell+Homing+and+Engraftment+after+in+utero+Hematopoietic-Cell+Transplantation.">CD26 Inhibition Enhances Allogeneic Donor-Cell Homing and Engraftment after in utero Hematopoietic-Cell Transplantation.</a> Blood. 108 (13), 4268-4274 (2006).</li><li>Waddington, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+gene+transfer+of+human+factor+IX+to+fetal+mice+can+induce+postnatal+tolerance+of+the+exogenous+clotting+factor.">In utero gene transfer of human factor IX to fetal mice can induce postnatal tolerance of the exogenous clotting factor.</a> Blood. 101 (4), 1359-1366 (2003).</li><li>Stitelman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Stage+Determines+Efficiency+of+Gene+Transfer+to+Muscle+Satellite+Cells+by+in+utero+Delivery+of+Adeno-Associated+Virus+Vector+Serotype+2/9.">Developmental Stage Determines Efficiency of Gene Transfer to Muscle Satellite Cells by in utero Delivery of Adeno-Associated Virus Vector Serotype 2/9.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 1, 14040 (2014).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+to+Ocular+Stem+Cells+by+Early+Gestational+Intraamniotic+Injection+of+Lentiviral+Vector.">Gene Transfer to Ocular Stem Cells by Early Gestational Intraamniotic Injection of Lentiviral Vector.</a> Molecular Therapy. 15 (3), 579-587 (2007).</li><li>Boelig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Intravenous+Route+of+Injection+Optimizes+Engraftment+and+Survival+in+the+Murine+Model+of+In+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">The Intravenous Route of Injection Optimizes Engraftment and Survival in the Murine Model of In utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 22 (6), 991-999 (2016).</li><li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-amniotic+Transient+Transduction+of+the+Periderm+with+a+Viral+Vector+Encoding+TGF&#946;3+Prevents+Cleft+Palate+in+Tgf&#946;3-/-.+Mouse+Embryos.">Intra-amniotic Transient Transduction of the Periderm with a Viral Vector Encoding TGF&#946;3 Prevents Cleft Palate in Tgf&#946;3-/-. Mouse Embryos.</a> Molecular Therapy. 1, 8-17 (2013).</li><li>Roybal, J., Endo, M., Radu, A., Zoltick, P., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+gestational+gene+transfer+of+IL-10+by+systemic+administration+of+lentiviral+vector+can+prevent+arthritis+in+a+murine+model.">Early gestational gene transfer of IL-10 by systemic administration of lentiviral vector can prevent arthritis in a murine model.</a> Gene Therapy. 18 (7), 719-726 (2011).</li><li>Reay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full-Length+Dystrophin+Gene+Transfer+to+the+Mdx+Mouse+in+utero.">Full-Length Dystrophin Gene Transfer to the Mdx Mouse in utero.</a> Gene Therapy. 15 (7), 531-536 (2008).</li><li>Ahmed, S., Waddington, S., Boza-Mor&#225;n, M., Y&#225;&#241;ez-Mu&#241;oz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Efficiency+Transduction+of+Spinal+Cord+Motor+Neurons+by+Intrauterine+Delivery+of+Integration-Deficient+Lentiviral+Vectors.">High-Efficiency Transduction of Spinal Cord Motor Neurons by Intrauterine Delivery of Integration-Deficient Lentiviral Vectors.</a> Journal of Controlled Release. 273, 99-107 (2018).</li><li>Haddad, M., Donsante, A., Zerfas, P., Kaler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+Brain-Directed+AAV+Gene+Therapy+Results+in+Rapid,+Robust,+and+Persistent+Transduction+of+Mouse+Choroid+Plexus+Epithelia.">Fetal Brain-Directed AAV Gene Therapy Results in Rapid, Robust, and Persistent Transduction of Mouse Choroid Plexus Epithelia.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 2, 101 (2013).</li><li>Nijagal, A., Le, T., Wegorzewska, M., MacKenzie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+in+utero+transplantation.">A mouse model of in utero transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2303 (2011).</li><li>Davey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jaagsiekte+Sheep+Retrovirus+Pseudotyped+Lentiviral+Vector-Mediated+Gene+Transfer+to+Fetal+Ovine+Lung.">Jaagsiekte Sheep Retrovirus Pseudotyped Lentiviral Vector-Mediated Gene Transfer to Fetal Ovine Lung.</a> Gene Therapy. 19 (2), 201-209 (2011).</li></ol>

الزرع في الرحم هو علاج محتملة للعديد من الاضطرابات الخلقية التي يمكن تشخيصها في وقت مبكر من الحمل. يسمح نموذج مورين للجامعة الإسلامية للتكنولوجيا الباحثين لاستكشاف البيئة الجنينية أو إلى تجريب مختلف أنواع العلاج. اعتماداً على ما يتم حقنها وما يجري استهداف، يمكن أن توفر عن طريق الحقن...

التقدم الذي أحرز مؤخرا في الفحص قبل الولادة والتشخيص قد سلطت الضوء على إمكانية علاج الجنين لعدد من الاضطرابات الخلقية التي ليس لديها خيارات العلاج الملائم بعد الولادة وينتج كبيرة في معدلات الاعتلال والوفيات. على وجه التحديد، في الرحم زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم (ايوهكت) وتحرير العلاج/الجينوم الجينات لديها القدرة على الاستفادة من خصائص الإنمائية الطبيعي للجنين لعلاج الخلقية الدموية والمناعية والوراثية اضطرابات أكثر كفاءة مما زرع HSC بعد الولادة وتحرير العلاج/الجينوم الجينات يمكن أن تفعل1،2. على وجه التحديد، نظراً لصغر حجم الجنين، الخلية المانحة أو الجرعة النواقل الفيروسية يمكن تعظيم كل وزن المستلم. بالإضافة إلى ذلك، يسمح عدم النضج المناعية للجنين المانحة هسكس بالحقن دون ميلوابلاتيفي وتكييف كآبته التي مطلوب في البروتوكولات زرع بعد الولادة. وبالمثل، يمكن حقن النواقل الفيروسية يحمل على التحوير العلاجية أو تكنولوجيا الجينوم التحرير دون استجابة المناعة تحد للمنتج التحوير أو ناقلات الأمراض الفيروسية. وأخيراً، إمكانية الوصول وطبيعة التكاثري للخلايا الجذعية الجنينية/السلف تتيح إمكانية توصيل أكثر كفاءة للخلايا الهدف السلف، فضلا عن أوضاع معينة للجينوم التحرير (الموجه من التماثل إصلاح) التي تتطلب ركوب الدراجات الخلايا إلى حدوث كفاءة. نموذج مورين بمثابة وسيلة الثاقبة وميسورة التكلفة لمعالجة المسائل الهامة في بيولوجيا الخلايا الجذعية وعلم المناعة قبل التجريب في نماذج حيوانية كبيرة قبل الإكلينيكية، وعلى هذا النحو، كانت بمثابة النموذج الأساسي ايوهكت و في الرحم العلاج الجيني قد استكشفت1،،من23.
على الرغم من أن العديد من المتغيرات دوراً هاما في نجاح ايوهكت و في الرحم الجينات العلاج/الجينوم التحرير في نماذج حيوانية موريني وكبير، هو متغير رئيسي طريقة تسليم هسكس أو النواقل الفيروسية. تقديم جرعات كبيرة من المانحين هسكس مع تأثير تمرير الأولى التي تحدث في الكبد الجنين، وهو الجهاز المكونة للدم في وقت ايوهكت، قد ثبت أن تكون أداة فعالة في تحقيق مستويات ماكروتشيميريك engraftment في الماوس ونماذج حيوانية كبيرة4 ،5. وكان هذا يتحقق عن طريق حقنه من المانحين الخلايا عن طريق الوريد فيتيلين في طراز الماوس و عن طريق حقن داخل القلب في نموذج الكلاب البوليسية. طريق الحقن أيضا دوراً أساسيا في استهداف الخلايا السلف من مختلف الأجهزة أثناء التطوير. على سبيل المثال، قد ثبت حقن عن طريق الوريد فيتيلين كفاءة ترانسدوسي كارديوميوسيتيس وخلايا الكبد بعد6،حقن7الحمل متأخر. بدلاً من ذلك، يسمح حقن داخل السلي من النواقل الفيروسية استهداف الأجهزة التي يتعرض لها فعلياً على أساس الجنينية قابلة للطي/تطوير وقت الحقن8. هذا هو أفضل مثال على باستهداف من الظهارة التنفسية عن طريق حقنه داخل السلي في أواخر الحمل للاستفادة من حركات طبيعية الجنين "التنفس"، الذي يعرض الجهاز التنفسي لناقلات الأمراض الفيروسية في السلوى 9من السوائل. هذين الوضعين من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا، عن طريق الحقن عبر الوريد فيتيلين وداخل السلي، وكانت أساسا للعديد من التجارب الماضية والجارية في المختبر. في هذا البروتوكول، يصف لنا بالتفصيل الأساليب لأداء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا عن طريق الحقن الوريدي وداخل السلي في نموذج مورين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:827px;" width="826">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Gloves</td>
			<td style="width:168px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:147px;">2D73DP65</td>
			<td style="width:231px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/ teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/o teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Curved scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14075-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heavy Scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14002-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Needle Driver</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">12005-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vicryl 2.0</td>
			<td style="width:168px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">JB945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transfer Pipette</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">GSI135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">MDS202000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">50 mL Conical tube</td>
			<td style="width:168px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:147px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Tape</td>
			<td style="width:168px;">3M</td>
			<td style="width:147px;">1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Eye lubricant</td>
			<td style="width:168px;">Major LubriFresh</td>
			<td style="width:147px;">0904-6488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:168px;">K&#38;H</td>
			<td style="width:147px;">3060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:168px;">Leica</td>
			<td style="width:147px;">MZ16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Injector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">HI01PK01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Glass Capillary tubes</td>
			<td style="width:168px;">Kimble</td>
			<td style="width:147px;">71900-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vertical Micropipette Puller</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Microelectrode Beveler</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">IM-300 Pneumatic Microinjector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">IM-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Insulin Syringe&#160;</td>
			<td style="width:168px;">BD&#160;</td>
			<td style="width:147px;">305935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Filter</td>
			<td style="width:168px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:147px;">25-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Compac5 Anesthesia Machine</td>
			<td style="width:168px;">VetEquip Compac5</td>
			<td style="width:147px;">901812&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:168px;">Piramal Critical Care</td>
			<td style="width:147px;">NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">N2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">NI 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">O2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">OX 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ad-GFP viral vector</td>
			<td style="width:168px;">Penn Vector Core</td>
			<td style="width:147px;">H5&#39;.040.CMV.eGFP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model

الزرع في الرحم (الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا) هو وضع فريد وتنوعاً للعلاج التي يمكن استخدامها لإدخال الخلايا الجذعية، والنواقل الفيروسية، أو أي مواد أخرى في أوائل الحمل. ويستند الأساس المنطقي وراء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا لأغراض علاجية صغر حجم الجنين والنضج المناعية الجنين، وإمكانية الوصول وطبيعة التكاثري للخلايا الجنينية الجذعية أو السلف، وإمكانات لعلاج مرض أو ظهور الأعراض قبل الولادة. الاستفادة من هذه الخصائص الإنمائية الطبيعي للجنين، إيصال الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) عن طريق الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا لديها القدرة على علاج الاضطرابات الدموية الخلقية مثل مرض الخلية المنجلية، دون المطلوب ميلوابلاتيفي أو كآبته التكييف اللازمة لعمليات زرع الأعضاء HSC بعد الولادة. وبالمثل، يحتمل أن تكون إمكانية الحصول على خلايا السلف في الأجهزة متعددة أثناء تطوير يسمح لاستهداف أكثر كفاءة للخلايا الجذعية/السلف بعد الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا نواقل الفيروسية للعلاج بالجينات أو الجينوم تحرير. بالإضافة إلى ذلك، الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا يمكن استخدامها لدراسة العمليات التنموية العادية بما في ذلك، لكن ليس على سبيل الحصر، تنمية التسامح المناعية. ويوفر الطراز مورين وسيلة قيمة وأسعار معقولة لفهم إمكانيات وحدود الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا قبل الدراسات الحيوانية الكبيرة قبل الإكلينيكية وتطبيق السريري في نهاية المطاف. هنا، يمكننا وصف بروتوكول للمنفذ الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الجنين مورين من خلال طرق الحقن الوريدي وداخل السلي. هذا البروتوكول قد استخدمت بنجاح توضيح الشروط اللازمة والآليات وراء زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم في الرحم والحث على التسامح في الرحم العلاج الجيني.

البقاء على قيد الحياة وانجرافتمينت تدابير هامة لنجاح تجارب ايوهكت. الأجنة التي تلقي ايوهكت تبعاً لنقاط النهاية المحددة للتجربة، قد يكون تحليل بريناتالي عملية قيصرية أو وأرزان ارتباط المستقبلات. وفي المتوسط، أن معدلات البقاء على قيد الحياة بعد الحقن الوريدي تتراوح بين 7...

Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

عن طريق الحقن الوريدي وداخل السلي في الرحم زرع في نموذج مورين

يمكننا وصف بروتوكول لأداء في الرحم زرع (الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا) عن طريق الحقن الوريدي وداخل السلي طرق الحقن في نموذج مورين. يمكن استخدام هذا البروتوكول لإدخال الخلايا والنواقل الفيروسية، وغيرها من المواد في البيئة الجنينية المناعي متسامح فريدة من نوعها.

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأجنة والعلاج الجيني وزرع الخلايا الجذعية. ميزة لهذه التقنية هو أنه يتيح تحليل آثار العلاجات التجريبية المختلفة على الأجنة مورين. سوف يكون هذا الإجراء الأطباء نيكولاس آهن، وباربرا كونز، والأطباء والزملاء الباحثين في مختبرنا.قبل البدء في العملية، إسقاط خمسة إلى 10 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني معقم داخل وخارج طرف إبرة جراحية، مرتين إلى ثلاث مرات لمسحه من أي حطام ممكن. المقبل ملء الإبرة مع كاشف الفائدة في حجم التجريبية المناسبة والتركيز. واضغط على زر الوضع ثلاث مرات على حاقن الصغرى للتقدم إلى شاشة معايرة الحقن.أضف فواصل زمنية من 10 أو 100 مللي ثانية لضبط وقت الحقن، واضغط على زر الوضع مرتين إضافيتين. اضغط على زر التوازن واضغط على دواسة القدم مرة واحدة. ثم اضغط على دواسة مرة أخرى وتقييم ما حجم حل يتم إفراغها من الإبرة لكل دفع.عندما يتم معايرة الحقن الدقيق إلى حجم التجريبية المناسبة، وملء الإبرة إلى المستوى الصحيح للحقن. عندما تم تنظيف جميع الإبر، تأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع إصبع القار الحامل من عمرها شهرين إلى ستة أشهر. حلق البطن ، مع الحرص على عدم تلف الحلمات ، ونقل الحيوان إلى وسادة التدفئة في موقف سوبين.ضع مرهم على عيون الحيوان وأقفل الأطراف على وسادة التدفئة مع الشريط. وتطهير الجلد المكشوف. ثم حقن التخدير الموضعي مثل 100 ميكرولترات من 0.25٪ Bupivacaine تحت الجلد.المقبل، وجعل شق الجلد سنتيمتر واحد إلى اثنين بحيث الحدود السفلية ليست أقرب من سنتيمتر واحد إلى التطفل، وتحديد خط الوسط من اللفافة، مع الحرص على عدم إصابة الأوعية شرسوفية المحيطة بها. باستخدام ملقط Adson، قرصة اللفافة دون الاستيلاء على أي من الأجهزة أو الأجنة الكامنة، وفتح الأنسجة مع مقص. مرة واحدة بأمان داخل تجويف البطن، وتوسيع شق اللفافة إلى طول شق الجلد، واستخدام تطبيقات طرف القطن لنقل الأمعاء إلى الجزء العلوي من البطن لفضح الرحم الجرافيد.استخراج الرحم من خلال شق بعناية تحديد المبايض الأيمن واليسرى لضمان أن يتم حساب جميع الأجنة. ضع الرحم الأيسر مرة أخرى في البطن بحيث يتعرض فقط الرحم الأيمن ، للحفاظ على الأجنة غير المحقونة دافئة. و بهدوء في كيس السلوي الجانبي بين أصابع الإبهام و المؤشر من اليد غير المهيمنة.ضع مجهر التشريح فوق الحيوان وضبط التركيز والإضاءة للحصول على تصور أفضل للجنين عند الضرورة. للحقن في الوريد تدوير الرحم بحيث vitelline عبثا، ليتم حقنها موازية لتلميح إبرة. ووضع الإبرة على الرحم في زاوية خمس درجات لاختراق جدار الرحم.مع طرف بين جدار الرحم وكيس السلوي، وضع الطرف مباشرة فوق عبثا vitelline وزاوية عرضية تقريبا، تنزلق الإبرة على عبثا حتى يتقدّم شطبة في السفينة. من الضروري أن تبقى الزاوية منخفضة حتى لا تخترق الإبرة الجدار الخلفي للسفينة. عندما يتم ملاحظة بقعة من الدم في طرف إبرة، للضغط على دواسة القدم لحقن الحجم الكامل للمواد ذات الاهتمام في السفينة.بالنسبة للحقن داخل السلوي، قم بتدوير الكيس الأمنيوسي حتى يتم العثور على موقع خالٍ من الأوعية. نقطة إبرة عمودي على جدار الرحم وثقب الإبرة من خلال كيس صفار الرحم، وساك السلى مع الحرص لا تخترق أي أنسجة الجنين. ثم حقن الحجم المناسب من المواد المطلوبة.بعد أي نوع من الحقن، سحب الإبرة من موقع الحقن مرة واحدة يتم تسليم وحدة التخزين المطلوب. و انتقل إلى الجنين التالي حتى تم حقن كل أجين قرن الرحم الصحيح. ثم العودة الحق في قرن الرحم في البطن.و أخرجي قرن الرحم الأيسر من البطن عندما تم حقن جميع الأجنة في القرن الأيسر إعادة الرحم بأكمله إلى البطن، مع الحرص على تجنب volvulus الرحم أو الأمعاء. استخدام ماصة نقل المتاح للاستغناء عن حوالي ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة في البطن، لتحل محل أي خسائر غير قابلة للحساسية.واستخدام 4-0 البوليجلاكتين 910 الغرز لإغلاق اللفافة والبطن في طبقة واحدة مستمرة. ثم نقل الماوس إلى قفص نظيف تحت مصباح الحرارة مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. في هذه التجربة التدريبية أظهرت أكباد الأجنة التي تلقت زرع الرحم من قبل متدرب مستويات فلورية أقل بعد 24 ساعة من الحقن ، بسبب انخفاض عدد خلايا GFP المزروعة ، مقارنة بالكبد التي حقنها مدرب من ذوي الخبرة.تحليل التدفق السيتوميتري للخلايا المانحة الإيجابية GFP يرتبط أيضا مع انخفاض مستوى الفلورسنت لوحظ تحت المجهر الفلورسنت. قدرة ناقلات الفيروسية تسليمها عبر الطريق داخل السلوي إلى الخلايا عبر الظهر في اتصال مع السائل الأمنيوسي. ويتمثل في تحويل الخلايا الظهارية 48 ساعة بعد الحقن في الرحم من الفيروس أدينو تحمل transgene GFP في يوم الحمل 12.5 الأجنة.مرة واحدة يتقن هذه التقنية يمكن أن تكتمل في 15-25 دقيقة لكل فأرة حامل. بعد مشاهدة هذا الفيديو يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقديم علاجات مختلفة بأمان وفعالية لأجنة الماوس.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

تحليل المكاني والزماني لأحدث إرك في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; الخط الجرثومي

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

ثقافة الفئران الجنينية الأمشاط: نموذج الفسيولوجي من غضروفي التعظم

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

تقنية زرع الثدي الثديية الرواية جديدة لتصور الجيل سفينة من الخلايا الجذعية البطانية الأوعية الدموية

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

تطبيق [رني] والحرارة الناجمة عن صدمة "التعبير عامل النسخ" إلى "إعادة برمجة الخلايا الجرثومية" إلى الخلايا العصبية في C. ايليجانس

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

خلية "التجميع فحوصات" لتقييم ربط الشق المورفولوجية مع ترانس-يغاندس وتثبيط عن طريق رابطة الدول المستقلة-يغاندس

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

فقدان وظيفة تحليل في الحبيبية للدماغ كريسبر بوساطة خلايا تستخدم في الرحم على أساس انهانسر نقل الجينات

Brain malformation is often caused by genetic mutations. Deciphering the mutations in patient-derived tissues has identified potential causative factors ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

تصور بالعقدة ولوحة نوتوتشوردال في جاسترولاتينج الأجنة الماوس باستخدام الميكروسكوب الإلكتروني المسح وكله جبل الفلورة

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...